Name: ex vivo method for assessing the mouse reproductive tract spontaneous motility and a matlab-based uterus motion tracking algorithm for data analysis
Uploaded: 2019-09-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis at JoVE.c

Bu çalışma iç IU fonları tarafından desteklenmiştir. AGO çalışma gebe. XC ve AGO açıklanan deneylerin tasarımında yer aldı.  FL ve AGO verileri analiz etti ve yorumladı. KLL, JOB, FL tüm ex vivo deneylerini gerçekleştirdi. FL MATLAB komut dosyası yazdı. KLL, Eyüp ve AGO el yazması yazdı.  Tüm yazarlar makalenin son halini okudu ve onayladı.

Hayvanlarla ilgili tüm prosedürler Indiana Üniversitesi Tıp Fakültesi'ndeki (Indianapolis, IN) Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır. Çalışmada 2-5 aylık F2-129S-C57BL/6 cinsel olgun kadın fareler kullanıldı.
DİkKAT: Hayvanlar ve biyolojik tehlikeli maddelerle çalışırken laboratuvar önlüğü, maske ve eldiven giyerek güvenliği sağlayın.
1. Çözüm Hazırlama
<ol><li>130 mM NaCl, 5 mM KCl,...

<ol>
	<li>Kuijsters, N. P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uterine+peristalsis+and+fertility:+current+knowledge+and+future+perspectives:+a+review+and+meta-analysis.">Uterine peristalsis and fertility: current knowledge and future perspectives: a review and meta-analysis.</a> Reproductive BioMedicine Online. 35 (1), 50-71 (2017).</li><li>Kural, M., Noor, N. N., Pandit, D., Joshi, T., Patil, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Menstrual+characteristics+and+prevalence+of+dysmenorrhea+in+college+going+girls.">Menstrual characteristics and prevalence of dysmenorrhea in college going girls.</a> Journal of Family Medicine and Primary Care. 4 (3), 426-431 (2015).</li><li>Dehnavi, Z. M., Jafarnejad, F., Kamali, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effect+of+aerobic+exercise+on+primary+dysmenorrhea:+A+clinical+trial+study.">The Effect of aerobic exercise on primary dysmenorrhea: A clinical trial study.</a> Journal of education and health promotion. 7, 3 (2018).</li><li>Lindner, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significance+of+prostaglandins+in+the+regulation+of+cyclic+events+in+the+ovary+and+uterus.">Significance of prostaglandins in the regulation of cyclic events in the ovary and uterus.</a> Advances in prostaglandin and thromboxane research. 8, 1371-1390 (1980).</li><li>Bernardi, M., Lazzeri, L., Perelli, F., Reis, F. M., Petraglia, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysmenorrhea+and+related+disorders.">Dysmenorrhea and related disorders.</a> F1000 research. 6, 1645 (2017).</li><li>Marjoribanks, J., Ayeleke, R. O., Farquhar, C., Proctor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonsteroidal+anti-inflammatory+drugs+for+dysmenorrhoea.">Nonsteroidal anti-inflammatory drugs for dysmenorrhoea.</a> The Cochrane database of systematic reviews. 7, 001751 (2015).</li><li>Oladosu, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abdominal+skeletal+muscle+activity+precedes+spontaneous+menstrual+cramping+pain+in+primary+dysmenorrhea.">Abdominal skeletal muscle activity precedes spontaneous menstrual cramping pain in primary dysmenorrhea.</a> American journal of obstetrics and gynecology. 219 (1), 91 (2018).</li><li>Lawson, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occupational+exposures+among+nurses+and+risk+of+spontaneous+abortion.">Occupational exposures among nurses and risk of spontaneous abortion.</a> American journal of obstetrics and gynecology. 206 (4), 327-328 (2012).</li><li>Mazze, R. I., Wilson, A. I., Rice, S. A., Baden, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fetal+development+in+mice+exposed+to+isoflurane.">Fetal development in mice exposed to isoflurane.</a> Teratology. 32 (3), 339-345 (1985).</li><li>Byers, S. L., Wiles, M. V., Dunn, S. L., Taft, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+estrous+cycle+identification+tool+and+images.">Mouse estrous cycle identification tool and images.</a> PLoS One. 7 (4), 35538 (2012).</li><li>Caligioni, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+reproductive+status/stages+in+mice.">Assessing reproductive status/stages in mice.</a> Current protocols in neuroscience. , (2009).</li><li>Segal, S., Csavoy, A. N., Datta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tocolytic+effect+of+catecholamines+in+the+gravid+rat+uterus.">The tocolytic effect of catecholamines in the gravid rat uterus.</a> Anesthesia and analgesia. 87 (4), 864-869 (1998).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenylephrine,+a+common+cold+remedy+active+ingredient,+suppresses+uterine+contractions+through+cAMP+signalling.">Phenylephrine, a common cold remedy active ingredient, suppresses uterine contractions through cAMP signalling.</a> Scientific reports. 8 (1), 11666 (2018).</li><li>Domino, M., Pawlinski, B., Gajewski, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomathematical+pattern+of+EMG+signal+propagation+in+smooth+muscle+of+the+non-pregnant+porcine+uterus.">Biomathematical pattern of EMG signal propagation in smooth muscle of the non-pregnant porcine uterus.</a> PLoS One. 12 (3), 0173452 (2017).</li><li>Crane, L. H., Martin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pace-maker+activity+in+the+myometrium+of+the+oestrous+rat:+in+vivo+studies+using+video-laparoscopy.">Pace-maker activity in the myometrium of the oestrous rat: in vivo studies using video-laparoscopy.</a> Reproduction, fertility, and development. 3 (5), 519-527 (1991).</li></ol>

