Name: assessing mineral availability in fish feeds using complementary methods demonstrated with the example of zinc in atlantic salmon
Uploaded: 2021-10-29T14:00:00
Duration: 4 min 54 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Mineral Availability in Fish Feeds using Complementary Methods Demonstrated with the Example of Zinc in Atlantic Salmon at JoVE.com

עבודה זו בוצעה במסגרת פרויקט APREMIA (זמינות ודרישה לכאורה של מינרלים בסלמון אטלנטי, מענק מס '244490) במימון מועצת המחקר הנורבגית.

<ol>
	<li>Ytrestoyl, T., Aas, T. S., Asgard, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilisation+of+feed+resources+in+production+of+Atlantic+salmon+(Salmo+salar)+in+Norway.">Utilisation of feed resources in production of Atlantic salmon (Salmo salar) in Norway.</a> Aquaculture. 448, 365-374 (2015).</li><li>Prabhu, P. A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+dietary+supply+of+microminerals+as+a+premix+in+a+complete+plant+ingredient-based+diet+to+juvenile+rainbow+trout+(Oncorhynchus+mykiss).">Evaluating dietary supply of microminerals as a premix in a complete plant ingredient-based diet to juvenile rainbow trout (Oncorhynchus mykiss).</a> Aquaculture Nutrition. 24 (1), 539-547 (2018).</li><li>Maret, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zinc+biochemistry:+from+a+single+zinc+enzyme+to+a+key+element+of+life.">Zinc biochemistry: from a single zinc enzyme to a key element of life.</a> Advances in nutrition. 4 (1), 82-91 (2013).</li><li>Hogstrand, C., Wood, C. M., Farrell, A. P., Brauner, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fish Physiology. 31, 135-200 (2011).</li><li>Baeverfjord, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mineral+nutrition+and+bone+health+in+salmonids.">Mineral nutrition and bone health in salmonids.</a> Reviews in Aquaculture. , (2018).</li><li>Maage, A., Julshamn, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+zinc+status+in+juvenile+Atlantic+salmon+(Salmo+salar)+by+measurement+of+whole+body+and+tissue+levels+of+zinc.">Assessment of zinc status in juvenile Atlantic salmon (Salmo salar) by measurement of whole body and tissue levels of zinc.</a> Aquaculture. 117 (1), 179-191 (1993).</li><li>Silva, M. S., Sele, V., Sloth, J. J., Araujo, P., Amlund, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Speciation+of+zinc+in+fish+feed+by+size+exclusion+chromatography+coupled+to+inductively+coupled+plasma+mass+spectrometry+&#8211;+Using+fractional+factorial+design+for+method+optimization+and+mild+extraction+conditions.">Speciation of zinc in fish feed by size exclusion chromatography coupled to inductively coupled plasma mass spectrometry &#8211; Using fractional factorial design for method optimization and mild extraction conditions.</a> Journal of Chromatography B. , (2018).</li><li>Prabhu, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zinc+uptake+in+fish+intestinal+epithelial+model+RTgutGC:+Impact+of+media+ion+composition+and+methionine+chelation.">Zinc uptake in fish intestinal epithelial model RTgutGC: Impact of media ion composition and methionine chelation.</a> Journal of Trace Elements in Medicine and Biology. 50, 377-383 (2018).</li><li>Silva, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apparent+availability+of+zinc,+selenium+and+manganese+as+inorganic+metal+salts+or+organic+forms+in+plant-based+diets+for+Atlantic+salmon+(Salmo+salar).">Apparent availability of zinc, selenium and manganese as inorganic metal salts or organic forms in plant-based diets for Atlantic salmon (Salmo salar).</a> Aquaculture. 503, 562-570 (2019).</li><li>Persson, D. P., Hansen, T. H., Laursen, K. H., Schjoerring, J. K., Husted, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+iron,+zinc,+sulfur+and+phosphorus+speciation+analysis+of+barley+grain+tissues+using+SEC-ICP-MS+and+IP-ICP-MS.">Simultaneous iron, zinc, sulfur and phosphorus speciation analysis of barley grain tissues using SEC-ICP-MS and IP-ICP-MS.</a> Metallomics. 1 (5), 418-426 (2009).</li><li>Lothian, A., Roberts, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standards+for+Quantitative+Metalloproteomic+Analysis+Using+Size+Exclusion+ICP-MS.">Standards for Quantitative Metalloproteomic Analysis Using Size Exclusion ICP-MS.</a> Journal of Visualized Experiments. (110), (2016).</li><li>Minghetti, M., Schirmer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+media+composition+on+bioavailability+and+toxicity+of+silver+and+silver+nanoparticles+in+fish+intestinal+cells+(RTgutGC).">Effect of media composition on bioavailability and toxicity of silver and silver nanoparticles in fish intestinal cells (RTgutGC).</a> Nanotoxicology. 10 (10), 1526-1534 (2016).</li><li>Glover, C. N., Hogstrand, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino+acid+modulation+of+in+vivo+intestinal+zinc+absorption+in+freshwater+rainbow+trout.">Amino acid modulation of in vivo intestinal zinc absorption in freshwater rainbow trout.</a> Journal of Experimental Biology. 205 (1), 151-158 (2002).</li><li>Ekman, R., Ekman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mass spectrometry: Instrumentation, interpretation, and applications. Wiley Series on Mass Spectrometry. , 105-115 (2009).</li><li>Hong, P., Koza, S., Bouvier, E. S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Review+Size-Exclusion+Chromatography+for+the+Analysis+of+Protein+Biotherapeutics+and+Their+Aggregates.">A Review Size-Exclusion Chromatography for the Analysis of Protein Biotherapeutics and Their Aggregates.</a> Journal of Liquid Chromatography &amp; Related Technologies. 35 (20), 2923-2950 (2012).</li><li>Krezel, A., Maret, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biological+inorganic+chemistry+of+zinc+ions.">The biological inorganic chemistry of zinc ions.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 611, 3-19 (2016).</li><li>National Research Council. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Nutrient Requirements of Fish and Shrimp. , (2011).</li></ol>

