Name: ex vivo method for assessing the mouse reproductive tract spontaneous motility and a matlab-based uterus motion tracking algorithm for data analysis
Uploaded: 2019-09-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis at JoVE.c

이 작품은 내부 IU 기금에 의해 지원되었다. AGO는 연구를 구상했다. XC 및 AGO는 기재된 실험의 설계에 관여하였다.  FL 및 AGO는 데이터를 분석하고 해석했습니다. KLL, JOB, FL은 모든 생체 내 실험을 수행하였다. FL은 MATLAB 스크립트를 작성했습니다. KLL, JOB, 그리고 AGO는 원고를 썼다.  모든 저자는 원고의 최종 버전을 읽고 승인했습니다.

동물을 가진 모든 절차는 인디애나 대학 의과 대학 (인디애나 폴리스, IN)의 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 2-5개월 된 F2-129S-C57BL/6 성적으로 성숙한 암컷 마우스를 연구에 사용하였다.
주의 사항: 동물 및 생체 유해 물질로 작업할 때 실험실 코트, 마스크 및 장갑을 착용하여 안전을 보장합니다.
1. 솔루션 준비
<ol><li>포...

<ol>
	<li>Kuijsters, N. P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uterine+peristalsis+and+fertility:+current+knowledge+and+future+perspectives:+a+review+and+meta-analysis.">Uterine peristalsis and fertility: current knowledge and future perspectives: a review and meta-analysis.</a> Reproductive BioMedicine Online. 35 (1), 50-71 (2017).</li><li>Kural, M., Noor, N. N., Pandit, D., Joshi, T., Patil, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Menstrual+characteristics+and+prevalence+of+dysmenorrhea+in+college+going+girls.">Menstrual characteristics and prevalence of dysmenorrhea in college going girls.</a> Journal of Family Medicine and Primary Care. 4 (3), 426-431 (2015).</li><li>Dehnavi, Z. M., Jafarnejad, F., Kamali, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effect+of+aerobic+exercise+on+primary+dysmenorrhea:+A+clinical+trial+study.">The Effect of aerobic exercise on primary dysmenorrhea: A clinical trial study.</a> Journal of education and health promotion. 7, 3 (2018).</li><li>Lindner, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significance+of+prostaglandins+in+the+regulation+of+cyclic+events+in+the+ovary+and+uterus.">Significance of prostaglandins in the regulation of cyclic events in the ovary and uterus.</a> Advances in prostaglandin and thromboxane research. 8, 1371-1390 (1980).</li><li>Bernardi, M., Lazzeri, L., Perelli, F., Reis, F. M., Petraglia, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysmenorrhea+and+related+disorders.">Dysmenorrhea and related disorders.</a> F1000 research. 6, 1645 (2017).</li><li>Marjoribanks, J., Ayeleke, R. O., Farquhar, C., Proctor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonsteroidal+anti-inflammatory+drugs+for+dysmenorrhoea.">Nonsteroidal anti-inflammatory drugs for dysmenorrhoea.</a> The Cochrane database of systematic reviews. 7, 001751 (2015).</li><li>Oladosu, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abdominal+skeletal+muscle+activity+precedes+spontaneous+menstrual+cramping+pain+in+primary+dysmenorrhea.">Abdominal skeletal muscle activity precedes spontaneous menstrual cramping pain in primary dysmenorrhea.</a> American journal of obstetrics and gynecology. 219 (1), 91 (2018).</li><li>Lawson, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occupational+exposures+among+nurses+and+risk+of+spontaneous+abortion.">Occupational exposures among nurses and risk of spontaneous abortion.</a> American journal of obstetrics and gynecology. 206 (4), 327-328 (2012).</li><li>Mazze, R. I., Wilson, A. I., Rice, S. A., Baden, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fetal+development+in+mice+exposed+to+isoflurane.">Fetal development in mice exposed to isoflurane.</a> Teratology. 32 (3), 339-345 (1985).</li><li>Byers, S. L., Wiles, M. V., Dunn, S. L., Taft, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+estrous+cycle+identification+tool+and+images.">Mouse estrous cycle identification tool and images.</a> PLoS One. 7 (4), 35538 (2012).</li><li>Caligioni, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+reproductive+status/stages+in+mice.">Assessing reproductive status/stages in mice.</a> Current protocols in neuroscience. , (2009).</li><li>Segal, S., Csavoy, A. N., Datta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tocolytic+effect+of+catecholamines+in+the+gravid+rat+uterus.">The tocolytic effect of catecholamines in the gravid rat uterus.</a> Anesthesia and analgesia. 87 (4), 864-869 (1998).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenylephrine,+a+common+cold+remedy+active+ingredient,+suppresses+uterine+contractions+through+cAMP+signalling.">Phenylephrine, a common cold remedy active ingredient, suppresses uterine contractions through cAMP signalling.</a> Scientific reports. 8 (1), 11666 (2018).</li><li>Domino, M., Pawlinski, B., Gajewski, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomathematical+pattern+of+EMG+signal+propagation+in+smooth+muscle+of+the+non-pregnant+porcine+uterus.">Biomathematical pattern of EMG signal propagation in smooth muscle of the non-pregnant porcine uterus.</a> PLoS One. 12 (3), 0173452 (2017).</li><li>Crane, L. H., Martin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pace-maker+activity+in+the+myometrium+of+the+oestrous+rat:+in+vivo+studies+using+video-laparoscopy.">Pace-maker activity in the myometrium of the oestrous rat: in vivo studies using video-laparoscopy.</a> Reproduction, fertility, and development. 3 (5), 519-527 (1991).</li></ol>

