Name: inducing and characterizing vesicular steatosis in differentiated heparg cells
Uploaded: 2019-07-18T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Inducing and Characterizing Vesicular Steatosis in Differentiated HepaRG Cells at JoVE.com

Vi takker Prof. Christian trepo (INSERM U871, Lyon, Frankrike), som ber forutsatt HepaRG celler. Vi er takknemlige til Rita Appodia for administrativ hjelp. Dette arbeidet ble støttet av MIUR-Ministero dell'istruzione, dell'università e della ricerca (FIRB 2011 – 2016 RBAP10XKNC) og Sapienza-Universitetet i Roma (beskytte. C26A13T8PS; Beskytte. C26A142MCH; Beskytte. C26A15LSXL).

1. utarbeidelse av kultur Media og reagenser
<ol><li>Voksende medium: supplement William ' s E medium med GlutaMAX, 10% fosterets storfe serum (FBS), 1% penicillin/Streptomycin, 5 μg/mL insulin og 0,5 μM Hydrocortisone hemisuccinate.</li>
	<li>Differensiering medium: supplement William ' s E medium med GlutaMAX, 10% FBS, 1% penicillin/Streptomycin, 5 μg/mL insulin, 50 μM Hydrocortisone hemisuccinate og 2% DMSO.</li>
	<li>Frysing medium: supplement voksende medium med 10% DMSO.</li>
	<li>Natrium oleat: oppløses i 9...