למחברים אין מה לחשוף.

ספיגת המעיים של Zn נראה מושפע על ידי הצורה הכימית של מיני Zn13. בהקשר זה, השימוש בפרוטוקולים המתוארים במאמר זה אפשר לחקור ברצף את ההיבטים הכימיים והביולוגיים שבבסוד 'הזמינות' של Zn בסלמון אטלנטי.
מחקר זה דיווח על שימוש בשיטת ניתוח דגימת Zn. שיטת SEC-ICP-MS סיפקה נתונים איכותיים לגבי המשקל המולקולרי של מינים כימיים Zn נוכח בשבר המסיס של הזנת סלמון אטלנטית. זה הושג בהשוואה לזמני השמירה של תקני כיול המשקל המולקולרי (כלומר, תירוגלובולין (660 kDa), Zn/ Cu סופראוקסיד דיסמוטאז (32 kDa), מיוגלובין (17 kDa) וויטמין B12 (1.36 kDa)) עם זמני השמירה של Zn המכיל פסגות. אתגר שנמצא בניתוח דגימת Zn היה זיהוי המינים הכימיים הלא ידועים של Zn בשל היעדר סטנדרטים אנליטיים. ב- SEC, ההפרדה בין המולקולות מבוססת על גודלן ביחס לנקבוביות בשלב הנייח. באופן עקרוני, מולקולות גדולות יותר יסעו מהר יותר, תחילה, ומולקולות קטנות יותר יסעו לאט יותר, ויעברו מאוחר יותר14. כתוצאה מכך, כל Zn המכיל שיא עשוי להכיל מספר תרכובות עם משקל מולקולרי דומה15. זה גם תורם לאתגר של זיהוי מינים כימיים Zn לא ידועים. יתר על כן, מספר תנאי מיצוי קל נבדקו להפקת Zn. Zn שחולץ היה נמוך (~ 10%). תנאי מיצוי קל הוחלו כדי לשמור על המין הכימי Zn שלם אבל זה אולי פגע יעילות החילוץ7.
בבדיקת המסיסות במבחנה, המסיסות של Zn בתוספת (כמו איזוטופ רדיו 65ZnCl2) ציין כי חומצות אמינו, במיוחד היסטידין וליסין, הגדיל את המסיסות של Zn (איור 5). באמצעות דגימות הזנה ישירות עבור מבינוי מסיסות תחת תנאים מדומים במערכת העיכול מבוסס על הידיעה כי שינוי ב speciation Zn הוא תלוי pH16. עם זאת, תנאים חומציים בתחילת מערכת העיכול, עלול לגרום לשינוי מסוים speciation אשר עשוי להיות בלתי הפיך (למשל, ZnO -> ZnCl2, בנוכחות HCl בתנאים חומציים בקיבה). עם זאת, מקור Zn המשמש כאן הוא ZnSO4 ואת המסיסות של אשר שופרה על ידי חומצות אמינו במדיום. השאלה הבאה שיש לענות עליה הייתה, האם ניתן לתרגם את המסיסות המוגברת לזמינות? קו תאי המעיים RTgutGC שימש כדי ללמוד את השאלה הזאת. בהקשר של תזונה מינרלית בבעלי חיים, קשה להגדיר את המונח 'זמינות' וניתן להסדיר אותו באופן דיפרנציאלי בתאים (במבחנה) בהשוואה לחיה (in vivo). לפיכך, המונח 'ספיגה' שימש כשמדובר בהערכת במבחנה באמצעות קו תאי מעיים. קו התא סיפק מידע שימושי על מנגנוני ספיגת Zn באפיתל המעי המהווה חלק מהתהליך הרגולטורי המורכב השולט בזמינות המינרלים בבעלי חיים. תאי RTgutGC עוררו יכולת טובה יותר לספיגה אפית של Zn בנוכחות חומצת אמינו (כלומר, מת'יונין; איור 6). עם זאת, הזמינות לכאורה ב vivo לא היה שונה באופן משמעותי בין מקורות Zn אורגניים בסלמון אטלנטי. במחקר זמינות in vivo, השוואת מקור Zn נעשתה ברמות Zn תזונתיים הרבה מעבר לדרישות Zn הידועות של סלמון אטלנטי17, ריכוז Zn הכולל של 150 מ"ג / קילוגרם להאכיל. ההבדלים בזמינות דמיינו טוב יותר כאשר רמות התזונה שנבדקו נופלות בטווח הדינמי הליניארי לפני שבעל החיים מגיע לרוויה. במחקר הנוכחי של vivo, ייתכן כי הסלמון האטלנטי היו רוויים היטב להבדל נצפה בספיגת Zn בין מקורות המשמשים.
לסיכום, השיטה הראשונה סיפקה מידע איכותי לגבי מינים כימיים שונים של Zn שנמצאו בחלק המסיס של הזנת סלמון אטלנטית; השיטה השנייה, מסיסות במבחנה של Zn בתוספת שופר בנוכחות ליגנדים חומצת אמינו; השיטה השלישית אישרה כי מסיסות משופרת על ידי חומצות אמינו יכול לשפר את ספיגת אפיתל המעי; לעומת זאת, השיטה הרביעית לא הצליחה למצוא הבדלים בזמינות של Zn ממקור אנאורגני או אורגני לסלמון אטלנטי. לסיכום, אם כי לא עולה בקנה אחד עם ממצאי in vivo, פרוטוקולי אין ויטרו סיפקו תובנות מעניינות להבנת המרכיבים השונים של זמינות Zn.

