Name: establishment of gastric cancer patient-derived xenograft models and primary cell lines
Uploaded: 2019-07-19T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av National Natural Science Foundation i Kina (81572392); det nasjonale nøkkel forsknings-og utviklingsprogrammet i Kina (2016YFC1201704); Tip-top vitenskapelige og tekniske innovative Youth talenter Guangdong spesiell støtte program (2016TQ03R614).
Vi spesifikt takker Guangzhou Sagene Biotech co, Ltd for hjelp i utarbeidelsen av tallene.

Denne menneskelige studien ble godkjent av institusjonelle etikk gjennomgang Board of Sun Yat-sen University Cancer Center (SYSUCC, Guangzhou, Kina). Dyret studien ble godkjent av institusjonelle Animal Care og bruk Committee of Sun Yat-sen University. Merk: alle eksperimenter ble utført i samsvar med relevante lover og institusjonelle retningslinjer, inkludert retningslinjer for yrkesmessig eksponerings beskyttelse mot blod-borne patogener.
1. prøve forberedelser
<ol><li>Få magekreft ve...

<ol>
	<li>Bray, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+cancer+statistics+2018:+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries.">Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> Ca-a Cancer Journal for Clinicians. 68 (6), 394-424 (2018).</li><li>Sugano, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+gastric+cancer+in+Asia.">Screening of gastric cancer in Asia.</a> Best Practive &amp; Research in Clinical Gastroenterology. 29 (6), 895-905 (2015).</li><li>Nikfarjam, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Demographic+survey+of+four+thousand+patients+with+10+common+cancers+in+North+Eastern+Iran+over+the+past+three+decades.">Demographic survey of four thousand patients with 10 common cancers in North Eastern Iran over the past three decades.</a> Asian Pacific Journal of Cancer Prevention. 15 (23), 10193-10198 (2014).</li><li>Coccolini, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+gastric+cancer:+What+we+know+and+what+we+still+have+to+learn.">Advanced gastric cancer: What we know and what we still have to learn.</a> World Journal of Gastroenterology. 22 (3), 1139-1159 (2016).</li><li>Goetze, O. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multimodal+treatment+in+locally+advanced+gastric+cancer.">Multimodal treatment in locally advanced gastric cancer.</a> Updates in Surgery. 70 (2), 173-179 (2018).</li><li>Graziosi, L., Marino, E., Donini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multimodal+Treatment+of+Locally+Advanced+Gastric+Cancer:+Will+the+West+Meet+the+East?.">Multimodal Treatment of Locally Advanced Gastric Cancer: Will the West Meet the East?.</a> Annals of Surgical Oncology. 26 (3), 918 (2019).</li><li>Choi, Y. Y., Noh, S. H., Cheong, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+Gastric+Cancer+Treatment:+From+the+Golden+Age+of+Surgery+to+an+Era+of+Precision+Medicine.">Evolution of Gastric Cancer Treatment: From the Golden Age of Surgery to an Era of Precision Medicine.</a> Yonsei Medical Journal. 56 (5), 1177-1185 (2015).</li><li>Zhang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TCGA+divides+gastric+cancer+into+four+molecular+subtypes:+implications+for+individualized+therapeutics.">TCGA divides gastric cancer into four molecular subtypes: implications for individualized therapeutics.</a> Chinese Journal of Cancer Research. 33 (10), 469-470 (2014).</li><li>Tirino, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What's+New+in+Gastric+Cancer:+The+Therapeutic+Implications+of+Molecular+Classifications+and+Future+Perspectives.">What's New in Gastric Cancer: The Therapeutic Implications of Molecular Classifications and Future Perspectives.</a> International Journal of Molecular Sciences. 19 (9), (2018).</li><li>Roschke, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Karyotypic+complexity+of+the+NCI-60+drug-screening+panel.">Karyotypic complexity of the NCI-60 drug-screening panel.</a> Cancer Research. 63 (24), 8634-8647 (2003).</li><li>Wilding, J. L., Bodmer, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+cell+lines+for+drug+discovery+and+development.">Cancer cell lines for drug discovery and development.</a> Cancer Research. 74 (9), 2377-2384 (2014).</li><li>Siolas, D., Hannon, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+tumor+xenografts:+transforming+clinical+samples+into+mouse+models.">Patient-derived tumor xenografts: transforming clinical samples into mouse models.</a> Cancer Research. 73 (17), 5315-5319 (2013).</li><li>Xu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+xenograft+mouse+models:+A+high+fidelity+tool+for+individualized+medicine.">Patient-derived xenograft mouse models: A high fidelity tool for individualized medicine.</a> Oncology Letters. 17 (1), 3-10 (2019).</li><li>Lai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+status+and+perspectives+of+patient-derived+xenograft+models+in+cancer+research.">Current status and perspectives of patient-derived xenograft models in cancer research.</a> Journal OF Hematology &amp; Oncology. 10 (1), 106 (2017).</li><li>Kawaguchi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+Update+of+Patient-Derived+Xenograft+Model+for+Translational+Breast+Cancer+Research.">Current Update of Patient-Derived Xenograft Model for Translational Breast Cancer Research.</a> Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 22 (2), 131-139 (2017).</li><li>Cassidy, J. W., Caldas, C., Bruna, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintaining+Tumor+Heterogeneity+in+Patient-Derived+Tumor+Xenografts.">Maintaining Tumor Heterogeneity in Patient-Derived Tumor Xenografts.</a> Cancer Research. 75 (15), 2963-2968 (2015).</li><li>Liu, X., Meltzer, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gastric+Cancer+in+the+Era+of+Precision+Medicine.">Gastric Cancer in the Era of Precision Medicine.</a> Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 3 (3), 348-358 (2017).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Human cancer growth and therapy in immunodeficient mouse models. (7), 694-708 (2014).</li><li>McDermott, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+human+cord+blood+engraftment+between+immunocompromised+mouse+strains.">Comparison of human cord blood engraftment between immunocompromised mouse strains.</a> Blood. 116 (2), 193-200 (2010).</li><li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID/gamma+(c)+(null)+mouse:+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells.">NOD/SCID/gamma (c) (null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li><li>Wege, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-transplantation+of+human+hematopoietic+stem+cells+and+human+breast+cancer+cells+in+NSG+mice:+a+novel+approach+to+generate+tumor+cell+specific+human+antibodies.">Co-transplantation of human hematopoietic stem cells and human breast cancer cells in NSG mice: a novel approach to generate tumor cell specific human antibodies.</a> MAbs. 6 (4), 968-977 (2014).</li></ol>

