Name: ex vivo method for assessing the mouse reproductive tract spontaneous motility and a matlab-based uterus motion tracking algorithm for data analysis
Uploaded: 2019-09-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis at JoVE.c

Detta arbete stöddes av interna IU-fonder. SEDAN tänkte man på studien. XC och sedan var inblandade i utformningen av de beskrivna experimenten.  FL och sedan analyserade och tolkade data. KLL, JOB, FL utförde alla ex vivo -experiment. FL skrev MATLAB-skriptet. KLL, JOB och AGO skrev manuskriptet.  Alla författare läser och godkänner den slutgiltiga versionen av manuskriptet.

Alla procedurer med djur har godkänts av den institutionella djuromsorg och användning kommittén vid Indiana University School of Medicine (Indianapolis, IN). 2-5 månad gamla F2-129S-C57BL/6 sexuellt-mogna kvinnliga möss användes i studien.
Försiktighet: Säkerställ säkerheten genom att bära en labbrock, mask och handskar när du arbetar med djur och biologiskt farliga material.
1. beredning av lösningen
<ol><li>Förbered Krebs buffert,...

<ol>
	<li>Kuijsters, N. P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uterine+peristalsis+and+fertility:+current+knowledge+and+future+perspectives:+a+review+and+meta-analysis.">Uterine peristalsis and fertility: current knowledge and future perspectives: a review and meta-analysis.</a> Reproductive BioMedicine Online. 35 (1), 50-71 (2017).</li><li>Kural, M., Noor, N. N., Pandit, D., Joshi, T., Patil, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Menstrual+characteristics+and+prevalence+of+dysmenorrhea+in+college+going+girls.">Menstrual characteristics and prevalence of dysmenorrhea in college going girls.</a> Journal of Family Medicine and Primary Care. 4 (3), 426-431 (2015).</li><li>Dehnavi, Z. M., Jafarnejad, F., Kamali, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effect+of+aerobic+exercise+on+primary+dysmenorrhea:+A+clinical+trial+study.">The Effect of aerobic exercise on primary dysmenorrhea: A clinical trial study.</a> Journal of education and health promotion. 7, 3 (2018).</li><li>Lindner, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significance+of+prostaglandins+in+the+regulation+of+cyclic+events+in+the+ovary+and+uterus.">Significance of prostaglandins in the regulation of cyclic events in the ovary and uterus.</a> Advances in prostaglandin and thromboxane research. 8, 1371-1390 (1980).</li><li>Bernardi, M., Lazzeri, L., Perelli, F., Reis, F. M., Petraglia, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysmenorrhea+and+related+disorders.">Dysmenorrhea and related disorders.</a> F1000 research. 6, 1645 (2017).</li><li>Marjoribanks, J., Ayeleke, R. O., Farquhar, C., Proctor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonsteroidal+anti-inflammatory+drugs+for+dysmenorrhoea.">Nonsteroidal anti-inflammatory drugs for dysmenorrhoea.</a> The Cochrane database of systematic reviews. 7, 001751 (2015).</li><li>Oladosu, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abdominal+skeletal+muscle+activity+precedes+spontaneous+menstrual+cramping+pain+in+primary+dysmenorrhea.">Abdominal skeletal muscle activity precedes spontaneous menstrual cramping pain in primary dysmenorrhea.</a> American journal of obstetrics and gynecology. 219 (1), 91 (2018).</li><li>Lawson, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occupational+exposures+among+nurses+and+risk+of+spontaneous+abortion.">Occupational exposures among nurses and risk of spontaneous abortion.</a> American journal of obstetrics and gynecology. 206 (4), 327-328 (2012).</li><li>Mazze, R. I., Wilson, A. I., Rice, S. A., Baden, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fetal+development+in+mice+exposed+to+isoflurane.">Fetal development in mice exposed to isoflurane.</a> Teratology. 32 (3), 339-345 (1985).</li><li>Byers, S. L., Wiles, M. V., Dunn, S. L., Taft, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+estrous+cycle+identification+tool+and+images.">Mouse estrous cycle identification tool and images.</a> PLoS One. 7 (4), 35538 (2012).</li><li>Caligioni, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+reproductive+status/stages+in+mice.">Assessing reproductive status/stages in mice.</a> Current protocols in neuroscience. , (2009).</li><li>Segal, S., Csavoy, A. N., Datta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tocolytic+effect+of+catecholamines+in+the+gravid+rat+uterus.">The tocolytic effect of catecholamines in the gravid rat uterus.</a> Anesthesia and analgesia. 87 (4), 864-869 (1998).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenylephrine,+a+common+cold+remedy+active+ingredient,+suppresses+uterine+contractions+through+cAMP+signalling.">Phenylephrine, a common cold remedy active ingredient, suppresses uterine contractions through cAMP signalling.</a> Scientific reports. 8 (1), 11666 (2018).</li><li>Domino, M., Pawlinski, B., Gajewski, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomathematical+pattern+of+EMG+signal+propagation+in+smooth+muscle+of+the+non-pregnant+porcine+uterus.">Biomathematical pattern of EMG signal propagation in smooth muscle of the non-pregnant porcine uterus.</a> PLoS One. 12 (3), 0173452 (2017).</li><li>Crane, L. H., Martin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pace-maker+activity+in+the+myometrium+of+the+oestrous+rat:+in+vivo+studies+using+video-laparoscopy.">Pace-maker activity in the myometrium of the oestrous rat: in vivo studies using video-laparoscopy.</a> Reproduction, fertility, and development. 3 (5), 519-527 (1991).</li></ol>