ארוחות דגים ושמן דגים שימשו באופן מסורתי במזון סלמון אטלנטי. עם זאת, מרכיבים אלה מוחלפים יותר ויותר על ידי מרכיבים על בסיס צמחי1. השינוי הנ"ל בהרכב המזון הביא לזמינות תזונתית נמוכה ולצורך מוגבר בשיפור הזמינות של מינרלים במזון סלמון אטלנטי, במיוחד אבץ (Zn)2. הזמינות המופחתת עשויה להיות תוצאה של שינוי ברמת Zn, מינים כימיים Zn או / וגורמים antinutritional נוכח מטריצת ההזנה. בתרחיש זה, מערך חדש של תוספים שנחשבים באופן כללי כ'מקורות אורגניים 'הופיעו עם פוטנציאל להיות מקור זמין טוב יותר של מינרלים תזונתיים לדגים. לכן, חשוב להבין כימיה בסיסית ופיזיולוגיה השולטת בזמינות המינרלים ומקורותיהם לדגים. אבץ הוא יסוד קורט חיוני לכל האורגניזמים החיים3. תפקידו של Zn כמולקולת איתות תואר הן ברמה הצפרית והן ברמה התאית בדגים4. בסלמון האטלנטי, מחסור Zn נקשר עם חריגות שלד ופעילות מופחתת של Zn metalloenzymes שונים5,6.
מחקר זה מתאר גישה שיטתית להבנת זמינות Zn על ידי סיווגו לארבעה תאים שונים של מורכבות כימית וביולוגית מגוונת. השיטות המעורבות מתוארות בארבעה חלקים, כפי שניתן לראות באיור 1: (1) הערכה של מינים כימיים Zn בשבר המסיס של הזנת סלמון אטלנטית באמצעות כרומטוגרפיה של אי-הכללה- ספקטרוסקופיית מסת פלזמה מצמידה באופן אינדוקטיבי (SEC-ICP-MS) שיטה7; (2) מסיסות במבחנה של Zn בתוספת להאכיל סלמון אטלנטי; (3) הערכת ספיגת מינים כימיים Zn על ידי מודל מעיים במבחנה (RTgutGC)8; ו -(4) זמינות לכאורה של Zn בסלמון אטלנטי(משכורת סלמו)9. פרוטוקולים דומים ניתן לפתח עבור מינרלים אחרים (למשל, מנגן, סלניום, נחושת) עניין תזונתי למינים דגים חקלאות ימית.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1060px;" width="1060">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">0.45 &#181;m syringe filter</td>
			<td style="width:240px;">Sartorius</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:287px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.45 &#956;m membrane filter</td>
			<td style="width:240px;">Pall</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">10 % fetal bovine serum</td>
			<td style="width:240px;">Eurobio</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1282 Compugamma Laboratory Gamma Counter</td>
			<td style="width:240px;">LKB Wallac</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">24 well plates (Falcon, TPP microplates)&#160;</td>
			<td style="width:240px;">Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td style="width:119px;">10048760</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2-aminobicyclo(2.2.1)heptane-2-carboxylic acid</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:119px;">A7902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">75 cm2 cell culture flasks (Falcon, TPP tissue culture flasks)</td>
			<td style="width:240px;">TPP Techno Plastic Products AG&#160;</td>
			<td style="width:119px;">90075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">L-Arginine</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td>A5006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bradford assay kit</td>
			<td style="width:240px;">Bio-Rad</td>
			<td>5000001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:240px;">Eppendorf Centrifuge 5702</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">L-Cysteine</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td>30089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">DL-methionine</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td style="width:119px;">59-51-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">D-methionine</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td>M9375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:415px;">Experimental fish feeds</td>
			<td style="width:240px;">Skretting</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Glycine</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td>410225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Guard column, TSKgel SWxl Type (7&#8239;&#956;m particle size)</td>
			<td style="width:240px;">Tosoh</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-Histidine</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td>53319</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HPLC coupled with a 7500ce ICP-MS</td>
			<td style="width:240px;">Agilent Technologies</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">Hydrochloric acid</td>
			<td style="width:240px;">Emsure ACS, ISO, 37% w/w, Merck</td>
			<td>1.00317</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Knife mill</td>
			<td style="width:240px;">GM 300, Retsch Gmbh</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-15 medium</td>
			<td style="width:240px;">Invitrogen/Gibco</td>
			<td style="width:119px;">&#160;21083027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-methionine&#160;</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:119px;">M9625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">L-Lysine</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td>23128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Methanol</td>
			<td style="width:240px;">LiChrosolv, HPLC grade, Merck&#160;</td>
			<td style="width:119px;">1.06035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Milli-Q water (18.2&#160;M&#937;&#160;cm)&#160;</td>
			<td style="width:240px;">EMD Millipore Corporation</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Myoglobin&#160;</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:119px;">M1882</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">NexION 350D ICP-MS</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pasteur pipette</td>
			<td style="width:240px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">pH meter&#160;</td>
			<td style="width:240px;">inoLab</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate-buffered saline (PBS)</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:119px;">806552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RTgutGC cells&#160;</td>
			<td style="width:240px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Obtained in kind from Professor Dr. Kristin Schirmer, Dept. of Environmental Toxicology, Eawag, Swiss Federal Institute of Aquatic Science and Technology, Switzerland</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">SEC column, TSKgel G3000SWxl</td>
			<td style="width:240px;">Tosoh</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sieve stainless steel (850&#8239;&#956;m - 1.12&#8239;mm)</td>
			<td style="width:240px;">Retsch</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Sodium dodecyl sulphate (SDS)</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td>436143</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Superoxide dismutase&#160;</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:119px;">S7571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Thyroglobulin&#160;</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:119px;">T1001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tricaine methanesulphonate</td>
			<td style="width:240px;">PharmaQ</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tris(hydroxymethyl)aminomethane&#160;</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td>252859</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin in 0.25% in phosphate-buffer saline</td>
			<td style="width:240px;">Biowest</td>
			<td style="width:119px;">L0910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Versene EDTA solution</td>
			<td style="width:240px;">Invitrogen/Gibco</td>
			<td>15040-033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Vitamin B12</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:119px;">V2876</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Zinc chelate of glycine</td>
			<td style="width:240px;">Phytobiotics</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Zinc sulphate</td>
			<td style="width:240px;">Vilomix</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing mineral availability in fish feeds using complementary methods demonstrated with the example of zinc in atlantic salmon

