Name: establishment of gastric cancer patient-derived xenograft models and primary cell lines
Uploaded: 2019-07-19T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af Kinas National Natural Science Foundation (81572392); Kinas nationale centrale forsknings-og udviklings program (2016YFC1201704); Tip-Top videnskabelige og tekniske innovative unge talenter af Guangdong særlige støtte program (2016TQ03R614).
Vi takker specifikt Guangzhou Sagene Biotech Co., Ltd. for støtte i udarbejdelsen af tallene.

Denne humane undersøgelse blev godkendt af den institutionelle etik Review Board of Sun Yat-sen University Cancer Center (SYSUCC, Guangzhou, Kina). Dyret undersøgelse blev godkendt af den institutionelle Animal Care og brug Udvalget af Sun Yat-sen University. Bemærk: alle eksperimenter blev udført i overensstemmelse med de relevante love og institutionelle retningslinjer, herunder retningslinjerne for beskyttelse af erhvervsmæssig eksponering mod blodbårne patogener.
1. forberedelse af pr...

<ol>
	<li>Bray, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+cancer+statistics+2018:+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries.">Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> Ca-a Cancer Journal for Clinicians. 68 (6), 394-424 (2018).</li><li>Sugano, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+gastric+cancer+in+Asia.">Screening of gastric cancer in Asia.</a> Best Practive &amp; Research in Clinical Gastroenterology. 29 (6), 895-905 (2015).</li><li>Nikfarjam, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Demographic+survey+of+four+thousand+patients+with+10+common+cancers+in+North+Eastern+Iran+over+the+past+three+decades.">Demographic survey of four thousand patients with 10 common cancers in North Eastern Iran over the past three decades.</a> Asian Pacific Journal of Cancer Prevention. 15 (23), 10193-10198 (2014).</li><li>Coccolini, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+gastric+cancer:+What+we+know+and+what+we+still+have+to+learn.">Advanced gastric cancer: What we know and what we still have to learn.</a> World Journal of Gastroenterology. 22 (3), 1139-1159 (2016).</li><li>Goetze, O. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multimodal+treatment+in+locally+advanced+gastric+cancer.">Multimodal treatment in locally advanced gastric cancer.</a> Updates in Surgery. 70 (2), 173-179 (2018).</li><li>Graziosi, L., Marino, E., Donini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multimodal+Treatment+of+Locally+Advanced+Gastric+Cancer:+Will+the+West+Meet+the+East?.">Multimodal Treatment of Locally Advanced Gastric Cancer: Will the West Meet the East?.</a> Annals of Surgical Oncology. 26 (3), 918 (2019).</li><li>Choi, Y. Y., Noh, S. H., Cheong, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+Gastric+Cancer+Treatment:+From+the+Golden+Age+of+Surgery+to+an+Era+of+Precision+Medicine.">Evolution of Gastric Cancer Treatment: From the Golden Age of Surgery to an Era of Precision Medicine.</a> Yonsei Medical Journal. 56 (5), 1177-1185 (2015).</li><li>Zhang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TCGA+divides+gastric+cancer+into+four+molecular+subtypes:+implications+for+individualized+therapeutics.">TCGA divides gastric cancer into four molecular subtypes: implications for individualized therapeutics.</a> Chinese Journal of Cancer Research. 33 (10), 469-470 (2014).</li><li>Tirino, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What's+New+in+Gastric+Cancer:+The+Therapeutic+Implications+of+Molecular+Classifications+and+Future+Perspectives.">What's New in Gastric Cancer: The Therapeutic Implications of Molecular Classifications and Future Perspectives.</a> International Journal of Molecular Sciences. 19 (9), (2018).</li><li>Roschke, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Karyotypic+complexity+of+the+NCI-60+drug-screening+panel.">Karyotypic complexity of the NCI-60 drug-screening panel.</a> Cancer Research. 63 (24), 8634-8647 (2003).</li><li>Wilding, J. L., Bodmer, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+cell+lines+for+drug+discovery+and+development.">Cancer cell lines for drug discovery and development.</a> Cancer Research. 74 (9), 2377-2384 (2014).</li><li>Siolas, D., Hannon, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+tumor+xenografts:+transforming+clinical+samples+into+mouse+models.">Patient-derived tumor xenografts: transforming clinical samples into mouse models.</a> Cancer Research. 73 (17), 5315-5319 (2013).</li><li>Xu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+xenograft+mouse+models:+A+high+fidelity+tool+for+individualized+medicine.">Patient-derived xenograft mouse models: A high fidelity tool for individualized medicine.</a> Oncology Letters. 17 (1), 3-10 (2019).</li><li>Lai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+status+and+perspectives+of+patient-derived+xenograft+models+in+cancer+research.">Current status and perspectives of patient-derived xenograft models in cancer research.</a> Journal OF Hematology &amp; Oncology. 10 (1), 106 (2017).</li><li>Kawaguchi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+Update+of+Patient-Derived+Xenograft+Model+for+Translational+Breast+Cancer+Research.">Current Update of Patient-Derived Xenograft Model for Translational Breast Cancer Research.</a> Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 22 (2), 131-139 (2017).</li><li>Cassidy, J. W., Caldas, C., Bruna, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintaining+Tumor+Heterogeneity+in+Patient-Derived+Tumor+Xenografts.">Maintaining Tumor Heterogeneity in Patient-Derived Tumor Xenografts.</a> Cancer Research. 75 (15), 2963-2968 (2015).</li><li>Liu, X., Meltzer, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gastric+Cancer+in+the+Era+of+Precision+Medicine.">Gastric Cancer in the Era of Precision Medicine.</a> Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 3 (3), 348-358 (2017).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Human cancer growth and therapy in immunodeficient mouse models. (7), 694-708 (2014).</li><li>McDermott, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+human+cord+blood+engraftment+between+immunocompromised+mouse+strains.">Comparison of human cord blood engraftment between immunocompromised mouse strains.</a> Blood. 116 (2), 193-200 (2010).</li><li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID/gamma+(c)+(null)+mouse:+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells.">NOD/SCID/gamma (c) (null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li><li>Wege, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-transplantation+of+human+hematopoietic+stem+cells+and+human+breast+cancer+cells+in+NSG+mice:+a+novel+approach+to+generate+tumor+cell+specific+human+antibodies.">Co-transplantation of human hematopoietic stem cells and human breast cancer cells in NSG mice: a novel approach to generate tumor cell specific human antibodies.</a> MAbs. 6 (4), 968-977 (2014).</li></ol>