여기에서, 우리는 난소, oviducts, 자궁 뿔 및 질을 포함하는 전체 설치류 생식 기관의 자발적인 수축성을 평가하기 위한 방법을 기술했습니다. 우리는 자발적인 자궁 운동성13에페닐레프린의 이완 효과를 입증하기 위해 유사한 방법을 사용했지만, 과거에는 데이터의 정량적 분석을 제공할 수 없었습니다. 이 작품에서는 MATLAB 모션 트래킹 모듈을 사용하여 정량적 운동성 데이터 분?...

주요 여성 기관으로서 자궁은 태아의 영양을 위해 생식에 매우 중요하며필수적입니다 1. 자궁은 3 개의 층으로 구성됩니다 : 회막, 근막 및 자궁 내막. myometrium는 자궁의 중요한 수축층이고 태아 납품에 있는 중요한 역할을 합니다. 자궁 내막은 자궁 구멍을 안감하는 가장 안쪽 층이고 태아 이식을 위해 필수적입니다. 생식 연령의 임신하지 않은 여성에서 자궁 내막 층은 월경 주기의 시작 부분에 매달 흘린다. 근막은 자궁에서 괴사 자궁 내막 조직을 지우는 데 필요한 자발적인 근심 수축을 유지함으로써이흘리기 과정에서 보조합니다 1.
불행 하 게도, 증가 근심 수축 월 경 질 등 부정적인 부작용귀 착될 수 있습니다., 또는 고통 스러운 생리 경련. 이것은 특히 젊은 여성과 nulliparous 여성2에서 볼 수 있습니다. 그러나, 월경기는 모든 여성을 위해 다르며 근심 수축의 강도에 따라 다릅니다. 강한 수축은 종종 심한 경련의 감각과연관3. 근위축성은 자궁초음파를 사용하여 가시화될 수 있으며 자궁내막파로 인식되기도 합니다. 자궁내막 슬루핑을 겪고 있는 자궁에서 생리 중 프로스타글란딘의 향상된 방출4은 근심시험 과수축성 증가에 기여하여 자궁 근육의 허혈 및 저산소증을 초래하고, 따라서 증가시키는 것으로 여겨진다. 통증3.
심한 월경불순은 일부 여성의 일상 적인 활동을 방해 할 수 있으며 여성의 3 ~ 33 %는 매우 심한 통증을 가지고 있으며, 이는 여성이 각 생리 주기5일 동안 침대에 누워있을 수 있습니다. 월경불협은 연령, 국적,경제상태에관계없이 생식연령여성의 부인과이병의 주요 원인5. 월경불순의 추정 된 보급은 생식 연령5의여성에서 45 %에서 93 %까지 높고 가변적입니다.  월경불경 관련 통증은 여성의 일상 생활에 영향을 미치며 청소년의 학업 성적 저하, 수면의 질 저하, 일상 활동의 제한 및 기분 변화5.
가혹한 월경불위를 경험하는 많은 여자는 그들의 고통을 구호하기 위하여 창구 판매 약물에 의지합니다. 이러한 창구 판매 약물은 프로스타글란딘의 형성을 방지하는 사이클로옥시게나제 (COX) 억제제를 함유하고있습니다6. 그러나 COX 억제제는 불리한 심혈관 사건과 관련이 있으며, 월경불경을 가진 여성의 약 18%는이러한 억제제 7에 반응하지 않습니다. 따라서 생리통을 줄이기 위해 새로운 약물이 필요합니다. 자궁의 수축성 이상이 월경불허의 발병기전에 기여하기 때문에 한 가지 가능한 전략은 자궁 이완제의 사용일 수 있습니다.
그것은 자연스럽 게 발생 하는 자발적인 심근 파 같은 수축의 모델에서 잠재적인 이완 제 약물의 효과 정량화 하는 것이 도움이. 그러나, 지금까지, 온전한 자궁에서 근육 이완 약물을 시험하기 위한 효율적인 생체 내 생체 내 방법은 설명되지 않았다. 현재, 아이소메트릭 장력 측정은 이완제 약물 효과를 평가하는 데 사용됩니다. 이러한 측정 동안, 자궁 근육 스트립은 조직 목욕에서 예압하에 일정한 길이로 유지되며 자궁 근육 수축의 힘은 이완제 약물의 존재 또는 부재 에서 옥시토신 자극 전후로 기록됩니다. 이 방법은 매우 유용하지만, 그것은 비싼 장비가 필요합니다. 또한, 등각부종 수축은 자연그대로 자궁에서 자연적으로 발생하는 자발적인 근심파와 유사한 수축과 유사하지 않습니다. 유일하게, 설치류에 있는 자궁 근심파는 전체 생식 기관 (난소, 난관, 자궁 및 질)가 완충액에서 유지될 때 자궁 혼 운동성으로 구상될 수 있습니다. 여기서, 우리는 산소화 된 크렙스 버퍼를 포함하는 페트리 접시에 배치 된 그대로 마우스 자궁의 자발적인 운동성을 모니터링하기위한 생체 내 방법을 제시한다. 또한 MATLAB 모션 트래커를 활용한 운동성 정량화 알고리즘에 대해서도 설명합니다. 이 새로운 접근 방식은 자연적으로 발생하는 치료법과 합성 화합물의 이완 잠재력을 테스트하기 위한 쉽고 저렴한 대안을 제공합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:671px;" width="670">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:208px;">Epinephrine hydrochloride</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">&#160;E4642&#160;</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:208px;">Dulbecco&#39;s PBS</td>
			<td style="width:161px;">Fisher Sceintific&#160;</td>
			<td style="width:75px;">17-512Q</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:208px;">Ethanol 200 PROOF</td>
			<td style="width:161px;">Decon Laboratories</td>
			<td style="width:75px;">2701</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:208px;">NaCl</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">S7653</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:208px;">Glucose</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">G7528</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:208px;">KCl</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">P9333</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:208px;">CaCl2 &#183; 2H2O</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">C5080</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:208px;">NaH2PO4</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">S0751</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:208px;">MgCl2&#160; &#183; 6H2O</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">M9272</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:208px;">NaHCO3</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">S6297</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:208px;">Isoflurane, USP</td>