Burada, yumurtalıklar, oviducts, rahim boynuzları ve vajina içeren tüm kemirgen üreme sistemi, spontan kontraktür değerlendirmek için bir yöntem açıklanmıştır. Biz spontan rahim motilitesi üzerinde fenilefrin rahatlatıcı etkisini göstermek için benzer bir yöntem kullanılan13, Ancak, geçmişte biz verilerin kantitatif analizi sağlamak mümkün değildi. Bu çalışmada, MATLAB hareket izleme modüllerini kullanarak nicel hareketlilik veri analizi için bir algoritma geliştir...

Önemli bir kadın organı olarak, rahim üreme için çok önemlidir vefetusun beslenmesi için gerekli 1. Rahim üç tabakadan oluşur: perimetrium, miyometrium ve endometrium. Miyometrium rahimin en önemli kontraktil tabakasıdır ve fetusun doğumda önemli bir rol oynar. Endometrium rahim boşluğunu kaplayan en içteki tabakadır ve embriyo implantasyonu için gereklidir. Üreme çağındaki gebe olmayan kadınlarda, endometrial tabaka adet döngüsünün başlangıcında aylık olarak dökülür. Nekrotik endometriyal dokuyu rahimden temizlemek için gerekli spontan miyomtriyal kasılmaları koruyarak bu dökülme sürecinde miyometrium yardımcı olur1.
Ne yazık ki, artan miyomtriyal kontrility gibi olumsuz yan etkilere neden olabilir, veya ağrılı adet krampları. Bu özellikle genç kadınlarda ve nulliparous kadınlarda görülür2. Ancak, dismenore her kadın için farklıdır ve miyomtriyal kasılmaları gücüne bağlıdır; güçlü kasılmalar genellikle şiddetli kramp hissi ile ilişkilidir3. Miyomtriyal kontrility rahim ultrasonu ile görselleştirilebilir ve genellikle endometrial dalgalar olarak kabul edilir. Endometriyal sloughing geçiren bir rahim4 adet sırasında prostaglandinlerin geliştirilmiş salınımı artmış miyomtriyal hiperkontilite katkıda, rahim kası iskemi ve hipoksi ile sonuçlanan ve böylece artmış ağrı3.
Şiddetli dismenore bazı kadınların günlük aktivite engelleyebilir ve kadınların% 3-33 çok şiddetli ağrı var, hangi bir kadın için yatalak neden olabilir 1 için 3 gün her adet döngüsü5. Dismenore ne olursa olsun yaş, milliyet ve ekonomik durumu5üreme çağındaki kadınlarda jinekolojik morbidite önde gelen nedenidir. Dismenore tahmini yaygınlığı hem yüksek hem de değişkendir, üreme çağındaki kadınlarda %45 ile %93 arasında değişmektedir5.  Dismenore ilişkili ağrı kadınların günlük yaşam üzerinde bir etkisi vardır ve ergenlerde kötü akademik performans neden olabilir, uyku düşük kalite, günlük aktivite kısıtlaması, ve duygudurum değişiklikleri5.
Şiddetli dismenore deneyimi birçok kadın ağrılarını hafifletmek için over-the-counter ilaçlar başvurmak. Bu tür over-the-counter ilaçlar siklooksijenaz içeren (COX) prostaglandins oluşumunu önlemek inhibitörleri6. Ancak, COX inhibitörleri olumsuz kardiyovasküler olaylar ile ilişkilidir, ve dismenore olan kadınların yaklaşık% 18 bu inhibitörleri yanıt vermiyor7. Bu nedenle, adet krampları azaltmak için yeni ilaçlar için bir ihtiyaç vardır. Rahim kontrility üzerinde dismenore patogenezi katkıda olduğundan, olası bir strateji rahim gevşetici kullanımı olabilir.
Bu doğal olarak meydana gelen spontan miyomtriyal dalga benzeri kasılmalar bir model potansiyel gevşetici ilaçların etkilerini ölçmek için yararlıdır. Ancak, şimdiye kadar, bozulmamış rahim kas rahatlatıcı ilaçlar test etmek için hiçbir etkili ex vivo yöntemi tarif edilmiştir. Şu anda, isometrik gerilim ölçümleri gevşetici ilaç etkilerini değerlendirmek için kullanılır. Bu ölçümler sırasında, rahim kas şeridi bir doku banyosunda ön yük altında sabit bir uzunlukta tutulurken, rahim kas kasılmaları kuvveti gevşetici bir ilacın varlığında veya yokluğunda oksitosin stimülasyonundan önce ve sonra kaydedilir. Bu yaklaşım çok yararlı olmasına rağmen, pahalı ekipman gerektirir. Ayrıca, isometrik kasılmalar doğal olarak bozulmamış rahim meydana spontan miyomtriyal dalga benzeri kasılmalar benzemez. Benzersiz, kemirgenler rahim miyomtrial dalgalar tüm üreme yolu (yumurtalıklar, yumurtalıklar, rahim ve vajina) bir tampon çözeltisi muhafaza edildiğinde rahim boynuzu hareketliliği olarak görselleştirilmiş olabilir. Burada, oksijenli Krebs tamponiçeren bir Petri kabına yerleştirilen sağlam fare rahminin spontan hareketliliğini izlemek için bir ex vivo yöntemi salıyoruz. Ayrıca MATLAB hareket izleyicisini kullanan bir hareketlilik nicelik algoritması tanımlıyoruz. Bu yeni yaklaşım doğal ilaçlar ve sentetik bileşiklerin rahatlatıcı potansiyelini test etmek için kolay ve daha az pahalı bir alternatif sağlar.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:671px;" width="670">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:208px;">Epinephrine hydrochloride</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">&#160;E4642&#160;</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:208px;">Dulbecco&#39;s PBS</td>