Gastrisk cancer er en aggressiv sygdom med begrænsede terapeutiske muligheder; således, modeller af gastrisk cancer er blevet en kritisk ressource til at muliggøre funktionelle forskningsundersøgelser med direkte oversættelse til klinikken4,8,17. Her har vi beskrevet metoderne og protokollen til oprettelse af gastrisk Cancer PDX-modeller og primære cellelinjer. Vigtigere, både morfologiske og biologiske egenskaber af gast...

Gastrisk cancer er den femte mest almindeligt forekommende kræft verden over og den tredje hyppigste årsag til kræftdødsfald. I 2018, over 1.000.000 nye tilfælde af gastrisk Cancer blev diagnosticeret globalt, og en anslået 783.000 mennesker blev dræbt af denne sygdom1. Forekomsten og dødeligheden af gastrisk cancer er fortsat meget høj i de nordøstlige asiatiske lande2,3. Trods betydelige fremskridt inden for kræftbehandling, er prognosen for patienter med fremskreden gastrisk Cancer stadig dårlig, med en femårig overlevelsesrate på ca. 25%4,5,6, 7,. Der er således et presserende behov for udvikling af nye terapeutiske strategier for gastrisk Cancer
Behandling af gastrisk cancer er udfordrende på grund af sin høje heterogenitet8,9. Således er spørgsmålet om, hvordan man løser udfordringerne ved tumor heterogenitet at realisere Precision medicin er centralt for kræftforskning. In vitro og in vivo modeller spiller afgørende roller i belyse de heterogene mekanismer og biologi af gastrisk cancer. Men, selv om der er talrige gastrisk Cancer cellelinjer og mange konventionelle transgene musemodeller for præklinisk forskning, ulemperne ved disse modeller begrænse deres applikationer10. Fordi egenskaberne ved disse modeller har ændret sig i kulturen, de ikke længere model tumor heterogenitet, og deres reaktioner har ikke været i stand til at forudsige svarene i mennesker11. Disse spørgsmål alvorligt begrænse muligheden for at identificere undergrupper af kræftpatienter, der vil reagere på målrettede lægemidler. Den kortsigtede kultur af primære tumorer giver en relativt hurtig og personlig måde at undersøge anticancer farmakologiske egenskaber, som sandsynligvis vil være kendetegnende for personlig kræftbehandling.
Patient afledte xenografter (pdxs) foretrækkes som en alternativ præklinisk model for lægemiddel respons profilering12. Derudover tilbyder PDX-modeller et effektivt værktøj til at studere initiering og progression af kræft13,14. PDX modeller bevarer den histologiske udseende af kræftceller, bevarer intratumoral heterogenitet, og bedre afspejle de relevante menneskelige komponenter i Tumorens mikromiljø15,16. Men begrænsningen af de udbredte PDX modeller er den lave succesrate for etablering og serielt formeringsmateriale menneskelige solide tumorer. I denne undersøgelse beskrives anstændigt vellykkede metoder til oprettelse af PDX-modeller og primære cellelinjer.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>40 &#956;m Cell Strainer</td>
			<td>Biologix, Shandong, China</td>
			<td>15-1040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biological Microscope</td>
			<td>OLYMPUS, Tokyo, Japan</td>
			<td>OLYMPUS CKX41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf, Mittelsachsen, Germany.</td>
			<td>5427R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Incubator</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA</td>
			<td>HERACELL 150i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS</td>
			<td>Basalmedia Technology, Shanghai, China</td>
			<td>L40601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electro-Thermostatic Water Cabinet</td>
			<td>Yiheng, Shanghai, China</td>
			<td>DK-8AXX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Wisent Biotechnology, Vancouver, Canada</td>
			<td>86150040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter, China</td>
			<td>CN2L9100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Live Tissue Kit Cryo Kit</td>
			<td>Celliver Biotechnology, Shanghai, China</td>
			<td>LT2601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Live Tissue Thaw Kit</td>
			<td>Celliver Biotechnology, Shanghai, China</td>
			<td>LT2602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NSG</td>
			<td>Biocytogen, Beijing, China</td>
			<td>B-CM-002-4-5W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicilin&#38;streptomycin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red blood cell lysis buffer</td>
			<td>Solarbio, Beijing, China</td>
			<td>R1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640 medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA</td>
			<td>8118367</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Suture Needles with Thread</td>
			<td>LingQiao, Ningbo, China</td>
			<td>3/8 arc 4&#215;10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-processed molds and auxiliary blades</td>
			<td>Celliver Biotechnology, Shanghai, China</td>
			<td>LT2603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA</td>
			<td>2003779</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Type 1 collagenase</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA</td>
			<td>17100017</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of gastric cancer patient-derived xenograft models and primary cell lines

