Name: ex vivo method for assessing the mouse reproductive tract spontaneous motility and a matlab-based uterus motion tracking algorithm for data analysis
Uploaded: 2019-09-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis at JoVE.c

Dette arbejde blev støttet af interne IE-midler. SIDEN udtænkt studiet. XC og AGO var involveret i udformningen af de beskrevne eksperimenter.  FL og siden analyserede og fortolkede dataene. KLL, JOB, FL udførte alle ex vivo -eksperimenter. FL skrev MATLAB-scriptet. KLL, JOB, og siden skrev manuskriptet.  Alle forfattere læste og godkendte den endelige version af manuskriptet.

Alle procedurer med dyr er blevet godkendt af den institutionelle dyrepleje og brug udvalg på Indiana University School of Medicine (Indianapolis, IN). 2-5 måned-gamle F2-129S-C57BL/6 seksuelt-modne hunmus blev brugt i studiet.
Forsigtig: Sørg for sikkerhed ved at bære en laboratorie frakke, maske og handsker, når du arbejder med dyr og biologisk farlige materialer.
1. klargøring af opløsningen
<ol><li>Forbered Krebs buffer, som indeholder:...

<ol>
	<li>Kuijsters, N. P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uterine+peristalsis+and+fertility:+current+knowledge+and+future+perspectives:+a+review+and+meta-analysis.">Uterine peristalsis and fertility: current knowledge and future perspectives: a review and meta-analysis.</a> Reproductive BioMedicine Online. 35 (1), 50-71 (2017).</li><li>Kural, M., Noor, N. N., Pandit, D., Joshi, T., Patil, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Menstrual+characteristics+and+prevalence+of+dysmenorrhea+in+college+going+girls.">Menstrual characteristics and prevalence of dysmenorrhea in college going girls.</a> Journal of Family Medicine and Primary Care. 4 (3), 426-431 (2015).</li><li>Dehnavi, Z. M., Jafarnejad, F., Kamali, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effect+of+aerobic+exercise+on+primary+dysmenorrhea:+A+clinical+trial+study.">The Effect of aerobic exercise on primary dysmenorrhea: A clinical trial study.</a> Journal of education and health promotion. 7, 3 (2018).</li><li>Lindner, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significance+of+prostaglandins+in+the+regulation+of+cyclic+events+in+the+ovary+and+uterus.">Significance of prostaglandins in the regulation of cyclic events in the ovary and uterus.</a> Advances in prostaglandin and thromboxane research. 8, 1371-1390 (1980).</li><li>Bernardi, M., Lazzeri, L., Perelli, F., Reis, F. M., Petraglia, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysmenorrhea+and+related+disorders.">Dysmenorrhea and related disorders.</a> F1000 research. 6, 1645 (2017).</li><li>Marjoribanks, J., Ayeleke, R. O., Farquhar, C., Proctor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonsteroidal+anti-inflammatory+drugs+for+dysmenorrhoea.">Nonsteroidal anti-inflammatory drugs for dysmenorrhoea.</a> The Cochrane database of systematic reviews. 7, 001751 (2015).</li><li>Oladosu, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abdominal+skeletal+muscle+activity+precedes+spontaneous+menstrual+cramping+pain+in+primary+dysmenorrhea.">Abdominal skeletal muscle activity precedes spontaneous menstrual cramping pain in primary dysmenorrhea.</a> American journal of obstetrics and gynecology. 219 (1), 91 (2018).</li><li>Lawson, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occupational+exposures+among+nurses+and+risk+of+spontaneous+abortion.">Occupational exposures among nurses and risk of spontaneous abortion.</a> American journal of obstetrics and gynecology. 206 (4), 327-328 (2012).</li><li>Mazze, R. I., Wilson, A. I., Rice, S. A., Baden, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fetal+development+in+mice+exposed+to+isoflurane.">Fetal development in mice exposed to isoflurane.</a> Teratology. 32 (3), 339-345 (1985).</li><li>Byers, S. L., Wiles, M. V., Dunn, S. L., Taft, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+estrous+cycle+identification+tool+and+images.">Mouse estrous cycle identification tool and images.</a> PLoS One. 7 (4), 35538 (2012).</li><li>Caligioni, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+reproductive+status/stages+in+mice.">Assessing reproductive status/stages in mice.</a> Current protocols in neuroscience. , (2009).</li><li>Segal, S., Csavoy, A. N., Datta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tocolytic+effect+of+catecholamines+in+the+gravid+rat+uterus.">The tocolytic effect of catecholamines in the gravid rat uterus.</a> Anesthesia and analgesia. 87 (4), 864-869 (1998).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenylephrine,+a+common+cold+remedy+active+ingredient,+suppresses+uterine+contractions+through+cAMP+signalling.">Phenylephrine, a common cold remedy active ingredient, suppresses uterine contractions through cAMP signalling.</a> Scientific reports. 8 (1), 11666 (2018).</li><li>Domino, M., Pawlinski, B., Gajewski, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomathematical+pattern+of+EMG+signal+propagation+in+smooth+muscle+of+the+non-pregnant+porcine+uterus.">Biomathematical pattern of EMG signal propagation in smooth muscle of the non-pregnant porcine uterus.</a> PLoS One. 12 (3), 0173452 (2017).</li><li>Crane, L. H., Martin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pace-maker+activity+in+the+myometrium+of+the+oestrous+rat:+in+vivo+studies+using+video-laparoscopy.">Pace-maker activity in the myometrium of the oestrous rat: in vivo studies using video-laparoscopy.</a> Reproduction, fertility, and development. 3 (5), 519-527 (1991).</li></ol>