<ol>
	<li>Starley, B. Q., Calcagno, C. J., Harrison, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonalcoholic+fatty+liver+disease+and+hepatocellular+carcinoma:+a+weighty+connection.">Nonalcoholic fatty liver disease and hepatocellular carcinoma: a weighty connection.</a> Hepatology. 51 (5), 1820-1832 (2010).</li><li>Byrne, C. D., Targher, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NAFLD:+a+multisystem+disease.">NAFLD: a multisystem disease.</a> Journal of Hepatology. 62 (1), 47-64 (2015).</li><li>Marra, F., Gastaldelli, A., Svegliati Baroni, G., Tell, G., Tiribelli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+basis+and+mechanisms+of+progression+of+non-+alcoholic+steatohepatitis.">Molecular basis and mechanisms of progression of non- alcoholic steatohepatitis.</a> Trends in Molecular Medicine. 14, 72-81 (2008).</li><li>Chalasani, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+diagnosis+and+management+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease:+Practice+guidance+from+the+American+Association+for+the+Study+of+Liver+Diseases.">The diagnosis and management of nonalcoholic fatty liver disease: Practice guidance from the American Association for the Study of Liver Diseases.</a> Hepatology. 67 (1), 328-357 (2018).</li><li>Banini, B. A., Sanyal, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+and+future+pharmacologic+treatment+of+nonalcoholic+steatohepatitis.">Current and future pharmacologic treatment of nonalcoholic steatohepatitis.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 33 (3), 134-141 (2017).</li><li>Takahashi, Y., Sugimoto, K., Inui, H., Fukusato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+pharmacological+therapies+for+nonalcoholic+fatty+liver+disease/nonalcoholic+steatohepatitis.">Current pharmacological therapies for nonalcoholic fatty liver disease/nonalcoholic steatohepatitis.</a> World Journal of Gastroenterology. 21 (13), 3777-3785 (2015).</li><li>Younossi, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+burden+of+NAFLD+and+NASH:+trends,+predictions,+risk+factors+and+prevention.">Global burden of NAFLD and NASH: trends, predictions, risk factors and prevention.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 15 (1), 11-20 (2018).</li><li>Santhekadur, P. K., Kumar, D. P., Sanyal, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+models+of+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">Preclinical models of non-alcoholic fatty liver disease.</a> Journal of Hepatology. 68 (2), 230-237 (2018).</li><li>Nagarajan, P., Mahesh Kumar, M. J., Venkatesan, R., Majundar, S. S., Juyal, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+modified+mouse+models+for+the+study+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease.">Genetically modified mouse models for the study of nonalcoholic fatty liver disease.</a> World Journal of. Gastroenterology. 18 (11), 1141-1153 (2012).</li><li>Oseini, A. M., Cole, B. K., Issa, D., Feaver, R. E., Sanyal, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translating+scientific+discovery:+the+need+for+preclinical+models+of+nonalcoholic+steatohepatitis.">Translating scientific discovery: the need for preclinical models of nonalcoholic steatohepatitis.</a> Hepatology International. 12 (1), 6-16 (2018).</li><li>Ramboer, E., Vanhaecke, T., Rogiers, V., Vinken, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immortalized+human+hepatic+cell+lines+for+in+vitro+testing+and+research+purposes.">Immortalized human hepatic cell lines for in vitro testing and research purposes.</a> Methods in Molecular Biology. 1250, 53-76 (2015).</li><li>G&#243;mez-Lech&#243;n, M. J., Donato, M. T., Castell, J. V., Jover, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hepatocytes+in+primary+culture:+the+choice+to+investigate+drug+metabolism+in+man.">Human hepatocytes in primary culture: the choice to investigate drug metabolism in man.</a> Current Drug Metabolism. 5 (5), 443-462 (2004).</li><li>Marion, M. J., Hantz, O., Durantel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+HepaRG+cell+line:+biological+properties+and+relevance+as+a+tool+for+cell+biology,+drug+metabolism,+and+virology+studies.">The HepaRG cell line: biological properties and relevance as a tool for cell biology, drug metabolism, and virology studies.</a> Methods in Molecular Biology. 640, 261-272 (2010).</li><li>Gripon, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+of+a+human+hepatoma+cell+line+by+hepatitis+B+virus.">Infection of a human hepatoma cell line by hepatitis B virus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 99 (24), 15655-15660 (2002).</li><li>Anth&#233;rieu, S., Rogue, A., Fromenty, B., Guillouzo, A., Robin, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+vesicular+steatosis+by+amiodarone+and+tetracycline+is+associated+with+up-regulation+of+lipogenic+genes+in+HepaRG+cells.">Induction of vesicular steatosis by amiodarone and tetracycline is associated with up-regulation of lipogenic genes in HepaRG cells.</a> Hepatology. 53 (6), 1895-1905 (2011).</li><li>Rouge, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PPAR+agonists+reduce+steatosis+in+oleic+acid-overloaded+HepaRG+cells.">PPAR agonists reduce steatosis in oleic acid-overloaded HepaRG cells.</a> Toxicology and Applied Pharmacology. 276 (1), 73-81 (2014).</li><li>Belloni, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+a+phospho-STAT3-miRNAs+pathway+improves+vesicular+hepatic+steatosis+in+an+in+vitro+and+in+vivo+model.">Targeting a phospho-STAT3-miRNAs pathway improves vesicular hepatic steatosis in an in vitro and in vivo model.</a> Scientific Reports. 8, 13638 (2018).</li><li>Nunn, A. D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+histone+deacetylase+inhibiting+drug+Entinostat+induces+lipid+accumulation+in+differentiated+HepaRG+cells.">The histone deacetylase inhibiting drug Entinostat induces lipid accumulation in differentiated HepaRG cells.</a> Scientific Reports. 6, 28025 (2016).</li><li>Donato, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytometric+analysis+for+drug-induced+steatosis+in+HepG2+cells.">Cytometric analysis for drug-induced steatosis in HepG2 cells.</a> Chemico-Biological Interactions. 181 (3), 417-423 (2009).