Här beskrev vi en metod för att bedöma spontan kontraktilitet av hela gnagare reproduktionsorgan, som omfattar äggstockarna, ovikanaler, livmoder horn, och slidan. Vi använde en liknande metod för att demonstrera den relaxerande effekten av fenylefrin på spontan livmoder motilitet13, men tidigare kunde vi inte ge kvantitativ analys av data. I detta arbete utvecklade vi en algoritm för kvantitativ motilitet dataanalys med hjälp av MATLAB motion tracking module. Detta är en användbar tekn...

Som ett stort kvinnligt organ, livmodern är avgörande för reproduktion och avgörande för näring av fostret1. Livmodern består av tre skikt: perimetrium, myometrium och endometrium. Den myometrium är den stora kontraktila skikt av livmodern och spelar en nyckelroll i Foster leverans. Livmoderslemhinnan är det innersta skiktet som kantar livmoderhålan och är nödvändig för embryoimplantation. Hos icke-gravida kvinnor i fertil ålder, endometrieskiktet är utgjutet varje månad i början av menstruationscykeln. Den myometrium aids i denna shedding process genom att bibehålla den spontana kan sammandragningar som behövs för att rensa den nekrotiska endometrievävnad från livmodern1.
Tyvärr, ökad kan kontraktilitet kan resultera i negativa biverkningar såsom dysmenorré, eller smärtsamma mensvärk. Detta är särskilt sett i unga honor och avkomma kvinnor2. Emellertid, dysmenorré är olika för varje kvinna och beror på styrkan i deras kan sammandragningar; starkare sammandragningar är ofta förknippade med känslan av svår kramp3. Myometrial kontraktilitet kan visualiseras med hjälp av livmoder ultraljud och är ofta erkänd som endometrievågor. Förbättrad frisättning av prostaglandiner under menstruation4 i en livmoder som genomgår endometriesloustar tros bidra till ökad kan hyperkontraktilitet, vilket resulterar i ischemi och hypoxi av livmoder muskeln och därmed ökad smärta3.
Svår dysmenorré kan hindra den dagliga aktiviteten hos vissa kvinnor och 3 till 33% av kvinnorna har mycket svår smärta, vilket kan orsaka en kvinna att vara sängliggande för 1 till 3 dagar varje menstruationscykel5. Dysmenorré är den vanligaste orsaken till gynekologisk morbiditet hos kvinnor i fertil ålder oavsett ålder, nationalitet, och ekonomisk status5. Den uppskattade prevalensen av dysmenorré är både hög och varierande, allt från 45% till 93% hos kvinnor i fertil ålder5.  Dysmenorré-associerad smärta har en effekt på det dagliga livet för kvinnor och kan resultera i dålig akademisk prestation hos ungdomar, lägre sömnkvalitet, begränsning av dagliga aktiviteter, och humörsvängningar5.
Många kvinnor som upplever svår dysmenorré utväg till over-the-counter mediciner för att lindra deras smärta. Sådana over-the-counter mediciner innehåller cyklooxygenas (COX) hämmare som förhindrar bildandet av prostaglandiner6. Emellertid, COX-hämmare är förknippade med ogynnsamma kardiovaskulära händelser, och om 18% av kvinnor med dysmenorré svarar inte på dessa hämmare7. Därför, det finns ett behov av nya mediciner för att minska mensvärk. Eftersom över kontraktilitet av livmodern bidrar till patogenesen av dysmenorré, en möjlig strategi kan vara användningen av uterin relaxantia.
Det är fördelaktigt att kvantifiera effekterna av potentiella relaxerande läkemedel i en modell av naturligt förekommande spontana kan vågliknande sammandragningar. Hittills har dock ingen effektiv ex vivo-metod för att testa muskelavslappnande läkemedel i intakt livmoder beskrivits. För närvarande, isometrisk spänning mätningar används för att utvärdera relaxerande läkemedels effekter. Under sådana mätningar, en livmoder muskel remsor bibehålls vid en konstant längd under förspänning i ett vävnads bad medan kraften i livmodern muskelsammandragningar registreras före och efter oxytocin stimulering i närvaro eller frånvaro av en relaxerande läkemedel. Även om detta tillvägagångssätt är mycket användbart, det kräver dyr utrustning. Dessutom, isometrisk sammandragningar inte liknar den spontana kan vågliknande sammandragningar som naturligt förekommer i intakt livmoder. Unikt, livmoder kan vågor i gnagare kan visualiseras som livmoder horn motilitet när hela reproduktionsorganen (äggstockar, ovikanaler, livmoder, och vagina) upprätthålls i en buffertlösning. Här presenterar vi en ex vivo-metod för att övervaka den spontana motiliteten hos den intakt mus livmodern placerad i en petriskål som innehåller syrad Krebs buffert. Vi beskriver också en motilitetskvantifieringsalgoritm som utnyttjar MATLAB motion tracker. Denna nya metod ger ett enkelt och billigare alternativ för att testa den relaxerande potentialen hos naturligt förekommande rättsmedel och syntetiska föreningar.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:671px;" width="670">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:208px;">Epinephrine hydrochloride</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">&#160;E4642&#160;</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:208px;">Dulbecco&#39;s PBS</td>