Brugen af prækliniske modeller til at fremme vores forståelse af tumor biologi og undersøge effektiviteten af terapeutiske agenter er nøglen til kræftforskning. Selv om der er mange etablerede gastrisk Cancer cellelinjer og mange konventionelle transgene musemodeller for præklinisk forskning, ulemperne ved disse in vitro og in vivo modeller begrænse deres applikationer. Fordi egenskaberne ved disse modeller har ændret sig i kulturen, de ikke længere model tumor heterogenitet, og deres reaktioner har ikke været i stand til at forudsige reaktioner hos mennesker. Således, alternative modeller, der bedre repræsenterer tumor heterogenitet er under udvikling. Patient afledte xenograft (PDX) modeller bevarer det histologiske udseende af kræftceller, bevarer intratumoral heterogenitet og bedre afspejler de relevante menneskelige komponenter i tumor mikromiljøet. Men, det tager normalt 4-8 måneder at udvikle en PDX-model, som er længere end den forventede overlevelse af mange gastriske patienter. Af denne grund kan etableringen af primære Cancer cellelinjer være en effektiv supplerende metode til lægemiddel respons undersøgelser. Den nuværende protokol beskriver metoder til at etablere PDX-modeller og primære Cancer cellelinjer fra kirurgiske gastriske kræft prøver. Disse metoder giver et nyttigt redskab til narkotika udvikling og kræft biologi forskning.

Her, tumor væv fra en operation blev bevaret i stamopløsning indtil næste trin. Inden for 4 timer, tumor væv blev skåret i små stykker og implanteret i dorsale flankerne af NSG mus, der var blevet bedøvet ved hjælp af isoflurane-gennemblødt bomuld. Tumorer, der er større end 1 cm3 , kan gensendes til implantation i nye mus (figur 1) eller skæres omhyggeligt og opbevares i flydende nitrogen efter protokollen. I denne undersøgelse, den første generation tumorer voksede ...

Watch this Scientific Journal Video about Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines at JoVE.com

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Den nuværende protokol beskriver metoder til at etablere patient afledte xenograft (PDX) modeller og primære Cancer cellelinjer fra kirurgiske gastriske kræft prøver. Metoderne giver et nyttigt værktøj til narkotika udvikling og kræft biologi forskning.

Etablering af gastrisk Cancer patient afledte xenograft-modeller og primære cellelinjer