Magekreft er en aggressiv sykdom med begrensede terapeutiske alternativer; Dermed har modeller av magekreft blitt en kritisk ressurs for å muliggjøre funksjonelle forskningsstudier med direkte oversettelse til klinikken4,8,17. Her har vi beskrevet metoder og protokoll for etablering av magekreft PDX modeller og primær cellelinjer. Viktigere, både morfologiske og biologiske karakteristika for magekreft prøver var stort sett ...

Magekreft er den femte mest vanlige kreft i verden og den tredje største årsaken til kreft død. I 2018, over 1 000 000 nye tilfeller av magekreft ble diagnostisert globalt, og anslagsvis 783 000 mennesker ble drept av denne sykdommen1. Forekomsten og dødelighet av magekreft fortsatt svært høy i nordøstlige asiatiske land2,3. Til tross for betydelig fremgang innen kreft terapi, er prognosen for pasienter med avansert ventrikkelkreft fortsatt dårlig, med en fem-års overlevelse på ca 25%4,5,6, 7,. Dermed er det et presserende behov for utvikling av nye terapeutiske strategier for magekreft
Behandling av magekreft er utfordrende på grunn av sin høye heterogenitet8,9. Således er spørsmålet om hvordan å møte utfordringene i tumor heterogenitet å realisere presisjon medisin er sentrale for kreftforskning. In vitro og in vivo-modeller spille avgjørende roller i elucidating den heterogene mekanismer og biologi av magekreft. Men selv om det er mange magekreft cellelinjer og mange konvensjonelle transgene Mouse-modeller for prekliniske forskning, ulempene med disse modellene begrense sine søknader10. Fordi karakteristikkene av disse modellene har endret seg i kultur, de ikke lenger modell tumor heterogenitet, og deres svar har ikke vært i stand til å forutsi responsen hos mennesker11. Disse problemene sterkt begrense muligheten for å identifisere undergrupper av kreftpasienter som vil reagere på målrettede legemidler. Den kortsiktige kulturen i primære svulster gir en relativt rask og personlig måte å undersøke anticancer Farmakologiske egenskaper, som vil trolig være kjennemerket på personlig kreft behandling.
Pasient-avledet xenotransplantater (PDXs) foretrekkes som en alternativ prekliniske modell for legemiddel respons profilering12. I tillegg tilbyr PDX-modeller et kraftig verktøy for å studere initiering og progresjon av kreft13,14. PDX modeller bevare histologic utseende av kreftceller, beholde intratumoral heterogenitet, og bedre gjenspeile relevante menneskelige komponenter av svulsten mikromiljøet15,16. Men begrensningen av mye brukt PDX modellene er den lave suksessraten for etablering og serielt spre menneskelige solide svulster. I denne studien beskrives skikkelig vellykkede metoder for å etablere PDX-modeller og primære cellelinjer.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>40 &#956;m Cell Strainer</td>
			<td>Biologix, Shandong, China</td>
			<td>15-1040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biological Microscope</td>
			<td>OLYMPUS, Tokyo, Japan</td>
			<td>OLYMPUS CKX41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf, Mittelsachsen, Germany.</td>
			<td>5427R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Incubator</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA</td>
			<td>HERACELL 150i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS</td>
			<td>Basalmedia Technology, Shanghai, China</td>
			<td>L40601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electro-Thermostatic Water Cabinet</td>
			<td>Yiheng, Shanghai, China</td>
			<td>DK-8AXX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Wisent Biotechnology, Vancouver, Canada</td>
			<td>86150040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter, China</td>
			<td>CN2L9100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Live Tissue Kit Cryo Kit</td>
			<td>Celliver Biotechnology, Shanghai, China</td>
			<td>LT2601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Live Tissue Thaw Kit</td>
			<td>Celliver Biotechnology, Shanghai, China</td>
			<td>LT2602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NSG</td>
			<td>Biocytogen, Beijing, China</td>
			<td>B-CM-002-4-5W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicilin&#38;streptomycin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red blood cell lysis buffer</td>
			<td>Solarbio, Beijing, China</td>
			<td>R1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640 medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA</td>
			<td>8118367</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Suture Needles with Thread</td>
			<td>LingQiao, Ningbo, China</td>
			<td>3/8 arc 4&#215;10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-processed molds and auxiliary blades</td>
			<td>Celliver Biotechnology, Shanghai, China</td>
			<td>LT2603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA</td>
			<td>2003779</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Type 1 collagenase</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA</td>
			<td>17100017</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of gastric cancer patient-derived xenograft models and primary cell lines