</li><li>Hellerer, T., Ax&#228;ng, C., Brackmann, C., Hillertz, P., Pilon, M., Enejder, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+of+lipid+storage+in+Caenorhabditis+elegans+using+coherent+anti-Stokes+Raman+scattering+(CARS)+microscopy.">Monitoring of lipid storage in Caenorhabditis elegans using coherent anti-Stokes Raman scattering (CARS) microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 104 (37), 14658-14663 (2007).</li><li>Le, T. T., Ziemba, A., Urasaki, Y., Brotman, S., Pizzorno, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+evaluation+of+hepatic+microvesicular+steatosis+with+multimodal+coherent+anti-Stokes+Raman+scattering+microscopy.">Label-free evaluation of hepatic microvesicular steatosis with multimodal coherent anti-Stokes Raman scattering microscopy.</a> PLoS One. 7 (11), 51092 (2012).</li><li>Guillouzo, A., Corlu, A., Aninat, C., Glaise, D., Morel, F., Guguen-Guillouzo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+hepatoma+HepaRG+cells:+a+highly+differentiated+model+for+studies+of+liver+metabolism+and+toxicity+of+xenobiotics.">The human hepatoma HepaRG cells: a highly differentiated model for studies of liver metabolism and toxicity of xenobiotics.</a> Chemico-Biological Interactions. 168 (1), 66-73 (2007).</li><li>Nelson, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hepatic+HepaRG+cells+maintain+an+organotypic+phenotype+with+high+intrinsic+CYP450+Activity/metabolism+and+significantly+outperform+standard+HepG2/C3A+cells+for+pharmaceutical+and+therapeutic+applications.">Human hepatic HepaRG cells maintain an organotypic phenotype with high intrinsic CYP450 Activity/metabolism and significantly outperform standard HepG2/C3A cells for pharmaceutical and therapeutic applications.</a> Basic &amp; Clinical Pharmacology &amp; Toxicology. 120 (1), 30-37 (2017).</li><li>Gerets, H. H. J., Tilmant, K., Gerin, B., Chanteux, H., Depelchin, B. O., Dhalluin, S., Atienzar, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+primary+human+hepatocytes,+HepG2+cells,+and+HepaRG+cells+at+the+mRNA+level+and+CYP+activity+in+response+to+inducers+and+their+predictivity+for+the+detection+of+human+hepatotoxins.">Characterization of primary human hepatocytes, HepG2 cells, and HepaRG cells at the mRNA level and CYP activity in response to inducers and their predictivity for the detection of human hepatotoxins.</a> Cell Biology and Toxicology. 28 (2), 69-87 (2012).</li><li>Pusl, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+fatty+acids+sensitize+hepatocytes+to+bile+acid-induced+apoptosis.">Free fatty acids sensitize hepatocytes to bile acid-induced apoptosis.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 371 (3), 441-445 (2008).</li><li>Gentile, C. L., Pagliassotti, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+fatty+acids+in+the+development+and+progression+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease.">The role of fatty acids in the development and progression of nonalcoholic fatty liver disease.</a> The Journal of Nutritional Biochemistry. 19 (9), 567-576 (2008).</li><li>Mei, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+roles+of+unsaturated+and+saturated+fatty+acids+on+autophagy+and+apoptosis+in+hepatocytes.">Differential roles of unsaturated and saturated fatty acids on autophagy and apoptosis in hepatocytes.</a> Journal of Pharmacological Experimental Therapy. 339, 487-498 (2011).</li><li>Malhi, H., Bronk, S. F., Werneburg, N. W., Gores, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+fatty+acids+induce+JNK-dependent+hepatocyte+lipoapoptosis.">Free fatty acids induce JNK-dependent hepatocyte lipoapoptosis.</a> Journal of Biological Chemistry. 281, 12093-12101 (2006).</li><li>Moravcov&#225;, A., &#268;ervinkov&#225;, Z., Ku&#269;era, O., Mezera, V., Rychtrmoc, D., Lotkov&#225;, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+oleic+and+palmitic+acid+on+induction+of+steatosis+and+cytotoxicity+on+rat+hepatocytes+in+primary+culture.">The effect of oleic and palmitic acid on induction of steatosis and cytotoxicity on rat hepatocytes in primary culture.</a> Physiological Research. 64, 627-636 (2015).</li><li>Ohsaki, Y., Shinohara, Y., Suzuki, M., Fujimoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pitfall+in+using+BODIPY+dyes+to+label+lipid+droplets+for+fluorescence+microscopy.">A pitfall in using BODIPY dyes to label lipid droplets for fluorescence microscopy.</a> Histochemistry and Cell Biology. 133 (4), 477-480 (2010).</li><li>Rinia, H. A., Burger, K. N., Bonn, M., M&#252;ller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+label-free+imaging+of+lipid+composition+and+packing+of+individual+cellular+lipid+droplets+using+multiplex+CARS+microscopy.">Quantitative label-free imaging of lipid composition and packing of individual cellular lipid droplets using multiplex CARS microscopy.</a> Biophysical Journal. 95 (10), 4908-4914 (2008).</li><li>Waschatko, G., Billecke, N., Schwendy, S., Jaurich, H., Bonn, M., Vilgis, T. A., Parekh, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+in+situ+imaging+of+oil+body+dynamics+and+chemistry+in+germination.">Label-free in situ imaging of oil body dynamics and chemistry in germination.</a> Journal of The Royal Society Interface. 13 (123), (2016).</li><li>J&#252;ngst, C., Winterhalder, M. J., Zumbusch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast+and+long+term+lipid+droplet+tracking+with+CARS+microscopy.">Fast and long term lipid droplet tracking with CARS microscopy.</a> Journal of Biophotonics. 4 (6), 435-441 (2011).</li><li>Welte, M. A., Gould, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+droplet+functions+beyond+energy+storage.">Lipid droplet functions beyond energy storage.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Molecular and Cell Biology of Lipids. 1862 (10), 1260-1272 (2017).</li><li>Cohen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+droplets+as+organelles.">Lipid droplets as organelles.</a> International Review of Cell and Molecular Biology. 337, 83-110 (2018).</li><li>Farese, R. V., Walther, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+droplets+finally+get+a+little+R-E-S-P-E-C-T.">Lipid droplets finally get a little R-E-S-P-E-C-T.</a> Cell. 139 (5), 855-860 (2009).</li></ol>