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Patient-afledte Xenograft Modeller og primære cellelinjer bliver en integreret del af udviklingen af lægemidler og initiering og progression af tumorbiologi forskning. Patient-afledte Xenograft Modeller bevare histologisk udseende af kræftceller, bevare intratumoral heterogenitet, og bedre afspejler de relevante menneskelige komponenter i tumor mikromiljø. Hans modeller er for mere præcise repræsentationer af kræft hos mennesker derefter traditionelle kræft cellelinjer og har potentiale til at forbedre den prækliniske evaluering af nye anticancer behandlinger.Desuden kan disse modeller være nyttige i at sammenligne molekylære egenskaber eller tumor signaturer mellem forskellige undergrupper af kræftpatienter. NSG-mus anbefales som immundefekt musemodel. På grund af musenes alvorlige immundefekt skal steriliteten opretholdes i alle forsøg.Under sterile forhold, bruge kraftkker og saks til omhyggeligt dissekere tumorvæv og trimme dem i flere små stykker. Efter bedøvelse af musen, bruge sterile saks til at gøre en en centimeter snit på begge dorsale flanker. Brug sterile kraftforladte til at forstyrre det subkutane væv.Derefter klip et stykke af tumorvævet, og læg det i det dybe sted. Luk implantatområdet ved subkutan sutur med kirurgiske suturnåle. Steriliser såret med jod.Efter dette, forsigtigt placere mus i et tomt bur og samtidig opretholde sternal recumbency. Vær meget opmærksom på musene, da de skal vågne op og begynde at gå efter cirka tre til fire minutter. Placer mus, der gennemgik kirurgi i et nyt bur adskilt fra dem, der ikke er udsat for kirurgi.Vurdere tumor størrelse ved palpering af implantationsstedet og måle dem med en Vernier caliper to gange om ugen. Efter aflive musene, bruge sterile stænde og saks til langsomt at isolere tumor fra musene. Vask tumorvæv i DPBS i en 10 centimeter skål.Du scener og saks til at dissekere og fjerne nekrotiske områder, fedtvæv, blodpropper og bindevæv. Dernæst skal du bruge en støbeform til at skære tumorvæv til en maksimal tykkelse på en millimeter. Vask tumor skiver med DPBS i en 10 centimeter skål.For at begynde vitrificeringsprocessen skal du bruge vicesser til at overføre skiverne til rør V1 og inkubere ved fire grader Celsius i fire minutter. Rul og inverter røret kortvarigt og inkuberes ved fire grader Celsius i yderligere fire minutter. Dernæst hældes V1 opløsning og skiver i en 10 centimeter skål og bruge kraftbefædre til at overføre skiverne i rør V2. Inkubere ved fire grader Celsius i fire minutter.Rul og inverter røret kortvarigt og inkuberes ved fire grader Celsius i yderligere fire minutter. Derefter hældes V2-opløsningen og skiverne i en 10 centimeter skål. Overfør skiverne i rør V3 og inkuberes ved fire grader Celsius i fem minutter.Rul og inverter røret kortvarigt og inkuberes ved fire grader Celsius i yderligere fem minutter. Sørg for, at alle skiverne synker til bunden af røret. Hvis flere skiver forbliver flydende, rulles og invertere røret kort og inkuberes ved fire grader Celsius, indtil alle skiverne synker helt.Hæld derefter V3-opløsningen og skiverne i en 10 centimeter skål. Skær vævsholderne i den rette længde og læg dem på steril