Name: inducing and characterizing vesicular steatosis in differentiated heparg cells
Uploaded: 2019-07-18T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Inducing and Characterizing Vesicular Steatosis in Differentiated HepaRG Cells at JoVE.com

Vi tackar prof. Christian Trepo (INSERM U871, Lyon, Frankrike), som vänligt gav HepaRG celler. Vi är tacksamma mot Rita Appodia för administrativ hjälp. Detta arbete stöddes av MIUR-Ministero dell' istruzione, dell' Università e della ricerca (FIRB 2011 – 2016 RBAP10XKNC) och Sapienza-universitetet i Rom (prot. C26A13T8PS; Prot. C26A142MCH; Prot. C26A15LSXL).

1. beredning av odlingsmedier och reagenser
<ol><li>Prolifererande medium: komplettera Williams E medium med GlutaMAX, 10% foster bovint serum (FBS), 1% penicillin/streptomycin, 5 μg/mL insulin och 0,5 μM hydrokortison hemisuccinat.</li>
	<li>Differentiering medium: supplement Williams E medium med GlutaMAX, 10% FBS, 1% penicillin/streptomycin, 5 μg/mL insulin, 50 μM hydrokortison hemisuccinat och 2% DMSO.</li>
	<li>Frysning medium: komplettera prolifererande medium med 10% DMSO.</li>
	<li>Natriumoleat: lös i 99% ...