Denne protokollen beskriver hvordan å differensiere HepaRG celler og hvordan å indusere flytande steatosis ved natrium oleat behandling (figur 1A). Faktisk, sammenlignet med andre menneskelige leverkreft (HCC) cellelinjer, HepaRG cellelinjen utstillinger funksjoner av voksne menneskelige hepatocytter, som representerer et verdifullt alternativ til ex vivo dyrket primære menneskelige hepatocytter13,14 ,...

Hepatic steatosis er definert som intrahepatic fett akkumulering, innen triglyserider inneholder lipid dråper, av minst 5% av leveren vekt. Langvarig hepatic lipid lagring er en potensielt reversibel prosess, men, det kan føre til leveren metabolske dysfunksjon, betennelser og avanserte former for alkoholfrie fatty leversykdom (NAFLD), den dominerende årsaken til kronisk leversykdom i mange deler av i verden1,2. NAFLD er en multifaktoriell sykdom som kan utvikle seg til de mer aggressive alkoholfrie steatohepatitis (Nash), som igjen kan utvikle seg til skrumplever og, i en liten prosentandel av pasientene, til leverkreft (HCC)1,3. Ingen godkjent terapi er for tiden tilgjengelig som en spesifikk behandling for NAFLD og kombinasjonen av kosthold og livsstil modifikasjoner forblir søyle av NAFLD og Nash Management4,5,6.
De molekylære mekanismene som førte til utviklingen av hepatic steatosis i patogenesen av NAFLD fortsatt å være belyst7. I denne sammenhengen har musemodeller blitt utviklet for å studere menneskelig steatosis sykdomsprogresjon. En myriade av ulike modeller finnes, og hver og en har sine fordeler og ulemper, inkludert genetiske, ernæringsmessige og kjemisk indusert modeller kombinere ulike tilnærminger. Genmodifiserte (transgene eller knockout) mus spontant utvikle leversykdom. Imidlertid bør det bemerkes at disse mutasjoner er svært sjeldne hos mennesker og sletting eller over-uttrykk for et enkelt gen (f. eks OB/OB mus) kan ikke etterligne etiologi av multifaktoriell menneskelige sykdom på molekylær nivå8,9. Likeledes kan sykdommen ervervet av mus etter kosttilskudd eller farmakologisk manipulasjon ikke etterligne virkningene av menneskelige dietter knyttet til utvikling av NAFLD i mann8. Animal modeller har imidlertid tilrettelagt utviklingen i forståelsen av NAFLD og denne tilnærmingen er i dag den mest brukte strategien i laboratoriet forskning. Likevel har replikering i mennesker av resultater som oppnås i dyremodeller gjentatte ganger mislyktes, forårsaker dårlig oversettelse til klinikken10.
Derfor, in vitro modeller av NAFLD kan spille en fundamental rolle i elucidating den molekylære mekanismer av NAFLD progresjon, og de representerer et verdifullt verktøy for å skjermen et stort antall forbindelser. Primær cellekulturer, udødeliggjort cellelinjer og lever biopsier har blitt mye brukt til forskningsformål11. Primær menneskelig hepatocytter ligner nøye menneskelige kliniske forhold, men det er et begrenset antall givere, og primær cellekulturer viser dårlig reproduserbarhet på grunn av variasjon i cellene. Disse observasjonene, sammen med etiske og logistiske spørsmål, har resultert i bruk av menneskets primære hepatocytter er begrenset12. Dermed representerer hepatic cellelinjer et praktisk alternativ, har flere viktige fordeler fremfor primær kultur, som hepatic cellelinjer vokse jevnt, har en nesten ubegrenset levetid, og har en stabil fenotype. Videre er cellelinjer lett tilgjengelige og kultur betingelsene for hepatic cellelinjer er enklere enn de primære hepatocytter og er standardisert blant ulike laboratorier.
Her beskriver vi i detalj en in vitro celle-basert modell av leveren flytande steatosis, representert ved hepatic differensiert HepaRG celler behandlet med fettsyrer natrium oleat. Den HepaRG cellelinjen ble etablert fra en kvinnelig pasient rammet av hepatitt C-smitte og en Edmondson karakter jeg godt differensiert leveren svulst14. Den HepaRG cellelinjen er en menneskelig bipotent Stamcelle linje i stand til å skille ved eksponering til 2% dimethyl sulfoxide (DMSO) mot to forskjellige celle fenotyper: galle-lignende og hepatocytter-lignende celler. Differensiert HepaRG celler (dHepaRG) dele noen funksjoner og egenskaper med voksen hepatocytter og har evnen til å stabilt uttrykke lever-spesifikke gener som albumin, AldolaseB, Cytokrom P450 2E1 (CYP2E1), og Cytokrom P450 3A4 (CYP3A4)13 (trinn 3). Behandling av dHepaRG celler med fettsyrer salt natrium oleat (250 μM) i 5 dager føre til generering av cytoplasmatiske lipid dråper, etterligne effekten av fettlever14,15,17,18 ( Trinn 4). Opphopning av lipid dråper kan lett oppdages av Oil Red O farging (trinn 5), en lysochrome fettløselige fargestoff som flekker nøytrale triglyserider og lipider rød-oransje. For effektivt å kvantifisere lipider i fatty dHepaRG, her illustrerer vi cytofluorimetric analyse etter farging med 4, 4-difluoro-1, 3, 5, 7-tetramethyl-4-Bora-3a, 4a-diaza-s-indacene (Bodipy 505/515) (trinn 6), en lipofile fluorescerende sonde som lokaliseres å intracellulære lipid kropper og har blitt brukt til å merke lipid dråper19. Videre viser vi hvordan man evaluerer steatosis ved kvantitativ polymerase kjedere reaksjon (qPCR) (trinn 7) genuttrykk dereguleringen av flere metabolske gener i dHepaRG celler. For ytterligere å karakterisere og kvantifisere akkumulering av lipid dråper etter natrium oleat behandling, utførte vi sammenhengende anti-Stokes Raman spredning (CARS) mikroskopi (trinn 8), en innovativ teknikk som gjør det mulig visualisering og kvantifisering av lipid dråper uten merking20,21.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:799px;" width="797">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Hyclone HyClone Fetal Clone II&#160;</td>
			<td style="width:240px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:143px;">SH30066</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">William&#8217;s E medium with GlutaMAX&#160;</td>
