Name: assessing mineral availability in fish feeds using complementary methods demonstrated with the example of zinc in atlantic salmon
Uploaded: 2021-10-29T14:00:00
Duration: 4 min 54 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Mineral Availability in Fish Feeds using Complementary Methods Demonstrated with the Example of Zinc in Atlantic Salmon at JoVE.com

यह काम परियोजना APREMIA (स्पष्ट उपलब्धता और अटलांटिक सामन में खनिजों की आवश्यकता, अनुदान संख्या २४४४९०) नार्वे अनुसंधान परिषद द्वारा वित्त पोषित के तहत किया गया था ।

<ol>
	<li>Ytrestoyl, T., Aas, T. S., Asgard, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilisation+of+feed+resources+in+production+of+Atlantic+salmon+(Salmo+salar)+in+Norway.">Utilisation of feed resources in production of Atlantic salmon (Salmo salar) in Norway.</a> Aquaculture. 448, 365-374 (2015).</li><li>Prabhu, P. A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+dietary+supply+of+microminerals+as+a+premix+in+a+complete+plant+ingredient-based+diet+to+juvenile+rainbow+trout+(Oncorhynchus+mykiss).">Evaluating dietary supply of microminerals as a premix in a complete plant ingredient-based diet to juvenile rainbow trout (Oncorhynchus mykiss).</a> Aquaculture Nutrition. 24 (1), 539-547 (2018).</li><li>Maret, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zinc+biochemistry:+from+a+single+zinc+enzyme+to+a+key+element+of+life.">Zinc biochemistry: from a single zinc enzyme to a key element of life.</a> Advances in nutrition. 4 (1), 82-91 (2013).</li><li>Hogstrand, C., Wood, C. M., Farrell, A. P., Brauner, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fish Physiology. 31, 135-200 (2011).</li><li>Baeverfjord, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mineral+nutrition+and+bone+health+in+salmonids.">Mineral nutrition and bone health in salmonids.</a> Reviews in Aquaculture. , (2018).</li><li>Maage, A., Julshamn, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+zinc+status+in+juvenile+Atlantic+salmon+(Salmo+salar)+by+measurement+of+whole+body+and+tissue+levels+of+zinc.">Assessment of zinc status in juvenile Atlantic salmon (Salmo salar) by measurement of whole body and tissue levels of zinc.</a> Aquaculture. 117 (1), 179-191 (1993).</li><li>Silva, M. S., Sele, V., Sloth, J. J., Araujo, P., Amlund, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Speciation+of+zinc+in+fish+feed+by+size+exclusion+chromatography+coupled+to+inductively+coupled+plasma+mass+spectrometry+&#8211;+Using+fractional+factorial+design+for+method+optimization+and+mild+extraction+conditions.">Speciation of zinc in fish feed by size exclusion chromatography coupled to inductively coupled plasma mass spectrometry &#8211; Using fractional factorial design for method optimization and mild extraction conditions.</a> Journal of Chromatography B. , (2018).</li><li>Prabhu, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zinc+uptake+in+fish+intestinal+epithelial+model+RTgutGC:+Impact+of+media+ion+composition+and+methionine+chelation.">Zinc uptake in fish intestinal epithelial model RTgutGC: Impact of media ion composition and methionine chelation.</a> Journal of Trace Elements in Medicine and Biology. 50, 377-383 (2018).</li><li>Silva, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apparent+availability+of+zinc,+selenium+and+manganese+as+inorganic+metal+salts+or+organic+forms+in+plant-based+diets+for+Atlantic+salmon+(Salmo+salar).">Apparent availability of zinc, selenium and manganese as inorganic metal salts or organic forms in plant-based diets for Atlantic salmon (Salmo salar).</a> Aquaculture. 503, 562-570 (2019).</li><li>Persson, D. P., Hansen, T. H., Laursen, K. H., Schjoerring, J. K., Husted, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+iron,+zinc,+sulfur+and+phosphorus+speciation+analysis+of+barley+grain+tissues+using+SEC-ICP-MS+and+IP-ICP-MS.">Simultaneous iron, zinc, sulfur and phosphorus speciation analysis of barley grain tissues using SEC-ICP-MS and IP-ICP-MS.</a> Metallomics. 1 (5), 418-426 (2009).</li><li>Lothian, A., Roberts, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standards+for+Quantitative+Metalloproteomic+Analysis+Using+Size+Exclusion+ICP-MS.">Standards for Quantitative Metalloproteomic Analysis Using Size Exclusion ICP-MS.</a> Journal of Visualized Experiments. (110), (2016).</li><li>Minghetti, M., Schirmer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+media+composition+on+bioavailability+and+toxicity+of+silver+and+silver+nanoparticles+in+fish+intestinal+cells+(RTgutGC).">Effect of media composition on bioavailability and toxicity of silver and silver nanoparticles in fish intestinal cells (RTgutGC).</a> Nanotoxicology. 10 (10), 1526-1534 (2016).</li><li>Glover, C. N., Hogstrand, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino+acid+modulation+of+in+vivo+intestinal+zinc+absorption+in+freshwater+rainbow+trout.">Amino acid modulation of in vivo intestinal zinc absorption in freshwater rainbow trout.</a> Journal of Experimental Biology. 205 (1), 151-158 (2002).</li><li>Ekman, R., Ekman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mass spectrometry: Instrumentation, interpretation, and applications. Wiley Series on Mass Spectrometry. , 105-115 (2009).</li><li>Hong, P., Koza, S., Bouvier, E. S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Review+Size-Exclusion+Chromatography+for+the+Analysis+of+Protein+Biotherapeutics+and+Their+Aggregates.">A Review Size-Exclusion Chromatography for the Analysis of Protein Biotherapeutics and Their Aggregates.</a> Journal of Liquid Chromatography &amp; Related Technologies. 35 (20), 2923-2950 (2012).</li><li>Krezel, A., Maret, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biological+inorganic+chemistry+of+zinc+ions.">The biological inorganic chemistry of zinc ions.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 611, 3-19 (2016).</li><li>National Research Council. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Nutrient Requirements of Fish and Shrimp. , (2011).</li></ol>