<ol>
	<li>Starley, B. Q., Calcagno, C. J., Harrison, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonalcoholic+fatty+liver+disease+and+hepatocellular+carcinoma:+a+weighty+connection.">Nonalcoholic fatty liver disease and hepatocellular carcinoma: a weighty connection.</a> Hepatology. 51 (5), 1820-1832 (2010).</li><li>Byrne, C. D., Targher, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NAFLD:+a+multisystem+disease.">NAFLD: a multisystem disease.</a> Journal of Hepatology. 62 (1), 47-64 (2015).</li><li>Marra, F., Gastaldelli, A., Svegliati Baroni, G., Tell, G., Tiribelli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+basis+and+mechanisms+of+progression+of+non-+alcoholic+steatohepatitis.">Molecular basis and mechanisms of progression of non- alcoholic steatohepatitis.</a> Trends in Molecular Medicine. 14, 72-81 (2008).</li><li>Chalasani, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+diagnosis+and+management+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease:+Practice+guidance+from+the+American+Association+for+the+Study+of+Liver+Diseases.">The diagnosis and management of nonalcoholic fatty liver disease: Practice guidance from the American Association for the Study of Liver Diseases.</a> Hepatology. 67 (1), 328-357 (2018).</li><li>Banini, B. A., Sanyal, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+and+future+pharmacologic+treatment+of+nonalcoholic+steatohepatitis.">Current and future pharmacologic treatment of nonalcoholic steatohepatitis.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 33 (3), 134-141 (2017).</li><li>Takahashi, Y., Sugimoto, K., Inui, H., Fukusato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+pharmacological+therapies+for+nonalcoholic+fatty+liver+disease/nonalcoholic+steatohepatitis.">Current pharmacological therapies for nonalcoholic fatty liver disease/nonalcoholic steatohepatitis.</a> World Journal of Gastroenterology. 21 (13), 3777-3785 (2015).</li><li>Younossi, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+burden+of+NAFLD+and+NASH:+trends,+predictions,+risk+factors+and+prevention.">Global burden of NAFLD and NASH: trends, predictions, risk factors and prevention.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 15 (1), 11-20 (2018).</li><li>Santhekadur, P. K., Kumar, D. P., Sanyal, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+models+of+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">Preclinical models of non-alcoholic fatty liver disease.</a> Journal of Hepatology. 68 (2), 230-237 (2018).</li><li>Nagarajan, P., Mahesh Kumar, M. J., Venkatesan, R., Majundar, S. S., Juyal, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+modified+mouse+models+for+the+study+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease.">Genetically modified mouse models for the study of nonalcoholic fatty liver disease.</a> World Journal of. Gastroenterology. 18 (11), 1141-1153 (2012).</li><li>Oseini, A. M., Cole, B. K., Issa, D., Feaver, R. E., Sanyal, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translating+scientific+discovery:+the+need+for+preclinical+models+of+nonalcoholic+steatohepatitis.">Translating scientific discovery: the need for preclinical models of nonalcoholic steatohepatitis.</a> Hepatology International. 12 (1), 6-16 (2018).</li><li>Ramboer, E., Vanhaecke, T., Rogiers, V., Vinken, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immortalized+human+hepatic+cell+lines+for+in+vitro+testing+and+research+purposes.">Immortalized human hepatic cell lines for in vitro testing and research purposes.</a> Methods in Molecular Biology. 1250, 53-76 (2015).</li><li>G&#243;mez-Lech&#243;n, M. J., Donato, M. T., Castell, J. V., Jover, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hepatocytes+in+primary+culture:+the+choice+to+investigate+drug+metabolism+in+man.">Human hepatocytes in primary culture: the choice to investigate drug metabolism in man.</a> Current Drug Metabolism. 5 (5), 443-462 (2004).</li><li>Marion, M. J., Hantz, O., Durantel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+HepaRG+cell+line:+biological+properties+and+relevance+as+a+tool+for+cell+biology,+drug+metabolism,+and+virology+studies.">The HepaRG cell line: biological properties and relevance as a tool for cell biology, drug metabolism, and virology studies.</a> Methods in Molecular Biology. 640, 261-272 (2010).</li><li>Gripon, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+of+a+human+hepatoma+cell+line+by+hepatitis+B+virus.">Infection of a human hepatoma cell line by hepatitis B virus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 99 (24), 15655-15660 (2002).</li><li>Anth&#233;rieu, S., Rogue, A., Fromenty, B., Guillouzo, A., Robin, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+vesicular+steatosis+by+amiodarone+and+tetracycline+is+associated+with+up-regulation+of+lipogenic+genes+in+HepaRG+cells.">Induction of vesicular steatosis by amiodarone and tetracycline is associated with up-regulation of lipogenic genes in HepaRG cells.</a> Hepatology. 53 (6), 1895-1905 (2011).</li><li>Rouge, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PPAR+agonists+reduce+steatosis+in+oleic+acid-overloaded+HepaRG+cells.">PPAR agonists reduce steatosis in oleic acid-overloaded HepaRG cells.</a> Toxicology and Applied Pharmacology. 276 (1), 73-81 (2014).</li><li>Belloni, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+a+phospho-STAT3-miRNAs+pathway+improves+vesicular+hepatic+steatosis+in+an+in+vitro+and+in+vivo+model.">Targeting a phospho-STAT3-miRNAs pathway improves vesicular hepatic steatosis in an in vitro and in vivo model.</a> Scientific Reports. 8, 13638 (2018).</li><li>Nunn, A. D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+histone+deacetylase+inhibiting+drug+Entinostat+induces+lipid+accumulation+in+differentiated+HepaRG+cells.">The histone deacetylase inhibiting drug Entinostat induces lipid accumulation in differentiated HepaRG cells.</a> Scientific Reports. 6, 28025 (2016).</li><li>Donato, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytometric+analysis+for+drug-induced+steatosis+in+HepG2+cells.">Cytometric analysis for drug-induced steatosis in HepG2 cells.</a> Chemico-Biological Interactions. 181 (3), 417-423 (2009).