			<td style="width:161px;">Fisher Sceintific&#160;</td>
			<td style="width:75px;">17-512Q</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:208px;">Ethanol 200 PROOF</td>
			<td style="width:161px;">Decon Laboratories</td>
			<td style="width:75px;">2701</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:208px;">NaCl</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">S7653</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:208px;">Glucose</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">G7528</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:208px;">KCl</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">P9333</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:208px;">CaCl2 &#183; 2H2O</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">C5080</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:208px;">NaH2PO4</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">S0751</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:208px;">MgCl2&#160; &#183; 6H2O</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">M9272</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:208px;">NaHCO3</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:75px;">S6297</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:208px;">Isoflurane, USP</td>
			<td style="width:161px;">Patterson Veterinary</td>
			<td style="width:75px;">07-893-2374</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:208px;">Dissecting Extra-Fine-Pointed Precision Splinter Forceps</td>
			<td style="width:161px;">Fisher Sceintific</td>
			<td style="width:75px;">13-812-42</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:208px;">Curved Hardened Fine Iris Scissors</td>
			<td style="width:161px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:75px;">14091-09</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="49">
			<td height="49" style="height:49px;width:208px;">Dissection High-performance Modular Stereomicroscope</td>
			<td style="width:161px;">Leica</td>
			<td style="width:75px;">MZ6&#160;</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:208px;">Digital 5 Megapixel Color Microscope Camera with active cooling system</td>
			<td style="width:161px;">Leica</td>
			<td style="width:75px;">&#160;DFC425 C</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:208px;">Stereomaster Microscope Fiber-Optic Light Sources</td>
			<td style="width:161px;">Fisher Sceintific&#160;</td>
			<td style="width:75px;">12-562-21</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:208px;">Weigh Boat</td>
			<td style="width:161px;">Fisher Sceintific&#160;</td>
			<td style="width:75px;">WB30304</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:208px;">Convertors Astound Standard Surgical Gown&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Cardinal Health&#160;</td>
			<td style="width:75px;">9515</td>
			<td style="width:227px;">Small, Medium or Large</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:208px;">Gloves</td>
			<td style="width:161px;">McKesson Corporation</td>
			<td style="width:75px;">20-1080</td>
			<td style="width:227px;">Small, Medium, or Large; powder-free sterile latex or nitrile surgical gloves</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#160;Petri Dish</td>
			<td style="width:161px;">Corning Falcon</td>
			<td>351029</td>
			<td style="width:227px;">100 mm</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;">&#160;Petri Dish</td>
			<td style="width:161px;">Corning Falcon</td>
			<td style="width:75px;">353001</td>
			<td style="width:227px;">35 mm</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">95% O2- 5% CO2 gas mixture</td>
			<td>Praxair</td>
			<td style="width:75px;">&#160;MM OXCD5-K</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Ear-loop Masks</td>
			<td>Valumax International</td>
			<td style="width:75px;">5430E-PP</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">DSLR 24.2 MP Camera</td>
			<td>Canon</td>
			<td style="width:75px;">EOS Rebel T6i</td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:208px;">MATLAB</td>
			<td style="width:161px;">MathWorks</td>
			<td style="width:75px;">N/A</td>
			<td style="width:227px;">version 2019 or later</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo method for assessing the mouse reproductive tract spontaneous motility and a matlab-based uterus motion tracking algorithm for data analysis