Her beskrev vi en metode til vurdering af spontan kontraktilitet af hele gnaver reproduktions kanalen, som omfatter æggestokkene, ovikanalerne, livmoder horn og vagina. Vi brugte en lignende metode til at demonstrere den afslappende effekt af phenylephrin på spontan uterin motilitet13, men i fortiden var vi ude af stand til at levere kvantitative analyse af dataene. I dette arbejde, vi udviklet en algoritme til kvantitativ motilitet dataanalyse ved hjælp af MATLAB motion tracking modul. Dette e...

Som et stort kvindeligt organ, livmoderen er afgørende for reproduktion og afgørende for næring af fosteret1. Livmoderen består af tre lag: perimetrium, myometrium og endometrium. Den myometrium er den største kontraktile lag af livmoderen og spiller en central rolle i fosteret levering. Endometriet er det inderste lag foring af livmoderhulen og er afgørende for embryo implantation. Hos ikke-gravide kvinder i den fødedygtige alder, den endometriale lag er kastet månedligt i begyndelsen af menstruationscyklus. Myometrium aids i denne udgydelse proces ved at opretholde de spontane myometriale sammentrækninger er nødvendige for at rydde det nekrotiske endometriale væv fra livmoderen1.
Desværre, øget myometrial kontraktilitet kan resultere i negative bivirkninger såsom dysmenorré, eller smertefulde menstruations kramper. Dette ses især hos unge kvinder og født Women2. Men, dysmenorré er forskellig for hver kvinde og afhænger af styrken af deres myometriale sammentrækninger; stærkere sammentrækninger er ofte forbundet med følelsen af svære kramper3. Myometrial kontraktilitet kan visualiseres ved hjælp af uterin ultralyd og er ofte anerkendt som endometriale bølger. Øget frigivelse af prostaglandiner under menstruation4 i en livmoder, der gennemgår endometriale sløjning menes at bidrage til øget myometrial hyperkontraktilitet, hvilket resulterer i iskæmi og hypoksi af uterin musklen og dermed øget smerte3.
Svær dysmenorré kan hæmme den daglige aktivitet af nogle kvinder og 3 til 33% af kvinderne har meget svære smerter, som kan forårsage en kvinde at være sengeliggende for 1 til 3 dage hver menstruationscyklus5. Dysmenorré er den førende årsag til gynækologisk sygelighed i kvinder i den reproduktive alder uanset alder, nationalitet og økonomisk status5. Den anslåede prævalens af dysmenorré er både høj og variabel, lige fra 45% til 93% i kvinder i den reproduktive alder5.  Dysmenorré-associerede smerter har en effekt på det daglige liv af kvinder og kan resultere i dårlig akademisk præstation hos unge, lavere søvnkvalitet, begrænsning af daglige aktiviteter, og humørsvingninger5.
Mange kvinder, der oplever svær dysmenorré udvej til over-the-counter medicin til at lindre deres smerte. Sådanne over-the-counter medicin indeholder cyclooxygenase (COX) hæmmere, som forhindrer dannelsen af prostaglandiner6. Men, COX-hæmmere er forbundet med negative kardiovaskulære hændelser, og omkring 18% af kvinder med dysmenorré reagerer ikke på disse hæmmere7. Derfor er der behov for nye medikamenter til at reducere menstruations kramper. Da over kontraktilitet af livmoderen bidrager til patogenesen af dysmenorré, en mulig strategi kan være brugen af uterin relaxants.
Det er fordelagtigt at kvantificere virkningerne af potentielle afslappende stoffer i en model af naturligt forekommende spontane myometriale bølge-lignende sammentrækninger. Men hidtil, ingen effektiv ex vivo metode til testning af muskel-afslappende lægemidler i intakt uterus er blevet beskrevet. I øjeblikket, isometrisk spænding målinger anvendes til at evaluere afslappende narkotika effekter. Under sådanne målinger, en uterin muskel strimmel opretholdes på en konstant længde under preload i et vævs bad, mens kraften af uterin muskelsammentrækninger registreres før og efter oxytocin stimulation i nærværelse af eller fravær af en afslappende stof. Selv om denne fremgangsmåde er meget nyttig, det kræver dyrt udstyr. Endvidere ligner isometriske sammentrækninger ikke de spontane myometriale bølgelignende sammentrækninger, der naturligt forekommer i den intakte uterus. Entydigt kan uterin myometriale bølger i gnavere visualiseres som uterin horn motilitet, når hele reproduktions kanalen (æggestokke, ovikanaler, uterus, og vagina) opretholdes i en bufferopløsning. Her præsenterer vi en ex vivo-metode til overvågning af den spontane motilitet af den intakte muse livmoder placeret i en Petri skål indeholdende oxygeneret Krebs buffer. Vi beskriver også en algoritme til kvantificering af motilitet ved hjælp af MATLAB motion tracker. Denne nye tilgang giver et nemt og billigere alternativ til at teste det afslappende potentiale af naturligt forekommende retsmidler og syntetiske forbindelser.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:671px;" width="670">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:208px;">Epinephrine hydrochloride</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">&#160;E4642&#160;</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:208px;">Dulbecco&#39;s PBS</td>
