Name: ex vivo method for assessing the mouse reproductive tract spontaneous motility and a matlab-based uterus motion tracking algorithm for data analysis
Uploaded: 2019-09-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis at JoVE.c

Ce travail a été soutenu par des fonds internes d'UI. AGO a conçu l'étude. XC et AGO ont participé à la conception des expériences décrites.  FL et AGO ont analysé et interprété les données. KLL, JOB, FL a effectué toutes les expériences ex vivo. FL a écrit le script MATLAB. KLL, JOB et AGO ont écrit le manuscrit.  Tous les auteurs ont lu et approuvé la version finale du manuscrit.

Toutes les procédures avec des animaux ont été approuvées par le Comité institutionnel de soins et d'utilisation des animaux de l'École de médecine de l'Université de l'Indiana (Indianapolis, IN). Des souris femelles F2-129S-C57BL/6 sexuellement matures ont été utilisées dans l'étude.
MISE EN GARDE: Assurer la sécurité en portant un manteau de laboratoire, un masque et des gants lorsque vous travaillez avec des animaux et des matériaux biodangereux.
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	<li>Kuijsters, N. P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uterine+peristalsis+and+fertility:+current+knowledge+and+future+perspectives:+a+review+and+meta-analysis.">Uterine peristalsis and fertility: current knowledge and future perspectives: a review and meta-analysis.</a> Reproductive BioMedicine Online. 35 (1), 50-71 (2017).</li><li>Kural, M., Noor, N. N., Pandit, D., Joshi, T., Patil, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Menstrual+characteristics+and+prevalence+of+dysmenorrhea+in+college+going+girls.">Menstrual characteristics and prevalence of dysmenorrhea in college going girls.</a> Journal of Family Medicine and Primary Care. 4 (3), 426-431 (2015).</li><li>Dehnavi, Z. M., Jafarnejad, F., Kamali, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effect+of+aerobic+exercise+on+primary+dysmenorrhea:+A+clinical+trial+study.">The Effect of aerobic exercise on primary dysmenorrhea: A clinical trial study.</a> Journal of education and health promotion. 7, 3 (2018).</li><li>Lindner, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significance+of+prostaglandins+in+the+regulation+of+cyclic+events+in+the+ovary+and+uterus.">Significance of prostaglandins in the regulation of cyclic events in the ovary and uterus.</a> Advances in prostaglandin and thromboxane research. 8, 1371-1390 (1980).</li><li>Bernardi, M., Lazzeri, L., Perelli, F., Reis, F. M., Petraglia, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysmenorrhea+and+related+disorders.">Dysmenorrhea and related disorders.</a> F1000 research. 6, 1645 (2017).</li><li>Marjoribanks, J., Ayeleke, R. O., Farquhar, C., Proctor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonsteroidal+anti-inflammatory+drugs+for+dysmenorrhoea.">Nonsteroidal anti-inflammatory drugs for dysmenorrhoea.</a> The Cochrane database of systematic reviews. 7, 001751 (2015).</li><li>Oladosu, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abdominal+skeletal+muscle+activity+precedes+spontaneous+menstrual+cramping+pain+in+primary+dysmenorrhea.">Abdominal skeletal muscle activity precedes spontaneous menstrual cramping pain in primary dysmenorrhea.</a> American journal of obstetrics and gynecology. 219 (1), 91 (2018).</li><li>Lawson, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occupational+exposures+among+nurses+and+risk+of+spontaneous+abortion.">Occupational exposures among nurses and risk of spontaneous abortion.</a> American journal of obstetrics and gynecology. 206 (4), 327-328 (2012).</li><li>Mazze, R. I., Wilson, A. I., Rice, S. A., Baden, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fetal+development+in+mice+exposed+to+isoflurane.">Fetal development in mice exposed to isoflurane.</a> Teratology. 32 (3), 339-345 (1985).</li><li>Byers, S. L., Wiles, M. V., Dunn, S. L., Taft, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+estrous+cycle+identification+tool+and+images.">Mouse estrous cycle identification tool and images.</a> PLoS One. 7 (4), 35538 (2012).</li><li>Caligioni, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+reproductive+status/stages+in+mice.">Assessing reproductive status/stages in mice.</a> Current protocols in neuroscience. , (2009).</li><li>Segal, S., Csavoy, A. N., Datta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tocolytic+effect+of+catecholamines+in+the+gravid+rat+uterus.">The tocolytic effect of catecholamines in the gravid rat uterus.</a> Anesthesia and analgesia. 87 (4), 864-869 (1998).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenylephrine,+a+common+cold+remedy+active+ingredient,+suppresses+uterine+contractions+through+cAMP+signalling.">Phenylephrine, a common cold remedy active ingredient, suppresses uterine contractions through cAMP signalling.</a> Scientific reports. 8 (1), 11666 (2018).</li><li>Domino, M., Pawlinski, B., Gajewski, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomathematical+pattern+of+EMG+signal+propagation+in+smooth+muscle+of+the+non-pregnant+porcine+uterus.">Biomathematical pattern of EMG signal propagation in smooth muscle of the non-pregnant porcine uterus.</a> PLoS One. 12 (3), 0173452 (2017).</li><li>Crane, L. H., Martin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pace-maker+activity+in+the+myometrium+of+the+oestrous+rat:+in+vivo+studies+using+video-laparoscopy.">Pace-maker activity in the myometrium of the oestrous rat: in vivo studies using video-laparoscopy.</a> Reproduction, fertility, and development. 3 (5), 519-527 (1991).</li></ol>