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

जेडएन का आंतों का अवशोषण13जेडएन प्रजाति के रासायनिक रूप से प्रभावित प्रतीत होता है . इस संबंध में, इस लेख में वर्णित प्रोटोकॉल के उपयोग ने अटलांटिक सामन में जेडएन की 'उपलब्धता' में अंतर्निहित रासायनिक और जैविक पहलुओं के क्रमिक अध्ययन की अनुमति दी।
इस अध्ययन में जेडएन स्पेसाइजेशन विश्लेषण विधि के उपयोग की सूचना दी गई। एसईसी-आईसीपी-एमएस विधि ने अटलांटिक सामन फीड के घुलनशील अंश में मौजूद जेडएन रासायनिक प्रजातियों के आणविक वजन से संबंधित गुणात्मक डेटा प्रदान किया । यह आणविक वजन अंशांकन मानकों (यानी, थायरोग्लोबुलिन (660 केडीए), जेडएन/सीयू सुपरऑक्साइड डिस्म्यूटेज (32 केडीए), मायोग्लोबिन (17 केडीए) और विटामिन बी 12 (1.36 केडीए) के अवधारण समय की तुलना में हासिल किया गया था जिसमें चोटियों वाले ज़ैन के अवधारण समय थे। जेडएन स्पेसिफिकेशन एनालिसिस में मिली एक चुनौती विश्लेषणात्मक मानकों की कमी के कारण अज्ञात जेडएन रासायनिक प्रजातियों की पहचान थी । एसईसी में, अणुओं का पृथक्करण स्थिर चरण में छिद्रों के सापेक्ष उनके आकार पर आधारित होता है। सिद्धांत रूप में, बड़े अणु तेजी से यात्रा करेंगे, पहले eluting, और छोटे अणुओं धीमी यात्रा करेंगे, बाद में14eluting । नतीजतन, प्रत्येक जेड युक्त चोटी में समान आणविक वजन15के साथ कई यौगिक हो सकते हैं। यह अज्ञात जेडएन रासायनिक प्रजातियों की पहचान करने की चुनौती में भी योगदान देता है। इसके अलावा, जेडएन निकालने के लिए कई हल्के निष्कर्षण स्थितियों का परीक्षण किया गया था। निकाले गए Zn कम (~ 10%) जेडएन रासायनिक प्रजातियों को अक्षुण्ण रखने के लिए हल्के निष्कर्षण की स्थिति लागू की गई थी लेकिन इससे निष्कर्षण दक्षता7से समझौता हो सकता है ।
इन विट्रो घुलनशीलता परख में, पूरक जेडएन (रेडियो आइसोटोप 65जेडएनसीएल2के रूप में) की घुलनशीलता ने संकेत दिया कि अमीनो एसिड, विशेष रूप से हिस्टिडीन और लिसाइन, जेडएन(चित्रा 5)की घुलनशीलता में वृद्धि हुई। नकली गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल स्थितियों के तहत इन विट्रो घुलनशीलता के लिए सीधे फीड नमूनों का उपयोग करना इस ज्ञान पर आधारित है कि जेडएन विशिष्टता में परिवर्तन पीएच निर्भरहै 16। हालांकि, जीआई पथ की शुरुआत में अम्लीय स्थितियों के परिणामस्वरूप विशिष्टता में कुछ परिवर्तन हो सकते हैं जो अपरिवर्तनीय हो सकते हैं (उदाहरण के लिए, जेडएनओ-> जेडएनएल2,पेट में अम्लीय परिस्थितियों में एचसीएल की उपस्थिति में)। फिर भी, यहां उपयोग किया जाने वाला जेडएन स्रोत जेडएनएसओ4 है और जिसकी घुलनशीलता को माध्यम में अमीनो एसिड द्वारा सुधारा गया था। अगले सवाल का जवाब दिया जाना था, क्या बढ़ी हुई घुलनशीलता का उपलब्धता में अनुवाद किया जा सकता है? इस प्रश्न का अध्ययन करने के लिए आरटगुटजीसी आंतों की कोशिका रेखा का उपयोग किया गया था। जानवरों में खनिज पोषण के संदर्भ में, 'उपलब्धता' शब्द को परिभाषित करना कठिन है और जानवर (वीवो में) की तुलना में कोशिकाओं (इन विट्रो) में अंतर से विनियमित किया जा सकता है। इसलिए, जब आंतों की सेल लाइन का उपयोग करके इन विट्रो मूल्यांकन की बात आती थी तो 'तेज' शब्द का उपयोग किया जाता था। सेल लाइन ने आंतों के एपिथेलियम में जेडएन तेज तंत्र पर उपयोगी जानकारी प्रदान की जो जटिल नियामक प्रक्रिया का हिस्सा है जो जानवरों में खनिज उपलब्धता को नियंत्रित करता है। आरटगुटजीसी कोशिकाओं ने अमीनो एसिड (यानी, मेथिओनिन) की उपस्थिति में जेडएन के एपिकल तेज के लिए बेहतर क्षमता प्राप्त की; चित्रा 6)। हालांकि, वीवो में स्पष्ट उपलब्धता अटलांटिक सामन में अकार्बनिक और कार्बनिक Zn स्रोतों के बीच काफी अलग नहीं थी। वीवो उपलब्धता अध्ययन में, Zn स्रोत तुलना आहार Zn स्तर पर अच्छी तरह से अटलांटिक सामन17, १५०मिलीग्राम/किलो फ़ीड के कुल Zn एकाग्रता के ज्ञात Zn आवश्यकताओं से अधिक किया गया था । उपलब्धता में अंतर बेहतर कल्पना कर रहे है जब आहार के स्तर का परीक्षण रैखिक गतिशील रेंज में गिरावट से पहले पशु संतृप्ति तक पहुंचता है । वीवो अध्ययन में वर्तमान में, यह संभव है कि अटलांटिक सामन अच्छी तरह से इस्तेमाल स्रोतों के बीच Zn अवशोषण में अंतर मनाया संतृप्त थे ।
संक्षेप में, पहली विधि ने अटलांटिक सामन फ़ीड के घुलनशील अंश में पाई जाने वाली विभिन्न जेडएन रासायनिक प्रजातियों के बारे में गुणात्मक जानकारी प्रदान की; दूसरी विधि, अमीनो एसिड लिगामेंट्स की उपस्थिति में पूरक जेडएन की इन विट्रो घुलनशीलता में सुधार किया गया था; तीसरी विधि ने पुष्टि की कि अमीनो एसिड द्वारा बेहतर घुलनशीलता आंतों के एपिथेलियम में तेज में सुधार कर सकती है; इसके विपरीत, चौथी विधि अकार्बनिक या कार्बनिक स्रोत से अटलांटिक सामन के लिए Zn की उपलब्धता में अंतर खोजने में विफल रहा । समाप्त करने के लिए, हालांकि वीवो निष्कर्षों के साथ संरेखण में नहीं, इन विट्रो प्रोटोकॉल ने जेडएन उपलब्धता के विभिन्न घटकों को समझने में दिलचस्प अंतर्दृष्टि प्रदान की।