</li><li>Hellerer, T., Ax&#228;ng, C., Brackmann, C., Hillertz, P., Pilon, M., Enejder, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+of+lipid+storage+in+Caenorhabditis+elegans+using+coherent+anti-Stokes+Raman+scattering+(CARS)+microscopy.">Monitoring of lipid storage in Caenorhabditis elegans using coherent anti-Stokes Raman scattering (CARS) microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 104 (37), 14658-14663 (2007).</li><li>Le, T. T., Ziemba, A., Urasaki, Y., Brotman, S., Pizzorno, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+evaluation+of+hepatic+microvesicular+steatosis+with+multimodal+coherent+anti-Stokes+Raman+scattering+microscopy.">Label-free evaluation of hepatic microvesicular steatosis with multimodal coherent anti-Stokes Raman scattering microscopy.</a> PLoS One. 7 (11), 51092 (2012).</li><li>Guillouzo, A., Corlu, A., Aninat, C., Glaise, D., Morel, F., Guguen-Guillouzo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+hepatoma+HepaRG+cells:+a+highly+differentiated+model+for+studies+of+liver+metabolism+and+toxicity+of+xenobiotics.">The human hepatoma HepaRG cells: a highly differentiated model for studies of liver metabolism and toxicity of xenobiotics.</a> Chemico-Biological Interactions. 168 (1), 66-73 (2007).</li><li>Nelson, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hepatic+HepaRG+cells+maintain+an+organotypic+phenotype+with+high+intrinsic+CYP450+Activity/metabolism+and+significantly+outperform+standard+HepG2/C3A+cells+for+pharmaceutical+and+therapeutic+applications.">Human hepatic HepaRG cells maintain an organotypic phenotype with high intrinsic CYP450 Activity/metabolism and significantly outperform standard HepG2/C3A cells for pharmaceutical and therapeutic applications.</a> Basic &amp; Clinical Pharmacology &amp; Toxicology. 120 (1), 30-37 (2017).</li><li>Gerets, H. H. J., Tilmant, K., Gerin, B., Chanteux, H., Depelchin, B. O., Dhalluin, S., Atienzar, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+primary+human+hepatocytes,+HepG2+cells,+and+HepaRG+cells+at+the+mRNA+level+and+CYP+activity+in+response+to+inducers+and+their+predictivity+for+the+detection+of+human+hepatotoxins.">Characterization of primary human hepatocytes, HepG2 cells, and HepaRG cells at the mRNA level and CYP activity in response to inducers and their predictivity for the detection of human hepatotoxins.</a> Cell Biology and Toxicology. 28 (2), 69-87 (2012).</li><li>Pusl, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+fatty+acids+sensitize+hepatocytes+to+bile+acid-induced+apoptosis.">Free fatty acids sensitize hepatocytes to bile acid-induced apoptosis.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 371 (3), 441-445 (2008).</li><li>Gentile, C. L., Pagliassotti, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+fatty+acids+in+the+development+and+progression+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease.">The role of fatty acids in the development and progression of nonalcoholic fatty liver disease.</a> The Journal of Nutritional Biochemistry. 19 (9), 567-576 (2008).</li><li>Mei, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+roles+of+unsaturated+and+saturated+fatty+acids+on+autophagy+and+apoptosis+in+hepatocytes.">Differential roles of unsaturated and saturated fatty acids on autophagy and apoptosis in hepatocytes.</a> Journal of Pharmacological Experimental Therapy. 339, 487-498 (2011).</li><li>Malhi, H., Bronk, S. F., Werneburg, N. W., Gores, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+fatty+acids+induce+JNK-dependent+hepatocyte+lipoapoptosis.">Free fatty acids induce JNK-dependent hepatocyte lipoapoptosis.</a> Journal of Biological Chemistry. 281, 12093-12101 (2006).</li><li>Moravcov&#225;, A., &#268;ervinkov&#225;, Z., Ku&#269;era, O., Mezera, V., Rychtrmoc, D., Lotkov&#225;, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+oleic+and+palmitic+acid+on+induction+of+steatosis+and+cytotoxicity+on+rat+hepatocytes+in+primary+culture.">The effect of oleic and palmitic acid on induction of steatosis and cytotoxicity on rat hepatocytes in primary culture.</a> Physiological Research. 64, 627-636 (2015).</li><li>Ohsaki, Y., Shinohara, Y., Suzuki, M., Fujimoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pitfall+in+using+BODIPY+dyes+to+label+lipid+droplets+for+fluorescence+microscopy.">A pitfall in using BODIPY dyes to label lipid droplets for fluorescence microscopy.</a> Histochemistry and Cell Biology. 133 (4), 477-480 (2010).</li><li>Rinia, H. A., Burger, K. N., Bonn, M., M&#252;ller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+label-free+imaging+of+lipid+composition+and+packing+of+individual+cellular+lipid+droplets+using+multiplex+CARS+microscopy.">Quantitative label-free imaging of lipid composition and packing of individual cellular lipid droplets using multiplex CARS microscopy.</a> Biophysical Journal. 95 (10), 4908-4914 (2008).</li><li>Waschatko, G., Billecke, N., Schwendy, S., Jaurich, H., Bonn, M., Vilgis, T. A., Parekh, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+in+situ+imaging+of+oil+body+dynamics+and+chemistry+in+germination.">Label-free in situ imaging of oil body dynamics and chemistry in germination.</a> Journal of The Royal Society Interface. 13 (123), (2016).</li><li>J&#252;ngst, C., Winterhalder, M. J., Zumbusch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast+and+long+term+lipid+droplet+tracking+with+CARS+microscopy.">Fast and long term lipid droplet tracking with CARS microscopy.</a> Journal of Biophotonics. 4 (6), 435-441 (2011).</li><li>Welte, M. A., Gould, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+droplet+functions+beyond+energy+storage.">Lipid droplet functions beyond energy storage.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Molecular and Cell Biology of Lipids. 1862 (10), 1260-1272 (2017).</li><li>Cohen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+droplets+as+organelles.">Lipid droplets as organelles.</a> International Review of Cell and Molecular Biology. 337, 83-110 (2018).</li><li>Farese, R. V., Walther, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+droplets+finally+get+a+little+R-E-S-P-E-C-T.">Lipid droplets finally get a little R-E-S-P-E-C-T.</a> Cell. 139 (5), 855-860 (2009).</li></ol>