			<td style="width:240px;">Thermofisher</td>
			<td>32551087</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin/streptomycin&#160;</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td>P4333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Insulin&#160;</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td>I9278</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">hydrocortisone hemisuccinate</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td>H2270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">DMSO, dimethyl sulfoxide</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td style="width:143px;">D2438&#160;&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Sodium Oleate</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td style="width:143px;">O7501&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Methanol</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td>179337</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Isopropanol</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td style="width:143px;">278475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BODIPY 505/515</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>D3921</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">PBS</td>
			<td style="width:240px;">Thermofisher</td>
			<td>14190-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Formaldehyde solution</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td>252549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">RNAse free DNAseI</td>
			<td style="width:240px;">Promega</td>
			<td>M198A&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass-bottomed dishes</td>
			<td style="width:240px;">Willco Wells</td>
			<td style="width:143px;">GWST-5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Oil Red solution</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td style="width:143px;">O625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">CellTiter 96 AQueous One Solution</td>
			<td style="width:240px;">Promega&#160;</td>
			<td style="width:143px;">G3582</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">q-PCR oligo name</td>
			<td>Sequence</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ACACB FOR</td>
			<td>CAAGCCGATCACCAAGAGTAAA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">ACACB REV</td>
			<td>CCCTGAGTTATCAGAGGCTGG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:239px;">b-actin FOR</td>
			<td style="width:240px;">GCACTCTTCCAGCCTTCCT</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:239px;">b-actin REV</td>
			<td style="width:240px;">AGGTCTTTGCGGATGTCCAC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ALBUMIN FOR</td>
			<td>TGCTTGAATGTGCTGATGACAGG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ALBUMIN REV</td>
			<td>AAGGCAAGTCAGCAGGCATCTCATC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ALDOB FOR</td>
			<td>GCATCTGTCAGCAGAATGGA&#160;</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ALDOB REV</td>
			<td>TAGACAGCAGCCAGGACCTT</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">APOB FOR</td>
			<td>CCTCCGTTTTGGTGGTAGAG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">APOB REV</td>
			<td>&#160;CCTAAAAGCTGGGAAGCTGA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">APOC3 FOR</td>
			<td>CTCAGCTTCATGCAGGGTTA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">APOC3 REV</td>
			<td>GGTGCTCCAGTAGTCTTTCAG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CPT1A FOR</td>
			<td>TCATCAAGAAATGTCGCACG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CPT1A REV</td>
			<td>GCCTCGTATGTGAGGCAAAA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CYP2E1 FOR</td>
			<td>TTGAAGCCTCTCGTTGACCC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CYP2E1 REV</td>
			<td>CGTGGTGGGATACAGCCAA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CYP3A4 FOR</td>
			<td>CTTCATCCAATGGACTGCATAAAT</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CYP3A4 REV</td>
			<td>TCCCAAGTATAACACTCTACACAGACAA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GAPDH FOR</td>
			<td>TGACAACTTTGGTATCGTGGAAGG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GAPDH REV</td>
			<td>AGGGATGATGTTCTGGAGAGCC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GPAM FOR</td>
			<td>TCTTTGGGTTTGCGGAATGTT</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GPAM REV</td>
			<td>ATGCACATCTCGCTCTTGAATAA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IL6 FOR</td>
			<td>CCTGAACCTTCCAAAGATGGC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IL6 REV</td>
			<td>ACCTCAAACTCCAAAAGACCAGTG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PDK4 FOR</td>
			<td>ACAGACAGGAAACCCAAGCCAC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PDK4 REV</td>
			<td>TGGAGGTGAGAAGGAACATACACG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PLIN2 FOR</td>
			<td>TTGCAGTTGCCAATACCTATGC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PLIN2 REV</td>
			<td>CCAGTCACAGTAGTCGTCACA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PLIN4 FOR</td>
			<td>AATGAGTTGGAGGGGCTGGGGGACATC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PLIN4 REV</td>
			<td>GGTCACCTAAACGAACGAAGTAGC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SCD FOR</td>
			<td>TCTAGCTCCTATACCACCACCA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SCD REV</td>
			<td>TCGTCTCCAACTTATCTCCTCC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SLC2A1 FOR</td>
			<td>TGCTCATCAACCGCAACGAG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SLC2A1 REV</td>
			<td>CCGACTCTCTTCCTTCATCTCCTG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">18S FOR</td>
			<td>CGCCGCTAGAGGTGAAATTC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">18S REV</td>
			<td>TTGGCAAATGCTTTCGCTC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