Ici, nous avons décrit une méthode pour évaluer la contractilité spontanée de l'appareil reproducteur entier de rongeur, qui inclut les ovaires, les oviducts, les cornes utérines, et le vagin. Nous avons utilisé une méthode semblable pour démontrer l'effet relaxant de la phényléphrine sur la motilité utérine spontanée13,cependant, dans le passé nous n'avons pas pu fournir l'analyse quantitative des données. Dans ce travail, nous avons développé un algorithme pour l'analyse quanti...

En tant qu'organe féminin majeur, l'utérus est crucial pour la reproduction et essentiel pour la nourriture du fœtus1. L'utérus se compose de trois couches : le perimetrium, le myometrium et l'endomètre. Le myometrium est la couche contractile principale de l'utérus et joue un rôle clé dans l'accouchement du fœtus. L'endomètre est la couche la plus interne qui tapisse la cavité utérine et est essentielle à l'implantation d'embryons. Chez les femelles non enceintes en âge de procréer, la couche endométriale est remise mensuellement au début du cycle menstruel. Le myometrium aide dans ce processus d'excrétion en maintenant les contractions myométriales spontanées nécessaires pour dégager le tissu endométrial nécrotique de l'utérus1.
Malheureusement, l'augmentation de la contractilité myometriale peut entraîner des effets secondaires négatifs tels que la dysmémérisé, ou des crampes menstruelles douloureuses. Ceci est particulièrement vu chez les jeunes femmes et les femmes nulliparous2. Cependant, la dysmémérisme est différente pour chaque femme et dépend de la force de leurs contractions myométriales; des contractions plus fortes sont souvent associées à la sensation de crampes sévères3. La contractilité myométriale peut être visualisée à l'aide de l'échographie utérine et est souvent reconnue comme des ondes endométriales. La libération accrue des prostaglandines pendant la menstruation4 dans un utérus subissant le sloughing endométrial est censée contribuer à l'hypercontractilité myometrial accrue, ayant pour résultat l'ischémie et l'hypoxie du muscle utérin et ainsi augmenté douleur3.
La dysméorrhe sévère peut entraver l'activité quotidienne de certaines femmes et 3 à 33% des femmes ont une douleur très sévère, ce qui pourrait causer une femme à être alitée pendant 1 à 3 jours chaque cycle menstruel5. La dysméorrhe est la principale cause de morbidité gynécologique chez les femmes en âge de procréer, indépendamment de l'âge, de la nationalité et du statut économique5. La prévalence estimée de la dysméorrhe est à la fois élevée et variable, allant de 45 % à 93 % chez les femmes en âge de procréerde 5ans.  La douleur associée à la dysménorrie a un effet sur la vie quotidienne des femmes et peut entraîner de mauvaises performances scolaires chez les adolescents, une qualité de sommeil inférieure, une restriction des activités quotidiennes et des changements d'humeur5.
Beaucoup de femmes qui souffrent de dysméorrhe sévère ont recours à des médicaments en vente libre pour soulager leur douleur. Ces médicaments en vente libre contiennent des inhibiteurs de la cyclooxygénase (COX) qui empêchent la formation de prostaglandines6. Cependant, les inhibiteurs de la COX sont associés à des événements cardiovasculaires indésirables, et environ 18 % des femmes atteintes de dysméorrhéa ne répondent pas à ces inhibiteurs7. Par conséquent, il ya un besoin de nouveaux médicaments pour réduire les crampes menstruelles. Puisque sur contractilité de l'utérus contribue à la pathogénie de la dysménorre, une stratégie possible peut être l'utilisation des relaxants utérins.
Il est bénéfique de quantifier les effets des médicaments relaxants potentiels dans un modèle de contractions naturelles spontanées ressemblant à des ondes myométriales. Cependant, jusqu'ici, aucune méthode ex vivo efficace pour tester des drogues de muscle-relaxant dans l'utérus intact n'a été décrite. Actuellement, des mesures de tension isométrique sont utilisées pour évaluer les effets des médicaments relaxants. Au cours de ces mesures, une bande musculaire utérine est maintenue à une longueur constante sous précharge dans un bain de tissu tandis que la force des contractions de muscle utérin est enregistrée avant et après la stimulation d'ocytocine en présence ou l'absence d'un médicament relaxant. Bien que cette approche soit très utile, elle nécessite un équipement coûteux. En outre, les contractions isométriques ne ressemblent pas aux contractions spontanées de myometrial-comme qui se produisent naturellement dans l'utérus intact. Unique, les ondes myométriales utérines chez les rongeurs peuvent être visualisées comme motilité de corne utérine quand l'ensemble de l'appareil reproducteur (ovaires, oviductes, utérus, et vagin) est maintenu dans une solution tampon. Ici, nous présentons une méthode ex vivo pour surveiller la motilité spontanée de l'utérus intact de souris placé dans un plat de Petri contenant le tampon oxygéné de Krebs. Nous décrivons également un algorithme de quantification de la motilité utilisant le tracker de mouvement MATLAB. Cette nouvelle approche offre une alternative facile et moins coûteuse pour tester le potentiel relaxant des remèdes naturels et des composés synthétiques.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:671px;" width="670">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:208px;">Epinephrine hydrochloride</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">&#160;E4642&#160;</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:208px;">Dulbecco&#39;s PBS</td>
