Name: formation of human periodontal ligament cell spheroids on chitosan films
Uploaded: 2019-06-19T15:00:00
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यह अध्ययन चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (एनएसएफसी 81700978), केंद्रीय विश्वविद्यालयों के लिए मौलिक अनुसंधान कोष (1504219050), शंघाई के प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (17$R1432800) और शंघाई चिकित्सा अन्वेषण परियोजना ( 17411972600).

अध्ययन प्रोटोकॉल स्कूल और Stomatology के अस्पताल की आचार समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था, टोंगजी विश्वविद्यालय. सभी रोगियों को लिखित सूचित सहमति प्रदान की.
1. PDL सेल अलगाव
<ol><li>पी डीएल कोशिकाओं की सं?...

<ol>
	<li>Albandar, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+risk+factors+of+periodontal+diseases.">Epidemiology and risk factors of periodontal diseases.</a> Dental Clinics of North America. 49 (3), 517-532 (2005).</li><li>Bartold, P. M., McCulloch, C. A., Narayanan, A. S., Pitaru, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+engineering:+a+new+paradigm+for+periodontal+regeneration+based+on+molecular+and+cell+biology.">Tissue engineering: a new paradigm for periodontal regeneration based on molecular and cell biology.</a> Periodontology 2000. 24, 253-269 (2000).</li><li>Chen, F. M., Jin, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Periodontal+tissue+engineering+and+regeneration:+current+approaches+and+expanding+opportunities.">Periodontal tissue engineering and regeneration: current approaches and expanding opportunities.</a> Tissue Engineering Part B Review. 16 (2), 219-255 (2010).</li><li>Yu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+periodontal+tissue+regeneration+by+periodontal+cell+implantation.">Enhanced periodontal tissue regeneration by periodontal cell implantation.</a> Journal of Clinical Periodontology. 40 (7), 698-706 (2013).</li><li>Yan, X. Z., Yang, F., Jansen, J. A., de Vries, R. B., van den Beucken, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-Based+Approaches+in+Periodontal+Regeneration:+A+Systematic+Review+and+Meta-Analysis+of+Periodontal+Defect+Models+in+Animal+Experimental+Work.">Cell-Based Approaches in Periodontal Regeneration: A Systematic Review and Meta-Analysis of Periodontal Defect Models in Animal Experimental Work.</a> Tissue Engineering Part B Review. 21 (5), 411-426 (2015).</li><li>Itaya, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristic+changes+of+periodontal+ligament-derived+cells+during+passage.">Characteristic changes of periodontal ligament-derived cells during passage.</a> Journal of Periodontal Research. 44 (4), 425-433 (2009).</li><li>Zhang, J., Li, B., Wang, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+engineered+tendon+matrix+in+the+stemness+of+tendon+stem+cells+in+vitro+and+the+promotion+of+tendon-like+tissue+formation+in+vivo.">The role of engineered tendon matrix in the stemness of tendon stem cells in vitro and the promotion of tendon-like tissue formation in vivo.</a> Biomaterials. 32 (29), 6972-6981 (2011).</li><li>Elliott, N. T., Yuan, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+three-dimensional+in+vitro+tissue+models+for+drug+discovery+and+transport+studies.">A review of three-dimensional in vitro tissue models for drug discovery and transport studies.</a> Journal of Pharmaceutical Sciences. 100 (1), 59-74 (2011).</li><li>Fennema, E., Rivron, N., Rouwkema, J., van Blitterswijk, C., de Boer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spheroid+culture+as+a+tool+for+creating+3D+complex+tissues.">Spheroid culture as a tool for creating 3D complex tissues.</a> Trends in Biotechnology. 31 (2), 108-115 (2013).</li><li>Cheng, N. C., Wang, S., Young, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+spheroid+formation+of+human+adipose-derived+stem+cells+on+chitosan+films+on+stemness+and+differentiation+capabilities.">The influence of spheroid formation of human adipose-derived stem cells on chitosan films on stemness and differentiation capabilities.</a> Biomaterials. 33 (6), 1748-1758 (2012).</li><li>Yeh, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+repair+with+injectable+cell+sheet+fragments+of+human+amniotic+fluid+stem+cells+in+an+immune-suppressed+rat+model.">Cardiac repair with injectable cell sheet fragments of human amniotic fluid stem cells in an immune-suppressed rat model.</a> Biomaterials. 31 (25), 6444-6453 (2010).</li><li>Kabiri, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+mesenchymal+stem/stromal+cell+osteogenesis+and+autocrine+signalling.">3D mesenchymal stem/stromal cell osteogenesis and autocrine signalling.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 419 (2), 142-147 (2012).</li><li>Lee, J. H., Han, Y. S., Lee, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-Duration+Three-Dimensional+Spheroid+Culture+Promotes+Angiogenic.">Long-Duration Three-Dimensional Spheroid Culture Promotes Angiogenic.