Name: inducing and characterizing vesicular steatosis in differentiated heparg cells
Uploaded: 2019-07-18T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Inducing and Characterizing Vesicular Steatosis in Differentiated HepaRG Cells at JoVE.com

Мы благодарим профессора Кристиана Трепо (INSERM U871, Лион, Франция), который любезно предоставил клетки HepaRG. Мы благодарны Рите Апподиа за административную помощь. Эта работа была поддержана MIUR-Ministero dell'istruzione, dell'universite e della ricerca (FIRB 2011-2016 RBAP10XKNC) и Римским университетом Сапиенца (протеже. C26A13T8PS; Прот. C26A142MCH; Прот. C26A15LSXL).

1. Подготовка культурных СМИ и реагентов
<ol><li>Пролиферирующая среда: дополнить среду Уильяма E с GlutaMAX, 10% сыворотки крупного рогатого скота плода (FBS), 1% пенициллина / стрептомицина, 5 мкг/мл инсулина и 0,5 мкмизона здоров.</li>
	<li>Дифференциация среды: дополнить Уильяма E среды с GlutaMAX, 10% FBS, 1% пе?...

<ol>
	<li>Starley, B. Q., Calcagno, C. J., Harrison, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonalcoholic+fatty+liver+disease+and+hepatocellular+carcinoma:+a+weighty+connection.">Nonalcoholic fatty liver disease and hepatocellular carcinoma: a weighty connection.</a> Hepatology. 51 (5), 1820-1832 (2010).</li><li>Byrne, C. D., Targher, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NAFLD:+a+multisystem+disease.">NAFLD: a multisystem disease.</a> Journal of Hepatology. 62 (1), 47-64 (2015).</li><li>Marra, F., Gastaldelli, A., Svegliati Baroni, G., Tell, G., Tiribelli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+basis+and+mechanisms+of+progression+of+non-+alcoholic+steatohepatitis.">Molecular basis and mechanisms of progression of non- alcoholic steatohepatitis.</a> Trends in Molecular Medicine. 14, 72-81 (2008).</li><li>Chalasani, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+diagnosis+and+management+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease:+Practice+guidance+from+the+American+Association+for+the+Study+of+Liver+Diseases.">The diagnosis and management of nonalcoholic fatty liver disease: Practice guidance from the American Association for the Study of Liver Diseases.</a> Hepatology. 67 (1), 328-357 (2018).</li><li>Banini, B. A., Sanyal, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+and+future+pharmacologic+treatment+of+nonalcoholic+steatohepatitis.">Current and future pharmacologic treatment of nonalcoholic steatohepatitis.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 33 (3), 134-141 (2017).</li><li>Takahashi, Y., Sugimoto, K., Inui, H., Fukusato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+pharmacological+therapies+for+nonalcoholic+fatty+liver+disease/nonalcoholic+steatohepatitis.">Current pharmacological therapies for nonalcoholic fatty liver disease/nonalcoholic steatohepatitis.</a> World Journal of Gastroenterology. 21 (13), 3777-3785 (2015).</li><li>Younossi, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+burden+of+NAFLD+and+NASH:+trends,+predictions,+risk+factors+and+prevention.">Global burden of NAFLD and NASH: trends, predictions, risk factors and prevention.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 15 (1), 11-20 (2018).</li><li>Santhekadur, P. K., Kumar, D. P., Sanyal, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+models+of+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">Preclinical models of non-alcoholic fatty liver disease.</a> Journal of Hepatology. 68 (2), 230-237 (2018).</li><li>Nagarajan, P., Mahesh Kumar, M. J., Venkatesan, R., Majundar, S. S., Juyal, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+modified+mouse+models+for+the+study+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease.">Genetically modified mouse models for the study of nonalcoholic fatty liver disease.</a> World Journal of. Gastroenterology. 18 (11), 1141-1153 (2012).</li><li>Oseini, A. M., Cole, B. K., Issa, D., Feaver, R. E., Sanyal, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translating+scientific+discovery:+the+need+for+preclinical+models+of+nonalcoholic+steatohepatitis.">Translating scientific discovery: the need for preclinical models of nonalcoholic steatohepatitis.</a> Hepatology International. 12 (1), 6-16 (2018).</li><li>Ramboer, E., Vanhaecke, T., Rogiers, V., Vinken, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immortalized+human+hepatic+cell+lines+for+in+vitro+testing+and+research+purposes.">Immortalized human hepatic cell lines for in vitro testing and research purposes.