inducing and characterizing vesicular steatosis in differentiated heparg cells

Hepatic steatosis representerer en metabolsk dysfunksjon som resulterer fra en opphopning av triglyserider-inneholdende lipid dråper i hepatocytter. Overdreven fett opphopning fører til alkoholfrie fatty leversykdom (NAFLD), som er potensielt reversibel og kan utvikle seg til alkoholfrie steatohepatitis (NASH) og til slutt skrumplever og leverkreft (HCC). Den molekylære mekanismer knytte lipid akkumulering i hepatocytter med progresjon til NASH, irreversible leverskader, fibrose, skrumplever, og selv HCC fortsatt uklart. For dette formål har flere in vitro-og in vivo-modeller blitt utviklet for å belyse de patologiske prosessene som forårsaker NAFLD. I denne studien, beskriver vi en cellulær modell for induksjon av leveren flytande steatosis som består av DMSO-differensiert menneskelig hepatic HepaRG celler behandlet med fettsyrer salt natrium oleat. Faktisk, natrium oleat-behandlet HepaRG celler akkumuleres lipid dråper i cytoplasma og viser typiske trekk ved steatosis. Den menneskelige modellen in vitro representerer et verdifullt alternativ til in vivo mus modeller, så vel som til den primære menneskelige hepatocytter. Vi presenterer også en sammenligning av flere metoder for kvantifisering og evaluering av fett opphopning i HepaRG celler, inkludert olje rød O farging, cytofluorimetric Bodipy måling, metabolsk genuttrykk analyse av qPCR, og sammenhengende anti-Stokes Raman spredning (CARS) mikroskopi. CARS Imaging kombinerer kjemiske spesifisitet av Raman spektroskopi, en kjemisk analyse teknikk velkjent i materialer vitenskap applikasjoner, med fordelene av høy hastighet, høy oppløsning ikke-lineære optiske microscopies å tillate presis kvantifisering av lipid akkumulering og lipid dråpe dynamikk. Etableringen av en effektiv in vitro modell for induksjon av flytande steatosis, sammen med en nøyaktig metode for kvantifisering og karakterisering av lipid akkumulering, kan føre til utvikling av tidlig fase diagnostisering av NAFLD via identifisering av molekylære markører, og til generering av nye behandlings strategier.

Denne protokollen beskriver en effektiv metode for å indusere og karakterisere flytande steatosis i DMSO-differensiert HepaRG celler ved natrium oleat behandling (figur 1A).
Differensiering av HepaRG celler. For å effektivt indusere differensiering, voksende celler må være sådd med lav tetthet (2,5 x 104 celler/cm2) i sprednings mediet. Når seeded ved lav tetthet, cellene aktivt dele og erverve en la...

Watch this Scientific Journal Video about Inducing and Characterizing Vesicular Steatosis in Differentiated HepaRG Cells at JoVE.com

Inducing and Characterizing Vesicular Steatosis in Differentiated HepaRG Cells

I denne studien, beskriver vi en detaljert protokoll for inducing leveren flytande steatosis i differensiert HepaRG celler med fettsyrer salt natrium oleat og ansette metoder for påvisning og kvantifisering av lipid akkumulering, inkludert sammenhengende anti-Stokes Raman spredning (CARS) mikroskopi, cytofluorimetric analyse, olje rød O farging, og qPCR.

Inducing og karakteriserer flytande steatosis i differensiert HepaRG celler

Hepatic steatosis represents a metabolic dysfunction that results from an accumulation of triglyceride-containing lipid droplets in hepatocytes. Excessive ...