</a> Activities of Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells. Biomolecules &amp; therapeutics. 24 (3), 260-267 (2016).</li><li>Yan, X. Z., van den Beucken, J., Yuan, C., Jansen, J. A., Yang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spheroid+formation+and+stemness+preservation+of+human+periodontal+ligament+cells+on+chitosan+films.">Spheroid formation and stemness preservation of human periodontal ligament cells on chitosan films.</a> Oral Diseases. 24 (6), 1083-1092 (2018).</li><li>Meli, L., Jordan, E. T., Clark, D. S., Linhardt, R. J., Dordick, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+a+three-dimensional,+microarray+environment+on+human+Cell+culture+in+drug+screening+systems.">Influence of a three-dimensional, microarray environment on human Cell culture in drug screening systems.</a> Biomaterials. , (2012).</li><li>LaRue, K. E., Khalil, M., Freyer, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microenvironmental+regulation+of+proliferation+in+multicellular+spheroids+is+mediated+through+differential+expression+of+cyclin-dependent+kinase+inhibitors.">Microenvironmental regulation of proliferation in multicellular spheroids is mediated through differential expression of cyclin-dependent kinase inhibitors.</a> Cancer Research. 64 (5), 1621-1631 (2004).</li><li>Tsai, A. C., Liu, Y., Yuan, X., Ma, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compaction,+fusion,+and+functional+activation+of+three-dimensional+human+mesenchymal+stem+cell+aggregate.">Compaction, fusion, and functional activation of three-dimensional human mesenchymal stem cell aggregate.</a> Tissue Engineering Part A. 21 (9-10), 1705-1719 (2015).</li><li>Cesarz, Z., Tamama, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spheroid+Culture+of+Mesenchymal+Stem+Cells.">Spheroid Culture of Mesenchymal Stem Cells.</a> Stem Cells International. 2016, 9176357 (2016).</li><li>Tong, J. Z., Sarrazin, S., Cassio, D., Gauthier, F., Alvarez, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+spheroid+culture+to+human+hepatocytes+and+maintenance+of+their+differentiation.">Application of spheroid culture to human hepatocytes and maintenance of their differentiation.</a> Biology of the Cell. 81 (1), 77-81 (1994).</li><li>Lee, W. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+injectable+spherically+symmetric+cell+aggregates+self-assembled+in+a+thermo-responsive+hydrogel+for+enhanced+cell+transplantation.">The use of injectable spherically symmetric cell aggregates self-assembled in a thermo-responsive hydrogel for enhanced cell transplantation.</a> Biomaterials. 30 (29), 5505-5513 (2009).</li><li>Frith, J. E., Thomson, B., Genever, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+three-dimensional+culture+methods+enhance+mesenchymal+stem+cell+properties+and+increase+therapeutic+potential.">Dynamic three-dimensional culture methods enhance mesenchymal stem cell properties and increase therapeutic potential.</a> Tissue Engineering Part C Methods. 16 (4), 735-749 (2010).</li><li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+spheroid+culture+system+on+micropatterned+substrates+for+improved+differentiation+efficiency+of+multipotent+mesenchymal+stem+cells.">3D spheroid culture system on micropatterned substrates for improved differentiation efficiency of multipotent mesenchymal stem cells.</a> Biomaterials. 30 (14), 2705-2715 (2009).</li><li>Miyagawa, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfabricated+scaffold+induces+the+spheroid+formation+of+human+bone+marrow-derived+mesenchymal+progenitor+cells+and+promotes+efficient+adipogenic+differentiation.">A microfabricated scaffold induces the spheroid formation of human bone marrow-derived mesenchymal progenitor cells and promotes efficient adipogenic differentiation.</a> Tissue Engineering Part A. 17 (3-4), 513-521 (2011).</li><li>Bartosh, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aggregation+of+human+mesenchymal+stromal+cells+(MSCs)+into+3D+spheroids+enhances+their+antiinflammatory+properties.">Aggregation of human mesenchymal stromal cells (MSCs) into 3D spheroids enhances their antiinflammatory properties.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (31), 13724-13729 (2010).</li><li>Baraniak, P. R., McDevitt, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scaffold-free+culture+of+mesenchymal+stem+cell+spheroids+in+suspension+preserves+multilineage+potential.">Scaffold-free culture of mesenchymal stem cell spheroids in suspension preserves multilineage potential.</a> Cell and Tissue Research. 347 (3), 701-711 (2012).</li><li>Rabea, E. I., Badawy, M. E., Stevens, C. V., Smagghe, G., Steurbaut, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chitosan+as+antimicrobial+agent:+applications+and+mode+of+action.">Chitosan as antimicrobial agent: applications and mode of action.</a> Biomacromolecules. 4 (6), 1457-1465 (2003).</li></ol>