</a> Methods in Molecular Biology. 1250, 53-76 (2015).</li><li>G&#243;mez-Lech&#243;n, M. J., Donato, M. T., Castell, J. V., Jover, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hepatocytes+in+primary+culture:+the+choice+to+investigate+drug+metabolism+in+man.">Human hepatocytes in primary culture: the choice to investigate drug metabolism in man.</a> Current Drug Metabolism. 5 (5), 443-462 (2004).</li><li>Marion, M. J., Hantz, O., Durantel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+HepaRG+cell+line:+biological+properties+and+relevance+as+a+tool+for+cell+biology,+drug+metabolism,+and+virology+studies.">The HepaRG cell line: biological properties and relevance as a tool for cell biology, drug metabolism, and virology studies.</a> Methods in Molecular Biology. 640, 261-272 (2010).</li><li>Gripon, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+of+a+human+hepatoma+cell+line+by+hepatitis+B+virus.">Infection of a human hepatoma cell line by hepatitis B virus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 99 (24), 15655-15660 (2002).</li><li>Anth&#233;rieu, S., Rogue, A., Fromenty, B., Guillouzo, A., Robin, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+vesicular+steatosis+by+amiodarone+and+tetracycline+is+associated+with+up-regulation+of+lipogenic+genes+in+HepaRG+cells.">Induction of vesicular steatosis by amiodarone and tetracycline is associated with up-regulation of lipogenic genes in HepaRG cells.</a> Hepatology. 53 (6), 1895-1905 (2011).</li><li>Rouge, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PPAR+agonists+reduce+steatosis+in+oleic+acid-overloaded+HepaRG+cells.">PPAR agonists reduce steatosis in oleic acid-overloaded HepaRG cells.</a> Toxicology and Applied Pharmacology. 276 (1), 73-81 (2014).</li><li>Belloni, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+a+phospho-STAT3-miRNAs+pathway+improves+vesicular+hepatic+steatosis+in+an+in+vitro+and+in+vivo+model.">Targeting a phospho-STAT3-miRNAs pathway improves vesicular hepatic steatosis in an in vitro and in vivo model.</a> Scientific Reports. 8, 13638 (2018).</li><li>Nunn, A. D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+histone+deacetylase+inhibiting+drug+Entinostat+induces+lipid+accumulation+in+differentiated+HepaRG+cells.">The histone deacetylase inhibiting drug Entinostat induces lipid accumulation in differentiated HepaRG cells.</a> Scientific Reports. 6, 28025 (2016).</li><li>Donato, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytometric+analysis+for+drug-induced+steatosis+in+HepG2+cells.">Cytometric analysis for drug-induced steatosis in HepG2 cells.</a> Chemico-Biological Interactions. 181 (3), 417-423 (2009).</li><li>Hellerer, T., Ax&#228;ng, C., Brackmann, C., Hillertz, P., Pilon, M., Enejder, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+of+lipid+storage+in+Caenorhabditis+elegans+using+coherent+anti-Stokes+Raman+scattering+(CARS)+microscopy.">Monitoring of lipid storage in Caenorhabditis elegans using coherent anti-Stokes Raman scattering (CARS) microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 104 (37), 14658-14663 (2007).</li><li>Le, T. T., Ziemba, A., Urasaki, Y., Brotman, S., Pizzorno, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+evaluation+of+hepatic+microvesicular+steatosis+with+multimodal+coherent+anti-Stokes+Raman+scattering+microscopy.">Label-free evaluation of hepatic microvesicular steatosis with multimodal coherent anti-Stokes Raman scattering microscopy.</a> PLoS One. 7 (11), 51092 (2012).</li><li>Guillouzo, A., Corlu, A., Aninat, C., Glaise, D., Morel, F., Guguen-Guillouzo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+hepatoma+HepaRG+cells:+a+highly+differentiated+model+for+studies+of+liver+metabolism+and+toxicity+of+xenobiotics.">The human hepatoma HepaRG cells: a highly differentiated model for studies of liver metabolism and toxicity of xenobiotics.</a> Chemico-Biological Interactions. 168 (1), 66-73 (2007).</li><li>Nelson, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hepatic+HepaRG+cells+maintain+an+organotypic+phenotype+with+high+intrinsic+CYP450+Activity/metabolism+and+significantly+outperform+standard+HepG2/C3A+cells+for+pharmaceutical+and+therapeutic+applications.">Human hepatic HepaRG cells maintain an organotypic phenotype with high intrinsic CYP450 Activity/metabolism and significantly outperform standard HepG2/C3A cells for pharmaceutical and therapeutic applications.