			<td style="width:161px;">Fisher Sceintific&#160;</td>
			<td style="width:75px;">17-512Q</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:208px;">Ethanol 200 PROOF</td>
			<td style="width:161px;">Decon Laboratories</td>
			<td style="width:75px;">2701</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:208px;">NaCl</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">S7653</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:208px;">Glucose</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">G7528</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:208px;">KCl</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">P9333</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:208px;">CaCl2 &#183; 2H2O</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">C5080</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:208px;">NaH2PO4</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">S0751</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:208px;">MgCl2&#160; &#183; 6H2O</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">M9272</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:208px;">NaHCO3</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">S6297</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:208px;">Isoflurane, USP</td>
			<td style="width:161px;">Patterson Veterinary</td>
			<td style="width:75px;">07-893-2374</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:208px;">Dissecting Extra-Fine-Pointed Precision Splinter Forceps</td>
			<td style="width:161px;">Fisher Sceintific</td>
			<td style="width:75px;">13-812-42</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:208px;">Curved Hardened Fine Iris Scissors</td>
			<td style="width:161px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:75px;">14091-09</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="49">
			<td height="49" style="height:49px;width:208px;">Dissection High-performance Modular Stereomicroscope</td>
			<td style="width:161px;">Leica</td>
			<td style="width:75px;">MZ6&#160;</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:208px;">Digital 5 Megapixel Color Microscope Camera with active cooling system</td>
			<td style="width:161px;">Leica</td>
			<td style="width:75px;">&#160;DFC425 C</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:208px;">Stereomaster Microscope Fiber-Optic Light Sources</td>
			<td style="width:161px;">Fisher Sceintific&#160;</td>
			<td style="width:75px;">12-562-21</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:208px;">Weigh Boat</td>
			<td style="width:161px;">Fisher Sceintific&#160;</td>
			<td style="width:75px;">WB30304</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:208px;">Convertors Astound Standard Surgical Gown&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Cardinal Health&#160;</td>
			<td style="width:75px;">9515</td>
			<td style="width:227px;">Small, Medium or Large</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:208px;">Gloves</td>
			<td style="width:161px;">McKesson Corporation</td>
			<td style="width:75px;">20-1080</td>
			<td style="width:227px;">Small, Medium, or Large; powder-free sterile latex or nitrile surgical gloves</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#160;Petri Dish</td>
			<td style="width:161px;">Corning Falcon</td>
			<td>351029</td>
			<td style="width:227px;">100 mm</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;">&#160;Petri Dish</td>
			<td style="width:161px;">Corning Falcon</td>
			<td style="width:75px;">353001</td>
			<td style="width:227px;">35 mm</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">95% O2- 5% CO2 gas mixture</td>
			<td>Praxair</td>
			<td style="width:75px;">&#160;MM OXCD5-K</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Ear-loop Masks</td>
			<td>Valumax International</td>
			<td style="width:75px;">5430E-PP</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">DSLR 24.2 MP Camera</td>
			<td>Canon</td>
			<td style="width:75px;">EOS Rebel T6i</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:208px;">MATLAB</td>
			<td style="width:161px;">MathWorks</td>
			<td style="width:75px;">N/A</td>
			<td style="width:227px;">version 2019 or later</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo method for assessing the mouse reproductive tract spontaneous motility and a matlab-based uterus motion tracking algorithm for data analysis