Denne protokollen beskriver hvordan man induserer lever vesikulær steatose i differensierte HepaRG-celler og metoder for deteksjon og kvantifisering av lipidakkumulering. Denne in vitro humane cellemodellen representerer et verdifullt alternativ til in vivo mus modeller og til primære menneskelige hepatocytter. Tin en nitrogen kryobevart lav passasje batch av HepaRG celler ved å fordype dem i en 37 grader Celsius bad til tint.Overfør raskt cellene til et 15-milliliter rør som inneholder 10 milliliter med proliferaterende medium. Etter sentrifugering i fem minutter, kast de overnaturante og gjenoppuspend cellene i fem milliliter med proliferaterende medium. Tell cellene og fortynne for å plate 250, 000 celler per kvadratcentimeter.Plate cellene på 100-millimeter celle kultur retter og fornye mediet hver to eller tre dager. Celler sprer seg med en doblingstid på rundt 24 timer. Når HepaRG-cellene når 80% samløpet, koble dem gjennom en tre til fem minutters inkubasjon med 0,05% trypsinløsning.Samle cellene i proliferating medium og sentrifuge i fem minutter som før. Kast de overnaturante og gjenoppusse cellene med fem milliliter med proliferaterende medium. Igjen, telle cellene og fortynne for å plate 250, 000 celler per kvadratcentimeter.På dette stadiet forsterker du cellene ved å gjenta disse trinnene for å nå et passende antall celler for å starte eksperimenter. For å kryopreserve HepaRG celler, løsne cellene 24 timer etter plating gjennom en tre til fem minutters inkubasjon med 0,05% trypsin løsning. Samle cellene i proliferating medium og sentrifuge i fem minutter som før.Kast de overnaturante, resuspend cellene i en milliliter per batch av frysemedium, og kryopreserve batchene i flytende nitrogen. På dag null, frø HepaRG celler på 250,000 celler per kvadratcentimeter i kulturbehandlede retter med et passende volum av spredning medium. To retter må være belagt for hver analyse, en for kontrollceller og en for oleatbehandlede celler.På dag to og dag fire endrer du mediet med et passende volum av spredningsmedium og lar cellene vokse til de når samløpet. På dag sju må cellene være 100% samløpet. Vask cellene én gang med 1X PBS.Deretter fjerner du 1X PBS og legger til et passende volum av differensieringsmedium. På dag åtte, ni, 12, 15 og 18 vasker du cellene én gang med 1X PBS før de legger til et passende volum differensieringsmedium. På dag 21, observere HepaRG celler under et mikroskop og sikre at cellene er samløpet differensierte kulturer.Som en kontroll høster du en kontrollfat for å utføre genuttrykksanalyse av differensieringsmarkørgener. På dag 21 kan differensierte HepaRG-celler kryoserveres i flytende nitrogen. På dag 21 fortynner natrium oleat med et passende volum av fullstendig differensieringsmedium til en endelig konsentrasjon på 250 mikromos.Legg til 99% metanol i et forhold på en til 400 i en annen aliquot av differensieringsmedium for å gjøre kjøretøyet kontroll behandling. Vask cellene én gang med 1X PBS og tilsett kjøretøy eller natrium oleat medium. På dag 23 og dag 25, endre mediet med riktig volum av nylaget medium.På dag 26 observer cellene ved optisk mikroskopi. Lipiddråper akkumuleres i natrium oleat behandlede celler og er lett synlige som gjennomsiktige dråper i cytoplasma. For å utføre Oljerød O-farging, vask først cellene én gang med 1X PBS og fjern 1X PBS helt.Tilsett 4% paraformaldehyd og inkuber i 15 minutter ved romtemperatur. Fjern paraformaldehyd og vask cellene to ganger med 1X PBS. Etter å ha fjernet PBS, inkuber cellene med 60% isopropanol i fem minutter ved romtemperatur.Fjern isopropanol og la cellene tørke helt ved romtemperatur. Tilsett nå Oil Red O arbeidsløsning til cellene og inkuber ved romtemperatur i 30 minutter. Volumet av arbeidsløsning som kreves for hver prøve tilsvarer volumet av medier som brukes til å kultere cellene.Fjern Oljerød O-oppløsningen og tilsett umiddelbart dobbeltdestillert vann. Etter å ha vasket cellene fire ganger med dobbeltdestillert vann, få bilder under mikroskopet for analyse. For å elute Oljerød O fargestoff, fjern alt vannet og la tørke.Deretter legger du til en milliliter på 100% isopropanol og inkubere i 10 minutter med mild risting ved romtemperatur. Pipette isopropanol med eluted Oil Red O farge opp og ned flere ganger, slik at all Olje Rød O er i løsningen. Overfør løsningen til en cuvette.Mål den optiske tettheten ved 500 nanometer ved spektrometri og bruk 100% isopropanol som blank. Vask cellene én gang med 1X PBS. Deretter inkuber med 100 nanomlar bodipy fortynnet i 1X PBS i mørket i 40 minutter ved 37 grader Celsius.En uoppained kontroll bør inkluderes i strømningscytometrimålingene. Fjern fargeløsningen og vask cellene én gang med 1X PBS. Vask deretter cellene på nytt og fjern PBS helt.Tilsett 4% paraformaldehyd og inkuber i 15 minutter ved romtemperatur. Fjern paraformaldehyd og vask prøvene tre ganger i fem minutter i PBS. Celler kan holdes i 1X PBS ved fire grader Celsius eller bildet umiddelbart.For lagring, pakk med Parafilm og dekk med aluminiumsfolie for å hindre at cellene tørker. For å verifisere effektiv induksjon av steatose ble oleatbehandlet og kontroll av HepaRG-celler farget med oljerød O-fargestoff. Etter farging er lipiddråper lett synlige som røde dråper.Farging kan kvantifiseres ved spektrofotometrisk måling av Olje R O fargestoff eluted med isopropanol. Absorbans av eluted Oil Red O fra cellene er direkte proporsjonal med cytoplasmatisk lipid dråpe akkumulering. Natriumvalenkonsentrasjon og eksponeringstid ble bestemt av MTT-kolorimetrisk cellevariasjonsanalyse.Formosan-produktet kvantifiseres ved absorbansen ved 490 nanometer og er direkte proporsjonal med antall levende celler i kulturen. Natrium oleatbehandling ble sammenlignet med natriumpalmitatbehandling. Det apoptotiske stoffet doksorubicin ble brukt som en kontroll.For å kvantifisere økningen av cellulær lipidinnhold etter natrium oleatbehandling, ble farging med Bodipy fargestoff brukt til å merke lipiddråper. Ved hjelp av cytofluorometrisk analyse er det mulig å kvantifisere triglyseridinnholdet ved Bodipy gjennomsnittlig fluorescerende intensitet, som er høyere i oleatbehandlede celler sammenlignet med kontrollceller. Dette indikerer effektiv fettakkumulering etter oleatbehandling.Bilder av Bodipy-beisede celler viser faktisk lyse grønne fluorescerende lipiddråper i oleatbehandlede celler som ikke er synlige i kontrollcellene. For ytterligere å karakterisere akkumuleringen av lipiddråper etter natrium oleatbehandling, kan CARS mikroskopi utføres som beskrevet i tekstprotokollen som muliggjør lipiddråper kvantifisering uten merking. Denne cellebaserte modellen kan øke kunnskapen om molekylære mekanismer som er involvert i ikke-onkotisk fettleversykdom og kan føre til utvikling av nye markører for tidlig diagnose og nye behandlingsstrategier.