			<td style="width:161px;">Fisher Sceintific&#160;</td>
			<td style="width:75px;">17-512Q</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:208px;">Ethanol 200 PROOF</td>
			<td style="width:161px;">Decon Laboratories</td>
			<td style="width:75px;">2701</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:208px;">NaCl</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">S7653</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:208px;">Glucose</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">G7528</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:208px;">KCl</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">P9333</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:208px;">CaCl2 &#183; 2H2O</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">C5080</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:208px;">NaH2PO4</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">S0751</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:208px;">MgCl2&#160; &#183; 6H2O</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">M9272</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:208px;">NaHCO3</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">S6297</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:208px;">Isoflurane, USP</td>
			<td style="width:161px;">Patterson Veterinary</td>
			<td style="width:75px;">07-893-2374</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:208px;">Dissecting Extra-Fine-Pointed Precision Splinter Forceps</td>
			<td style="width:161px;">Fisher Sceintific</td>
			<td style="width:75px;">13-812-42</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:208px;">Curved Hardened Fine Iris Scissors</td>
			<td style="width:161px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:75px;">14091-09</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="49">
			<td height="49" style="height:49px;width:208px;">Dissection High-performance Modular Stereomicroscope</td>
			<td style="width:161px;">Leica</td>
			<td style="width:75px;">MZ6&#160;</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:208px;">Digital 5 Megapixel Color Microscope Camera with active cooling system</td>
			<td style="width:161px;">Leica</td>
			<td style="width:75px;">&#160;DFC425 C</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:208px;">Stereomaster Microscope Fiber-Optic Light Sources</td>
			<td style="width:161px;">Fisher Sceintific&#160;</td>
			<td style="width:75px;">12-562-21</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:208px;">Weigh Boat</td>
			<td style="width:161px;">Fisher Sceintific&#160;</td>
			<td style="width:75px;">WB30304</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:208px;">Convertors Astound Standard Surgical Gown&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Cardinal Health&#160;</td>
			<td style="width:75px;">9515</td>
			<td style="width:227px;">Small, Medium or Large</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:208px;">Gloves</td>
			<td style="width:161px;">McKesson Corporation</td>
			<td style="width:75px;">20-1080</td>
			<td style="width:227px;">Small, Medium, or Large; powder-free sterile latex or nitrile surgical gloves</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#160;Petri Dish</td>
			<td style="width:161px;">Corning Falcon</td>
			<td>351029</td>
			<td style="width:227px;">100 mm</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;">&#160;Petri Dish</td>
			<td style="width:161px;">Corning Falcon</td>
			<td style="width:75px;">353001</td>
			<td style="width:227px;">35 mm</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">95% O2- 5% CO2 gas mixture</td>
			<td>Praxair</td>
			<td style="width:75px;">&#160;MM OXCD5-K</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Ear-loop Masks</td>
			<td>Valumax International</td>
			<td style="width:75px;">5430E-PP</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">DSLR 24.2 MP Camera</td>
			<td>Canon</td>
			<td style="width:75px;">EOS Rebel T6i</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:208px;">MATLAB</td>
			<td style="width:161px;">MathWorks</td>
			<td style="width:75px;">N/A</td>
			<td style="width:227px;">version 2019 or later</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo method for assessing the mouse reproductive tract spontaneous motility and a matlab-based uterus motion tracking algorithm for data analysis

