Name: establishment of gastric cancer patient-derived xenograft models and primary cell lines
Uploaded: 2019-07-19T14:00:00
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이 작품은 중국의 국립 자연 과학 재단에 의해 지원되었다 (81572392); 중국 의 국가 핵심 연구 개발 프로그램 (2016YFC1201704); 광동 특별 지원 프로그램 (2016TQ03R614)의 팁 탑 과학 기술 혁신 청소년 재능.
우리는 특히 수치의 준비에 도움을 광저우 새진 생명 공학 (주)에 감사드립니다.

이 인간 적인 연구 결과는 Sun Yat-sen 대학 암 센터의 기관 윤리 검토 위원회에 의해 승인되었습니다 (SYSUCC, 광저우, 중국). 동물 연구는 선야센 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 참고: 모든 실험은 혈액 매개 병원균에 대한 직업 노출 보호를 위한 지침을 포함하여 관련 법률 및 기관 지침을 준수하여 수행되었습니다.
1. 견본 준비
<ol><li>수술에서 ?...

<ol>
	<li>Bray, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+cancer+statistics+2018:+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries.">Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> Ca-a Cancer Journal for Clinicians. 68 (6), 394-424 (2018).</li><li>Sugano, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+gastric+cancer+in+Asia.">Screening of gastric cancer in Asia.</a> Best Practive &amp; Research in Clinical Gastroenterology. 29 (6), 895-905 (2015).</li><li>Nikfarjam, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Demographic+survey+of+four+thousand+patients+with+10+common+cancers+in+North+Eastern+Iran+over+the+past+three+decades.">Demographic survey of four thousand patients with 10 common cancers in North Eastern Iran over the past three decades.</a> Asian Pacific Journal of Cancer Prevention. 15 (23), 10193-10198 (2014).</li><li>Coccolini, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+gastric+cancer:+What+we+know+and+what+we+still+have+to+learn.">Advanced gastric cancer: What we know and what we still have to learn.</a> World Journal of Gastroenterology. 22 (3), 1139-1159 (2016).</li><li>Goetze, O. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multimodal+treatment+in+locally+advanced+gastric+cancer.">Multimodal treatment in locally advanced gastric cancer.</a> Updates in Surgery. 70 (2), 173-179 (2018).</li><li>Graziosi, L., Marino, E., Donini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multimodal+Treatment+of+Locally+Advanced+Gastric+Cancer:+Will+the+West+Meet+the+East?.">Multimodal Treatment of Locally Advanced Gastric Cancer: Will the West Meet the East?.</a> Annals of Surgical Oncology. 26 (3), 918 (2019).</li><li>Choi, Y. Y., Noh, S. H., Cheong, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+Gastric+Cancer+Treatment:+From+the+Golden+Age+of+Surgery+to+an+Era+of+Precision+Medicine.">Evolution of Gastric Cancer Treatment: From the Golden Age of Surgery to an Era of Precision Medicine.</a> Yonsei Medical Journal. 56 (5), 1177-1185 (2015).</li><li>Zhang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TCGA+divides+gastric+cancer+into+four+molecular+subtypes:+implications+for+individualized+therapeutics.">TCGA divides gastric cancer into four molecular subtypes: implications for individualized therapeutics.</a> Chinese Journal of Cancer Research. 33 (10), 469-470 (2014).</li><li>Tirino, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What's+New+in+Gastric+Cancer:+The+Therapeutic+Implications+of+Molecular+Classifications+and+Future+Perspectives.">What's New in Gastric Cancer: The Therapeutic Implications of Molecular Classifications and Future Perspectives.