वर्तमान अध्ययन एक 3 डी सेल संस्कृति प्रणाली शुरू की पारंपरिक 2 डी monolayer सेल संस्कृति से संबंधित कुछ सीमाओं को दूर करने के लिए. प्रोटोकॉल के अनुसार, PDL सेलुलर गोलोइड सफलतापूर्वक chitosan फिल्मों पर कोशिकाओं culturing द...

Periodontitis, मुख्य रूप से दंत पट्टिका1द्वारा शुरू, periodontal स्नायुबंधन (PDL), कूपिका हड्डी, और सीमेंटम सहित periodontal ऊतकों की क्षति की विशेषता है। periodontitis के लिए वर्तमान उपचार आमतौर पर सक्रिय रोग की प्रगति को रोकने में सफल रहे हैं, लेकिन खो periodontal ऊतकों के पुनर्जनन एक नैदानिक चुनौती बनी हुई है. हाल ही में, वर्तमान उपचार2,3,4की कमियों को दूर करने के लिए periodontal ऊतक पुनर्जनन के लिए सेल आधारित दृष्टिकोण में महत्वपूर्ण प्रगति की गई है.
हमारी पिछली व्यवस्थित समीक्षा से पता चला है कि पी डी एल कोशिकाओं ने पीरियडोंटल पुनर्जनन5के लिए काफी संभावनाएं दिखाईं . परंपरागत रूप से, PDL कोशिकाओं को दो आयामी (2 डी) ऐसे ऊतक संस्कृति polystyrene (TCPS) के रूप में substrates पर सुसंस्कृत हैं. तथापि, इन विट्रो कल्चर6में पीडीएल कोशिकाओं के विशिष्ट परिवर्तन देखे गए हैं। यह घटना शायद इसलिए है क्योंकि 2डी टीसीपीएस विवो त्रि-आयामी (3 डी) माइक्रोएमेंटल7से भिन्न है। 2 डी substrates पर सुसंस्कृत कोशिकाओं की तुलना में, एक 3 डी microenvironment में विकसित कोशिकाओं विवो कोशिकाओं8में करने के लिए और अधिक समानताएं प्रदर्शित करते हैं। इसलिए, 3 डी सेल संस्कृति मॉडल पारंपरिक 2 डी monolayer सेल संस्कृति के लिए एक आशाजनक विकल्प प्रदान करते हैं.
पारंपरिक 3 डी संस्कृति विधि 3 डी biomaterials में कोशिकाओं encapsulating है. 3 डी biomaterials में encapsulated कोशिकाओं के साथ तुलना में, सेलुलर गोलाभ अधिक बारीकी से vivo स्थिति में नकल क्योंकि गोलोइड विदेशी सामग्री से मुक्त बढ़ कोशिकाओं के समुच्चय हैं9,10,11, 12यह बताया गया है कि कोशिकीय गोलभों ने फाइब्रोनेक्टिन और लेमिनिन13सहित अतिरिक्त कोशिकीय मैट्रिक्स (ईसीएम) घटकों के परिरक्षण के माध्यम से एमएससी जैव क्रियाकलापों को बढ़ावा दिया . पारंपरिक PDL सेल संस्कृति मॉडल में सुधार करने के लिए, हम हाल ही में एक 3 डी PDL सेल संस्कृति विधि है, जो chitosan फिल्मों14पर PDL कोशिकाओं के गोलिकांध गठन पर आधारित है विकसित किया है. स्फीरॉइड गठन ने पीडीएल कोशिकाओं14की आत्म-नवीकरण और अस्थिजन्य विभेद क्षमता में वृद्धि की। यहाँ, हम chitosan फिल्मों पर आधारित विस्तृत PDL सेल स्रूपभ संस्कृति प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं. PDL सेलुलर spheroids की 3 डी संस्कृति प्रणाली पारंपरिक TCPS सेल संस्कृति से संबंधित कमियों में से कुछ पर काबू पाने, और इस प्रकार भविष्य periodontal ऊतक पुनर्जनन के लिए एक बढ़ाया चिकित्सीय प्रभावकारिता के साथ PDL कोशिकाओं के उत्पादन के लिए उपयुक्त हो सकता है.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:718px;" width="718">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">&#945;-MEM</td>