मछली भोजन और मछली के तेल पारंपरिक रूप से अटलांटिक सामन फ़ीड में इस्तेमाल किया गया । हालांकि, इन अवयवों को तेजी से पौधे आधारित सामग्री द्वारा प्रतिस्थापित किया जा रहा है1। फीड कंपोजीशन में उपरोक्त बदलाव के परिणामस्वरूप आहार की कम उपलब्धता हुई है और अटलांटिक सामन फीड, विशेष रूप से जिंक (जेडएन)2में खनिज उपलब्धता में सुधार की आवश्यकता बढ़ गई है। कम उपलब्धता जेडएन स्तर, जेडएन रासायनिक प्रजातियों या/और आहार मैट्रिक्स में मौजूद कुपोषण कारकों में बदलाव का परिणाम हो सकता है । इस परिदृश्य में, सामान्य रूप से 'कार्बनिक स्रोतों' के रूप में विचार किए जाने वाले एडिटिव्स की एक नई सरणी मछली के लिए आहार खनिजों का एक बेहतर उपलब्ध स्रोत होने की क्षमता के साथ उभरी है। इसलिए, खनिजों की उपलब्धता और मछली के लिए उनके स्रोतों को नियंत्रित करने वाले मौलिक रसायन विज्ञान और शरीर विज्ञान को समझना महत्वपूर्ण है। जिंक सभी जीवों के लिए एक आवश्यक अनु ट्रेस तत्व है3. सिग्नलिंग अणु के रूप में जेडएन की भूमिका का वर्णन मछली4में पैरासेलुलर और इंट्रासेलुलर दोनों स्तर पर किया गया है । अटलांटिक सामन में, जेडएन की कमी कंकाल असामान्यताओं और विभिन्न जेडएन धातुविज्ञान5,6की कम गतिविधि से जुड़ी हुई है।
यह अध्ययन विभिन्न रासायनिक और जैविक जटिलता के चार विभिन्न डिब्बों में वर्गीकृत करके जेडएन उपलब्धता को समझने के लिए एक व्यवस्थित दृष्टिकोण का वर्णन करता है। इसमें शामिल तरीकों को चार खंडों में वर्णित किया गया है, जैसा कि चित्र 1 में देखा जा सकता है:(1) एक अटलांटिक सामन फ़ीड के घुलनशील अंश में Zn रासायनिक प्रजातियों का मूल्यांकन एक आकार अपवर्जन क्रोमेटोग्राफी का उपयोग करके-प्रेरक रूप से प्लाज्मा मास स्पेक्ट्रोस्कोपी (एसईसी-आईसीपी-एमएस) विधि7; (2) अटलांटिक सामन फ़ीड में पूरक Zn की विट्रो घुलनशीलता; (3) मूल्यांकन Zn रासायनिक प्रजातियों में विट्रो आंतों मॉडल (RTgutGC)8द्वारा तेज; और (4) अटलांटिक सामन(साल्मो सालार)9में Zn की स्पष्ट उपलब्धता । इसी तरह के प्रोटोकॉल जलकृषि मछली प्रजातियों के लिए पोषण हित के अन्य खनिजों (जैसे, मैंगनीज, सेलेनियम, तांबा) के लिए विकसित किए जा सकते हैं।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1060px;" width="1060">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">0.45 &#181;m syringe filter</td>
			<td style="width:240px;">Sartorius</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:287px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.45 &#956;m membrane filter</td>
			<td style="width:240px;">Pall</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">10 % fetal bovine serum</td>
			<td style="width:240px;">Eurobio</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1282 Compugamma Laboratory Gamma Counter</td>
			<td style="width:240px;">LKB Wallac</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">24 well plates (Falcon, TPP microplates)&#160;</td>
			<td style="width:240px;">Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td style="width:119px;">10048760</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2-aminobicyclo(2.2.1)heptane-2-carboxylic acid</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:119px;">A7902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">75 cm2 cell culture flasks (Falcon, TPP tissue culture flasks)</td>
			<td style="width:240px;">TPP Techno Plastic Products AG&#160;</td>
			<td style="width:119px;">90075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">L-Arginine</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td>A5006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bradford assay kit</td>
			<td style="width:240px;">Bio-Rad</td>
			<td>5000001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:240px;">Eppendorf Centrifuge 5702</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">L-Cysteine</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td>30089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">DL-methionine</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td style="width:119px;">59-51-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">D-methionine</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td>M9375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:415px;">Experimental fish feeds</td>
			<td style="width:240px;">Skretting</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Glycine</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td>410225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Guard column, TSKgel SWxl Type (7&#8239;&#956;m particle size)</td>
			<td style="width:240px;">Tosoh</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-Histidine</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td>53319</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HPLC coupled with a 7500ce ICP-MS</td>
			<td style="width:240px;">Agilent Technologies</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">Hydrochloric acid</td>
			<td style="width:240px;">Emsure ACS, ISO, 37% w/w, Merck</td>
			<td>1.00317</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Knife mill</td>
			<td style="width:240px;">GM 300, Retsch Gmbh</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-15 medium</td>
			<td style="width:240px;">Invitrogen/Gibco</td>
			<td style="width:119px;">&#160;21083027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-methionine&#160;</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:119px;">M9625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">L-Lysine</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td>23128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Methanol</td>
			<td style="width:240px;">LiChrosolv, HPLC grade, Merck&#160;</td>
			<td style="width:119px;">1.06035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Milli-Q water (18.2&#160;M&#937;&#160;cm)&#160;</td>
			<td style="width:240px;">EMD Millipore Corporation</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Myoglobin&#160;</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:119px;">M1882</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">NexION 350D ICP-MS</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pasteur pipette</td>
			<td style="width:240px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">pH meter&#160;</td>
			<td style="width:240px;">inoLab</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate-buffered saline (PBS)</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:119px;">806552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RTgutGC cells&#160;</td>
			<td style="width:240px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Obtained in kind from Professor Dr. Kristin Schirmer, Dept. of Environmental Toxicology, Eawag, Swiss Federal Institute of Aquatic Science and Technology, Switzerland</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">SEC column, TSKgel G3000SWxl</td>
			<td style="width:240px;">Tosoh</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sieve stainless steel (850&#8239;&#956;m - 1.12&#8239;mm)</td>
			<td style="width:240px;">Retsch</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Sodium dodecyl sulphate (SDS)</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td>436143</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Superoxide dismutase&#160;</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:119px;">S7571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Thyroglobulin&#160;</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:119px;">T1001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tricaine methanesulphonate</td>
			<td style="width:240px;">PharmaQ</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tris(hydroxymethyl)aminomethane&#160;</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td>252859</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin in 0.25% in phosphate-buffer saline</td>
			<td style="width:240px;">Biowest</td>
			<td style="width:119px;">L0910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Versene EDTA solution</td>
			<td style="width:240px;">Invitrogen/Gibco</td>
			<td>15040-033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Vitamin B12</td>
			<td style="width:240px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:119px;">V2876</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Zinc chelate of glycine</td>
			<td style="width:240px;">Phytobiotics</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Zinc sulphate</td>
			<td style="width:240px;">Vilomix</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing mineral availability in fish feeds using complementary methods demonstrated with the example of zinc in atlantic salmon