Dysmenorré, eller smärtsam kramper, är det vanligaste symtomet i samband med menstruationer hos kvinnor och dess svårighetsgrad kan hindra kvinnors vardag. Här presenterar vi en enkel och billig metod som skulle vara avgörande för att testa nya läkemedel minskar uterin kontraktilitet. Denna metod utnyttjar den unika förmågan hos hela mus reproduktionsorganen att uppvisa spontan motilitet när den underhålls ex vivo i en petriskål som innehåller syrad Krebs buffert. Denna spontana motilitet liknar den vågliknande kan aktiviteten i den mänskliga livmodern, kallad endometrievågor. För att demonstrera effektiviteten av metoden, vi använde en välkänd livmoder relaxerande läkemedel, epinefrin. Vi visar att den spontana motilitet av hela mus reproduktionsorganen kan snabbt och reversibelt hämmas av 1 μM adrenalin i denna petriskål modell. Dokumentera förändringarna i livmodern motilitet kan lätt göras med hjälp av en vanlig smart telefon eller en sofistikerad digitalkamera. Vi utvecklade en MATLAB-baserad algoritm som möjliggör rörelsespårning för att kvantifiera spontan livmoder motilitetsförändringar genom att mäta graden av livmoder Horns rörelser. En stor fördel med denna ex vivo tillvägagångssätt är att reproduktionsorganen förblir intakt under hela experimentet, bevara alla inneboende intrauterin cellulära interaktioner. Den största begränsningen av detta tillvägagångssätt är att upp till 10-20% av uteri kan uppvisa någon spontan motilitet. Hittills är detta den första kvantitativa ex vivo metoden för att bedöma spontan livmoder motilitet i en petriskål modell.

Bild 1 visar representativa bilder tagna under hela reproduktionsorgan isolerings proceduren som beskrivs i detta protokoll. För att undvika kontaminering av bufferten med päls, vilket skulle minska videokvaliteten, fuktade vi mus kroppen med 70% etanol. Det viktigaste riktmärket för dissekeringsdelen av protokollet är att hitta urinblåsan. Livmodern och slidan kommer att lokaliseras sämre än urinblåsan.
För att testa protokollet, behandlade vi hela repr...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis at JoVE.c

Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis

Uteruskontraktioner är viktiga för välbefinnande hos kvinnor. Emellertid, patologiskt ökad kontraktilitet kan resultera i dysmenorré, särskilt hos yngre kvinnor. Här beskriver vi en enkel ex vivo beredning möjliggör snabb bedömning av effekten av glatt muskelavslappnande medel som kan användas för behandling av dysmenorré.