			<td style="width:161px;">Fisher Sceintific&#160;</td>
			<td style="width:75px;">17-512Q</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:208px;">Ethanol 200 PROOF</td>
			<td style="width:161px;">Decon Laboratories</td>
			<td style="width:75px;">2701</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:208px;">NaCl</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">S7653</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:208px;">Glucose</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">G7528</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:208px;">KCl</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">P9333</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:208px;">CaCl2 &#183; 2H2O</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">C5080</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:208px;">NaH2PO4</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">S0751</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:208px;">MgCl2&#160; &#183; 6H2O</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">M9272</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:208px;">NaHCO3</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">S6297</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:208px;">Isoflurane, USP</td>
			<td style="width:161px;">Patterson Veterinary</td>
			<td style="width:75px;">07-893-2374</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:208px;">Dissecting Extra-Fine-Pointed Precision Splinter Forceps</td>
			<td style="width:161px;">Fisher Sceintific</td>
			<td style="width:75px;">13-812-42</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:208px;">Curved Hardened Fine Iris Scissors</td>
			<td style="width:161px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:75px;">14091-09</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="49">
			<td height="49" style="height:49px;width:208px;">Dissection High-performance Modular Stereomicroscope</td>
			<td style="width:161px;">Leica</td>
			<td style="width:75px;">MZ6&#160;</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:208px;">Digital 5 Megapixel Color Microscope Camera with active cooling system</td>
			<td style="width:161px;">Leica</td>
			<td style="width:75px;">&#160;DFC425 C</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:208px;">Stereomaster Microscope Fiber-Optic Light Sources</td>
			<td style="width:161px;">Fisher Sceintific&#160;</td>
			<td style="width:75px;">12-562-21</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:208px;">Weigh Boat</td>
			<td style="width:161px;">Fisher Sceintific&#160;</td>
			<td style="width:75px;">WB30304</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:208px;">Convertors Astound Standard Surgical Gown&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Cardinal Health&#160;</td>
			<td style="width:75px;">9515</td>
			<td style="width:227px;">Small, Medium or Large</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:208px;">Gloves</td>
			<td style="width:161px;">McKesson Corporation</td>
			<td style="width:75px;">20-1080</td>
			<td style="width:227px;">Small, Medium, or Large; powder-free sterile latex or nitrile surgical gloves</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#160;Petri Dish</td>
			<td style="width:161px;">Corning Falcon</td>
			<td>351029</td>
			<td style="width:227px;">100 mm</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;">&#160;Petri Dish</td>
			<td style="width:161px;">Corning Falcon</td>
			<td style="width:75px;">353001</td>
			<td style="width:227px;">35 mm</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">95% O2- 5% CO2 gas mixture</td>
			<td>Praxair</td>
			<td style="width:75px;">&#160;MM OXCD5-K</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Ear-loop Masks</td>
			<td>Valumax International</td>
			<td style="width:75px;">5430E-PP</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">DSLR 24.2 MP Camera</td>
			<td>Canon</td>
			<td style="width:75px;">EOS Rebel T6i</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:208px;">MATLAB</td>
			<td style="width:161px;">MathWorks</td>
			<td style="width:75px;">N/A</td>
			<td style="width:227px;">version 2019 or later</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo method for assessing the mouse reproductive tract spontaneous motility and a matlab-based uterus motion tracking algorithm for data analysis