Bruk av prekliniske modeller for å fremme vår forståelse av tumor biologi og undersøke effekten av terapeutiske midler er nøkkelen til kreftforskning. Selv om det er mange etablerte magekreft cellelinjer og mange konvensjonelle transgene Mouse-modeller for prekliniske forskning, ulempene med disse in vitro og in vivo-modeller begrense sine søknader. Fordi karakteristikkene av disse modellene har endret seg i kultur, de ikke lenger modell tumor heterogenitet, og deres svar har ikke vært i stand til å forutsi reaksjoner hos mennesker. Således, alternativ modeller det bedre forestiller svulst heterogenitet er bebygget. Pasient-avledet xenograft (PDX) modeller bevare histologic utseende av kreftceller, beholde intratumoral heterogenitet, og bedre gjenspeile relevante menneskelige komponenter av tumor mikromiljøet. Det tar imidlertid vanligvis 4-8 måneder å utvikle en PDX-modell, som er lengre enn forventet overlevelse for mange ventrikkel pasienter. Av denne grunn, kan etablere primære kreftcelle linjer være en effektiv komplementær metode for narkotika respons studier. Den gjeldende protokollen beskriver metoder for å etablere PDX-modeller og primære kreftcelle linjer fra kirurgiske magekreft prøver. Disse metodene gir et nyttig verktøy for narkotika utvikling og kreft biologi forskning.

Her ble tumor vev fra en operasjon bevart i lager løsningen til neste trinn. Innen 4 timer ble tumor vev skåret i små biter og implantert i rygg flanken til NSG-mus som hadde blitt anesthetized med isoflurane bomull. Svulster større enn 1 cm3 kan være resected for implantation til nye mus (figur 1) eller skiver nøye og bevart i flytende nitrogen etter protokollen. I denne studien, den første generasjon svulster vokste saktere enn i senere generasjoner, tar 3 uker eller leng...

Watch this Scientific Journal Video about Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines at JoVE.com

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Den gjeldende protokollen beskriver metoder for å etablere pasient-avledet xenograft (PDX) modeller og primære kreftcelle linjer fra kirurgiske magekreft prøver. Metodene gir et nyttig verktøy for narkotika utvikling og kreft biologi forskning.