הערכת הזמינות של מיקרו-מינרלים תזונתיים היא אתגר גדול בתזונה מינרלית של מיני דגים. המאמר הנוכחי נועד לתאר גישה שיטתית המשלבת מתודולוגיות שונות כדי להעריך את הזמינות של אבץ (Zn) בסלמון אטלנטי(משכורת סלמו). בהתחשב בכך שכמה מינים כימיים Zn יכול להיות נוכח במזון סלמון אטלנטי, הועלתה ההשערה כי זמינות Zn מושפעת מינים כימיים Zn הנוכחי להאכיל. לכן, במחקר זה, הפרוטוקול הראשון הוא על איך לחלץ את המינים הכימיים Zn שונים מן ההזנה ולנתח אותם על ידי גודל הדרת כרומטוגרפיה-אינדוקטיבית מצמיד ספקטרוסקופיית מסת פלזמה (SEC-ICP-MS) שיטה. לאחר מכן, פותחה שיטת במבחנה כדי להעריך את המסיסות של Zn תזונתיים במזון סלמון אטלנטי. הפרוטוקול השלישי מתאר את השיטה לחקור את ההשפעה של שינוי הרכב מינים כימיים Zn על ספיגת Zn במודל אפיתל מעי דגים באמצעות קו תאי המעי פורל קשת (RTgutGC). יחד, הממצאים משיטות ההפריה הושוו למחקר in vivo שבחן את הזמינות לכאורה של מקורות אנאורגניים ואורגניים של Zn בתוספת הזנות סלמון אטלנטיות. התוצאות הראו כי מספר מינים כימיים Zn ניתן למצוא הזנות ואת היעילות של מקור Zn אורגני תלוי מאוד חומצת אמינו ליגנד המשמש כלאט Zn. הממצאים של שיטות במבחנה היו פחות מתאם עם תוצאה זו של מחקר in vivo. עם זאת, בפרוטוקולים במבחנה המתוארים במאמר זה סיפקו מידע חיוני לגבי זמינות Zn והערכתה בהזנות דגים.