gaze. Overfør skiverne over på holderne.Wrap holderne med gaze. Brug knpr kan sættes i flydende nitrogen, og de inkuberes i fem minutter. Derefter skal du mærke de kryogene hætteglas med vævsinformationen.Overfør holderne med vævsskiver i hætteglassene, som vil blive opbevaret i flydende nitrogen. Første, resect gastrisk kræft prøver fra resected prøver eller høstet PDX væv. Placer væv på is og overføre dem til en 10 centimeter steril kultur parabol.Brug scener og saks til at fjerne nekrotiske områder, fedtvæv, blodpropper og bindevæv. Vask tumorvævet én gang med DPBS indeholdende penicillin og streptomycin i en 10 centimeter skål. Dernæst skæres tumoren i stykker på låget af skålen.Den maksimale tykkelse af hvert stykke skal være en millimeter. Stykkerne overføres til et centrifugerør på 50 milliliter, der indeholder syv milliliter af en type 1-kollagenase, og trypsinopløsning. Vortex blandingen kort.Inkubere i et vandbad ved 37 grader Celsius i 30 til 40 minutter, og sørg for at vortex blandingen hvert femte minut. Efter dette, tilsæt en lige volumen af RPMI-1640 medium suppleret med 10% FBS og vortex blandingen grundigt. Denne blanding overføres til et nyt centrifugerør på 50 milliliter ved langsom filtrering gennem et 40 mikroliterfilter.Centrifuge filtraterne med en hastighed mellem 113 og 163 gange g i fem til syv minutter ved stuetemperatur. Fjern forsigtigt denne supernatant. Vask pellet med fem milliliter PBS og forsigtigt fjerne supernatant.Hvis pellet er rød, det indeholder erythrocytter. Forsigtigt resuspend pellet med 500 mikroliter af røde blodlegemer lysis buffer og inkuberes ved stuetemperatur i fem minutter. Derefter tilsættes fem milliliter PBS.Centrifuge med en hastighed mellem 113 og 163 gange g i fem til syv minutter ved stuetemperatur. Fjern forsigtigt supernatanten og opsprænret pellet med kultur medium og overføre blandingen i en steril 10 centimeter skål. Inkuber kulturen ved 37 grader Celsius med 5% kuldioxid, og sørg for at erstatte mediet med serumholdigt medium hver anden til tredje dag.I denne undersøgelse, gastrisk kræft PDX modeller og primære cellelinjer er etableret. Første generation tumorer ses at vokse langsommere end dem i senere generationer, tager tre uger eller længere for at nå den passende størrelse. Succesraten for første generations subkutane tumordannelse er over 80%Identiteten af kræftcellerne fra PDX modeller er bekræftet fra PDX modeller af H & E farvning.Succesraten for tumordannelse fra kryoreserveret tumorvæv ses at være ca. 95%Tumorceller kan let genkendes af forskelle i morfologi. De primære celler godkendes uafhængigt af to patologer under et mikroskop. For yderligere bekræftelse anvendes H&E-farvning til at observere kræftcelleffologi efter fiksering.Antallet af vellykkede isolation af primære cellelinjer er ca. 40% Disse modeller har vist sig at være prædiktiv for kliniske resultater og bliver brugt til præklinisk lægemiddelevaluering ved en markøridentifikation, biologiske undersøgelser og personlige medicinstrategier.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Development and Maintenance of a Preclinical Patient Derived Tumor Xenograft Model for the Investigation of Novel Anti-Cancer Therapies