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Isolasjon, karakterisering og Comparative Differensiering av Human tannpulpa stamceller hentet fra permanente tenner ved hjelp av to ulike metoder

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Inducing Myointimal Hyperplasia Versus Atherosclerosis in Mice: An Introduction of Two Valid Models

Inducing Myointimal Hyperplasi Versus Åreforkalkning i Mus: En introduksjon av to gyldige modeller

Various in vivo laboratory rodent models for the induction of artery stenosis have been established to mimic diseases that include arterial plaque ...

Minimal Invasive Surgical Procedure of Inducing Myocardial Infarction in Mice

Minimal Invasive Kirurgisk prosedyre for å indusere hjerteinfarkt i Mus

Myocardial infarction still remains the main cause of death in western countries, despite considerable progress in the stent development area in the last ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Studerer Bukspyttkjertelkreft Stem Cell Kjennetegn for å utvikle nye behandlingsstrategier

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaukom-induserende prosedyre i en<em&gt; I Vivo</em&gt; Rat Model og Whole-mount Retina Forberedelse

Glaucoma is a disease of the central nervous system affecting retinal ganglion cells (RGCs). RGC axons making up the optic nerve carry visual input to the ...

Inducing Ischemia-reperfusion Injury in the Mouse Ear Skin for Intravital Multiphoton Imaging of Immune Responses

Induserende iskemi-reperfusjon Injury i Mouse Ear Skin for intra multiphoton avbildning av immunrespons

Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when there is transient hypoxia due to the obstruction of blood flow (ischemia) followed by a subsequent ...

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

Forskolin-indusert Hevelse i tarmen Organoids: An<em&gt; In Vitro</em&gt; Analyse for å vurdere Drug Response i pasienter med cystisk fibrose

Recently-developed cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-modulating drugs correct surface expression and/or function of the mutant ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimalisert Analyse av<em&gt; I Vivo</em&gt; og<em&gt; In Vitro</em&gt; Leversteatose

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Inducing akutt lungeskade i mus ved direkte Intratrakeal lipopolysakkarid drypping

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice

En revidert metode for å indusere sekundær lymfødem i Hindlimb bentap av mus

Animal models are of paramount importance in the research of lymphedema in order to understand the pathophysiology of the disease but also to explore ...