La dysmémérise, ou crampes douloureuses, est le symptôme le plus commun associé aux règles chez les femmes et sa sévérité peut entraver la vie quotidienne des femmes. Ici, nous présentons une méthode facile et peu coûteuse qui serait instrumentale pour tester de nouveaux médicaments diminuant la contractilité utérine. Cette méthode utilise la capacité unique de l'ensemble de l'appareil reproducteur de la souris à montrer la motilité spontanée lorsqu'il est maintenu ex vivo dans un plat Petri contenant tampon Krebs oxygéné. Cette motilité spontanée ressemble à l'activité myométriale ondulée de l'utérus humain, appelée ondes endométriales. Pour démontrer l'efficacité de la méthode, nous avons employé un médicament relaxant utérin bien connu, l'épinéphrine. Nous démontrons que la motilité spontanée de l'ensemble de l'appareil reproducteur de souris peut être rapidement et réversiblement inhibée par 1 épinéphrine de M dans ce modèle de plat de Petri. Documenter les changements de la motilité utérine peut être facilement fait à l'aide d'un téléphone intelligent ordinaire ou un appareil photo numérique sophistiqué. Nous avons développé un algorithme basé sur MATLAB permettant au suivi de mouvement de quantifier les changements spontanés de motilité utérine en mesurant le taux de mouvements de corne utérine. Un avantage majeur de cette approche ex vivo est que l'appareil reproducteur reste intact tout au long de l'expérience, préservant toutes les interactions cellulaires intra-utérines intrinsèques. La principale limitation de cette approche est que jusqu'à 10-20% de l'utérus peut ne présenter aucune motilité spontanée. Jusqu'à présent, il s'agit de la première méthode quantitative ex vivo pour évaluer la motilité utérine spontanée dans un modèle de plat Petri.

La figure 1 montre des images représentatives prises pendant toute la procédure d'isolement de l'appareil reproducteur qui est décrite dans ce protocole. Pour éviter de contaminer le tampon avec de la fourrure, ce qui diminuerait la qualité vidéo, nous avons humidifié le corps de la souris avec 70% d'éthanol. La principale référence pour la section de dissection du protocole est de trouver la vessie urinaire. L'utérus et le vagin seront situés inférieurs à la vessie.
<p cla...

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Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis

Les contractions utérines sont importantes pour le bien-être des femelles. Cependant, la contractilité pathologiquement accrue peut avoir comme conséquence la dysméorrhea, particulièrement dans les femelles plus jeunes. Ici, nous décrivons une préparation ex vivo simple permettant l'évaluation rapide de l'efficacité des relaxants lisses de muscle qui peuvent être employés pour traiter la dysméorrhea.

Méthode Ex Vivo pour évaluer la motilité spontanée de la mouse Reproductive Tract et un algorithme de suivi des mouvements uterus basé sur MATLAB pour l'analyse des données

Dysmenorrhea, or painful cramping, is the most common symptom associated with menses in females and its severity can hinder women&#39;s everyday lives. ...