			<td style="width:161px;">Patterson Veterinary</td>
			<td style="width:75px;">07-893-2374</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:208px;">Dissecting Extra-Fine-Pointed Precision Splinter Forceps</td>
			<td style="width:161px;">Fisher Sceintific</td>
			<td style="width:75px;">13-812-42</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:208px;">Curved Hardened Fine Iris Scissors</td>
			<td style="width:161px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:75px;">14091-09</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="49">
			<td height="49" style="height:49px;width:208px;">Dissection High-performance Modular Stereomicroscope</td>
			<td style="width:161px;">Leica</td>
			<td style="width:75px;">MZ6&#160;</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:208px;">Digital 5 Megapixel Color Microscope Camera with active cooling system</td>
			<td style="width:161px;">Leica</td>
			<td style="width:75px;">&#160;DFC425 C</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:208px;">Stereomaster Microscope Fiber-Optic Light Sources</td>
			<td style="width:161px;">Fisher Sceintific&#160;</td>
			<td style="width:75px;">12-562-21</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:208px;">Weigh Boat</td>
			<td style="width:161px;">Fisher Sceintific&#160;</td>
			<td style="width:75px;">WB30304</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:208px;">Convertors Astound Standard Surgical Gown&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Cardinal Health&#160;</td>
			<td style="width:75px;">9515</td>
			<td style="width:227px;">Small, Medium or Large</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:208px;">Gloves</td>
			<td style="width:161px;">McKesson Corporation</td>
			<td style="width:75px;">20-1080</td>
			<td style="width:227px;">Small, Medium, or Large; powder-free sterile latex or nitrile surgical gloves</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#160;Petri Dish</td>
			<td style="width:161px;">Corning Falcon</td>
			<td>351029</td>
			<td style="width:227px;">100 mm</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;">&#160;Petri Dish</td>
			<td style="width:161px;">Corning Falcon</td>
			<td style="width:75px;">353001</td>
			<td style="width:227px;">35 mm</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">95% O2- 5% CO2 gas mixture</td>
			<td>Praxair</td>
			<td style="width:75px;">&#160;MM OXCD5-K</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Ear-loop Masks</td>
			<td>Valumax International</td>
			<td style="width:75px;">5430E-PP</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">DSLR 24.2 MP Camera</td>
			<td>Canon</td>
			<td style="width:75px;">EOS Rebel T6i</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:208px;">MATLAB</td>
			<td style="width:161px;">MathWorks</td>
			<td style="width:75px;">N/A</td>
			<td style="width:227px;">version 2019 or later</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo method for assessing the mouse reproductive tract spontaneous motility and a matlab-based uterus motion tracking algorithm for data analysis