Dysmenorré, eller smertefulde kramper, er det mest almindelige symptom forbundet med menstruation hos kvinder og dens sværhedsgrad kan hæmme kvinders hverdag. Her præsenterer vi en nem og billig metode, der ville være medvirkende til at teste nye lægemidler faldende uterin kontraktilitet. Denne metode udnytter den unikke evne til hele musens reproduktive kanal til at udvise spontan motilitet, når den vedligeholdes ex vivo i en Petri skål indeholdende oxygeneret Krebs buffer. Denne spontane motilitet ligner den bølge-lignende myometriale aktivitet af den menneskelige uterus, omtales som endometriale bølger. For at demonstrere effektiviteten af metoden, vi ansat en velkendt uterin afslappende lægemiddel, epinephrin. Vi viser, at den spontane motilitet af hele musens reproduktive kanal kan hurtigt og reversibelt hæmmes af 1 μM adrenalin i denne Petri skål model. Dokumentere ændringer af uterin motilitet kan nemt gøres ved hjælp af en almindelig smart telefon eller et sofistikeret digitalt kamera. Vi udviklede en MATLAB-baseret algoritme, der tillod motion tracking at kvantificere spontane uterin motilitet ændringer ved at måle hastigheden af livmoder horn bevægelser. En stor fordel ved denne ex vivo tilgang er, at den reproduktive tarmkanalen forbliver intakt i hele forsøget, bevare alle iboende intrauterin cellulære interaktioner. Den væsentligste begrænsning af denne fremgangsmåde er, at op til 10-20% af uteri ikke kan udvise spontan motilitet. Hidtil er dette den første kvantitative ex vivo -metode til vurdering af spontan uterin motilitet i en Petri skål model.