</a> International Journal of Molecular Sciences. 19 (9), (2018).</li><li>Roschke, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Karyotypic+complexity+of+the+NCI-60+drug-screening+panel.">Karyotypic complexity of the NCI-60 drug-screening panel.</a> Cancer Research. 63 (24), 8634-8647 (2003).</li><li>Wilding, J. L., Bodmer, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+cell+lines+for+drug+discovery+and+development.">Cancer cell lines for drug discovery and development.</a> Cancer Research. 74 (9), 2377-2384 (2014).</li><li>Siolas, D., Hannon, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+tumor+xenografts:+transforming+clinical+samples+into+mouse+models.">Patient-derived tumor xenografts: transforming clinical samples into mouse models.</a> Cancer Research. 73 (17), 5315-5319 (2013).</li><li>Xu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+xenograft+mouse+models:+A+high+fidelity+tool+for+individualized+medicine.">Patient-derived xenograft mouse models: A high fidelity tool for individualized medicine.</a> Oncology Letters. 17 (1), 3-10 (2019).</li><li>Lai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+status+and+perspectives+of+patient-derived+xenograft+models+in+cancer+research.">Current status and perspectives of patient-derived xenograft models in cancer research.</a> Journal OF Hematology &amp; Oncology. 10 (1), 106 (2017).</li><li>Kawaguchi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+Update+of+Patient-Derived+Xenograft+Model+for+Translational+Breast+Cancer+Research.">Current Update of Patient-Derived Xenograft Model for Translational Breast Cancer Research.</a> Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 22 (2), 131-139 (2017).</li><li>Cassidy, J. W., Caldas, C., Bruna, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintaining+Tumor+Heterogeneity+in+Patient-Derived+Tumor+Xenografts.">Maintaining Tumor Heterogeneity in Patient-Derived Tumor Xenografts.</a> Cancer Research. 75 (15), 2963-2968 (2015).</li><li>Liu, X., Meltzer, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gastric+Cancer+in+the+Era+of+Precision+Medicine.">Gastric Cancer in the Era of Precision Medicine.</a> Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 3 (3), 348-358 (2017).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Human cancer growth and therapy in immunodeficient mouse models. (7), 694-708 (2014).</li><li>McDermott, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+human+cord+blood+engraftment+between+immunocompromised+mouse+strains.">Comparison of human cord blood engraftment between immunocompromised mouse strains.</a> Blood. 116 (2), 193-200 (2010).</li><li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID/gamma+(c)+(null)+mouse:+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells.">NOD/SCID/gamma (c) (null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li><li>Wege, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-transplantation+of+human+hematopoietic+stem+cells+and+human+breast+cancer+cells+in+NSG+mice:+a+novel+approach+to+generate+tumor+cell+specific+human+antibodies.">Co-transplantation of human hematopoietic stem cells and human breast cancer cells in NSG mice: a novel approach to generate tumor cell specific human antibodies.</a> MAbs. 6 (4), 968-977 (2014).</li></ol>