आहार सूक्ष्म खनिजों की उपलब्धता का आकलन मछली प्रजातियों के खनिज पोषण में एक बड़ी चुनौती है। वर्तमान लेख का उद्देश्य अटलांटिक सामन(साल्मो सालार)में जिंक (जेडएन) की उपलब्धता का आकलन करने के लिए विभिन्न तरीकों के संयोजन के लिए एक व्यवस्थित दृष्टिकोण का वर्णन करना है। यह देखते हुए कि कई Zn रासायनिक प्रजातियों एक अटलांटिक सामन फ़ीड में मौजूद हो सकता है, यह परिकल्पना की गई थी कि Zn उपलब्धता फ़ीड में मौजूद Zn रासायनिक प्रजातियों से प्रभावित है । इस प्रकार, इस अध्ययन में, पहला प्रोटोकॉल इस बारे में है कि विभिन्न जेडएन रासायनिक प्रजातियों को फ़ीड से कैसे निकाला जाए और आकार के बहिष्कार क्रोमेटोग्राफी-प्रेरक रूप से प्लाज्मा मास स्पेक्ट्रोस्कोपी (एसईसी-आईसीपी-एमएस) विधि से उनका विश्लेषण किया जाए। इसके बाद, अटलांटिक सामन फीड में आहार जेडएन की घुलनशीलता का मूल्यांकन करने के लिए एक इन विट्रो विधि विकसित की गई थी। तीसरा प्रोटोकॉल इंद्रधनुष ट्राउट आंत सेल लाइन (आरटगुटजीसी) का उपयोग करके मछली आंतों के एपिथेलियल मॉडल में जेडएन रासायनिक प्रजातियों की संरचना को बदलने के प्रभाव का अध्ययन करने की विधि का वर्णन करता है। एक साथ, इन विट्रो तरीकों से निष्कर्षों की तुलना वीवो अध्ययन में अटलांटिक सामन फीड के पूरक जेडएन के अकार्बनिक और कार्बनिक स्रोतों की स्पष्ट उपलब्धता की जांच के साथ की गई थी । परिणामों से पता चला है कि कई Zn रासायनिक प्रजातियों फ़ीड में पाया जा सकता है और एक कार्बनिक Zn स्रोत की दक्षता अमीनो एसिड ligand के लिए chelate Zn इस्तेमाल पर बहुत ज्यादा निर्भर करता है । इन विट्रो विधियों के निष्कर्षों का वीवो अध्ययन में उस परिणाम से कम संबंध था । फिर भी, इस लेख में वर्णित इन विट्रो प्रोटोकॉल ने जेडएन उपलब्धता और मछली फ़ीड में इसके आकलन के बारे में महत्वपूर्ण जानकारी प्रदान की।