הערכה של מינים כימיים Zn בשבר המסיס של הזנת סלמון אטלנטית באמצעות שיטת SEC-ICP-MS שיטת SEC-ICP-MS מספקת נתונים על המינים הכימיים של Zn שנמצאו בחלק המסיס של הזנת הסלמון האטלנטי. איור 4 ממחיש את הפרופיל הכרומטוגרפי של Zn שנמצא בשבר המסיס. כרומטוגרמה זו הושגה בשיטת SEC-ICP-MS. חמישה Zn המכילים פסגות נמצאו בחלקים המסיסים של הזנת הסלמון האטלנטי. לכל פסגה משקל מולקולרי שונה; שיא ראשון (~ 600 kDa), שיא שני ושיא שלוש (מ 32 ל 17 kDa), שיא ארבע (מ 17 ל 1.36 kDa) ושיא חמש (> 1.36 kDa). שיא ארבע היה הנפוץ ביותר, ואחריו שיא שתיים, שלוש, חמש ואחת, בהתאמה. למינים הכימיים Zn שנמצאו בשבר המסיס יכולים להיות מקורות שונים מכיוון שההזנה המשמשת מכילה מרכיבים ימיים ועל בסיס צמחי, וצורה משלימה (כלומר, Zn sulphate). טווח המשקל המולקולרי של המינים הכימיים Zn הציע כי תרכובות אלה עשויים להיות metalloproteins.
מסיסות במבחנה של Zn בתוספת להאכיל סלמון אטלנטי מסיסות של תוספת 65Zn גדל בנוכחות חומצות אמינו. כל חומצות האמינו שנבדקו הגדילו את המסיסות של תוספת 65Zn. מת'יונין, גליצין, ציסטאין, היסטידין וליצין משופר 65מסיסות Zn; מסיסות גבוהה יותר נמצאה עם היסטידין וליסין(איור 5).
הערכה של ספיגת מיני Zn באמצעות מודל מעיים במבחנה (RTgutGC) ספיגת אבץ אפית בתאי RTgutGC הושפעה באופן משמעותי מנוכחות של L-Met או DL-Met בריכוזים של 2 מ"מ. יתר על כן, ההשפעה של מתיונין על ספיגת Zn בתאי RTgutGC הושפעה לרעה מנוכחות של BCH (חוסם מערכת הובלת חומצות אמינו), בהשוואה לתאים שאינם מטופלים עם BCH (איור 6).
זמינות לכאורה של Zn תזונתי בסלמון אטלנטי(משכורת סלמו) בהזנות מעשיות עבור סלמון אטלנטי, זמינות Zn לכאורה היה זהה כאשר שכשהם עם מקור אנאורגני (Zn סולפט) או מקור אורגני (Zn chelate של גליצין). הערכים המשוערים לזמינות לכאורה של Zn (%, n = 3) בסלמון אטלנטי היו 31% ± 12% בעת שכשהם עם מקור אנאורגני (Zn sulphate) ו 31% ± 3% בעת שכשהם מקור אורגני (Zn chelate של גליצין).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59862/59862fig1.jpg"> איור 1: סיכום הגישה השיטתית להערכת זמינות המינרלים בשיטות משלימות. גישה זו שימשה לחקר זמינות אבץ בסלמון האטלנטי, כולל דגימת Zn, מסיסות Zn בסביבת מעיים, ספיגת Zn על ידי תאי מעיים וזמינות לכאורה Zn. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59862/59862fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59862/59862fig2.jpg"> איור 2: סיכום ההליך לחילוץ Zn מדגימת הזנה. אבץ מופק מדגימת הזנה בתנאי מיצוי קלים. החילוץ מלווה בניתוח דגימת Zn. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59862/59862fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59862/59862fig3.jpg"> איור 3: דוגמה לתאי RTgutGC 1 שעות (משמאל) ושבוע אחד (מימין) לאחר זריעת צלוחיות תרבית התא. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59862/59862fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59862/59862fig4.jpg"> איור 4: כרומטוגרמה המציגה את הפסגות המכילות Zn מהשבר המסיס של הזנת הסלמון האטלנטי ונותחה על ידי SEC-ICP-MS. שלושת המשכפלים מאופיינים בקווים הכחולים, האדומים והשחורים. כיול משקל מולקולרי בוצע באמצעות תירוגלובולין (660 kDa, ניטור 127I), Zn/ Cu סופראוקסיד דיסמוטאז (32 kDa, ניטור 66Zn), מיוגלובין (17 kDa, ניטור 57Fe), ויטמין B12 (1.36 kDa, ניטור 59Co); שיא 1 (P1): ~ 600 kDa, זמן שמירה (RT) 8.2 דקות; שיא 2+3 (P2+3): מ 32 עד 17 kDa, RT 14.2 + 15.3 דקות; שיא 4 (P4): מ 17 ל 1.36 kDa, RT 16.3 דקות; שיא 5 (P5): > 1.36 kDa, Rt 23.2 דקות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59862/59862fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59862/59862fig5.jpg"> איור 5: ההשפעה של חומצות אמינו על מסיסות במבחנה של Zn בתוספת להאכיל סלמון אטלנטי. הנתונים מוצגים כממוצע ± SD (n = 3). הנתונים נותחו באמצעות ANOVA בכיוון אחד, ואחריו מבחן ההשוואה המרובה של Dunnet, השוואת הממוצע של כל קבוצת AA עם זה של קבוצת ביקורת (ללא AA). כוכביות מציינות את רמת המשמעות של ANOVA (ערכי P < 0.05 (*), < 0.01 (**), < 0.001 (***) ו- < 0.0001 (****)). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59862/59862fig5large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59862/59862fig6.jpg"> איור 6: השפעת מתיונין ומעכב הובלת חומצות אמינו (2-אמינוביציקלו [2.2.1] חומצה הפטן-2-קרבוקסילית, BCH, 10 מ"ר). הנתונים מוצגים כממוצע ± SD (n = 3). הנתונים נותחו באמצעות ANOVA דו כיווני, ואחריו מבחן ההשוואה המרובה של טוקי עם רמת < 0.05 של משמעות. הבדלים לאחר ההוקי בין קבוצות מיוצגים כאות עילית מעל הפסים; פסים עם כתב עילי שונים שונים סטטיסטית (p < 0.05). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59862/59862fig6large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td>הגדרות HPLC</td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>עמודה</td>
			<td>עמודת SEC (30 ס"מ x 7.8 מ"מ, גודל חלקיקים של 5 מיקרומטר) + עמודת שמירה (גודל חלקיקי מיקרומטר 7 מיקרומטר)</td>
		</tr>
<tr>
<td>טווח כיול</td>
			<td>1.0 × 104 - 5.0 × 105 Da</td>
		</tr>
<tr>
<td>שלב נייד</td>
			<td>50 מ"מ טריס-HCl + 3% MeOH (pH 7.5)</td>
		</tr>
<tr>
<td>קצב זרימה</td>
			<td>0.7 מ"ל דקה−1
</td>
		</tr>
<tr>
<td>נפח הזרקה</td>
			<td>50 μL</td>
		</tr>
<tr>
<td>הגדרות ICP-MS</td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>עוצמה קדימה</td>
			<td>1550 ואט</td>
		</tr>
<tr>
<td>זרימת גז פלזמה</td>
			<td>15.0 ליטר דקה−1
</td>
		</tr>
<tr>
<td>זרימת גז נושאת</td>
			<td>0.86 ליטר דקה−1
</td>
		</tr>
<tr>
<td>זרימת גז איפור</td>
			<td>0.34 ליטר דקה−1
</td>
		</tr>
<tr>
<td>זמן השתהות</td>
			<td>0.1 s לכל איזוטופ</td>
		</tr>
<tr>
<td>איזוטופים מנוטרים</td>
			<td>
127 אני, 66Zn, 59Co, 57Fe</td>
		</tr>
</tbody></table>טבלה 1. מבט כולל על הגדרות המכשיר עבור HPLC ו- ICP-MS.
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td>הרכב כימי (mM)</td>
			<td>L15/ex</td>
			<td>מדיום ניסיוני (L15/FW)</td>
		</tr>
<tr>
<td>נתרן חנקתי</td>
			<td>155</td>
			<td>155</td>
		</tr>
<tr>
<td>אשלגן חנקתי</td>
			<td>6.2</td>
			<td>6.2</td>
		</tr>
<tr>
<td>מגנזיום גופרתי</td>
			<td>3.8</td>
			<td>19.5</td>
		</tr>
<tr>
<td>סידן חנקתי</td>
			<td>1.5</td>
			<td>5.4</td>
		</tr>
<tr>
<td>HEPES</td>
			<td>5</td>
			<td>5</td>
		</tr>
<tr>
<td>מגנזיום כלוריד</td>
			<td>-</td>
			<td>15</td>
		</tr>
<tr>
<td>נתרן פירובט</td>
			<td>5.7</td>
			<td>5.7</td>
		</tr>
<tr>
<td>גלקטוז</td>
			<td>5.7</td>
			<td>5.7</td>
		</tr>
<tr>
<td>pH</td>
			<td>7.1</td>
			<td>7.4</td>
		</tr>
<tr>
<td>חוזק יוני</td>
			<td>178</td>
			<td>258</td>
		</tr>
<tr height="36">
<td>הרכב יוני (mM)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>סידן, Ca2+ *
</td>
			<td>1.6 ± 0.1</td>
			<td>5.3 ± 0.2</td>
		</tr>
<tr>
<td>מגנזיום, מ"ג2+ *
</td>
			<td>3.9 ± 0.3</td>
			<td>32.5 ± 0.7</td>
		</tr>
<tr>
<td>אשלגן, K+ *
</td>
			<td>8.2 ± 1.2</td>
			<td>8.6 ± 1.1</td>
		</tr>
<tr>
<td>נתרן, נה+ *
</td>
			<td>160 ± 3</td>
			<td>157 ± 2</td>
		</tr>
<tr>
<td>חנקתי,מס' 3- **
</td>
			<td>164</td>
			<td>172.4</td>
		</tr>
<tr>
<td>סולפט, כך4- **
</td>
			<td>3.8</td>
			<td>18.7</td>
		</tr>
<tr>
<td>כלוריד, קל- **
</td>
			<td>1.5</td>
			<td>31.5</td>
		</tr>
</tbody></table>טבלה 2. ההרכב הכימי והאיוני של המדיה הניסיונית נבדק.