Detta protokoll beskriver hur man differentierar HepaRG-celler och hur man inducerar vesikulär steatos genom natriumoleatbehandling (figur 1A). I själva verket, jämfört med andra humana hepatocellulära carcinom (HCC) cellinjer, heparg cell linjen uppvisar egenskaper hos vuxna humana hepatocyter, som representerar ett värdefullt alternativ till ex vivo odlade primära humana hepatocyter13,14 ,<sup cl...

Leversteatos definieras som intrahepatisk fettansamling, inom triglyceridinnehållande lipiddroppar, med minst 5% av lever vikten. Långvarig nedsatt lipidlagring är en potentiellt reversibel process, emellertid, det kan leda till lever metabolisk dysfunktion, inflammation och avancerade former av alkoholfria fettlever (NAFLD), den dominerande orsaken till kronisk leversjukdom i många delar av världen1,2. NAFLD är en multifaktoriell sjukdom som kan utvecklas till den mer aggressiva alkoholhaltig steatohepatit (NASH), som i sin tur kan utvecklas till cirros och, i en liten andel av patienterna, till Hepatocellulär cancer (HCC)1,3. Ingen godkänd behandling finns för närvarande som en särskild behandling för NAFLD och kombinationen av kost och livsstilsförändringar förblir pelaren i NAFLD och NASH Management4,5,6.
De molekylära mekanismerna som leder till utvecklingen av leversteatos i patogenesen av NAFLD återstår fortfarande att belysa7. I detta sammanhang har musmodeller utvecklats för att studera progression av Human leversteatos. En myriad av olika modeller existerar, och var och en har sina fördelar och nackdelar, inklusive genetiska, näringsmässiga och kemiskt inducerade modeller som kombinerar olika metoder. Genetiskt modifierade (transgena eller knockout) möss utvecklar spontant leversjukdom. Emellertid, det bör noteras att dessa mutationer är mycket sällsynta hos människor och radering eller överuttryck av en enda gen (t. ex., OB/ob mus) kan inte efterlikna etiologin för den multifaktoriella mänskliga sjukdomen på molekylär nivå8,9. Likaså kan den sjukdom som förvärvas av möss efter diet eller farmakologisk manipulation inte efterlikna effekterna av mänsklig kost i samband med utvecklingen av NAFLD i man8. Djurmodeller har dock underlättat utvecklingen i förståelsen av NAFLD och detta tillvägagångssätt är för närvarande den mest använda strategin i laboratorieforskning. Ändå har replikation hos människor av resultat som erhållits i djurmodeller upprepade gånger misslyckats, vilket orsakar dålig översättning till kliniken10.
Därför, in vitro-modeller av NAFLD kan spela en grundläggande roll i att belysa de molekylära mekanismerna i NAFLD progression, och de utgör ett värdefullt verktyg för att avskärma ett stort antal föreningar. Primära cellkulturer, förevigade cellinjer och leverbiopsier har i stor utsträckning använts för forskningsändamål11. Primära humana hepatocyter liknar mycket humana kliniska tillstånd, men det finns ett begränsat antal givare, och primära cellkulturer uppvisar dålig reproducerbarhet på grund av cellernas variation. Dessa observationer, tillsammans med etiska och logistiska frågor, har resulterat i användning av humana primära hepatocyter är begränsad12. Sålunda, lever cellinjer utgör ett bekvämt alternativ, med flera viktiga fördelar jämfört med primärkulturen, som lever cellinjer växa stadigt, har en nästan obegränsad livslängd, och har en stabil fenotyp. Dessutom är cellinjer lättillgängliga och kultur förhållandena för levercellinjer är enklare än för primära hepatocyter och är standardiserade mellan olika laboratorier.
Här beskriver vi i detalj en in vitro-cellbaserad modell av levervesikulär steatos, representerad av leverdifferentierade HepaRG-celler behandlade med fettsyran natriumoleat. Den HepaRG cellinjer etablerades från en kvinnlig patient som drabbats av hepatit C-infektion och en Edmondson grad jag väl differentierade lever tumör14. Den HepaRG cellinjer är en mänsklig bipotent progenitorcellinjer som kan differentiera vid exponering för 2% dimetylsulfoxid (DMSO) mot två olika cell fenotyper: biliär-liknande och hepatocyte-liknande celler. Differentierade HepaRG celler (dHepaRG) dela vissa funktioner och egenskaper med vuxna hepatocyter och besitter förmågan att stabilt uttrycka leverspecifika gener såsom albumin, AldolaseB, cytokrom P450 2E1 (CYP2E1), och cytokrom P450 3A4 (CYP3A4)13 (steg 3). Behandling av dheparg celler med fettsyran salt natriumoleat (250 μm) för 5 dagar leda till generering av cytoplasmiska lipiddroppar, imitera effekterna av fettlever14,15,17,18 ( steg 4). Ansamling av lipiddroppar kan lätt upptäckas av olja röd O färgning (steg 5), en lysokrom fettlösliga färgämnen som fläckar neutrala triglycerider och lipider röd-orange. För att effektivt kvantifiera lipider i Fatty dHepaRG, här illustrerar vi cytofluorimetrisk analys efter färgning med 4, 4-difluoro-1, 3, 5, 7-tetrametyl-4-Bora-3a, 4a-diaza-s-indacene (Bodipy 505/515) (steg 6), en lipofila fluorescerande sond som lokaliserar till intracellulära lipidkroppar och har använts för att märka lipiddroppar19. Dessutom, här visar vi hur man utvärderar steatos genom kvantitativ polymeras kedjereaktion (qPCR) (steg 7) genuttryck avreglering av flera metaboliska gener i dheparg celler. För att ytterligare karakterisera och kvantifiera ackumuleringen av lipiddroppar efter behandling med natriumoleat utförde vi sammanhängande anti-Stokes Raman spridning (Cars) mikroskopi (steg 8), en innovativ teknik som möjliggör visualisering och kvantifiering av lipiddroppar utan märkning20,21.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:799px;" width="797">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Hyclone HyClone Fetal Clone II&#160;</td>
			<td style="width:240px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:143px;">SH30066</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">William&#8217;s E medium with GlutaMAX&#160;</td>