Figur 1 viser repræsentative billeder, der er taget under hele isolations proceduren for reproduktions kanalen, som er beskrevet i denne protokol. For at undgå at forurenes bufferen med pels, hvilket ville formindske videokvaliteten, fugtet vi muse legemet med 70% ethanol. Den vigtigste benchmark for dissektion afsnit af protokollen er at finde urinblæren. Livmoderen og vagina vil blive placeret ringere end urinblæren.
For at teste den protokol, vi behandlede ...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis at JoVE.c

Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis

Uterine sammentrækninger er vigtige for trivsel af kvinder. Men, patologisk øget kontraktilitet kan resultere i dysmenorré, især hos yngre kvinder. Her beskriver vi et simpelt ex vivo præparat, der giver mulighed for hurtig vurdering af effekten af glatte muskelafslappende midler, som kan anvendes til behandling af dysmenorré.

Ex vivo metode til vurdering af musens reproduktive kanal spontan motilitet og en MATLAB-baseret uterus motion tracking algoritme til data analyse

Dysmenorrhea, or painful cramping, is the most common symptom associated with menses in females and its severity can hinder women&#39;s everyday lives. ...

Vores protokol er vigtig, fordi den giver den første kvantitative ex vivo metode til vurdering af spontane motilitet af en intakt livmoder. Denne nye tilgang giver et let og billigere alternativ til at teste afslappende potentiale naturligt forekommende retsmidler i syntetiske forbindelser. En stor fordel ved denne teknik er, at alle intra-uterin cellulære interaktioner forbliver intakt i hele eksperimentet.Over kontraktilitet af livmoderen er forbundet med dysmenorré, for hvilke livmoderafslappende midler kan være nyttige til behandling. Denne metode giver en nem måde at teste nye afslappende midler. Efter bekræftelse af estrous cyklus fase, placere musen i liggende position, og sprede ekstremiteterne til at afsløre abdominal bækkenregionen.Våd maven med 70% ethanol, og bruge hændel til omhyggeligt at løfte huden overlegen i forhold til klitoris. Lav små tværgående snit på de laterale aspekter af det nedre abdominale område op til de øvre ekstremiteter for at eksponere bughinden. Skær forsigtigt gennem bughinden for at eksponere mave-tarmkanalen uden at beskadige livmoderhornene, og brug spinces til at fjerne fascia og fedtvæv, der dækker mave-tarmkanalen.Fjern duodenum, jejunum, ileum, cecum, og den opstigende og tværgående kolon. Find urinblæren for at finde skeden, som findes direkte under urinblæren. Find skambenet symphysis ved sammenløbet af skambenet knogler, caudal til blæren, og bruge en saks til omhyggeligt at foretage et snit på de laterale sider af skambenet symphysis gennem interpubic fibrocartilaginous væv for at få adgang og give en rute for vaginal ekstraktion.Skær gennem mellemkødet placeret mellem anus og nederste del af vulva, og bruge kraftang til at løfte skeden for at tillade en langsom excision af endetarmen. Identificer de to uterine horn, der bifurcate i en gaffel rostrally til skeden og finde en indviklede oviduct og æggest i slutningen af hvert horn. Korrekt identifikation af livmoderhorn er afgørende for proceduren for at sikre, at vævene ikke er beskadiget.Brug små dissekere saks til at fjerne eventuelle ledbånd, der forbinder til og støtte horn, oviducts og æggestokke i bughulen, og fjerne skeden, livmoderen, oviducts og æggestokke. Overfør hele den isolerede forplantningskanal i en 100 millimeter petriskål indeholdende 10 milliliter Dulbeccos PBS. Brug hæcener og kirurgisk saks til at fjerne enhver bindevæv og fedtvæv omkring livmoderen horn og vagina samt enhver pels i skambenet regionen, der kan hindre billedkvaliteten.Fjern den brede ledbånd for at tillade motilitet af livmoderen horn og vaske vævet to gange med frisk Dulbecco's PBS per vask, før du overfører den isolerede forplantningskanalen i en 35 millimeter petriskål, der indeholder tre milliliter iltet Krebs opløsning. For spontan motilitet billeddannelse, placere Petriskålen på en sort overflade ved stuetemperatur, og lad 15 til 30 minutter for spontane sammentrækninger til at begynde. Når bevægelse kan observeres, registrere den spontane livmoder motilitet i 10 minutter fra et aksialt plan ved hjælp af enhver form for digitalt videoudstyr.Dernæst overføres præparatet til en petriskål, der indeholder iltet Krebs-buffer suppleret med teststoffet, og den spontane uterusmotilitet registreres i yderligere 10 minutter på samme måde. Ved afslutningen af registreringsperioden vaskes hele forplantningskanalen i 10 milliliter af Dulbeccos PBS i en 100 millimeter petriskål, og prøven overføres til en ny petriskål med frisk iltet Krebs-buffer for at vurdere behandlingens reversibilitet. Optag den spontane uterine motilitet i ca. 10 minutter på samme måde som for de sidste to optagelser.Derefter overføre præparatet til en anden 35 millimeter petriskål fyldt med iltet Krebs buffer suppleret med køretøjet for teststoffet for at sikre, at der ikke er mekanisk inducerede ændringer i den spontane livmodermotilitet. Den reproduktive tarmkanalen forberedelse udstillet høj motilitet i paneler A og C i mangel af adrenalin. Men denne fænotype er i dvale i panel B med tilstedeværelsen af en mikro muller adrenalin.Her vises en analyse af stikprøvedata af adrenalinadministration og spontan motilitetsgendannelse, der illustrerer, hvordan hormontets virkninger på forplantningskanalens spontane motilitet kan kvantificeres ud fra optagelserne af vævet før, under og efter testblandingsbehandling. Det er vigtigt at undgå at komprimere eller overbelaste livmoderhornene ellers vil der ikke blive observeret spontan kontraktilitet. Vores metode kan også anvendes til test forbindelser, der kan øge kontraktilitet af livmoderen.Denne procedure kan anvendes på gravide mus uteri på de tidligere stadier af graviditeten. Dette eksperiment har potentiale til at blive opgraderet til en seks godt plade format for gennemløb narkotika screening.