위암은 제한된 치료 옵션을 가진 공격적인 질병입니다. 따라서, 위암의 모델은 클리닉 4,8,17에직접 번역하여 기능적 연구 연구를 가능하게하는 중요한 자원이되었다. 여기에서, 우리는 위암 PDX 모형 및 1 차적인 세포주를 설치하는 방법 그리고 프로토콜을 기술했습니다. 중요한 것은, 위암 견본의 형태학적 및 생물학적 특성 둘...

위암은 전 세계적으로 다섯 번째로 흔한 암이며 암 사망의 세 번째 주요 원인입니다. 2018년에는 1,000,000건 이상의 새로운 위암 사례가 전 세계적으로 진단되었으며, 약 783,000명이 이 질병으로 사망했습니다1. 위암의 발생률과 사망률은 동북아시아국가에서 매우 높게 남아 2,3. 암 치료 분야에서 상당한 진전에도 불구하고, 진행성 위암 환자의 예후는 약 25 % 4,5,6의 5 년 생존율로 가난한 상태로 남아 있습니다. 7,. 따라서, 위암에 대한 새로운 치료 전략의 개발이 절실히 요구되고 있다.
위암의 치료는 높은 이질성 때문에 도전이다8,9. 따라서 정밀 의학을 실현하기 위해 종양 이질성의 과제를 해결하는 방법에 대한 질문은 암 연구의 핵심입니다. 생체 외 및 생체 내 모델은 위암의 이기종 메커니즘과 생물학을 해명하는 데 중요한 역할을합니다. 그러나, 전임상 연구를 위한 수많은 위암 세포주 및 많은 종래의 형질전환 마우스 모델이 있지만, 이들 모델의 단점은 그들의 적용을 제한한다10. 이러한 모델의 특성이 배양에서 변화했기 때문에, 그들은 더 이상 종양 이질성을 모델링하지 않으며, 그들의 반응은 인간11에서반응을 예측할 수 없었다. 이 문제점은 표적으로 한 약에 반응할 암 환자의 소집단을 확인하는 가능성을 가혹하게 제한합니다. 1 차적인 종양의 단기 문화는 아마 개인화한 암 처리의 특징일 것이다 항암 약리학적인 속성을 조사하는 상대적으로 급속하고 개인화한 쪽을 제공합니다.
환자 유래 이종이식(PDX)은 약물 반응 프로파일링(12)에 대한대체 전임상 모델로서 바람직하다. 또한, PDX 모델은 암의 개시 및 진행을 연구하기위한 강력한 도구를 제공합니다13,14. PDX 모델은 암세포의 조직학적 외관을 보존하고, 종양 내 이질성을 유지하고, 종양 미세환경(15,16)의관련 인간 성분을 더 잘 반영한다. 그러나, 널리 사용되는 PDX 모델의 한계는 인간 고형 종양을 확립하고 연속적으로 전파하기 위한 낮은 성공률이다. 이 연구에서는 PDX 모델 및 1 차 세포주를 확립하기위한 상당히 성공적인 방법이 설명되어 있습니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>40 &#956;m Cell Strainer</td>
			<td>Biologix, Shandong, China</td>
			<td>15-1040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biological Microscope</td>
			<td>OLYMPUS, Tokyo, Japan</td>
			<td>OLYMPUS CKX41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf, Mittelsachsen, Germany.</td>
			<td>5427R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Incubator</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA</td>
			<td>HERACELL 150i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS</td>
			<td>Basalmedia Technology, Shanghai, China</td>
			<td>L40601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electro-Thermostatic Water Cabinet</td>
			<td>Yiheng, Shanghai, China</td>
			<td>DK-8AXX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Wisent Biotechnology, Vancouver, Canada</td>
			<td>86150040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter, China</td>
			<td>CN2L9100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Live Tissue Kit Cryo Kit</td>
			<td>Celliver Biotechnology, Shanghai, China</td>
			<td>LT2601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Live Tissue Thaw Kit</td>
			<td>Celliver Biotechnology, Shanghai, China</td>
			<td>LT2602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NSG</td>
			<td>Biocytogen, Beijing, China</td>
			<td>B-CM-002-4-5W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicilin&#38;streptomycin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red blood cell lysis buffer</td>
			<td>Solarbio, Beijing, China</td>
			<td>R1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640 medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA</td>
			<td>8118367</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Suture Needles with Thread</td>
			<td>LingQiao, Ningbo, China</td>
			<td>3/8 arc 4&#215;10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-processed molds and auxiliary blades</td>
			<td>Celliver Biotechnology, Shanghai, China</td>
			<td>LT2603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA</td>
			<td>2003779</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Type 1 collagenase</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA</td>
			<td>17100017</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of gastric cancer patient-derived xenograft models and primary cell lines

종양 생물학에 대한 이해를 증진하고 치료제의 효능을 조사하기 위해 전임상 모델을 사용하는 것이 암 연구의 핵심입니다. 전임상 연구를 위한 많은 확립된 위암 세포주 및 많은 전통적인 형질전환 마우스 모델이 있지만, 이러한 생체외 및 생체내 모델의 단점은 그들의 적용을 제한합니다. 이 모형의 특성이 문화에서 변경되었기 때문에, 그(것)들은 더 이상 종양 이질성을 모델링하지 않으며, 그들의 반응은 인간에 있는 반응을 예측할 수 없었습니다. 따라서, 종양 이질성을 더 잘 나타내는 대체 모델이 개발되고 있다. 환자 유래 이종이식(PDX) 모델은 암세포의 조직학적 외관을 보존하고 종양 내 이질성을 유지하며 종양 미세 환경의 관련 인간 성분을 더 잘 반영합니다. 그러나, 그것은 일반적으로 많은 위 환자의 예상된 생존 보다는 더 긴 PDX 모형을 개발하기 위하여 4-8 달이 걸립니다. 이러한 이유로, 1차 암 세포주를 확립하는 것은 약물 반응 연구를 위한 효과적인 상보적인 방법일 수 있다. 현재 프로토콜은 수술 위암 샘플에서 PDX 모델과 1 차적인 암 세포주를 설치하는 방법을 기술합니다. 이러한 방법은 약물 개발 및 암 생물학 연구에 유용한 도구를 제공합니다.