			<td style="width:158px;">Gibco</td>
			<td style="width:166px;">11900-073</td>
			<td style="width:172px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">acetic acid&#160;</td>
			<td style="width:158px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:166px;">64197</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Cell culture flask 25 cm2</td>
			<td style="width:158px;">Corning</td>
			<td style="width:166px;">430639</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Cell culture flask 75 cm2</td>
			<td style="width:158px;">Corning</td>
			<td style="width:166px;">430641</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:63px;width:223px;">Chitosan</td>
			<td style="width:158px;">Heppe Medical&#160;Chitosan GmbH</td>
			<td style="width:166px;">/</td>
			<td>molecular weight 500 kDa, degree of deacetylation 85%</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">FCS</td>
			<td style="width:158px;">Gibco</td>
			<td style="width:166px;">26140-079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Live/Dead Viability/Cytotoxicity Kit</td>
			<td style="width:158px;">Molecular&#160;Probes</td>
			<td style="width:166px;">L3224</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">NaOH</td>
			<td style="width:158px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:166px;">1310732</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">PBS</td>
			<td>KeyGen Biotech&#160;</td>
			<td style="width:166px;">KGB5001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">pen/strep</td>
			<td style="width:158px;">Gibco</td>
			<td style="width:166px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Trypsin/EDTA&#160;</td>
			<td>KeyGen Biotech&#160;</td>
			<td style="width:166px;">KGM25200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">15 mL conical centrifuge tube</td>
			<td style="width:158px;">Corning</td>
			<td style="width:166px;">430790</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">24-well plate</td>
			<td style="width:158px;">Corning</td>
			<td style="width:166px;">3524</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