Dismenore, ya da ağrılı kramp, kadınlarda adet ile ilişkili en yaygın belirti ve şiddeti kadınların günlük yaşamlarını engelleyebilir. Burada, rahim kontraktilliğini azaltan yeni ilaçların test edilmesinde etkili olacak kolay ve ucuz bir yöntem salıyoruz. Bu yöntem, oksijenli Krebs tampon içeren bir Petri kabında ex vivo muhafaza zaman spontan hareketlilik sergilemek için tüm fare üreme yolu benzersiz yeteneğini kullanır. Bu spontan hareketlilik insan rahminin endometrial dalgalar olarak adlandırılan dalga benzeri miyomsal aktivitesine benzer. Yöntemin etkinliğini göstermek için, biz iyi bilinen bir rahim gevşetici ilaç istihdam, epinefrin. Bu Petri çanak modelinde fare üreme yollarının tamamının spontan hareketliliğinin 1 μM epinefrin tarafından hızlı ve geri döndürülebilir. Rahim motilitesi değişiklikleri belgeleme kolayca sıradan bir akıllı telefon veya sofistike bir dijital kamera kullanılarak yapılabilir. Rahim boynuzu hareketlerinin hızını ölçerek spontan rahim hareketliliği değişikliklerini ölçmek için hareket izlemesağlayan MATLAB tabanlı bir algoritma geliştirdik. Bu ex vivo yaklaşımın önemli bir avantajı, üreme yolu tüm deney boyunca bozulmadan kalır, tüm içsel intrauterin hücresel etkileşimleri koruyarak. Bu yaklaşımın en önemli sınırlaması, uterusun %10-20'sine kadar spontan hareketlilik gösteremeyebileceğidir. Şimdiye kadar, bu petri çanak modelinde spontan rahim motilitesini değerlendirmek için ilk kantitatif ex vivo yöntemidir.

Şekil 1, bu protokolde açıklanan tüm üreme yolu izolasyon prosedürü sırasında çekilen temsili görüntüleri gösterir. Tamponu kürkle kirletmemek için, video kalitesini düşürecek, fare gövdesini %70 etanol ile nemlendirdik. Protokolün diseksiyon bölümü için en önemli kriter idrar kesesini bulmaktır. Rahim ve vajina idrar kesesi alt yer olacaktır.
Protokolü test etmek için tüm üreme bölgesini epinefrinle tedavi ettik. Epinefrin iyi rah...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis at JoVE.c

Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis

Rahim kasılmaları dişilerin refahı için önemlidir. Ancak, patolojik olarak artan kontraktilite dismenore neden olabilir, özellikle genç kadınlarda. Burada, dismenore tedavisinde kullanılabilecek düz kas gevşeticilerin etkinliğinin hızlı bir şekilde değerlendirilmesini sağlayan basit bir ex vivo hazırlık tarif ediyoruz.