			<td style="width:240px;">Thermofisher</td>
			<td>32551087</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin/streptomycin&#160;</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td>P4333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Insulin&#160;</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td>I9278</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">hydrocortisone hemisuccinate</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td>H2270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">DMSO, dimethyl sulfoxide</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td style="width:143px;">D2438&#160;&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Sodium Oleate</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td style="width:143px;">O7501&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Methanol</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td>179337</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Isopropanol</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td style="width:143px;">278475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BODIPY 505/515</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>D3921</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">PBS</td>
			<td style="width:240px;">Thermofisher</td>
			<td>14190-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Formaldehyde solution</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td>252549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">RNAse free DNAseI</td>
			<td style="width:240px;">Promega</td>
			<td>M198A&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass-bottomed dishes</td>
			<td style="width:240px;">Willco Wells</td>
			<td style="width:143px;">GWST-5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Oil Red solution</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td style="width:143px;">O625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">CellTiter 96 AQueous One Solution</td>
			<td style="width:240px;">Promega&#160;</td>
			<td style="width:143px;">G3582</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">q-PCR oligo name</td>
			<td>Sequence</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ACACB FOR</td>
			<td>CAAGCCGATCACCAAGAGTAAA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">ACACB REV</td>
			<td>CCCTGAGTTATCAGAGGCTGG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:239px;">b-actin FOR</td>
			<td style="width:240px;">GCACTCTTCCAGCCTTCCT</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:239px;">b-actin REV</td>
			<td style="width:240px;">AGGTCTTTGCGGATGTCCAC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ALBUMIN FOR</td>
			<td>TGCTTGAATGTGCTGATGACAGG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ALBUMIN REV</td>
			<td>AAGGCAAGTCAGCAGGCATCTCATC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ALDOB FOR</td>
			<td>GCATCTGTCAGCAGAATGGA&#160;</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ALDOB REV</td>
			<td>TAGACAGCAGCCAGGACCTT</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">APOB FOR</td>
			<td>CCTCCGTTTTGGTGGTAGAG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">APOB REV</td>
			<td>&#160;CCTAAAAGCTGGGAAGCTGA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">APOC3 FOR</td>
			<td>CTCAGCTTCATGCAGGGTTA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">APOC3 REV</td>
			<td>GGTGCTCCAGTAGTCTTTCAG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CPT1A FOR</td>
			<td>TCATCAAGAAATGTCGCACG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CPT1A REV</td>
			<td>GCCTCGTATGTGAGGCAAAA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CYP2E1 FOR</td>
			<td>TTGAAGCCTCTCGTTGACCC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CYP2E1 REV</td>
			<td>CGTGGTGGGATACAGCCAA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CYP3A4 FOR</td>
			<td>CTTCATCCAATGGACTGCATAAAT</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CYP3A4 REV</td>
			<td>TCCCAAGTATAACACTCTACACAGACAA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GAPDH FOR</td>
			<td>TGACAACTTTGGTATCGTGGAAGG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GAPDH REV</td>
			<td>AGGGATGATGTTCTGGAGAGCC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GPAM FOR</td>
			<td>TCTTTGGGTTTGCGGAATGTT</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GPAM REV</td>
			<td>ATGCACATCTCGCTCTTGAATAA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IL6 FOR</td>
			<td>CCTGAACCTTCCAAAGATGGC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IL6 REV</td>
			<td>ACCTCAAACTCCAAAAGACCAGTG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PDK4 FOR</td>
			<td>ACAGACAGGAAACCCAAGCCAC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PDK4 REV</td>
			<td>TGGAGGTGAGAAGGAACATACACG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PLIN2 FOR</td>
			<td>TTGCAGTTGCCAATACCTATGC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PLIN2 REV</td>
			<td>CCAGTCACAGTAGTCGTCACA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PLIN4 FOR</td>
			<td>AATGAGTTGGAGGGGCTGGGGGACATC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PLIN4 REV</td>
			<td>GGTCACCTAAACGAACGAAGTAGC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SCD FOR</td>
			<td>TCTAGCTCCTATACCACCACCA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SCD REV</td>
			<td>TCGTCTCCAACTTATCTCCTCC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SLC2A1 FOR</td>
			<td>TGCTCATCAACCGCAACGAG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SLC2A1 REV</td>
			<td>CCGACTCTCTTCCTTCATCTCCTG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">18S FOR</td>
			<td>CGCCGCTAGAGGTGAAATTC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">18S REV</td>
			<td>TTGGCAAATGCTTTCGCTC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