formation of human periodontal ligament cell spheroids on chitosan films

Periodontal स्नायु (PDL) कोशिकाओं periodontal ऊतक पुनर्जनन के लिए महान वादा पकड़. परंपरागत रूप से, PDL कोशिकाओं को दो आयामी (2 डी) ऐसे ऊतक संस्कृति polystyrene (TCPS) के रूप में substrates पर सुसंस्कृत हैं. तथापि, इन विट्रो कल्चर के दौरान पीडीएल कोशिकाओं के विशिष्ट परिवर्तन देखे गए हैं। इस घटना शायद है क्योंकि 2 डी TCPS में विवो तीन आयामी (3 डी) microenvironment से अलग है. 2 डी substrates पर सुसंस्कृत कोशिकाओं की तुलना में, एक 3 डी microenvironment में विकसित कोशिकाओं विवो कोशिकाओं में करने के लिए और अधिक समानताएं प्रदर्शित. इसलिए, 3 डी सेल संस्कृति मॉडल पारंपरिक 2 डी monolayer सेल संस्कृति के लिए एक आशाजनक विकल्प प्रदान करते हैं. पारंपरिक PDL सेल संस्कृति मॉडल में सुधार करने के लिए, हम हाल ही में एक 3 डी सेल संस्कृति विधि है, जो chitosan फिल्मों पर PDL कोशिकाओं के गोलिकाइड गठन पर आधारित है विकसित किया है. यहाँ, हम chitosan फिल्मों पर आधारित विस्तृत सेल स्रूपभ संस्कृति प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। PDL सेलुलर spheroids की 3 डी संस्कृति प्रणाली पारंपरिक 2 डी monolayer सेल संस्कृति से संबंधित सीमाओं में से कुछ पर काबू पाने, और इस प्रकार भविष्य periodontal ऊतक पुनर्जनन के लिए एक बढ़ाया चिकित्सीय प्रभावकारिता के साथ PDL कोशिकाओं के उत्पादन के लिए उपयुक्त हो सकता है.

वर्तमान प्रोटोकॉल का उपयोग करते हुए, व्यवहार्य PDL सेल गोलोइड सफलतापूर्वक गठन किया गया. चित्र 1 से पता चला है कि संलग्न कोशिकाओं के बजाय निलंबित कोशिकाओं या गोलाभ मुख्य रूप से chitosan ?...

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Formation of Human Periodontal Ligament Cell Spheroids on Chitosan Films

यहाँ, हम chitosan फिल्मों द्वारा मानव periodontal स्नायु (PDL) सेल अफ़ीरों की रचना के प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। तीन आयामी (3 डी) सेलुलर अफ़ीरॉइड की संस्कृति पारंपरिक ऊतक संस्कृति polystyrene (TCPS) संस्कृति प्रणाली के लिए एक विकल्प प्रदान करता है.

Chitosan फिल्मों पर मानव Periodontal लिगामेंट सेल स्फीरॉइड्स का गठन

Periodontal ligament (PDL) cells hold great promise for periodontal tissue regeneration. Conventionally, PDL cells are cultured on two-dimensional (2D) ...