여기서, 수술로부터종양 조직은 다음 단계까지 스톡 용액에 보존되었다. 4 시간 안에, 종양 조직은 작은 조각으로 절단하고 이소플루란 에 젖은 면화로 마취된 NSG 마우스의 등쪽 측방으로 이식되었습니다. 1 cm 3보다 큰 종양은 새로운 마우스에 이식하기 위해 절제될 수 있었다 (그림1)또는 신중하게 슬라이스하고 프로토콜에 따라 액체 질소에 보존. 이 연구에서는, 1 ?...

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Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines (Video) | JoVE

현재 프로토콜은 외과 위암 견본에서 환자 파생된 이종이식 (PDX) 모형 및 1 차적인 암 세포주를 설치하는 방법을 기술합니다. 이 방법은 약물 개발 및 암 생물학 연구에 유용한 도구를 제공합니다.

위암 환자 유래 이종이식 모델 및 1차 세포주 구축

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

환자 유래 제노이식 모델 및 1차 세포주 약물 개발과 종양 생물학 연구의 개시 및 진행의 필수적인 부분이 되고 있습니다. 환자 유래 제노이식 모델은 암세포의 조직학적 외관을 보존하고, 종양 내 이질성을 유지하며, 종양 미세 환경의 관련 인간 성분을 더 잘 반영한다. 그의 모형은 그 때 전통적인 암 세포 주 다음 인간암의 더 정확한 표현을 위한 이고 새로운 항암 치료의 전임상 평가를 향상하기 위하여 잠재력을 가지고 있습니다.또한, 이들 모델은 암 환자의 상이한 하위집단 간의 분자 특성 또는 종양 시그니처를 비교하는 데 유용할 수 있다. NSG 마우스는 면역 형결성 마우스 모델로 권장됩니다. 마우스의 가혹한 면역 결핍 때문에, 불임은 모든 실험에서 유지되어야 합니다.멸균 조건하에서, 조심스럽게 종양 조직을 해부하고 여러 작은 조각으로 그들을 손질하는 집게와 가위를 사용합니다. 마우스를 마취한 후 멸균 가위를 사용하여 두 등대 측면에 1센티미터 절개를 합니다. 멸균 집게를 사용하여 피하 조직을 방해하십시오.그런 다음 종양 조직의 조각을 잘라 깊은 부위에 놓습니다. 수술 봉합봉 바늘로 피하 봉합사에 의해 임플란트 영역을 닫습니다. 요오드로 상처를 살균하십시오.그 후, 흉골 의 복리전을 유지하면서 마우스를 빈 케이지에 부드럽게 놓습니다. 마우스가 일어나서 약 3~4분 후에 걷기 시작해야 하기 때문에 세심한 주의를 기울이는 것입니다. 수술을 받지 않은 쥐와 분리된 새 케이지에 수술을 받은 마우스를 놓습니다.이식 부위의 심플포션에 의해 종양 크기를 평가하고 일주일에 두 번 Vernier 캘리퍼로 측정합니다. 마우스를 안락사한 후 멸균 집게와 가위를 사용하여 마우스로부터 종양을 천천히 분리하십시오. 10센티미터 접시에 DPBS에서 종양 조직을 씻으시면.당신은 해부하고 괴사 영역, 지방 조직, 혈전 및 결합 조직을 제거하기 위해 집게와 가위를 집게합니다. 다음으로, 곰팡이를 사용하여 종양 조직을 최대 두께를 1mm로 자른다. 10센티미터 접시에 DPBS로 종양 슬라이스를 씻으시면 됩니다.바이트로화 과정을 시작하려면 집게를 사용하여 조각을 튜브 V1로 옮기고 섭씨 4도에서 4분 동안 배양합니다. 튜브를 짧게 굴려 반으로 뒤집고 4분간 섭씨 4도에서 배양합니다. 다음으로 V1 용액과 슬라이스를 10센티미터 접시에 붓고 집게를 사용하여 조각을 튜브 V2로 옮킨다. 섭씨 4도에서 4분간 배양하세요.튜브를 짧게 굴려 반으로 뒤집어 섭씨 4도에서 4분간 배양합니다. 그 후 V2 용액과 슬라이스를 10센티미터 접시에 붓습니다. 슬라이스를 튜브 V3로 옮기고 섭씨 4도에서 5분간 배양합니다.