월경기, 또는 고통스러운 경련은, 여성의 월성과 관련된 가장 흔한 증상이며, 그 심각성은 여성의 일상 생활을 방해 할 수 있습니다. 여기에서, 우리는 자궁 수축을 감소시키는 새로운 약 시험을 위한 중요한 역할을 할 것입니다 쉽고 저렴한 방법을 제시합니다. 이 방법은 산소화 된 Krebs 버퍼를 포함하는 페트리 접시에서 생체 내 생체를 유지 했을 때 자발적인 운동성을 나타내는 전체 마우스 생식 기관의 독특한 능력을 활용합니다. 이 자발적인 운동성은 자궁내막파로 불리는 인간 자궁의 파도와 같은 근심 활성과 유사합니다. 이 방법의 효과를 입증하기 위해 잘 알려진 자궁 이완제 약물 인 피네프린을 사용했습니다. 우리는 전체 마우스 생식 기관의 자발적인 운동성이 이 페트리 접시 모델에서 1 μM 에피네프린에 의해 신속하고 가역적으로 억제될 수 있음을 입증합니다. 자궁 운동성의 변화를 문서화하는 것은 일반 스마트 폰 이나 정교한 디지털 카메라를 사용하여 쉽게 수행 할 수 있습니다. 우리는 모션 트래킹이 자궁 경적 운동의 속도를 측정하여 자발적인 자궁 운동성 변화를 정량화할 수 있도록 MATLAB 기반 알고리즘을 개발했습니다. 이 ex vivo 접근법의 주요 장점은 생식 기관이 전체 실험 전반에 걸쳐 그대로 유지되어 모든 본질적인 자궁 내 세포 상호 작용을 보존한다는 것입니다. 이 접근의 중요한 한계는 자궁의 10-20%까지 자발적인 운동성을 전시할 수 없다는 것입니다. 지금까지, 이것은 페트리 접시 모델에서 자발적인 자궁 운동성을 평가하기 위한 최초의 정량적 생체 내 방법이다.

도 1은 본 프로토콜에 기재된 전체 생식관 격리 절차 동안 촬영된 대표적인 이미지를 나타낸다. 비디오 품질을 저하시킬 수 있는 모피로 버퍼를 오염시키는 것을 방지하기 위해 마우스 본체를 70% 에탄올로 적십시켰습니다. 프로토콜의 해부 섹션에 대한 주요 벤치 마크는 오줌 방광을 찾는 것입니다. 자궁과 질은 오줌 방광에 열등하게 위치할 것입니다.
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Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis at JoVE.c

Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis

자궁 수축은 여성의 복지에 중요합니다. 그러나 병리학적으로 수축성이 증가하면 월경불순, 특히 젊은 여성에게 발생할 수 있습니다. 여기에서, 우리는 월경경 치료에 사용될 수 있는 평활근 이완제의 효능의 빠른 평가를 허용하는 간단한 생체 내 준비를 기술한다.