यह चिटोसन फिल्मों द्वारा पीरियडोन्टल स्नायु सेल स्फेरॉइड को बनाने का एक विस्तृत प्रोटोकॉल है। पारंपरिक संस्कृति प्रणाली के साथ तुलना में, गोलाकार संस्कृति प्रणाली बढ़ी हुई आत्म-नवीकरण और ऑस्टियोजेनिक भेदभाव क्षमताओं के साथ पीरियोडोन्टल स्नायु कोशिकाओं का उत्पादन करती है। शुरू करने के लिए, पांडुलिपि में निर्देशित 1% वजन से मात्रा वाले चिटोसन समाधान तैयार करें।24-अच्छी तरह से ऊतक संस्कृति पॉलीस्टीरिन प्लेट के प्रत्येक कुएं में 0.5 मिलीलीटर चिटोसन समाधान जोड़ें। चिटोसन फिल्म बनाने के लिए 24 घंटे के लिए 60 डिग्री सेल्सियस पर एक ओवन में प्लेट को सुखाएं। चिटोसन फिल्मों को बेअसर करने के लिए, 24-अच्छी प्लेट के प्रत्येक कुएं में 0.5 सामान्य सोडियम हाइड्रोक्साइड के 0.5 मिलीलीटर जोड़ें और दो घंटे के लिए कमरे के तापमान पर इनक्यूबेट करें।इसके बाद चिटोसन फिल्मों को डबल डिसाइड पानी से तीन बार धोएं। कमरे के तापमान पर रात भर 70% शराब में चिटोसन-लेपित 24-अच्छी थाली को स्टरलाइज करें। पीबीएस के साथ तीन बार प्लेट कुल्ला तो यह पराबैंगनी प्रकाश के तहत रात भर छोड़ दें ।सेल सीडिंग से पहले, प्री-वार्म प्रसार माध्यम, पीबीएस समाधान, और ट्राइप्सिन ईडीटीए समाधान 37 डिग्री सेल्सियस तक। सेल कल्चर फ्लास्क से सुपरनेट को त्यागें और 10 मिलीलीटर पीबीएस के साथ, कॉन्फ्ल्यूरेंट पीरियोडोन्टल स्नायु, या पीडीएल कोशिकाओं को धोएं। पीबीएस को त्यागें और फ्लास्क में ट्राइप्सिन ईडीटीए समाधान का एक मिलीलीटर जोड़ें।तीन मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर फ्लास्क को इनक्यूबेट करें और फिर ट्राइप्सिन पाचन को समाप्त करने के लिए प्रसार माध्यम के तीन मिलीलीटर जोड़ें। सेल निलंबन को 15 मिलीलीटर शंकु नली में स्थानांतरित करें फिर इसे 300 बार जी पर पांच मिनट के लिए अपकेंद्री करें। सुपरनेट को त्यागें और प्रसार माध्यम के 500 माइक्रोलीटर में कोशिकाओं को फिर से निलंबित करें।एक हीमोसाइटोमीटर के साथ कोशिकाओं की गणना करें और उन्हें प्लेट पर पांच, 10, 30 और 60 हजार कोशिकाओं प्रति वर्ग सेंटीमीटर पर बीज करें। संस्कृति 5% कार्बन डाइऑक्साइड और आर्द्रीकृत हवा में ३७ डिग्री सेल्सियस पर एक इनक्यूबेटर में पीडीएल कोशिकाओं, प्रति सप्ताह दो बार संस्कृति माध्यम बदल रहा है । एक विलोम चरण विपरीत माइक्रोस्कोप के माध्यम से पांच दिनों के लिए दैनिक सेल आकृति विज्ञान का निरीक्षण करें।इस प्रोटोकॉल का उपयोग करके व्यवहार्य पीडीएल सेल गोलाकार सफलतापूर्वक बनते हैं। एक और तीन दिन पर कम बोने वाले घनत्व के लिए स्पेरोइड शायद ही कभी मनाए जाते हैं। लेकिन दो उच्च घनत्व पर, स्फेरॉइड के विभिन्न आकार पहले दिन से मौजूद हैं।इष्टतम सीडिंग घनत्व 30 हजार कोशिकाओं प्रति सेंटीमीटर चुकता है क्योंकि इसके परिणामस्वरूप सजातीय स्फेरॉइड होते हैं। संस्कृति के पांच दिनों के बाद, सभी सीडिंग घनत्व के लिए बड़े स्फेरॉइड देखे जाते हैं। एक व्यवहार्यता परख दर्शाता है कि पीडीएल कोशिकाओं के बहुमत एक, तीन, और छह दिन पर जीवित हैं, लेकिन मृत कोशिकाओं की संख्या छह दिन पर बढ़ जाती है ।इस प्रोटोकॉल की एक सीमा स्फेरॉइड गठन के बाद कोशिकाओं के प्रसार में कमी है। इसलिए स्फेरॉइड गठन के बाद कोशिकाओं के प्रसार को बढ़ावा देने के लिए आगे के अध्ययनों की आवश्यकता है।

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Isolation and Quantitative Immunocytochemical Characterization of Primary Myogenic Cells and Fibroblasts from Human Skeletal Muscle

मानव कंकाल की मांसपेशी से प्राथमिक myogenic कोशिकाओं और fibroblasts के अलगाव और मात्रात्मक Immunocytochemical विशेषता

The repair and regeneration of skeletal muscle requires the action of satellite cells, which are the resident muscle stem cells. These can be isolated ...