</a> Basic &amp; Clinical Pharmacology &amp; Toxicology. 120 (1), 30-37 (2017).</li><li>Gerets, H. H. J., Tilmant, K., Gerin, B., Chanteux, H., Depelchin, B. O., Dhalluin, S., Atienzar, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+primary+human+hepatocytes,+HepG2+cells,+and+HepaRG+cells+at+the+mRNA+level+and+CYP+activity+in+response+to+inducers+and+their+predictivity+for+the+detection+of+human+hepatotoxins.">Characterization of primary human hepatocytes, HepG2 cells, and HepaRG cells at the mRNA level and CYP activity in response to inducers and their predictivity for the detection of human hepatotoxins.</a> Cell Biology and Toxicology. 28 (2), 69-87 (2012).</li><li>Pusl, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+fatty+acids+sensitize+hepatocytes+to+bile+acid-induced+apoptosis.">Free fatty acids sensitize hepatocytes to bile acid-induced apoptosis.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 371 (3), 441-445 (2008).</li><li>Gentile, C. L., Pagliassotti, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+fatty+acids+in+the+development+and+progression+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease.">The role of fatty acids in the development and progression of nonalcoholic fatty liver disease.</a> The Journal of Nutritional Biochemistry. 19 (9), 567-576 (2008).</li><li>Mei, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+roles+of+unsaturated+and+saturated+fatty+acids+on+autophagy+and+apoptosis+in+hepatocytes.">Differential roles of unsaturated and saturated fatty acids on autophagy and apoptosis in hepatocytes.</a> Journal of Pharmacological Experimental Therapy. 339, 487-498 (2011).</li><li>Malhi, H., Bronk, S. F., Werneburg, N. W., Gores, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+fatty+acids+induce+JNK-dependent+hepatocyte+lipoapoptosis.">Free fatty acids induce JNK-dependent hepatocyte lipoapoptosis.</a> Journal of Biological Chemistry. 281, 12093-12101 (2006).</li><li>Moravcov&#225;, A., &#268;ervinkov&#225;, Z., Ku&#269;era, O., Mezera, V., Rychtrmoc, D., Lotkov&#225;, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+oleic+and+palmitic+acid+on+induction+of+steatosis+and+cytotoxicity+on+rat+hepatocytes+in+primary+culture.">The effect of oleic and palmitic acid on induction of steatosis and cytotoxicity on rat hepatocytes in primary culture.</a> Physiological Research. 64, 627-636 (2015).</li><li>Ohsaki, Y., Shinohara, Y., Suzuki, M., Fujimoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pitfall+in+using+BODIPY+dyes+to+label+lipid+droplets+for+fluorescence+microscopy.">A pitfall in using BODIPY dyes to label lipid droplets for fluorescence microscopy.</a> Histochemistry and Cell Biology. 133 (4), 477-480 (2010).</li><li>Rinia, H. A., Burger, K. N., Bonn, M., M&#252;ller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+label-free+imaging+of+lipid+composition+and+packing+of+individual+cellular+lipid+droplets+using+multiplex+CARS+microscopy.">Quantitative label-free imaging of lipid composition and packing of individual cellular lipid droplets using multiplex CARS microscopy.</a> Biophysical Journal. 95 (10), 4908-4914 (2008).</li><li>Waschatko, G., Billecke, N., Schwendy, S., Jaurich, H., Bonn, M., Vilgis, T. A., Parekh, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+in+situ+imaging+of+oil+body+dynamics+and+chemistry+in+germination.">Label-free in situ imaging of oil body dynamics and chemistry in germination.</a> Journal of The Royal Society Interface. 13 (123), (2016).</li><li>J&#252;ngst, C., Winterhalder, M. J., Zumbusch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast+and+long+term+lipid+droplet+tracking+with+CARS+microscopy.">Fast and long term lipid droplet tracking with CARS microscopy.</a> Journal of Biophotonics. 4 (6), 435-441 (2011).</li><li>Welte, M. A., Gould, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+droplet+functions+beyond+energy+storage.">Lipid droplet functions beyond energy storage.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Molecular and Cell Biology of Lipids. 1862 (10), 1260-1272 (2017).</li><li>Cohen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+droplets+as+organelles.">Lipid droplets as organelles.</a> International Review of Cell and Molecular Biology. 337, 83-110 (2018).</li><li>Farese, R. V., Walther, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+droplets+finally+get+a+little+R-E-S-P-E-C-T.">Lipid droplets finally get a little R-E-S-P-E-C-T.</a> Cell. 139 (5), 855-860 (2009).</li></ol>