inducing and characterizing vesicular steatosis in differentiated heparg cells

Leversteatos representerar en metabolisk dysfunktion som resulterar från en ansamling av triglycerid innehållande lipiddroppar i hepatocyter. Överdriven fettansamling leder till alkoholfria fettlever (NAFLD), som är potentiellt reversibel och kan utvecklas till alkoholfri steatohepatit (NASH) och så småningom cirros och Hepatocellulär cancer (HCC). De molekylära mekanismerna som förbinder lipidackumulering i hepatocyter med progressionen till NASH, irreversibel leverskada, fibros, cirros, och även HCC är fortfarande oklart. För detta ändamål har flera in vitro-och in vivo-modeller utvecklats för att belysa de patologiska processer som orsakar NAFLD. I den nuvarande studien, beskriver vi en cellulär modell för induktion av lever vesikulär steatos som består av DMSO-differentierade mänskliga levern HepaRG celler behandlade med fettsyra salt natriumoleat. Faktum natrium Oleate-behandlade HepaRG celler ackumuleras lipiddroppar i cytoplasman och visar typiska egenskaper hos steatos. Denna in vitro human modell utgör ett värdefullt alternativ till in vivo möss modeller samt till de primära humana hepatocyter. Vi presenterar också en jämförelse av flera metoder för kvantifiering och utvärdering av ansamling av fett i HepaRG celler, inklusive olja röd O färgning, cytofluorimetrisk Bodipy mätning, metabolisk gen uttrycks analys av qPCR, och sammanhängande anti-Stokes Raman spridning (bilar) mikroskopi. BILAR Imaging kombinerar Raman spektroskopi kemiska specificitet, en kemisk analysteknik välkänd i materialvetenskap tillämpningar, med fördelarna med hög hastighet, högupplösta icke-linjära optiska microscopies att möjliggöra exakt kvantifiering av lipidackumulering och lipiddynamik. Inrättandet av en effektiv in vitro-modell för induktion av vesikulär steatos, tillsammans med en noggrann metod för kvantifiering och karakterisering av lipidackumulering, kan leda till utveckling av tidig diagnostisering av NAFLD via identifiering av molekyl markörer och generering av nya behandlingsstrategier.

Detta protokoll beskriver en effektiv metod för att inducera och karakterisera vesikulär steatos i DMSO-differentierade HepaRG-celler genom behandling med natriumoleat (figur 1A).
Differentiering av HepaRG-celler. För att effektivt framkalla differentiering måste prolifererande celler seedas med låg densitet (2,5 x 104 celler/cm2) i spridnings mediet. När cellerna seedas vid låg densitet delar de ak...

Watch this Scientific Journal Video about Inducing and Characterizing Vesicular Steatosis in Differentiated HepaRG Cells at JoVE.com

Inducing and Characterizing Vesicular Steatosis in Differentiated HepaRG Cells

I denna studie, vi beskriver ett detaljerat protokoll för att inducera lever vesikulär steatos i differentierade HepaRG celler med fettsyra salt natriumoleat och använda metoder för detektion och kvantifiering av lipidackumulering, inklusive sammanhängande anti-Stokes Raman spridning (bilar) mikroskopi, cytofluorimetrisk analys, olja röd O färgning, och qPCR.

Inducerande och karaktäriserande vesikulär steatos i differentierade HepaRG-celler

Hepatic steatosis represents a metabolic dysfunction that results from an accumulation of triglyceride-containing lipid droplets in hepatocytes. Excessive ...