Fare Üreme Yolu Spontan Hareketliliği Değerlendirmek için Ex Vivo Yöntemi ve Veri Analizi için MATLAB tabanlı Rahim Hareket Takip Algoritması

Dysmenorrhea, or painful cramping, is the most common symptom associated with menses in females and its severity can hinder women&#39;s everyday lives. ...

Protokolümüz önemli, çünkü bozulmamış bir rahmin spontan hareketliliğini değerlendirmek için ilk kantitatif ex vivo yöntemini sağlar. Bu yeni yaklaşım sentetik bileşikler doğal olarak meydana gelen ilaçların gevşetici potansiyelini test etmek için kolay ve daha az pahalı bir alternatif sağlar. Bu tekniğin en büyük avantajı, tüm rahim içi hücresel etkileşimlerin deney boyunca bozulmadan kalmasıdır.Rahim kontrility üzerinde dismenore ile ilişkilidir, hangi rahim gevşetici tedavi için yararlı olabilir. Bu yöntem yeni gevşetici test etmek için kolay bir yol sağlar. Estrous döngüsü aşamasında doğruladıktan sonra, supine pozisyonda fare yerleştirin, ve karın pelvik bölge ortaya çıkarmak için ekstremiteleri yayıldı.% 70 etanol ile karın ıslak, ve dikkatle klitoris üstün cilt kaldırmak için forseps kullanın. Periton ortaya çıkarmak için üst ekstremitelere kadar alt karın bölgesinin lateral yönleri üzerinde küçük enine kesiler olun. Dikkatle rahim boynuzları zarar vermeden gastrointestinal sistem ortaya çıkarmak için periton ile kesilmiş, ve fasya kaldırmak için forceps kullanın ve gastrointestinal sistemi kapsayan yağ dokusu.Duodenum çıkarın, jejunum, ileum, çekum, ve artan ve enine kolon. Doğrudan idrar kesesi altında bulunan vajina bulmak için idrar kesesi bulun. Kasık kemikleri birleştiğinde kasık symphysis bulun, mesane kaudal, ve dikkatle giridem fibrocartilaginous doku ile kasık symphysis lateral taraflarında bir kesi yapmak için makas kullanın erişim ve vajinal ekstraksiyon için bir yol sağlamak için.Anüs ve vulva alt kısmı arasında bulunan perine ile kesin ve rektum yavaş bir eksizyon sağlamak için vajina kaldırmak için forseps kullanın. Vajinaya bir çatal rostrally içine çatal ve her boynuz sonunda bir kıvrık oviduct ve yumurtalık bulmak iki rahim boynuzları tanımlayın. Rahim boynuzlarının doğru bir şekilde tanımlanması, dokuların zarar görmemesini sağlamak için prosedür açısından çok önemlidir.Karın boşluğuiçinde boynuzları, oviducts ve yumurtalıklar bağlamak ve desteklemek ve vajina, rahim, oviducts ve yumurtalıklar kaldırmak için küçük diseksiyon makas kullanın. Tüm izole üreme yollarını 10 milimetrelik Bir Petri kabına aktarın 10 Mililitre Dulbecco'nun PBS'si. Tervenat boynuzları ve vajina çevreleyen herhangi bir bağ ve yağ dokusu yanı sıra görüntü kalitesini engelleyebilir kasık bölgesinde herhangi bir kürk kaldırmak için forceps ve cerrahi makas kullanın.Rahim boynuzlarının hareketliliğini sağlamak için geniş ligamenti çıkarın ve izole üreme yi, üç mililitre oksijenli Krebs çözeltisi içeren 35 milimetrelik Petri kabına aktarmadan önce, dokuyu yıkama başına taze Dulbecco'nun PBS'i ile iki kez yıkayın. Spontan hareketlilik görüntüleme için Petri kabını oda sıcaklığında siyah bir yüzeye yerleştirin ve spontan kasılmalar için 15 ila 30 dakika bekleyin. Hareket gözlemlenebildiği zaman, her türlü dijital video ekipmanı kullanarak eksenel bir uçaktan 10 dakika boyunca spontan rahim motilitesini kaydedin.Daha sonra, test bileşiği ile takviye oksijenli Krebs tampon içeren bir Petri kabına hazırlık aktarın ve aynı şekilde ek bir 10 dakika için spontan rahim motilitesi kaydedin. Kayıt döneminin sonunda, 100 milimetrelik Petri kabında Dulbecco'nun PBS'sinin 10 mililitresinde tüm üreme yöntemini yıkayın ve tedavinin geri döndürülebilirliğini değerlendirmek için numuneyi taze oksijenli Krebs tamponundan oluşan yeni bir Petri kabına aktarın. Son iki kayıtta olduğu gibi, spontan rahim motilitesini yaklaşık 10 dakika boyunca aynı şekilde kaydedin.Daha sonra spontan rahim motilitesinde mekanik olarak indüklenen değişiklikler olmadığından emin olmak için test bileşiği için araçla desteklenen oksijenli Krebs tamponu yla dolu 35 milimetrelik başka bir Petri kabına aktarın. Üreme sistemi hazırlığı epinefrin yokluğunda A ve C panellerinde yüksek hareketlilik sergiledi. Ama bu fenotip bir mikro muller epinefrin varlığı ile panel B atıl olduğunu.Burada, epinefrin uygulaması ve spontan hareketlilik kurtarma örnek veri analizi gösterilmiştir, üreme sistemi spontan hareketlilik üzerinde hormon etkileri nasıl test bileşik tedavi öncesi alınan doku kayıtlarından ölçülebilir gösteren, ve test bileşik tedavi den sonra. Rahim boynuzlarının sıkıştırılmasından veya aşırı esnemekten kaçınmak önemlidir, aksi takdirde spontan kontrüzyon gözlenmez. Yöntemimiz aynı zamanda rahmin kasıklığını artırabilecek bileşiklerin test edilmesinde de kullanılabilir.Bu işlem gebeliğin erken evrelerinde gebe fare uterisine uygulanabilir. Bu deney, elde etme uyuşturucu taraması için altı kuyu luk formatına yükseltilme potansiyeline sahiptir.