Research

JoVE Journal

Biology

Assessing Neural Stem Cell Motility Using an Agarose Gel-based Microfluidic Device

While microfluidic technology is reaching a new level of maturity for macromolecular assays, cell-based assays are still at an infant stage1. This is ...

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

The retina and its sole output neuron, the retinal ganglion cell (RGC), comprise an excellent model in which to examine biological questions such as cell ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

Et system til<em&gt; Ex vivo</em&gt; Dyrkning af embryonale Pancreas

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

A Novel Bayesian Change-point Algorithm for Genome-wide Analysis of Diverse ChIPseq Data Types

A Novel Bayesian Change-point Algoritme for genom-dækkende analyse af Diverse ChIPseq Datatyper

ChIPseq is a widely used technique for investigating protein-DNA interactions. Read density profiles are generated by using next-sequencing of ...

Ex vivo Method for High Resolution Imaging of Cilia Motility in Rodent Airway Epithelia

Ex vivo Method for High Resolution Imaging of Cilia Motility in Rodent Airway Epithelia

Ex vivo Metode til High Resolution Imaging af Cilia Motilitet i Rodent luftvejsepiteler

An ex vivo technique for imaging mouse airway epithelia for quantitative  analysis of motile cilia function important for insight into mucociliary  ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel<em&gt; Ex vivo</em&gt; Kultur Fremgangsmåde til Embryonale Mouse Heart

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In vivo Mikroinjektion og Elektroporation af Mouse Testis

This video and article contribution gives a comprehensive description of microinjection and electroporation of mouse testis in vivo. This particular ...

Spatiotemporal Mapping of Motility in Ex Vivo Preparations of the Intestines

Spatiotemporal Mapping of Motility in Ex Vivo Preparations of the Intestines

Spatiotemporal Kortlægning af Motilitet i<em&gt; Ex vivo</em&gt; Forberedelser af tarmene

Multiple approaches have been used to record and evaluate gastrointestinal motility including: recording changes in muscle tension, intraluminal pressure, ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Måling stivheden af<em&gt; Ex vivo</em&gt; Mus Aortas Brug Atomic force mikroskopi

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...