Ex vivo metod för att bedöma mus reproduktionsorganen spontan motilitet och en MATLAB-baserade livmodern motion tracking algoritm för data analys

Dysmenorrhea, or painful cramping, is the most common symptom associated with menses in females and its severity can hinder women&#39;s everyday lives. ...

Vårt protokoll är betydande eftersom det ger den första kvantitativa ex vivo-metoden för att bedöma den spontana motiliteten hos en intakt livmoder. Denna nya metod ger ett enkelt och billigare alternativ för att testa den relaxant potential naturligt förekommande rättsmedel i syntetiska föreningar. En stor fördel med denna teknik är att alla intra-uterine cellulära interaktioner förblir intakt under hela experimentet.Över kontraktilitet i livmodern är associerad med dysmenorré, för vilka livmoderns relaxanter kan vara användbara för behandling. Denna metod ger ett enkelt sätt att testa nya relaxanter. Efter att ha bekräftat estrous cykelstadiet, placera musen i ryggläge, och sprida extremiteterna för att exponera buken bäckenregionen.Blöt buken med 70%etanol, och använd tens för att försiktigt lyfta huden överlägsen klitoris. Göra små tvärgående snitt på de laterala aspekterna av nedre buken området upp till de övre extremiteterna att exponera bukhinnan. Skär försiktigt genom bukhinnan för att exponera mag-tarmkanalen utan att skada livmoderhornen, och använd tåten för att avlägsna fascian och fettvävnaden som täcker mag-tarmkanalen.Ta bort tolvfingertarmen, jejunum, ileum, upphörande, och den stigande och tvärgående kolon. Lokalisera urinblåsan för att lokalisera slidan som finns direkt under urinblåsan. Lokalisera blygd symphysis vid sammanflödet av blygd ben, caudal till urinblåsan, och använda sax för att noggrant göra ett snitt på de laterala sidorna av blygd symphysis genom interpubic fibrocartilaginous vävnad för att få tillgång och att ge en väg för vaginal extraktion.Skär genom perineum ligger mellan anus och nedre delen av vulva, och använda tänjningar för att lyfta slidan för att möjliggöra en långsam excision av ändtarmen. Identifiera de två livmoderhorn som bifurcate i en gaffel rostrally till slidan och lokalisera en invecklad oviduct och äggstock i slutet av varje horn. Korrekt identifiera livmoderhornen är avgörande för förfarandet för att säkerställa att vävnaderna inte är skadade.Använd små dissekera sax för att ta bort eventuella ligament som ansluter till och stödja horn, ägggångarna och äggstockarna inom bukhålan, och ta bort vagina, livmoder, äggstockar och äggstockar. Överför hela isolerade reproduktions-tarmkanalen i en 100 millimeter Petri-skålen som innehåller 10 milliliter av Dulbeccos PBS. Använd tåtor och kirurgisk sax för att ta bort eventuella bindväv och fettvävnad som omger livmoderhorn och vagina samt någon päls i blygdregionen som skulle kunna hindra bildkvaliteten.Ta bort det breda ligamentet för att tillåta motilitet hos livmoderhornen och tvätta vävnaden två gånger med färska Dulbeccos PBS per tvätt innan du överför det isolerade reproduktionsstället till en 35 millimeters Petriskål som innehåller tre milliliter syresatt Krebs-lösning. För spontan motilitetsavbildning, placera Petri-skålen på en svart yta vid rumstemperatur, och låt 15 till 30 minuter för spontana sammandragningar att börja. När rörelse kan observeras, spela in den spontana livmoderns motilitet i 10 minuter från ett axiellt plan med hjälp av någon typ av digital videoutrustning.Därefter överför beredningen till en Petri-rätt som innehåller syresatt Krebs buffert kompletterad med testföreningen och antent den spontana livmodermotiliteten i ytterligare 10 minuter på samma sätt. I slutet av inspelningsperioden, tvätta hela reproduktionskanalen i 10 milliliter av Dulbeccos PBS i en 100 millimeter Petriskål, och överföra provet till en ny Petriskål av nysatt Krebs buffert för att bedöma reversibiliteten av behandlingen. Spela in den spontana livmodermotiliteten i ca 10 minuter på samma sätt, som för de två sista inspelningarna.Överför sedan preparatet till en annan 35 millimeter Petriskål fylld med syresatt Krebs buffert kompletterad med fordonet för testföreningen för att säkerställa att det inte finns några mekaniskt inducerade förändringar i den spontana livmodermotiteten. Den reproduktiva tarmkanalen beredning uppvisade hög motilitet i panelerna A och C i avsaknad av adrenalin. Men denna fenotyp är vilande i panel B med förekomsten av en mikro muller adrenalin.Här visas en provdataanalys av epinefrinad administrering och spontan motilitetsåterhämtning, som illustrerar hur hormonets effekter på den spontana motiliteten i reproduktionskanalen kan kvantifieras från de inspelningar av vävnaden som tagits före, under och efter testföreningsbehandling. Det är viktigt att undvika att komprimera eller översträcka livmoderhornen annars kommer ingen spontan kontraktilitet att observeras. Vår metod kan också användas för testning av föreningar som kan öka livsligheten i livmodern.Detta förfarande kan tillämpas på gravida mus uteri i de tidigare stadierna av graviditeten. Detta experiment har potential att uppgraderas till en sex väl plattan format för genomströmning drog screening.