튜브를 짧게 굴려 반으로 뒤집고 섭씨 4도에서 5분간 배양합니다. 모든 조각이 튜브 의 바닥에 가라앉는지 확인합니다. 여러 조각이 떠있는 상태로 유지되면 튜브를 짧게 굴리고 반역하고 모든 조각이 완전히 가라 앉을 때까지 섭씨 4도에서 배양하십시오.그런 다음 V3 용액을 붓고 10센티미터 접시에 슬라이스합니다. 조직 홀더를 적절한 길이로 자르고 멸균 거즈에 놓습니다. 조각을 홀더에 옮기습니다.거즈로 홀더를 감싸는 다. 집게를 사용하여 홀더를 액체 질소에 놓고 5 분 동안 배양하게하십시오. 그 후 극저온 바이알에 조직 정보를 표시합니다.액체 질소에 저장됩니다 바이알에 조직 슬라이스홀더를 전송합니다. 첫째, 절제된 견본 또는 수확한 PDX 조직에서 위암 견본을 절제합니다. 티슈를 얼음 위에 놓고 10센티미터 의 멸균 문화 접시로 옮기다.집게와 가위를 사용하여 괴사 부위, 지방 조직, 혈전 및 결합 조직을 제거하십시오. 10센티미터 접시에 페니실린과 연쇄상 구균을 포함하는 DPBS로 종양 조직을 한 번 씻으시다. 다음으로, 접시뚜껑에 조각으로 종양을 잘라.각 조각의 최대 두께는 1밀리미터여야 합니다. 타입-1 콜라게나아제와 트립신 용액의 7밀리리터를 포함하는 50 밀리리터 원심분리기 튜브로 조각을 옮기십시오. 혼합물을 잠시 소용돌이시다.30~40분간 섭씨 37도의 수조에서 배양하여 5분마다 혼합물을 소용돌이시게 합니다. 그 후, 10%의 FBS로 보충된 RPMI-1640 배지의 동일한 부피를 추가하고 혼합물을 철저히 소용돌이시다. 40 마이크로리터 필터를 통해 느린 여과로 이 혼합물을 새로운 50 밀리리터 원심분리기 튜브로 옮킨다.원심 분리기는 실온에서 5~7분 동안 113~163배 의 속도로 여과됩니다. 이 상체를 조심스럽게 제거하십시오. PBS의 5 밀리리터로 펠릿을 씻고 상체를 조심스럽게 제거합니다.펠릿이 빨간색인 경우 적혈구가 포함되어 있습니다. 적혈구 용해 완충제 500 마이크로리터로 펠릿을 부드럽게 재중단하고 실온에서 5분 동안 배양합니다. 그런 다음 PBS의 5 밀리리터를 추가합니다.원심분리기는 실온에서 5~7분 동안 113~163배의 속도로 제공됩니다. 상체를 조심스럽게 제거하고 배양 배지로 펠릿을 재연하고 혼합물을 멸균 10센티미터 접시로 옮킨다. 37도의 이산화탄소로 배양하여 2~3일마다 배지를 혈청 함유 매체로 교체하십시오.이 연구에서는, 위암 PDX 모형 및 1 차적인 세포주 설치됩니다. 1 세대 종양은 적절한 크기에 도달하기 위해 3 주 이상 복용, 후대에있는 것보다 더 느리게 성장하는 것으로 볼 수 있습니다. 1세대 피하 종양 형성의 성공률은 80% 이상이며, PDX 모델에서 암세포의 정체는 H&E 염색에 의해 PDX 모델으로부터 확인된다.냉동 보존 종양 조직에서 종양 형성의 성공률은 약 95%의 종양 세포가 형태학의 차이에 의해 쉽게 인식될 수 있는 것으로 여겨진다. 1 차세포는 현미경의 밑에 2개의 병리학자에 의해 독립적으로 인증됩니다. 추가 확인을 위해, H&E 염색은 고정 후에 암세포 형태를 관찰하기 위하여 이용됩니다.1차 세포주의 성공적인 격리비율은 약 40%로 임상 결과를 예측하는 것으로 나타났으며 마커 식별, 생물학적 연구 및 개인화된 의학 전략에 의한 전임상 약물 평가에 사용되고 있다.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Development and Maintenance of a Preclinical Patient Derived Tumor Xenograft Model for the Investigation of Novel Anti-Cancer Therapies