एसईसी-आईसीपी-एमएस विधि का उपयोग करके अटलांटिक सामन फ़ीड के घुलनशील अंश में जेडएन रासायनिक प्रजातियों का मूल्यांकन एसईसी-आईसीपी-एमएस विधि अटलांटिक सामन फ़ीड के घुलनशील अंश में पाई जाने वाली जेडएन रासायनिक प्रजातियों के बारे में डेटा प्रदान करती है। चित्रा 4 घुलनशील अंश में पाए जाने वाले जेडएन के क्रोमेग्राफिक प्रोफाइल को दिखाता है। यह क्रोमेटोग्राम एसईसी-आईसीपी-एमएस विधि का उपयोग करके प्राप्त किया गया था। अटलांटिक सामन फ़ीड के घुलनशील अंशों में पांच जेड युक्त चोटियां पाई गईं । प्रत्येक चोटी का एक अलग आणविक वजन होता है; पीक वन (~ 600 केडीए), पीक टू और पीक थ्री (32 से 17 केडीए), पीक फोर (17 से 1.36 केडीए) और पीक फाइव (> 1.36 केडीए)। पीक फोर सबसे प्रचुर मात्रा में था, इसके बाद क्रमशः पीक दो, तीन, पांच और एक । घुलनशील अंश में पाई जाने वाली जेडएन रासायनिक प्रजातियों में विभिन्न स्रोत हो सकते हैं क्योंकि उपयोग की जाने वाली फ़ीड में समुद्री आधारित और पौधे आधारित सामग्री, और पूरक रूप (यानी, ज़ेन सल्फेट) दोनों होते हैं। जेडएन रासायनिक प्रजातियों की आणविक वजन सीमा ने सुझाव दिया कि ये यौगिक धातुप्रक्रोटीन हो सकते हैं ।
अटलांटिक सामन फ़ीड में पूरक Zn की विट्रो घुलनशीलता में अमीनो एसिड की उपस्थिति में पूरक 65जेडएन की घुलनशीलता बढ़ गई। सभी परीक्षण अमीनो एसिड पूरक 65Zn. मेथियोनिन, ग्लाइसिन, सिस्टीन, हिस्टिडीन, और लिसिन सुधार 65Zn घुलनशीलता की घुलनशीलता में वृद्धि हुई; हिस्टिडीन और लिसाइन(चित्रा 5)के साथ उच्च घुलनशीलता पाई गई।
एक इन विट्रो आंतों के मॉडल (RTgutGC) का उपयोग कर Zn प्रजातियों का मूल्यांकन तेज आरटगुटजीसी कोशिकाओं में एपिकल जिंक तेज 2 एमएम सांद्रता पर एल-मेट या डीएल-मेट की उपस्थिति से काफी प्रभावित थे। इसके अलावा, आरसीएच(चित्र 6)के साथ अनुपचारित कोशिकाओं की तुलना में आरसीएच (एक अमीनो एसिड परिवहन प्रणाली अवरोधक) की उपस्थिति से आरटगुटजीसी कोशिकाओं में जेडएन तेज पर मेथियोनिन का प्रभाव नकारात्मक रूप से प्रभावित हुआ।
अटलांटिक सामन(साल्मो सालार)में आहार Zn की स्पष्ट उपलब्धता अटलांटिक सामन के लिए व्यावहारिक फ़ीड में, स्पष्ट जेडएन उपलब्धता एक अकार्बनिक स्रोत (जेडएन सल्फेट) या एक कार्बनिक स्रोत (ग्लाइसिन के जेडएन चेलेट) के साथ पूरक होने पर समान थी। अटलांटिक सामन में जेडएन (%, एन = 3) की स्पष्ट उपलब्धता के लिए अनुमानित मूल्य 12% ± 31% थे, जब एक अकार्बनिक स्रोत (जेडएन सल्फेट) के साथ पूरक होते हैं और 31% ± 3% जब एक कार्बनिक स्रोत (ग्लाइसिन का जेडएन चेलेट) पूरक होता है।
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59862/59862fig1.jpg"> चित्र 1:पूरक तरीकों का उपयोग करके खनिज उपलब्धता का आकलन करने के लिए व्यवस्थित दृष्टिकोण कासारांश। इस दृष्टिकोण का उपयोग अटलांटिक सामन में जिंक की उपलब्धता का अध्ययन करने के लिए किया गया था, जिसमें जेडएन स्पेसिवेशन, आंतों के वातावरण में जेडएन घुलनशीलता, आंतों की कोशिकाओं द्वारा जेडएन तेज और जेडएन स्पष्ट उपलब्धता शामिल थी। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59862/59862fig1large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59862/59862fig2.jpg"> चित्रा 2:फ़ीड नमूने से Zn निष्कर्षण के लिए प्रक्रिया का सारांश। जिंक हल्के निष्कर्षण स्थितियों का उपयोग कर एक फ़ीड नमूना से निकाला जाता है। निष्कर्षण Zn नमूना विश्लेषण के बाद किया जाता है। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59862/59862fig2large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59862/59862fig3.jpg"> चित्र 3:RTgutGC कोशिकाओं का एक उदाहरण 1 घंटे (बाएं) और 1 सप्ताह (दाएं) सेल संस्कृति फ्लास्क में सीडिंग के बाद । <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59862/59862fig3large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59862/59862fig4.jpg"> चित्रा 4:एक क्रोमेटोग्राम अटलांटिक सामन फ़ीड के घुलनशील अंश से Zn युक्त चोटियों दिखा रहा है और एसईसी-आईसीपी-एमएस द्वारा विश्लेषण किया । तीन प्रतिकृति नीले, लाल और काले रंग की रेखाओं की विशेषता है। एक आणविक वजन अंशांकन थायरोग्लोबुलिन (६६० केडीए, निगरानी १२७मैं), Zn/Cu superoxide dismutase (३२ केडीए, निगरानी ६६Zn), myoglobin (17 केडीए, निगरानी ५७Fe), विटामिन बी 12 (१.३६ केडीए, निगरानी ५९कंपनी) का उपयोग किया गया था; पीक 1 (P1): ~ 600 केडीए, प्रतिधारण समय (आरटी) 8.2 मिनट; पीक 2 +3 (P2+3): 32 से 17 केडीए, आरटी 14.2 + 15.3 मिनट; पीक 4 (P4): 17 से 1.36 केडीए, आरटी 16.3 मिनट; पीक 5 (P5): > 1.36 केडीए, आरटी 23.2 मिनट. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59862/59862fig4large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59862/59862fig5.jpg"> चित्रा 5:अटलांटिक सामन फ़ीड में पूरक Zn की इन विट्रो घुलनशीलता पर अमीनो एसिड का प्रभाव। डेटा को डीडी (एन = 3) ± मतलब के रूप में प्रस्तुत किया जाता है। डेटा एक तरह से ANOVA के माध्यम से विश्लेषण किया गया, है Dunnet कई तुलना परीक्षण के बाद, नियंत्रण समूह (कोई ए. ए.) के साथ प्रत्येक ए. ए. समूह के मतलब की तुलना । तारांकन ANOVA (पी मूल्यों < ०.०५ (*), < ०.०१ (**), < ०.००१ (***) और < ०.०००१ (*)) के महत्व के स्तर को दर्शाता है । <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59862/59862fig5large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59862/59862fig6.jpg"> चित्रा 6:मेथिओनिन और एक अमीनो एसिड परिवहन अवरोधक (2-अमीनोबिकीक्लो [2.2.1] हेप्टेन-2-कार्बोक्सिलिक एसिड, बीसीएच, 10 mM) का प्रभाव। डेटा को डीडी (एन = 3) ± मतलब के रूप में प्रस्तुत किया जाता है। डेटा दो तरह से ANOVA के माध्यम से विश्लेषण किया गया, पी < ०.०५ महत्व के स्तर के साथ Tukey कई तुलना परीक्षण के बाद । समूहों के बीच तदर्थ मतभेदों को सलाखों के ऊपर सुपरस्क्रिप्ट पत्र के रूप में दर्शाया जाता है; विभिन्न सुपरस्क्रिप्ट वाले बार सांख्यिकीय रूप से अलग हैं (पी < 0.05)। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59862/59862fig6large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।</a>