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Mineral Availability in Fish Feeds using Complementary Methods Demonstrated with the Example of Zinc in Atlantic Salmon at JoVE.com

Assessing Mineral Availability in Fish Feeds using Complementary Methods Demonstrated with the Example of Zinc in Atlantic Salmon

מאמר זה מסביר בפירוט גישה שיטתית להערכת זמינות מיקרו-מינרלית בסלמון אטלנטי. המתודולוגיה כוללת כלים ומודלים עם מורכבות ביולוגית גוברת: (1) ניתוח דגימה כימית, (2) מסיסות במבחנה, (3) מחקרי ספיגה בקווי תאים, ו-(4) במחקרי דגי vivo.

הערכת זמינות המינרלים בהזנות דגים בשיטות משלימות המודגמת עם הדוגמה של אבץ בסלמון אטלנטי

Assessing the availability of dietary micro-minerals is a major challenge in mineral nutrition of fish species. The present article aims to describe a ...

חקרנו את הזמינות של מסיסות של מיקרו-מתכות כמו סלניום אבץ עם צורות כימיות שונות או מקורות, כפי שאנו מכנים את זה, בהקשר של שינוי הרכב ההזנה. בסוויטת רדיונוקלידים, שקול כ-0.2 גרם של דגימות מזון סלמון אטלנטי טחון, ומערבב אותו עם רדיוטרייזר אבץ של פעילות ספציפית ידועה בצינור דגימה של חמישה מיליליטר. הכן שישה aliquots אחרים של המאגר ולהוסיף אחת מחומצות האמינו המוצגות כאן לכל אחד להגיע לריכוז טוחנת סופית של חמישה מילימולר.הוסף חוצץ זוהר מעיים מים מתוקים כדי להאכיל את המדגם. לאחר מכן, מוסיפים את חיץ הזוהר של המעיים במים מתוקים ל- aliquots המאגר המכיל את חומצות האמינו. סוגרים את הצינורות ומסובבים אותם על ספינר סיבובי במהירות של 25 סל"ד למשך 30 דקות.לאחר מכן, צנטריפוגה ב 1, 157 x g במשך 10 דקות, כדי להפריד את השברים המסיסים ולא מסיסים. השתמש בקופת גמא כדי למדוד את הספירה לדקה של רדיוטריידר האבץ בשברים המסיסים והלא מסיסים. לשטוף את פורל הקשת נגזר קו תאי מעיים פעמיים עם מיליליטר אחד של פתרון EDTA, ולשאוב את הפתרון לאחר כל לשטוף באמצעות pipette.לטפל בתאים שטופים עם פתרון 0.25%טריפסין. סובבו בעדינות את הבקבוק בזוויות חדות במשך שתי דקות. לאחר מכן להוסיף 10 מיליליטר של L-15 בינוני המכיל 5%FBS כדי לנטרל את טריפסין.באמצעות פיפטה סטרילית, decant השעיית התא המתקבל לתוך צינור צנטריפוגה תחתון חרוטי. צנטריפוגה ב-130 על ג'י למשך שלוש דקות. לאחר מכן באמצעות hemocytometer, לקבוע את הצפיפות של התאים שנקטפו על ידי ספירה ידנית.זרעו את התאים על 24 לוחות באר בצפיפות תאים של 50, 000 תאים למיליליטר, לבאר, ודגרו את הלוחות ב 19 מעלות צלזיוס תחת אווירה נורמלית במשך 48 שעות לפני הניסויים. לאחר האכלת הדגים במשך 11 ימים והמתת חסד, לאסוף מדגם מאוחסן של צואת הדג על ידי הפשטה מן הסנפיר הגחון לפי הטבעת ומניחים אותו על צלחת. השתמש מרית כדי להעביר את הצואה מהצלחת לתוך צינור חרוט 50 מיליליטר.מיד לאחסן את הדגימות ב 20 מעלות צלזיוס. במחקר זה, הזמינות המינרלית של הזנת דגים מוערכת באמצעות מספר שיטות חינם. ניתוח מייצג של הזנת סלמון אטלנטית באמצעות שיטת הספקטרומטריה של מסת הפלזמה, המספק נתונים על המינים הכימיים של אבץ שנמצאו בשבר המסיס.חמישה אבץ המכיל פסגות ניתן לראות בשבר זה, כל אחד עם משקל מולקולרי שונה. למינים הכימיים של אבץ שנמצאו בשבר המסיס יכולים להיות מקורות שונים, מכיוון שההזנה המשמשת מכילה מרכיבים ימיים ומבוססים על צמחים, והיא מתווספת. טווח המשקל המולקולרי של מינים אלה מצביע על כך שתרכובות אלה עשויות להיות מטאלופרוטאין.בעוד המסיסות של אבץ 65 מוסף מגביר את נוכחותם של כל חומצות האמינו שנבדקו, מסיסות גבוהה יותר נמצא עם היסטידין וליצין. ספיגת אבץ אפית בתאי Arteca GC מושפעת באופן משמעותי על ידי נוכחות של L-Met או DL-Met בריכוזים שני מילימולרים. יתר על כן, ההשפעה של מת'יונין על ספיגת אבץ מושפעת לרעה על ידי נוכחות של BCH.היתרון העיקרי של פרוטוקול זה הוא שניסינו לשלב גישות שונות במחקרים חזותיים, אנליטיים ונבונים, כדי להשוות ולהחמיא זה לזה בכל הנוגע ללימוד זמינות מינרלים.