Research

JoVE Journal

Biology

Assessing Neural Stem Cell Motility Using an Agarose Gel-based Microfluidic Device

Nöral Kök Hücre Motilite değerlendirilmesi Agaroz Jel tabanlı mikroakışkan Cihaz Kullanımı

While microfluidic technology is reaching a new level of maturity for macromolecular assays, cell-based assays are still at an infant stage1. This is ...

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

Erken Civciv Embriyolar ex vivo (Kültür) Kültür Yöntemi

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

Fare Retina Ganglion Hücreleri Gen İfadesi utero ve ex vivo Elektroporasyon

The retina and its sole output neuron, the retinal ganglion cell (RGC), comprise an excellent model in which to examine biological questions such as cell ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

Için bir sistem<em&gt; Ex vivo</emEmbriyonik Pankreas&gt; ekimi

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

A Novel Bayesian Change-point Algorithm for Genome-wide Analysis of Diverse ChIPseq Data Types

Çeşitli ChIPseq Veri Türleri Genom çapında Analizi İçin Yeni Bir Bayesian değiştir nokta Algoritması

ChIPseq is a widely used technique for investigating protein-DNA interactions. Read density profiles are generated by using next-sequencing of ...

Ex vivo Method for High Resolution Imaging of Cilia Motility in Rodent Airway Epithelia

Ex vivo Method for High Resolution Imaging of Cilia Motility in Rodent Airway Epithelia

Kemirgen Havayolu Epiteli içinde Cilia Motilite Yüksek Çözünürlüklü Görüntüleme için ex vivo Yöntemi

An ex vivo technique for imaging mouse airway epithelia for quantitative  analysis of motile cilia function important for insight into mucociliary  ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

Yeni Bir<em&gt; Ex vivo</emEmbriyonik Fare Kalp için&gt; Kültür Yöntemi

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

Fare Testis İn Vivo Mikroenjeksiyon ve Elektroporasyon

This video and article contribution gives a comprehensive description of microinjection and electroporation of mouse testis in vivo. This particular ...

Spatiotemporal Mapping of Motility in Ex Vivo Preparations of the Intestines

Spatiotemporal Mapping of Motility in Ex Vivo Preparations of the Intestines

Hareketliliği zamanmekansal Haritalama içinde<em&gt; Ex Vivo</emBağırsakların&gt; Hazırlıklar

Multiple approaches have been used to record and evaluate gastrointestinal motility including: recording changes in muscle tension, intraluminal pressure, ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

sertliği ölçme<em&gt; Ex Vivo</emAtomik Kuvvet Mikroskobu Kullanma&gt; Fare aorta

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...