마우스 생식 기관 자발적 운동성 및 데이터 분석을 위한 MATLAB 기반 자궁 운동 추적 알고리즘을 평가하기 위한 Ex Vivo 방법

Dysmenorrhea, or painful cramping, is the most common symptom associated with menses in females and its severity can hinder women&#39;s everyday lives. ...

우리의 프로토콜은 그대로 자궁의 자발적인 운동성을 평가하기위한 최초의 정량적 전 생체 내 방법을 제공하기 때문에 중요합니다. 이 새로운 접근 방식은 합성 화합물에서 자연적으로 발생하는 치료법의 이완제 잠재력을 테스트하기위한 쉽고 저렴한 대안을 제공합니다. 이 기술의 주요 장점은 모든 자궁 내 세포 상호 작용이 실험 전반에 걸쳐 그대로 남아 있다는 것입니다.자궁의 수축이상은 자궁 이완제 치료에 유용할 수 있는 난종증과 연관된다. 이 방법은 새로운 이완제를 테스트하는 쉬운 방법을 제공합니다. 에스트라스트 사이클 스테이지를 확인한 후 마우스를 척추 위치에 배치하고 사지를 퍼져 복부 골반 부위를 노출시한다.복부를 70%에탄올로 적시고, 집게를 사용하여 클리토리스보다 우수한 피부를 조심스럽게 들어올립니다. 복막을 노출하기 위해 상복부 영역의 측면 측면에 작은 횡선 절개를 합니다. 자궁 뿔을 손상시키지 않고 위장관을 노출시키기 위해 복막을 조심스럽게 잘라내고, 집게를 사용하여 위장관을 덮는 근막과 지방 조직을 제거합니다.십이지장, 제주넘, 일리움, cecum, 그리고 오름차순과 횡결 결장제거합니다. 오줌 방광을 찾아 오줌 방광 의 밑에 직접 찾아내는 질을 찾아내는. 음모 뼈의 합류에 음모 대칭을 찾아, 방광에 caudal, 조심스럽게 접근을 얻고 질 추출을위한 경로를 제공하기 위해 중간 섬유 카르티라기누스 조직을 통해 음모 심기의 측면에 절개를 만들기 위해 가위를 사용합니다.외음부의 항문과 하부 사이에 위치한 회음부를 잘라내고, 집게를 사용하여 직장을 느리게 절인 것을 허용합니다. 질에 포크로 분기 두 자궁 뿔을 식별하고 각 뿔의 끝에 복잡한 oviduct와 난소를 찾을 수 있습니다. 자궁 뿔을 올바르게 식별하는 것은 조직이 손상되지 않도록하는 절차에 중요합니다.작은 해부 가위를 사용하여 복강 내에서 뿔, oviducts 및 난소에 연결하고 지원하는 인대를 제거하고 질, 자궁, oviducts 및 난소를 제거하십시오. Dulbecco의 PBS의 10 밀리리터를 포함하는 100 밀리미터 페트리 접시에 전체 고립 된 생식 기관을 전송합니다. 집게와 외과 가위를 사용하여 자궁 뿔과 질을 둘러싼 결합 및 지방 조직뿐만 아니라 이미지 품질을 방해 할 수있는 음모 부위의 털을 제거하십시오.넓은 인대를 제거하여 자궁 뿔의 운동성을 허용하고 세척당 신선한 덜벡코의 PBS로 조직을 두 번 씻은 후 고립된 생식 기관을 35mm 페트리 접시에 산소가 공급된 크렙스 용액 3밀리리터를 함유합니다. 자발적인 운동성 이미징의 경우, 페트리 접시를 실온의 검은 표면에 놓고 15~30분 동안 자발적인 수축이 시작되도록 합니다. 움직임을 관찰할 수 있을 때 모든 유형의 디지털 비디오 장비를 사용하여 축 평면에서 10분 동안 자발적인 자궁 운동성을 기록합니다.다음으로, 시험 화합물로 보충된 산소형 크렙스 버퍼를 함유한 페트리 접시에 제제를 옮기고 같은 방식으로 10분 동안 자발적인 자궁 운동성을 기록한다. 기록 기간이 끝나면 100mm 페트리 접시에 덜벡코PBS의 10 밀리리터로 생식 기관 전체를 세척하고, 시료를 갓 산소로 공급한 크렙스 버퍼의 새로운 페트리 접시로 옮겨 치료의 가역성을 평가한다. 마지막 두 녹음과 동일한 방식으로 약 10 분 동안 자발적인 자궁 운동성을 기록합니다.그런 다음 자발적인 자궁 운동성에 기계적으로 유도된 변화가 없도록 테스트 화합물에 대한 차량으로 보충된 산소형 크렙스 버퍼로 채워진 다른 35mm 페트리 접시로 제제를 전송한다. 생식 기관 준비는 에피네프린이 없는 경우 패널 A와 C에서 높은 운동성을 나타냈다. 그러나 이 표현형은 하나의 마이크로 뮬러 에피네프린의 존재와 패널 B에 휴면.여기서, 에피네프린 투여 및 자발적운동성 회복의 샘플 데이터 분석이 도시되고, 생식기관에 대한 호르몬의 효과가 생식기관에 대한 부작용이 시험 전, 도중, 및 검사 후 의외의 조직 기록으로부터 정량화될 수 있는 방법을 보여준다. 그렇지 않으면 자발적인 수축이 관찰되지 않을 것이다 압축하거나 자궁 뿔을 오버 스트레칭하지 않는 것이 중요합니다. 우리의 방법은 또한 자궁의 수축을 증가시킬 수 있는 화합물을 테스트하기 위해 사용될 수 있습니다.이 절차는 임신의 초기 단계에서 임신 마우스 자궁에 적용될 수 있습니다. 이 실험은 처리량 약물 스크리닝을 위한 6개의 잘 플레이트 형식으로 업그레이드될 가능성이 있습니다.