Development and Maintenance of a Preclinical Patient Derived Tumor Xenograft Model for the Investigation of Novel Anti-Cancer Therapies (Video) | JoVE

전임상 환자 유래 종양 소설 안티 - 암 치료의 조사를위한 이종 이식 모델의 개발 및 유지 보수

Patient derived tumor xenograft (PDTX) models provide a necessary platform in facilitating anti-cancer drug development prior to human trials. Human tumor ...

연구

암 연구학

Establishment of a Primary Culture of Patient-derived Soft Tissue Sarcoma

Establishment of a Primary Culture of Patient-derived Soft Tissue Sarcoma (Video) | JoVE

환자에서 파생 된 연 조직 육 종의 기본 문화 설립

Soft tissue sarcomas (STS) represent a spectrum of heterogeneous malignancies with a difficult diagnosis, classification, and management. To date, more ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis (Video) | JoVE

인간 비뇨기과 세포 암 및 대장암 종양 성장 및 자발적 전이를 위한 환자 유래 직교 이종이식 모델

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Patient-derived Heterogeneous Xenograft Model of Pancreatic Cancer Using Zebrafish Larvae as Hosts for Comparative Drug Assessment

Patient-derived Heterogeneous Xenograft Model of Pancreatic Cancer Using Zebrafish Larvae as Hosts for Comparative Drug Assessment (Video) | JoVE

비교 약물 평가를 위한 호스트로 Zebrafish 애벌레를 사용하여 췌장암의 환자 유래 이종 이종이식 모형

Patient-derived tumor xenograft (PDX) and cell-derived tumor xenograft (CDX) are important techniques for preclinical assessment, medication guidance and ...

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model (Video) | JoVE

흑색종 환자 유래 이종이식 모델

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

Isolation and Characterization of Patient-derived Pancreatic Ductal Adenocarcinoma Organoid Models

Isolation and Characterization of Patient-derived Pancreatic Ductal Adenocarcinoma Organoid Models (Video) | JoVE

환자 유래 췌장 선암 조직형 모델의 격리 및 특성 분석

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is amongst the most lethal malignancies. Recently, next-generation organoid culture methods enabling the ...

Combined Conditional Knockdown and Adapted Sphere Formation Assay to Study a Stemness-Associated Gene of Patient-derived Gastric Cancer Stem Cells

Combined Conditional Knockdown and Adapted Sphere Formation Assay to Study a Stemness-Associated Gene of Patient-derived Gastric Cancer Stem Cells (Video) | JoVE

결합된 조건부 녹다운 및 적응된 구체 형성 분석은 환자 유래 위암 줄기 세포의 줄기 관련 유전자를 연구하기 위하여

Cancer stem cells (CSCs) are implicated in tumor initiation, development and recurrence after treatment, and have become the center of attention of many ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish (Video) | JoVE

제브라피시의 1차 환자 유래 종양 이종이식의 약물 스크리닝

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

The Establishment and Utilization of Patient Derived Xenograft Models of Central Nervous System Metastasis

The Establishment and Utilization of Patient Derived Xenograft Models of Central Nervous System Metastasis (Video) | JoVE

중추신경계 전이의 환자 유래 이종이식 모델의 확립 및 활용

The development of novel therapies for central nervous system (CNS) metastasis has been hindered by the lack of preclinical models that accurately ...

Generation and Expansion of Primary, Malignant Pleural Mesothelioma Tumor Lines

Generation and Expansion of Primary, Malignant Pleural Mesothelioma Tumor Lines (Video) | JoVE

원발성, 악성 흉막 중피종 종양 라인의 생성 및 확장

Current methodologies for the expansion of primary tumor cell lines from rare tumor types are lacking. This protocol describes methods to expand primary ...