Research

JoVE Journal

Biology

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamAÃƒÅ½Ã¢â‚¬Â41

טיהור של מ magneticum מסננים השגריר-1 Magnetosome חלבון Associated MamAΔ41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

Genome Editing with CompoZr Custom Zinc Finger Nucleases (ZFNs)

Genome Editing with CompoZr Custom Zinc Finger Nucleases ZFNs

הגנום עורך עם אצבע CompoZr nucleases אישית אבץ (ZFNs)

Genome editing is a powerful technique that can be used to elucidate gene function and the genetic basis of disease. Traditional gene editing methods such ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

לטווח ארוך רעילות מבחן קטלני עם לסרטן הארטמיה franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

Reprogramming Human Somatic Cells into Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) Using Retroviral Vector with GFP

Reprogramming Human Somatic Cells into Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs Using Retroviral Vector with GFP

תכנות מחדש האדם תאים סומטיים תוך המושרה בתאי גזע pluripotent (iPSCs) באמצעות וקטור retroviral עם GFP

Human embryonic stem cells (hESCs) are pluripotent and an invaluable cellular sources for in vitro disease modeling and regenerative medicine1. It has ...

Robust 3D DNA FISH Using Directly Labeled Probes

דגי ה-DNA 3D חזקים באמצעות בדיקות שכותרתו ישירות

3D DNA FISH has become a major tool for  analyzing three-dimensional organization of the nucleus, and several variations  of the technique have been ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

The Xenopus Oocyte Cut-open Vaseline Gap Voltage-clamp Technique With Fluorometry

The Xenopus Oocyte Cut-open Vaseline Gap Voltage-clamp Technique With Fluorometry

<em&gt; Xenopus</em&gt; טכניקת ביצית Cut-פתוח וזלין גאפ מתח מהדק עם Fluorometry

The cut-open oocyte Vaseline gap (COVG) voltage clamp technique allows for analysis of electrophysiological and kinetic properties of heterologous ion ...

Assessing Species-specific Contributions To Craniofacial Development Using Quail-duck Chimeras

הערכת תרומות מינים ספציפיות כדי Craniofacial פיתוח באמצעות מפלצות שליו-ברווז

The generation of chimeric embryos is a widespread and powerful approach to study cell fates, tissue interactions, and species-specific contributions to ...

Measuring the Osmotic Water Permeability Coefficient (Pf) of Spherical Cells: Isolated Plant Protoplasts as an Example

Measuring the Osmotic Water Permeability Coefficient Pf of Spherical Cells: Isolated Plant Protoplasts as an Example

מדידת אוסמוטי המים החדירות מקדם (P<sub&gt; F</sub&gt;) של תאים כדוריים: Protoplasts צמח מבודד כדוגמה

Studying AQP regulation mechanisms is crucial for the understanding of water relations at both the cellular and the whole plant levels. Presented here is ...

Observation and Quantification of Telomere and Repetitive Sequences Using Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) with PNA Probes in Caenorhabditis elegans

Observation and Quantification of Telomere and Repetitive Sequences Using Fluorescence In Situ Hybridization FISH with PNA Probes in Caenorhabditis elegans

תצפית כימות הטלומרים ו רצפים חוזרים קרינה באמצעות<em&gt; באתרו</em&gt; הכלאה (דגים) עם PNA בדיקות ב<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em

Telomere is a ribonucleoprotein structure that protects chromosomal ends from aberrant fusion and degradation. Telomere length is maintained by telomerase ...