Этот протокол описывает, как дифференцировать клетки HepaRG и как вызвать везикулярный стеатоз лечения олеатом натрия(рисунок 1A). Действительно, по сравнению с другими человеческими линиями клеток гепатоцеллюлярной карциномы (HCC), клеточная линия HepaRG демонстриру...

Печеночный стеатоз определяется как внутрипеченое накопление жира, в триглицеридов, содержащих липидные капли, по крайней мере 5% от веса печени. Длительное хранение печеночных липидов является потенциально обратимым процессом, однако, это может привести к дисфункции обмена веществ печени, воспаление и передовые формы безалкогольных жировых заболеваний печени (NAFLD), преобладающей причиной хронических заболеваний печени во многих частях мир1,2. НАФЛД является многофакторным заболеванием, которое может эволюционировать до более агрессивного безалкогольного стеатогепатита (NASH), который, в свою очередь, может прогрессировать до цирроза печени и, в небольшом проценте пациентов, гепатоцеллюлярной карциномы (HCC)1,3. Нет утвержденной терапии в настоящее время доступна в качестве конкретного лечения для NAFLD и сочетание диеты и изменения образа жизни остается столп НАФЛД и NASH управления4,5,6.
Молекулярные механизмы, ведущие к развитию печеночного стеатоза в патогенезаНАФЛД, еще предстоит выяснить 7. В этом контексте были разработаны модели мышей для изучения прогрессирования болезни стеатоза человека. Существует множество различных моделей, и каждая из них имеет свои преимущества и недостатки, включая генетические, питательные и химически индуцированные модели, сочетающие различные подходы. Генетически модифицированные (трансгенные или нокаутирующие) мыши спонтанно развивают заболевания печени. Однако следует отметить, что эти мутации очень редки у людей и удаление или чрезмерное выражение одного гена (например, об/об мышь) не могут имитировать этиологию многофакторного заболевания человека на молекулярном уровне8,9. Аналогичным образом, болезнь, приобретенная мышами после диетических или фармакологических манипуляций, не можетимитировать эффекты рациона человека, связанные с развитием НАФЛД у человека 8. Модели животных, однако, способствовали развитию понимания НАФЛД, и этот подход в настоящее время является наиболее часто используемой стратегией в лабораторных исследованиях. Тем не менее, репликация в организме человека результатов, полученных в животных моделях неоднократно не удалось, в результате чего плохой перевод в клинику10.
Таким образом, модели in vitro NAFLD могут играть основополагающую роль в выяснении молекулярных механизмов прогрессии NAFLD, и они представляют собой ценный инструмент для проверки большого количества соединений. Первичные клеточные культуры, увековеченные клеточные линии и биопсия печени широко используются в исследовательских целях11. Первичные гепатоциты человека очень похожи на клинические условия человека, но существует ограниченное число доноров, а первичные клеточные культуры показывают плохую воспроизводимость из-за изменчивости клеток. Эти наблюдения, наряду с этическими и материально-техническими вопросами, привели к тому, что использование первичных гепатоцитов человека было ограничено12. Таким образом, печеночные клеточные линии представляют собой удобную альтернативу, имеющая ряд существенных преимуществ перед первичной культурой, так как линии печеночных клеток постоянно растут, имеют почти неограниченный срок службы и имеют стабильный фенотип. Кроме того, клеточные линии легко доступны, а культурные условия линий печеночной клетки проще, чем у первичных гепатоцитов, и стандартизируются между различными лабораториями.
Здесь мы подробно описываем модель клеточного цитирования печени, представленную печеночными дифференцированными клетками HepaRG, обработанными олеатом натрия. Линия клеток HepaRG была создана из женщины,пациентки, пораженной инфекцией гепатита С, и Эдмондсона класса I хорошо дифференцированной опухоли печени14. Линия клеток HepaRG является человеческой бипотентной линии клеток-прародителей, способной дифференцироваться при воздействии 2% диметилсульфида (DMSO) на два различных клеточных фенотипа: желтоподобные и гепатоцитные клетки. Дифференцированные клетки HepaRG (dHepaRG) имеют некоторые особенности и свойства со взрослыми гепатоцитами и обладают способностью четко выражать гены, характерные для печени, такие как Альбумин, АлдолазеБ, Цитохром P450 2E1 (CYP2E1) и Cytochrome P450 3A4 (CYP3A4)13 (шаг 3). Лечение клеток dHepaRG жирным кислотным олеатом натрия (250 мкм) в течение 5 дней приводит к выработке цитоплазмических липидных капель, имитирующих эффекты жировой печени14,15,17,18 ( шаг 4). Накопление липидных капель может быть легко обнаружено маслом Red O окрашивания (шаг 5), лизохром жирорастворимый краситель, который окрашивает нейтральные триглицериды и липиды красно-оранжевый. Для эффективной количественной оценки липидов в жирной dHepaRG, здесь мы иллюстрируем цитофторетриметрический анализ после окрашивания с 4,4-дифторо-1,3,5,7-тетраметил-4-бора-3a,4a-диаза-с-индицен (Bodipy 505/515) (шаг 6), липофилии флоцентистые внутриклеточных липидных органов и был использован для обозначения липидных капель19. Кроме того, здесь мы показываем, как оценить стеатоз по количественной полимеразной цепной реакции (qPCR) (шаг 7) генной экспрессии дерегуляции нескольких метаболических генов в клетках dHepaRG. Для дальнейшей характеристики и количественной оценки накопления липидных капель после лечения олеатом натрия, мы выполнили когерентную анти-Стокс Раман рассеяния (CARS) микроскопии (шаг 8), инновационный метод, который позволяет визуализации и количественной оценки липидные капли без маркировки20,21.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:799px;" width="797">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Hyclone HyClone Fetal Clone II&#160;</td>
			<td style="width:240px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:143px;">SH30066</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">William&#8217;s E medium with GlutaMAX&#160;</td>