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td>एचपीएलसी सेटिंग्स</td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>स्तम्भ</td>
			<td>एसईसी कॉलम (30 सेमी x 7.8 मिमी, 5 माइक्रोन कण आकार) + गार्ड कॉलम (7 माइक्रोन कण आकार)</td>
		</tr>
<tr>
<td>अंशांकन रेंज</td>
			<td>1.0 × 104 - 5.0 × 105 डीए</td>
		</tr>
<tr>
<td>मोबाइल चरण</td>
			<td>50 mM Tris-HCl + 3% MeOH (पीएच 7.5)</td>
		</tr>
<tr>
<td>प्रवाह दर</td>
			<td>0.7 एमएल न्यूनतम−1
</td>
		</tr>
<tr>
<td>इंजेक्शन की मात्रा</td>
			<td>50 माइक्रोन</td>
		</tr>
<tr>
<td>आईसीपी-एमएस सेटिंग्स</td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>फॉरवर्ड पावर</td>
			<td>1550 डब्ल्यू</td>
		</tr>
<tr>
<td>प्लाज्मा गैस प्रवाह</td>
			<td>15.0 एल न्यूनतम−1
</td>
		</tr>
<tr>
<td>कैरियर गैस प्रवाह</td>
			<td>0.86 एल मिनट−1
</td>
		</tr>
<tr>
<td>मेकअप गैस प्रवाह</td>
			<td>0.34 एल न्यूनतम−1
</td>
		</tr>
<tr>
<td>बस समय</td>
			<td>0.1 एस प्रति आइसोटोप</td>
		</tr>
<tr>
<td>आइसोटोप की निगरानी</td>
			<td>
127 I, 66Zn, 59कं, 57Fe</td>
		</tr>
</tbody></table>तालिका 1. एचपीएलसी और आईसीपी-एमएस के लिए इंस्ट्रूमेंट सेटिंग्स का अवलोकन।
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td>रासायनिक संरचना (एमएमए)</td>
			<td>L15/ex</td>
			<td>प्रायोगिक माध्यम (L15/FW)</td>
		</tr>
<tr>
<td>सोडियम नाइट्रेट</td>
			<td>155</td>
			<td>155</td>
		</tr>
<tr>
<td>पोटेशियम नाइट्रेट</td>
			<td>6.2</td>
			<td>6.2</td>
		</tr>
<tr>
<td>मैग्नीशियम सल्फेट</td>
			<td>3.8</td>
			<td>19.5</td>
		</tr>
<tr>
<td>कैल्शियम नाइट्रेट</td>
			<td>1.5</td>
			<td>5.4</td>
		</tr>
<tr>
<td>हेपेस</td>
			<td>5</td>
			<td>5</td>
		</tr>
<tr>
<td>मैग्नीशियम क्लोराइड</td>
			<td>-</td>
			<td>15</td>
		</tr>
<tr>
<td>सोडियम पायरुवेट</td>
			<td>5.7</td>
			<td>5.7</td>
		</tr>
<tr>
<td>गैलेक्टोस</td>
			<td>5.7</td>
			<td>5.7</td>
		</tr>
<tr>
<td>पीएच</td>
			<td>7.1</td>
			<td>7.4</td>
		</tr>
<tr>
<td>आयनिक ताकत</td>
			<td>178</td>
			<td>258</td>
		</tr>
<tr height="36">
<td>आयनिक संरचना (एमएन)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>कैल्शियम, Ca2 + *
</td>
			<td>1.6 ± 0.1</td>
			<td>5.3 ± 0.2</td>
		</tr>
<tr>
<td>मैग्नीशियम, एमजी2 + *
</td>
			<td>3.9 ± 0.3</td>
			<td>32.5 ± 0.7</td>
		</tr>
<tr>
<td>पोटेशियम, कश्मीर+ *
</td>
			<td>8.2 ± 1.2</td>
			<td>8.6 ± 1.1</td>
		</tr>
<tr>
<td>सोडियम, ना+ *
</td>
			<td>160 ± 3</td>
			<td>157 ± 2</td>
		</tr>
<tr>
<td>नाइट्रेट, कोई3- **
</td>
			<td>164</td>
			<td>172.4</td>
		</tr>
<tr>
<td>सल्फेट, एसओ4- **
</td>
			<td>3.8</td>
			<td>18.7</td>
		</tr>
<tr>
<td>क्लोराइड, सीएल- **
</td>
			<td>1.5</td>
			<td>31.5</td>
		</tr>
</tbody></table>तालिका 2. प्रायोगिक मीडिया की रासायनिक और आयनिक संरचना का परीक्षण किया गया।