Udvikling og vedligeholdelse af et præklinisk Patient Afledt Tumor xenograftmodel for undersøgelse af Novel Anti-Cancer Therapies

Patient derived tumor xenograft (PDTX) models provide a necessary platform in facilitating anti-cancer drug development prior to human trials. Human tumor ...

Establishment of a Primary Culture of Patient-derived Soft Tissue Sarcoma

Etablering af en primær kultur af Patient-afledte bløddelssarkom

Soft tissue sarcomas (STS) represent a spectrum of heterogeneous malignancies with a difficult diagnosis, classification, and management. To date, more ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Patient afledte Ortotopiske xenograft-modeller til humant Urothelialt celle karcinom og kolorektal cancer tumor vækst og spontan metastase

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Patient-derived Heterogeneous Xenograft Model of Pancreatic Cancer Using Zebrafish Larvae as Hosts for Comparative Drug Assessment

Patient-afledt heterogene xenograft model af kræft i bugspytkirtlen ved hjælp af Zebrafish larver som værter for sammenlignende Lægemiddelvurdering

Patient-derived tumor xenograft (PDX) and cell-derived tumor xenograft (CDX) are important techniques for preclinical assessment, medication guidance and ...

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

En melanom patient afledt xenograft-model

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

Isolation and Characterization of Patient-derived Pancreatic Ductal Adenocarcinoma Organoid Models

Isolering og karakterisering af patient-afledte bugspytkirtel ductal adenokarcinom Organoid modeller

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is amongst the most lethal malignancies. Recently, next-generation organoid culture methods enabling the ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

Drug Screening af primære patient afledt tumor xenografts i Zebrafish

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

The Establishment and Utilization of Patient Derived Xenograft Models of Central Nervous System Metastasis

etablering og anvendelse af patientafledte xenograftmodeller af centralnervesystemets metastaser

The development of novel therapies for central nervous system (CNS) metastasis has been hindered by the lack of preclinical models that accurately ...

Generation and Expansion of Primary, Malignant Pleural Mesothelioma Tumor Lines

Generering og udvidelse af primære, maligne pleurale mesotheliom tumorlinjer

Current methodologies for the expansion of primary tumor cell lines from rare tumor types are lacking. This protocol describes methods to expand primary ...

Assessment of Chimeric Antigen Receptor T Cell-Associated Toxicities Using an Acute Lymphoblastic Leukemia Patient-Derived Xenograft Mouse Model

Vurdering af kimær antigenreceptor T-celleassocieret toksicitet ved hjælp af en patientafledt xenograft musemodel med akut lymfoblastær leukæmi

Chimeric antigen receptor T (CART) cell therapy has emerged as a powerful tool for the treatment of multiple types of CD19+ malignancies, which has led to ...