Detta protokoll beskriver hur man inducerar lever vesicular steatosis i differentierade HepaRG celler och metoder för detektion och kvantifiering av lipid ackumulering. Denna in vitro mänskliga cellmodell utgör ett värdefullt alternativ till in vivo möss modeller och till primära mänskliga hepatocyter. Tina ett kväve cryopreserved låg passage parti HepaRG celler genom att fördjupa dem i en 37 graders Celsius bad tills tinas.Snabbt överföra cellerna till en 15-milliliter rör som innehåller 10 milliliter av proliferering medium. Efter centrifugering i fem minuter, kasta supernatant och resuspend cellerna i fem milliliter prolifererande medium. Räkna cellerna och späd för att platta 250, 000 celler per kvadratcentimeter.Platta cellerna på 100-millimeters cellodlingsrätter och förnya mediet varannan eller var tredje dag. Celler förökar sig med en fördubblingstid på cirka 24 timmar. När HepaRG-cellerna når 80%konfluency, lossa dem genom en tre till fem minuters inkubation med 0,05%trypsin lösning.Samla in cellerna i proliferering medium och centrifug i fem minuter som tidigare. Kasta supernatanten och resuspend cellerna med fem milliliter prolifererande medium. Återigen, räkna cellerna och späd för att platta 250, 000 celler per kvadratcentimeter.I detta skede, förstärka cellerna genom att upprepa dessa steg för att nå ett lämpligt antal celler för att starta experiment. Till cryopreserve HepaRG celler, lossa cellerna 24 timmar efter plätering genom en tre-till fem-minuters inkubation med 0,05%trypsin lösning. Samla in cellerna i proliferering medium och centrifug i fem minuter som tidigare.Kasta supernatanten, resuspend cellerna i en milliliter per sats av frysmedium, och cryopreserve satserna i flytande kväve. På dag noll, frö HepaRG celler vid 250, 000 celler per kvadratcentimeter i odlingsbehandlade rätter med en lämplig volym av spridning medium. Två rätter måste pläterade för varje analys, en för kontrollceller och en för oleatbehandlade celler.På dag två och dag fyra, ändra mediet med en lämplig volym av spridningsmedium och låt cellerna växa tills de når sammanflödet. På dag sju måste cellerna vara 100%konfluenta. Tvätta cellerna en gång med 1X PBS.Ta sedan bort 1X PBS och lägg till en lämplig volym av differentieringsmedium. På dag åtta, nio, 12, 15 och 18, tvätta cellerna en gång med 1X PBS innan du lägger till en lämplig volym av differentiering medium. På dag 21, observera HepaRG celler under mikroskop och se till att cellerna är sammanflytande differentierade kulturer.Som en kontroll, skörda en kontroll skålen för att utföra genuttryck analys av differentiering markör gener. Vid dag 21 kan differentierade HepaRG-celler cryopreserveras i flytande kväve. På dag 21, späd natriumoleate med en lämplig volym av fullständig differentiering medium till en slutlig koncentration av 250 mikromolar.Tillsätt 99%metanol vid ett förhållande av ett till 400 i en annan alikvot av differentieringsmedium för att göra fordonets kontrollbehandling. Tvätta cellerna en gång med 1X PBS och tillsätt fordonet eller natriumolet medium. På dag 23 och dag 25, byt medium med lämplig volym av nyberedda medium.På dag 26, observera cellerna genom optisk mikroskopi. Lipiddroppar ackumuleras i de natriumoletbehandlade cellerna och syns lätt som genomskinliga droppar i cytoplasman. För att utföra Oil Red O-färgning, tvätta först cellerna en gång med 1X PBS och ta bort 1X PBS helt.Tillsätt 4%paraformaldehyd och inkubera i 15 minuter vid rumstemperatur. Ta bort paraformaldehyden och tvätta cellerna två gånger med 1X PBS. Efter att du har tagit bort PBS, inkubera cellerna med 60%isopropanol i fem minuter vid rumstemperatur.Ta bort isopropanolen och låt cellerna torka helt i rumstemperatur. Nu lägga Oil Red O arbetslösning till cellerna och inkubera i rumstemperatur i 30 minuter. Den volym av arbetslösning som krävs för varje prov motsvarar den volym av media som används för culturing cellerna.Ta bort Oil Red O-lösningen och tillsätt omedelbart dubbeldestillerat vatten. Efter tvättning av cellerna fyra gånger med dubbeldestillerat vatten, förvärva bilder under mikroskopet för analys. För att elera Oljeröd o färgämne, ta bort allt vatten och låt torka.Tillsätt sedan en milliliter på 100%isopropanol och inkubera i 10 minuter med varsam skakning vid rumstemperatur. Pipettera isopropanolen med eluerat Olja Röd O färga upp och ner flera gånger, se till att alla Oil Red O är i lösningen. Överför lösningen till en cuvette.Mät den optiska densiteten vid 500 nanometer genom spektrofotometri och använd 100%isopropanol som tomt. Tvätta cellerna en gång med 1X PBS. Sedan, inkubera med 100 nanomolar av Bodipy utspädd i 1X PBS i mörker i 40 minuter vid 37 grader Celsius.En obestainerad kontroll bör ingå i flödescytometrimätningarna. Ta bort färgningslösningen och tvätta cellerna en gång med 1X PBS. Sedan, tvätta cellerna igen och ta bort PBS helt.Tillsätt 4%paraformaldehyd och inkubera i 15 minuter vid rumstemperatur. Ta bort paraformaldehyden och tvätta proverna tre gånger i fem minuter i PBS. Celler kan hållas i 1X PBS vid fyra grader Celsius eller avbildas omedelbart.För förvaring, linda med Parafilm och täck med aluminiumfolie för att förhindra att cellerna torkar. För att verifiera effektiv induktion av steatos, oleat-behandlade och kontroll HepaRG celler var färgas med Olja Röd O färgämne. Efter färgning syns lipiddropparna lätt som röda droppar.Färgning kan kvantifieras genom spektrofotometrisk mätning av Oil R O dye elueras med isopropanol. Absorbans av eluted Olja Röd O från cellerna är direkt proportionell mot cytoplasmatisk lipiddropp ackumulering. Natriumoleat koncentration och exponeringstid fastställdes av MTT kolorimetrisk cellen viabilitet assay.Den Formosan produkten kvantifieras genom dess absorbans vid 490 nanometer och är direkt proportionell mot antalet levande celler i kultur. Natriumoleatbehandling jämfördes med natriumpalatbehandling. Den apoptotiska drogen doxorubicin användes som en kontroll.För att kvantifiera ökningen av cellulära lipidhalten efter natriumolet behandling, färgning med Bodipy färgämne användes för att märka lipiddroppar. Med hjälp av cytofluormetrisk analys är det möjligt att kvantifiera triglyceridhalten med Bodipy medelvärdet fluorescerande intensitet, vilket är högre i oleatbehandlat-behandlade celler jämfört med kontrollceller. Detta indikerar effektiv fettansamling efter oleatbehandling.Faktum är att bilder av Bodipy-färgade celler visar ljusgröna fluorescerande lipiddroppar i oleatbehandlade celler som inte syns i kontrollcellerna. För att ytterligare karakterisera ansamling av lipiddroppar efter natriumoletbehandling kan CARS mikroskopi utföras enligt beskrivningen i textprotokollet vilket möjliggör kvantifiering av lipiddroppar utan märkning. Denna cell-baserade modellen kan öka kunskapen om de molekylära mekanismer som är involverade i icke-onkotisk fettlever och kan leda till utveckling av nya markörer för tidig diagnos och nya strategier behandling.