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Assessing Mineral Availability in Fish Feeds using Complementary Methods Demonstrated with the Example of Zinc in Atlantic Salmon

इस लेख में विस्तार से अटलांटिक सामन में सूक्ष्म खनिज उपलब्धता का आकलन करने के लिए एक व्यवस्थित दृष्टिकोण बताते हैं । पद्धति में बढ़ती जैविक जटिलता के साथ उपकरण और मॉडल शामिल हैं: (1) रासायनिक विशिष्टता विश्लेषण, (2) इन विट्रो घुलनशीलता, (3) सेल लाइनों में तेज अध्ययन, और (4) वीवो मछली अध्ययन में।

अटलांटिक सामन में जिंक के उदाहरण के साथ प्रदर्शित पूरक तरीकों का उपयोग करके मछली फ़ीड में खनिज उपलब्धता का आकलन

Assessing the availability of dietary micro-minerals is a major challenge in mineral nutrition of fish species. The present article aims to describe a ...

हमने विभिन्न रासायनिक रूपों या स्रोतों के साथ जिंक सेलेनियम जैसी सूक्ष्म धातुओं की घुलनशीलता की उपलब्धता का अध्ययन किया, जैसा कि हम इसे फीड कंपोजीशन बदलने के संदर्भ में कहते हैं । एक रेडियोन्यूक्लाइड सुइट में, लगभग 0.2 ग्राम जमीन अटलांटिक सामन फ़ीड नमूनों का वजन करें, और इसे पांच मिलीलीटर मात्रा नमूना ट्यूब में ज्ञात विशिष्ट गतिविधि के जिंक रेडियोट्रेसर के साथ मिलाएं। बफर के छह अन्य aliquots तैयार करें और पांच मिलीमोलर की अंतिम मोलर एकाग्रता तक पहुंचने के लिए प्रत्येक के लिए यहां दिखाए गए अमीनो एसिड में से एक जोड़ें।नमूना खिलाने के लिए मीठे पानी आंतों के चमकदार बफर जोड़ें। इसके बाद, अमीनो एसिड युक्त बफर एलिकोट्स में मीठे पानी की आंतों के चमकदार बफर को जोड़ें। ट्यूबों को बंद करें और उन्हें 30 मिनट के लिए 25 आरपीएम पर एक रोटरी स्पिनर पर स्पिन करें।फिर, घुलनशील और गैर घुलनशील अंशों को अलग करने के लिए 10 मिनट के लिए 1, 157 x g पर अपकेंद्रित्र। घुलनशील और गैर घुलनशील अंशों में जिंक रेडियोट्रेसर के प्रति मिनट की गिनती को मापने के लिए गामा टेलर का उपयोग करें। EDTA समाधान के एक मिलीलीटर के साथ दो बार इंद्रधनुष ट्राउट व्युत्पन्न आंतों की कोशिका रेखा को धोएं, और एक पिपेट का उपयोग करके प्रत्येक धोने के बाद समाधान को बाहर निकालें।0.25% ट्राइप्सिन समाधान के साथ धोया कोशिकाओं का इलाज करें। धीरे-धीरे फ्लास्क को तीव्र कोणों पर दो मिनट के लिए घुमाएं। इसके बाद ट्राइप्सिन को बेअसर करने के लिए 5% एफबीएस युक्त एल-15 मीडियम के 10 मिलीलीटर जोड़ें ।एक बाँझ पिपेट का उपयोग करना, परिणामस्वरूप सेल निलंबन को शंकुके नीचे अपकेंद्रित्र ट्यूब में डिकंट करें। तीन मिनट के लिए 130 x G पर सेंट्रलाइज। फिर एक हीमोसाइटोमीटर का उपयोग करके, मैनुअल गिनती द्वारा काटी गई कोशिकाओं के घनत्व का निर्धारण करें।24 अच्छी तरह से प्लेटों पर कोशिकाओं बीज ५०, 000 कोशिकाओं प्रति मिलीलीटर की एक कोशिका घनत्व पर, प्रति अच्छी तरह से, और प्रयोगों से पहले ४८ घंटे के लिए एक सामांय वातावरण के तहत 19 डिग्री सेल्सियस पर प्लेटों इनक्यूबेट । मछली को 11 दिनों तक खिलाने और उन्हें इच्छामृत्यु देने के बाद, वेंट्रल फिन से गुदा में अलग करके मछली के मल का एक पूल्ड नमूना एकत्र करें और इसे एक प्लेट पर रखें। प्लेट से मल को 50 मिलीलीटर शंकु नली में स्थानांतरित करने के लिए एक स्पैटुला का उपयोग करें।तुरंत नमूनों को 20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें। इस अध्ययन में कई मानार्थ तरीकों का इस्तेमाल करते हुए मछली के चारे की खनिज उपलब्धता का आकलन किया जाता है । आकार-अपवर्जन क्रोमेटोग्राफी के माध्यम से अटलांटिक सामन फ़ीड का प्रतिनिधि विश्लेषण प्रेरक-युग्मित प्लाज्मा मास स्पेक्ट्रोमेट्री विधि, घुलनशील अंश में पाई जाने वाली जस्ता रासायनिक प्रजातियों के बारे में डेटा प्रदान करता है।इस अंश में पांच जिंक युक्त चोटियों को देखा जा सकता है, प्रत्येक एक अलग आणविक वजन के साथ। घुलनशील अंश में पाई जाने वाली जिंक रासायनिक प्रजातियों में विभिन्न स्रोत हो सकते हैं, क्योंकि उपयोग की जाने वाली फ़ीड में समुद्री आधारित और पौधे आधारित दोनों तत्व होते हैं, और पूरक होते हैं। इन प्रजातियों की आणविक वजन सीमा का सुझाव है कि ये यौगिक धातुलोप्रोटीन हो सकते हैं।जबकि पूरक जिंक 65 की घुलनशीलता सभी परीक्षण अमीनो एसिड की उपस्थिति को बढ़ाती है, हिस्टिडीन और लिसाइन के साथ उच्च घुलनशीलता पाई जाती है। आर्टेका जीसी कोशिकाओं में एपिकल जिंक तेज दो मिलीमोलर सांद्रता में एल-मेट या डीएल-मेट की उपस्थिति से काफी प्रभावित होता है। इसके अलावा, जिंक तेज पर मेथियोनिन का प्रभाव बीसीएच की उपस्थिति से नकारात्मक रूप से प्रभावित होता है।इस प्रोटोकॉल का मुख्य लाभ यह है कि जब खनिज उपलब्धता का अध्ययन करने की बात आती है तो हमने दृश्य, विश्लेषणात्मक और इनविवो अध्ययनों में विभिन्न दृष्टिकोणों को संयोजित करने की कोशिश की और एक-दूसरे की तुलना की और उनकी तारीफ की ।

Research

JoVE Journal

Biology

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