			<td style="width:240px;">Thermofisher</td>
			<td>32551087</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin/streptomycin&#160;</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td>P4333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Insulin&#160;</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td>I9278</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">hydrocortisone hemisuccinate</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td>H2270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">DMSO, dimethyl sulfoxide</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td style="width:143px;">D2438&#160;&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Sodium Oleate</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td style="width:143px;">O7501&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Methanol</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td>179337</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Isopropanol</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td style="width:143px;">278475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BODIPY 505/515</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>D3921</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">PBS</td>
			<td style="width:240px;">Thermofisher</td>
			<td>14190-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Formaldehyde solution</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td>252549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">RNAse free DNAseI</td>
			<td style="width:240px;">Promega</td>
			<td>M198A&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass-bottomed dishes</td>
			<td style="width:240px;">Willco Wells</td>
			<td style="width:143px;">GWST-5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Oil Red solution</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td style="width:143px;">O625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">CellTiter 96 AQueous One Solution</td>
			<td style="width:240px;">Promega&#160;</td>
			<td style="width:143px;">G3582</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">q-PCR oligo name</td>
			<td>Sequence</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ACACB FOR</td>
			<td>CAAGCCGATCACCAAGAGTAAA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">ACACB REV</td>
			<td>CCCTGAGTTATCAGAGGCTGG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:239px;">b-actin FOR</td>
			<td style="width:240px;">GCACTCTTCCAGCCTTCCT</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:239px;">b-actin REV</td>
			<td style="width:240px;">AGGTCTTTGCGGATGTCCAC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ALBUMIN FOR</td>
			<td>TGCTTGAATGTGCTGATGACAGG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ALBUMIN REV</td>
			<td>AAGGCAAGTCAGCAGGCATCTCATC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ALDOB FOR</td>
			<td>GCATCTGTCAGCAGAATGGA&#160;</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ALDOB REV</td>
			<td>TAGACAGCAGCCAGGACCTT</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">APOB FOR</td>
			<td>CCTCCGTTTTGGTGGTAGAG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">APOB REV</td>
			<td>&#160;CCTAAAAGCTGGGAAGCTGA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">APOC3 FOR</td>
			<td>CTCAGCTTCATGCAGGGTTA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">APOC3 REV</td>
			<td>GGTGCTCCAGTAGTCTTTCAG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CPT1A FOR</td>
			<td>TCATCAAGAAATGTCGCACG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CPT1A REV</td>
			<td>GCCTCGTATGTGAGGCAAAA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CYP2E1 FOR</td>
			<td>TTGAAGCCTCTCGTTGACCC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CYP2E1 REV</td>
			<td>CGTGGTGGGATACAGCCAA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CYP3A4 FOR</td>
			<td>CTTCATCCAATGGACTGCATAAAT</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CYP3A4 REV</td>
			<td>TCCCAAGTATAACACTCTACACAGACAA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GAPDH FOR</td>
			<td>TGACAACTTTGGTATCGTGGAAGG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GAPDH REV</td>
			<td>AGGGATGATGTTCTGGAGAGCC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GPAM FOR</td>
			<td>TCTTTGGGTTTGCGGAATGTT</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GPAM REV</td>
			<td>ATGCACATCTCGCTCTTGAATAA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IL6 FOR</td>
			<td>CCTGAACCTTCCAAAGATGGC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IL6 REV</td>
			<td>ACCTCAAACTCCAAAAGACCAGTG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PDK4 FOR</td>
			<td>ACAGACAGGAAACCCAAGCCAC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PDK4 REV</td>
			<td>TGGAGGTGAGAAGGAACATACACG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PLIN2 FOR</td>
			<td>TTGCAGTTGCCAATACCTATGC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PLIN2 REV</td>
			<td>CCAGTCACAGTAGTCGTCACA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PLIN4 FOR</td>
			<td>AATGAGTTGGAGGGGCTGGGGGACATC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PLIN4 REV</td>
			<td>GGTCACCTAAACGAACGAAGTAGC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SCD FOR</td>
			<td>TCTAGCTCCTATACCACCACCA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SCD REV</td>
			<td>TCGTCTCCAACTTATCTCCTCC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SLC2A1 FOR</td>
			<td>TGCTCATCAACCGCAACGAG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SLC2A1 REV</td>
			<td>CCGACTCTCTTCCTTCATCTCCTG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">18S FOR</td>
			<td>CGCCGCTAGAGGTGAAATTC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">18S REV</td>
			<td>TTGGCAAATGCTTTCGCTC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