Notre protocole est significatif parce qu’il fournit la première méthode quantitative ex vivo pour évaluer la motilité spontanée d’un utérus intact. Cette nouvelle approche offre une alternative facile et moins coûteuse pour tester le potentiel relaxant des remèdes naturels dans les composés synthétiques. Un avantage majeur de cette technique est que toutes les interactions cellulaires intra-utérine restent intactes tout au long de l’expérience.La sur contractilité de l’utérus est associée à la dysménorrhée, pour laquelle les relaxants utérins peuvent être utiles pour le traitement. Cette méthode fournit un moyen facile de tester de nouveaux relaxants. Après avoir confirmé le stade du cycle estreux, placez la souris dans la position supine, et écartez les extrémités pour exposer la région pelvienne abdominale.Mouiller l’abdomen avec 70% d’éthanol, et utiliser des forceps pour soulever soigneusement la peau supérieure au clitoris. Faire de petites incisions transversales sur les aspects latéraux de la région abdominale inférieure jusqu’aux extrémités supérieures pour exposer le péritoine. Couper soigneusement à travers le péritoine pour exposer le tractus gastro-intestinal sans endommager les cornes utérine, et utiliser des forceps pour enlever le fascia et le tissu adipeux couvrant le tractus gastro-intestinal.Enlevez le dudénodum, le jejunum, l’iléum, le cecum et le côlon ascendant et transversaux. Localiser la vessie urinaire pour localiser le vagin qui se trouve directement sous la vessie urinaire. Localiser la symphyse pubienne au confluent des os pubiens, caudal à la vessie, et utiliser des ciseaux pour faire soigneusement une incision sur les côtés latéraux de la symphyse pubienne à travers le tissu fibrocartilaginous interpubique pour accéder et de fournir une voie pour l’extraction vaginale.Couper à travers le périnée situé entre l’anus et la partie inférieure de la vulve, et utiliser des forceps pour soulever le vagin pour permettre une excision lente du rectum. Identifiez les deux cornes utérine qui bifurquent dans une fourchette rostrally au vagin et localisez un oviducte et un ovaire alambiqués à l’extrémité de chaque corne. L’identification correcte des cornes utérine est essentielle à la procédure pour s’assurer que les tissus ne sont pas endommagés.Utilisez de petits ciseaux dissectants pour enlever tous les ligaments qui se connectent aux cornes, aux oviductes et aux ovaires dans la cavité abdominale et pour enlever le vagin, l’utérus, les oviductes et les ovaires. Transférer l’ensemble de l’appareil reproducteur isolé dans une boîte de Pétri de 100 millimètres contenant 10 millilitres de PBS de Dulbecco. Utilisez des forceps et des ciseaux chirurgicaux pour enlever tout tissu conjonctif et adipeux entourant les cornes utérine et le vagin ainsi que toute fourrure dans la région pubienne qui pourrait nuire à la qualité de l’image.Retirer le ligament large pour permettre la motilité des cornes utérine et laver le tissu deux fois avec pbs frais Dulbecco par lavage avant de transférer l’appareil reproducteur isolé dans une boîte de Pétri de 35 millimètres contenant trois millilitres de solution krebs oxygénée. Pour l’imagerie spontanée par motilité, placez la boîte de Pétri sur une surface noire à température ambiante et prévoyez de 15 à 30 minutes pour que les contractions spontanées commencent. Lorsque le mouvement peut être observé, enregistrez la motilité utérine spontanée pendant 10 minutes à partir d’un plan axial à l’aide de tout type d’équipement vidéo numérique.Ensuite, transférez la préparation dans une boîte de Pétri contenant du tampon Krebs oxygéné complété par le composé d’essai et enregistrez la motilité utérine spontanée pendant 10 minutes supplémentaires de la même manière. À la fin de la période d’enregistrement, laver l’ensemble de l’appareil reproducteur en 10 millilitres du PBS de Dulbecco dans une boîte de Pétri de 100 millimètres et transférer l’échantillon dans une nouvelle boîte de Pétri de tampon Krebs fraîchement oxygéné pour évaluer la réversibilité du traitement. Enregistrez la motilité utérine spontanée pendant environ 10 minutes de la même manière que pour les deux derniers enregistrements.Ensuite, transférez la préparation dans une autre boîte de Pétri de 35 millimètres remplie de tampon Krebs oxygéné complété par le véhicule pour le composé d’essai pour s’assurer qu’il n’y a pas de changements mécaniquement induits dans la motilité utérine spontanée. La préparation de l’appareil reproducteur a montré une grande motilité dans les panneaux A et C en l’absence d’épinéphrine. Mais ce phénotype est dormant dans le panneau B avec la présence d’une microénerphrine muller.Ici, une analyse de données d’échantillon de l’administration d’épinéphrine et de la récupération spontanée de motilité est montrée, illustrant comment les effets de l’hormone sur la motilité spontanée d’appareil reproducteur peuvent être quantifiés des enregistrements du tissu pris avant, pendant, et après traitement composé d’essai. Il est important d’éviter de compresser ou de trop remettre les cornes utérine sinon aucune contractilité spontanée ne sera observée. Notre méthode peut également être utilisée pour tester les composés qui peuvent augmenter la contractilité de l’utérus.Cette procédure peut être appliquée à l’utérus de souris enceinte aux premiers stades de la grossesse. Cette expérience a le potentiel d’être mise à niveau vers un format de six plaques de puits pour le dépistage des médicaments à débit.

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