Research

JoVE Journal

Biology

Assessing Neural Stem Cell Motility Using an Agarose Gel-based Microfluidic Device

아가로 오스 겔 기반 Microfluidic 장치를 사용 신경 줄기 세포의 운동성 평가

While microfluidic technology is reaching a new level of maturity for macromolecular assays, cell-based assays are still at an infant stage1. This is ...

연구

생물학

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

조기 칙 태아 예 생체내 (새로운 문화)의 문화에 대한 방법

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

마우스 망막 신경절 세포의 유전자 발현에 대한 utero 및 전직 생체내의 Electroporation에

The retina and its sole output neuron, the retinal ganglion cell (RGC), comprise an excellent model in which to examine biological questions such as cell ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

위한 시스템<em&gt; 예 생체</em배아 췌장의&gt; 배양

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

A Novel Bayesian Change-point Algorithm for Genome-wide Analysis of Diverse ChIPseq Data Types

다양한 ChIPseq 데이터 유형의 게놈 차원의 분석을위한 소설 베이지안 변경 - 포인트 알고리즘

ChIPseq is a widely used technique for investigating protein-DNA interactions. Read density profiles are generated by using next-sequencing of ...

Ex vivo Method for High Resolution Imaging of Cilia Motility in Rodent Airway Epithelia

Ex vivo Method for High Resolution Imaging of Cilia Motility in Rodent Airway Epithelia

설치류기도 상피의 섬모 운동성의 높은 해상도 이미지를위한 생체 방법

An ex vivo technique for imaging mouse airway epithelia for quantitative  analysis of motile cilia function important for insight into mucociliary  ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

소설<em&gt; 생체</em배아 마우스 사랑을&gt; 문화 방법

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

마우스 고환의 생체 내 미세 주입 및 Electroporation에에서

This video and article contribution gives a comprehensive description of microinjection and electroporation of mouse testis in vivo. This particular ...

Spatiotemporal Mapping of Motility in Ex Vivo Preparations of the Intestines

Spatiotemporal Mapping of Motility in Ex Vivo Preparations of the Intestines

운동성의 시공간 매핑<em&gt; 전의 VIVO</em내장의&gt; 준비

Multiple approaches have been used to record and evaluate gastrointestinal motility including: recording changes in muscle tension, intraluminal pressure, ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

의 강성 측정<em&gt; 전의 VIVO</em원자 힘 현미경을 사용하여&gt; 마우스 대동맥

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...