inducing and characterizing vesicular steatosis in differentiated heparg cells

Печеночный стеатоз представляет собой метаболическую дисфункцию, которая является результатом накопления триггеросодержащих липидных капель в гепатоцитах. Чрезмерное накопление жира приводит к безалкогольной жировой болезни печени (NAFLD), которая потенциально обратима и может перерасти в безалкогольный стеатогепатит (NASH) и в конечном итоге цирроз и гепатоцеллюля). Молекулярные механизмы, связывающие накопление липидов в гепатоцитах с прогрессированием в NASH, необратимые повреждения печени, фиброз, цирроз печени и даже HCC до сих пор остается неясным. С этой целью, несколько in vitro и in vivo модели были разработаны, чтобы выяснить патологические процессы, которые вызывают NAFLD. В настоящем исследовании, мы описываем клеточной модели для индукции печени везикулярный стеатоз, который состоит из DMSO-дифференцированных человеческих печеночных клеток HepaRG, обработанных жирными кислотами соли олеата. Действительно, олейт натрия обработанных клеток HepaRG накапливают липидные капли в цитоплазме и показывают типичные особенности стеатоза. Эта человеческая модель in vitro представляет собой ценную альтернативу моделям in vivo мышей, а также первичным человеческим гепатоцитам. Мы также представляем сравнение нескольких методов количественной оценки и оценки накопления жира в клетках HepaRG, включая окодело oil Red O, цитофторметрическое измерение Бодипи, метаболический анализ экспрессии генов qPCR и когерентный анти-Стокс Рамана рассеяния (CARS) микроскопии. Изображение CARS сочетает в себе химическую специфичность Раманской спектроскопии, метода химического анализа, хорошо известного в материалах, с преимуществами высокоскоростных нелинейных оптических микроскопов с высоким разрешением количественное увеличение накопления липидов и динамики липидных капель. Создание эффективной модели in vitro для индукции везикулярного стеатоза, наряду с точным методом количественной оценки и характеристики накопления липидов, может привести к развитию ранней стадии диагностики НАФЛД с помощью идентификации молекулярных маркеров и создания новых стратегий лечения.

Этот протокол описывает эффективный метод, чтобы вызвать и охарактеризовать везикулярный стеатоз в DMSO дифференцированных клеток HepaRG натрия олеат лечения(рисунок 1A).
Дифференциация клеток HepaRG. Чтобы эффективно вызвать дифференциацию...

Watch this Scientific Journal Video about Inducing and Characterizing Vesicular Steatosis in Differentiated HepaRG Cells at JoVE.com

Inducing and Characterizing Vesicular Steatosis in Differentiated HepaRG Cells

В этом исследовании мы описываем подробный протокол для индуцирования печени везикулярный стеатоз в дифференцированных клетках HepaRG с жирным кислотным олеатом соли натрия и используем методы обнаружения и количественной оценки накопления липидов, включая когерентный анти-Стокс Рамана рассеяния (CARS) микроскопии, цитофторетриметрический анализ, Масло красный O окрашивания, и qPCR.

Индуцирование и характеристика везикулярного стеатоза в дифференцированных клетках гепаррг

Hepatic steatosis represents a metabolic dysfunction that results from an accumulation of triglyceride-containing lipid droplets in hepatocytes. Excessive ...