Research

JoVE Journal

Biology

Assessing Neural Stem Cell Motility Using an Agarose Gel-based Microfluidic Device

Bedöma Neurala Motility Stem Cell Använda en agarosgel-baserade mikroflödessystem enhet

While microfluidic technology is reaching a new level of maturity for macromolecular assays, cell-based assays are still at an infant stage1. This is ...

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

Metod för kultur av tidig kycklingembryon ex vivo (New Kultur)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

In utero och ex vivo elektroporation för genuttryck i Mus Retinal ganglion celler

The retina and its sole output neuron, the retinal ganglion cell (RGC), comprise an excellent model in which to examine biological questions such as cell ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

Ett system för<em&gt; Ex vivo</em&gt; Odling av embryonala Pancreas

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

A Novel Bayesian Change-point Algorithm for Genome-wide Analysis of Diverse ChIPseq Data Types

A Novel Bayesian Change-punkt Algoritm för Genomvid analys av olika ChIPseq datatyper

ChIPseq is a widely used technique for investigating protein-DNA interactions. Read density profiles are generated by using next-sequencing of ...

Ex vivo Method for High Resolution Imaging of Cilia Motility in Rodent Airway Epithelia

Ex vivo Method for High Resolution Imaging of Cilia Motility in Rodent Airway Epithelia

Ex vivo-metod för högupplöst avbildning av Cilia Motility i Rodent luftvägsepitel

An ex vivo technique for imaging mouse airway epithelia for quantitative  analysis of motile cilia function important for insight into mucociliary  ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel<em&gt; Ex vivo</em&gt; Kultur Metod för embryonala Mouse Heart

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In vivo mikroinjektion och elektroporation av Mus Testikel

This video and article contribution gives a comprehensive description of microinjection and electroporation of mouse testis in vivo. This particular ...

Spatiotemporal Mapping of Motility in Ex Vivo Preparations of the Intestines

Spatiotemporal Mapping of Motility in Ex Vivo Preparations of the Intestines

Spatiotemporal Kartläggning av motilitet i<em&gt; Ex vivo</em&gt; Förberedelser tarm

Multiple approaches have been used to record and evaluate gastrointestinal motility including: recording changes in muscle tension, intraluminal pressure, ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Mätning av styvheten hos<em&gt; Ex vivo</em&gt; Mus Aorta Använda atomkraftsmikroskopi

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...