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Isolering, karakterisering och jämförande differentiering av mänskliga Dental celler Pulp Stem Härstammar från permanenta tänder med hjälp av två olika metoder

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Inducing Myointimal Hyperplasia Versus Atherosclerosis in Mice: An Introduction of Two Valid Models

Induktion myointimal Hyperplasi Versus åderförkalkning hos möss: En introduktion av två giltiga modeller

Various in vivo laboratory rodent models for the induction of artery stenosis have been established to mimic diseases that include arterial plaque ...

Minimal Invasive Surgical Procedure of Inducing Myocardial Infarction in Mice

Minimal invasiv kirurgisk procedur att inducera hjärtinfarkt hos möss

Myocardial infarction still remains the main cause of death in western countries, despite considerable progress in the stent development area in the last ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Studera bukspottkörtelcancer Stem Cell egenskaper för att utveckla nya behandlingsstrategier

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaukom framkallande ordningen i en<em&gt; In Vivo</em&gt; Råttmodell och Hela montering Retina Förberedelse

Glaucoma is a disease of the central nervous system affecting retinal ganglion cells (RGCs). RGC axons making up the optic nerve carry visual input to the ...

Inducing Ischemia-reperfusion Injury in the Mouse Ear Skin for Intravital Multiphoton Imaging of Immune Responses

Induktion ischemi-reperfusionsskada i musen Ear Skin för Intravital multifoton avbildning av immunsvar

Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when there is transient hypoxia due to the obstruction of blood flow (ischemia) followed by a subsequent ...

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

Forskolininducerad Svullnad i Intestinal Organoids: An<em&gt; In Vitro</em&gt; Analys av Läkemedels svar i patienter med cystisk fibros

Recently-developed cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-modulating drugs correct surface expression and/or function of the mutant ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimerad Analys av<em&gt; In Vivo</em&gt; och<em&gt; In Vitro</em&gt; Leversteatos

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Inducera akut lung skada hos möss genom direkt Intratracheal Lipopolysaccharide instillation

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice

En reviderad metod för att inducera sekundära lymfödem i bakdelen av möss

Animal models are of paramount importance in the research of lymphedema in order to understand the pathophysiology of the disease but also to explore ...