Этот протокол описывает, как вызвать везикулярный стеатоз печени в дифференцированных клетках гепаРГ и методах обнаружения и количественной оценки накопления липидов. Эта модель клеток человека in vitro представляет собой ценную альтернативу моделям мышей in vivo и первичным гепатоцитам человека. Оттепель азота криоконсервированных низким проходом партии клеток HepaRG, погружая их в 37 градусов по Цельсию ванны до размораживания.Быстро перенесите клетки в 15-миллилитровую трубку, содержащую 10 миллилитров размножающейся среды. После центрифугирования в течение пяти минут, отбросить супернатант и повторного перерасхода клеток в пять миллилитров размножающихся среды. Подсчитайте клетки и разбавьте для того, чтобы пластины 250000 клеток на квадратный сантиметр.Плита клетки на 100-миллиметровой клеточной культуры блюда и обновить средний каждые два или три дня. Клетки размножаются с удвоением времени около 24 часов. Как только клетки HepaRG достигают 80%-ного слияния, отсоедините их через трех-пятиминутную инкубацию с 0,05%-трипсином раствором.Соберите клетки в размножающиеся среды и центрифуги в течение пяти минут, как и раньше. Откажитесь от супернатанта и распространяйте клетки пятью миллилитров размножающихся сред. Опять же, подсчитайте клетки и разбавить для того, чтобы пластины 250000 клеток на квадратный сантиметр.На этом этапе, усилить клетки, повторяя эти шаги, чтобы достичь соответствующего количества клеток, чтобы начать эксперименты. Чтобы криопресергить клетки HepaRG, отсоедините клетки через 24 часа после покрытия через трех-пятиминутную инкубацию с 0,05%трипсином раствором. Соберите клетки в размножающиеся среды и центрифуги в течение пяти минут, как и раньше.Откажитесь от супернатанта, перерасходуйте клетки в один миллилитр на партию замораживания среды и криопресервуйте партии в жидком азоте. На нулевом дне семенные клетки HepaRG на уровне 250 000 клеток на квадратный сантиметр в обработанные культурой блюда с соответствующим объемом среды пролиферации. Два блюда должны быть поцарны для каждого анализа, один для контрольных клеток и один для oleate-обработанных клеток.На второй день и четвертый день, изменить среду с соответствующим объемом распространения среды и пусть клетки растут, пока они не достигнут слияния. На седьмой день клетки должны быть на 100% стечены. Вымойте клетки один раз с 1X PBS.Затем удалите 1X PBS и добавьте соответствующий объем дифференциации среды. В дни восемь, девять, 12, 15 и 18, мыть клетки один раз с 1X PBS, прежде чем добавить соответствующий объем дифференциации среды. На 21-й день наблюдайте за клетками HepaRG под микроскопом и убедитесь, что клетки являются стеченными дифференцированными культурами.В качестве контроля, урожай одного контрольного блюда для выполнения анализа экспрессии генов маркера гена. В день 21, дифференцированные клетки HepaRG могут быть криоконсервированы в жидком азоте. На 21 день разбавляют олеатом натрия с соответствующим объемом полной дифференциации среды до конечной концентрации 250 микромолеров.Добавить 99%метанол в соотношении от одного до 400 в другой aliquot дифференциации среды, чтобы сделать лечение управления транспортным средством. Вымойте клетки один раз с 1X PBS и добавить автомобиль или олеат натрия среды. На 23-й и 25-й день измените среду с соответствующим объемом свежеприготовленной среды.На 26-й день наблюдайте за клетками с помощью оптической микроскопии. Липидные капли накапливаются в обработанных клетках олеата натрия и легко видны как полупрозрачные капли в цитоплазме. Для выполнения Масляный красный O окрашивания, сначала мыть клетки один раз с 1X PBS и удалить 1X PBS полностью.Добавить 4%paraformaldehyde и инкубировать в течение 15 минут при комнатной температуре. Удалите параформальдегид и мыть клетки дважды с 1X PBS. После удаления PBS, инкубировать клетки с 60%изопропанол в течение пяти минут при комнатной температуре.Удалите изопропанол и дайте клеткам полностью высохнуть при комнатной температуре. Теперь добавьте масляный красный O рабочий раствор в клетки и инкубировать при комнатной температуре в течение 30 минут. Объем рабочего раствора, необходимого для каждого образца, соответствует объему средств массовой информации, используемых для культивирования клеток.Удалите раствор Oil Red O и немедленно добавьте двойную дистиллированную воду. После мытья клеток четыре раза с двойной дистиллированной водой, приобрести изображения под микроскопом для анализа. Чтобы украсить масло Красного O красителя, удалить всю воду и дайте высохнуть.Затем добавьте один миллилитр 100%изопропанола и инкубировать в течение 10 минут с нежной тряской при комнатной температуре. Pipette изопропанол с элайтовым маслом Красный O красителя вверх и вниз несколько раз, гарантируя, что все масло Красный O находится в растворе. Перенесите раствор на кювет.Измерьте оптическую плотность на 500 нанометров с помощью спектрофотометрии и используйте 100% изопропанол в качестве пустого. Вымойте клетки один раз с 1X PBS. Затем инкубировать 100 наномоляр бодипи разбавленных в 1X PBS в темноте в течение 40 минут при 37 градусах по Цельсию.В измерения цитометрии потока должен быть включен неокрашиваемый контроль. Удалить окрашивание раствор и мыть клетки один раз с 1X PBS. Затем, мыть клетки снова и удалить PBS полностью.Добавить 4%paraformaldehyde и инкубировать в течение 15 минут при комнатной температуре. Удалите параформальдегид и мыть образцы три раза в течение пяти минут в PBS. Клетки могут храниться в 1X PBS при четырех градусах цельсия или изображения немедленно.Для хранения, оберните с Parafilm и накрыть алюминиевой фольгой, чтобы предотвратить клетки от высыхания. Для проверки эффективной индукции стеатоза, олеат-обработанные и контрольные клетки HepaRG были окрашены в масляный красный O краситель. После окрашивания липидные капли легко видны как красные капли.Окрашивание может быть количественно спектрофотометрическое измерение масла R O красителя eluted с изопропанолом. Поглощение эладутного масла Red O из клеток прямо пропорционально накоплению цитоплазмических липидных капель. Концентрация олеата натрия и время экспозиции определялись анализом жизнеспособности МТТ колоритной клетки.Продукт Formosan количественно измеряется его абсорбаностью на 490 нанометров и прямо пропорционален количеству живых клеток в культуре. Лечение олеатом натрия сравнивали с лечением пальмитатом натрия. В качестве контроля использовался апоптотический препарат доксорубицин.Для количественной оценки увеличения содержания липидов клеток после лечения олеатом натрия, окрашивание красителем Бодипи было использовано для обозначения липидных капель. Используя цитофторометрический анализ, можно количественно определить содержание триглицеридов по Bodipy средняя флуоресцентная интенсивность, которая выше в олеат-обработанных клеток по сравнению с контрольными клетками. Это указывает на эффективное накопление жира после лечения олеатом.Действительно, изображения Бодипи-окрашенных клеток показывают ярко-зеленые флуоресцентные липидные капли в олеат-обработанных клетках, которые не видны в контрольных клетках. Для дальнейшей характеристики накопления липидных капель после лечения олеатом натрия, КАРС микроскопия может быть выполнена, как описано в текстовом протоколе, который позволяет липидных капель количественно без маркировки. Эта клеточная модель может повысить знания молекулярных механизмов, участвующих в не онкотических жировых заболеваний печени и может привести к разработке новых маркеров для ранней диагностики и новых стратегий лечения.