Differentiation of a Human Neural Stem Cell Line on Three Dimensional Cultures, Analysis of MicroRNA and Putative Target Genes

तीन आयामी संस्कृति, MicroRNA का विश्लेषण और ख्यात लक्ष्य जीन पर एक मानव तंत्रिका स्टेम सेल लाइन के भेदभाव

Neural stem cells (NSCs) are capable of self-renewal and differentiation into neurons, astrocytes and oligodendrocytes under specific local ...

A Novel Culture Model for Human Pluripotent Stem Cell Propagation on Gelatin in Placenta-conditioned Media

एक उपन्यास संस्कृति मॉडल मानव pluripotent के लिए अपरा वातानुकूलित मीडिया में जिलेटिन पर सेल प्रचार स्टेम

The propagation of human pluripotent stem cells (hPSCs) in conditioned medium derived from human cells in feeder-free culture conditions has been of ...

Generation of Genetically Modified Organotypic Skin Cultures Using Devitalized Human Dermis

निष्प्राण मानव डर्मिस का प्रयोग आनुवंशिक रूप से संशोधित Organotypic त्वचा संस्कृतियों की पीढ़ी

Organotypic cultures allow the reconstitution of a 3D environment critical for cell-cell contact and cell-matrix interactions which mimics the function ...

Culturing Human Pluripotent and Neural Stem Cells in an Enclosed Cell Culture System for Basic and Preclinical Research

बेसिक और preclinical अनुसंधान के लिए एक संलग्न सेल संस्कृति प्रणाली में मानव pluripotent और तंत्रिका स्टेम सेल संवर्धन

This paper describes how to use a custom manufactured, commercially available enclosed cell culture system for basic and preclinical research. Biosafety ...

A RANKL-based Osteoclast Culture Assay of Mouse Bone Marrow to Investigate the Role of mTORC1 in Osteoclast Formation

माउस अस्थि मज्जा की एक RANKL आधारित अस्थिशोषक संस्कृति परख अस्थिशोषक गठन में mTORC1 की भूमिका की जांच करने के लिए

Osteoclasts are unique bone-resorbing cells that differentiate from the monocyte/macrophage lineage of bone marrow. Dysfunction of osteoclasts may result ...

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

सेल एकत्रीकरण परख सीआईएसद्वारा ट्रांस-लाइगैंडों और उसके निषेध के साथ Drosophila पायदान के बंधन का मूल्यांकन करने के लिए-लाइगैंडों

Notch signaling is an evolutionarily conserved cell-cell communication system used broadly in animal development and adult maintenance. Interaction of the ...

HUVEC Tube-formation Assay to Evaluate the Impact of Natural Products on Angiogenesis

HUVEC ट्यूब गठन परख एंजियोजेनेसिस पर प्राकृतिक उत्पादों के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए

Angiogenesis is a phenomenon that includes different processes, such as endothelial cell proliferation, differentiation, and migration, that lead to the ...

Efficient Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Liver Cells

लिवर सेल में मानव Pluripotent स्टेम सेल के कुशल भेदभाव

The liver detoxifies harmful substances, secretes vital proteins, and executes key metabolic activities, thus sustaining life. Consequently, liver ...

Hemogenic Reprogramming of Human Fibroblasts by Enforced Expression of Transcription Factors

ट्रांसक्रिप्शन कारकों की प्रबल अभिव्यक्ति द्वारा मानव फाइब्रोब्लास्ट्स के हेमोजेनिक रिप्रोग्रामन

The cellular and molecular mechanisms underlying specification of human hematopoietic stem cells (HSCs) remain elusive. Strategies to recapitulate human ...