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Выделение, характеристика и сравнительный Дифференциация по правам зубных стволовых клеток, полученных из целлюлозы постоянных зубов с помощью двух различных методов

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Inducing Myointimal Hyperplasia Versus Atherosclerosis in Mice: An Introduction of Two Valid Models

Склонение Myointimal гиперплазия против атеросклероза у мышей: Введение двух допустимых моделей

Various in vivo laboratory rodent models for the induction of artery stenosis have been established to mimic diseases that include arterial plaque ...

Minimal Invasive Surgical Procedure of Inducing Myocardial Infarction in Mice

Минимально инвазивная хирургическая процедура индукции инфаркта миокарда у мышей

Myocardial infarction still remains the main cause of death in western countries, despite considerable progress in the stent development area in the last ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Изучение рака поджелудочной железы стволовых клеток Характеристики для разработки новых стратегий лечения

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Глаукома индуцирующего процедуры в<em&gt; В Vivo</em&gt; Крыса модель и всего монтажа Retina Подготовка

Glaucoma is a disease of the central nervous system affecting retinal ganglion cells (RGCs). RGC axons making up the optic nerve carry visual input to the ...

Inducing Ischemia-reperfusion Injury in the Mouse Ear Skin for Intravital Multiphoton Imaging of Immune Responses

Наводить Ишемия-реперфузионного повреждения в слуховом коже мышей прижизненной многофотонной визуализации иммунных реакций

Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when there is transient hypoxia due to the obstruction of blood flow (ischemia) followed by a subsequent ...

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

Форсколин-индуцированной Отек в кишечном органоидов:<em&gt; In Vitro</em&gt; Анализ для оценки ответа на наркотики в больных муковисцидозом

Recently-developed cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-modulating drugs correct surface expression and/or function of the mutant ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Оптимизированный анализ<em&gt; В Vivo</em&gt; и<em&gt; In Vitro</em&gt; Стеатоз печени

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Индуцирование острая травма легких у мышей путем прямого внутричехального липополисахарида интиллация

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice

Пересмотренный метод для индуцирования вторичной лимфедемы в Hindlimb мышей

Animal models are of paramount importance in the research of lymphedema in order to understand the pathophysiology of the disease but also to explore ...