Etablering av magekreft pasient-avledet Xenograft modeller og primær celle Lines

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Pasientavledede Xenograft-modeller og primærcellelinjer blir en integrert del av legemiddelutviklingen og initieringen og utviklingen av tumorbiologiforskning. Pasientavledede Xenograft Modeller bevare histologiske utseendet av kreftceller, beholde intratumoral heterogenitet, og bedre reflektere de relevante menneskelige komponentene i tumormikromiljøet. Hans modeller er for mer nøyaktige representasjoner av menneskelig kreft enn tradisjonelle kreftcellelinjer og har potensial til å forbedre den prekliniske evalueringen av nye kreftbehandlinger.I tillegg kan disse modellene være nyttige for å sammenligne molekylære egenskaper eller tumorsignaturer mellom ulike undergrupper av kreftpasienter. NSG-mus anbefales som immunsviktsmusmodell. På grunn av musenes alvorlige immunsvikt må steriliteten opprettholdes i alle eksperimenter.Under sterile forhold, bruk tang og saks for å forsiktig dissekere tumorvevet og trimme dem i flere små biter. Etter bedøving av musen, bruk steril saks for å gjøre en centimeter snitt på begge dorsale flanker. Bruk sterile tang for å forstyrre det subkutane vevet.Klipp deretter et stykke av tumorvevet, og legg det inn i det dype stedet. Lukk implantatområdet ved subkutan sutur med kirurgiske suturnåler. Steriliser såret med jod.Etter dette, legg forsiktig musene i et tomt bur samtidig som de opprettholder sternal recumbency. Vær oppmerksom på musene som de skal våkne opp og begynne å gå etter ca tre til fire minutter. Plasser mus som gjennomgikk kirurgi i et nytt bur atskilt fra de som ikke er utsatt for kirurgi.Vurder tumorstørrelsen ved palpasjon av implantasjonsstedet og mål dem med en Vernier-kaliper to ganger i uken. Etter eutanisering av musene, bruk sterile tang og saks for å isolere svulsten langsomt fra musene. Vask tumorvevet i DPBS i en 10 centimeter rett.Du tang og saks til å dissekere og fjerne nekrotiske områder, fettvev, blodpropper og bindevev. Deretter bruker du en mugg for å kutte tumorvevet til en maksimal tykkelse på en millimeter. Vask tumorskivene med DPBS i en 10 centimeter rett.For å starte vitrifiseringsprosessen, bruk tang til å overføre skivene til rør V1 og inkubere ved fire grader Celsius i fire minutter. Rull og inverter røret kort og inkuber ved fire grader Celsius i ytterligere fire minutter. Hell deretter V1-løsningen og skjærer i en 10 centimeter skål og bruk tang til å overføre skivene til rør V2. Inkuber ved fire grader Celsius i fire minutter.Rull og inverter røret kort og inkuber det på fire grader Celsius i ytterligere fire minutter. Etter dette, hell V2-løsningen og skivene i en 10 centimeter tallerken. Overfør skivene til rør V3 og inkuber ved fire grader Celsius i fem minutter.Rull og inverter røret kort og inkuber ved fire grader Celsius i ytterligere fem minutter. Pass på at alle skivene synker til bunnen av røret. Hvis flere skiver forblir flytende, rull og inverter røret kort og inkuber ved fire grader Celsius til alle skivene synker helt.Hell deretter V3-løsningen og skiver i en 10 centimeter rett. Klipp vevsholderne til riktig lengde og plasser dem på steril gasbind. Overfør skivene til holderne.Pakk holderne med gasbind. Bruk tang, plasser holderne i flytende nitrogen og la dem inkubere i fem minutter. Etter dette merker du de kryogene hetteglassene med vevsinformasjonen.Overfør holderne med vevskiver inn i hetteglassene, som vil bli lagret i flytende nitrogen. Først, resect magekreft prøver fra resected prøver eller høstet PDX vev. Legg vevet på is og overfør dem til en 10 centimeter steril kulturrett.Bruk tang og saks for å fjerne nekrotiske områder, fettvev, blodpropper og bindevev. Vask tumorvevet en gang med DPBS som inneholder penicillin og streptomycin i en 10 centimeter rett. Deretter kutter svulsten i stykker på lokket på parabolen.Maksimal tykkelse på hvert stykke skal være en millimeter. Overfør bitene til et 50 milliliter sentrifugerør som inneholder syv milliliter av en type 1 kollagenase og trypsinløsning. Vortex blandingen kort.Inkuber i et vannbad ved 37 grader Celsius i 30 til 40 minutter, og sørg for å virvle blandingen hvert femte minutt. Etter dette, legg til et likt volum av RPMI-1640 medium supplert med 10% FBS og vortex blandingen grundig. Overfør denne blandingen til et nytt 50 milliliter sentrifugerør ved langsom filtrering gjennom et 40 mikroliterfilter.Sentrifuge filtrater med en hastighet mellom 113 og 163 ganger g i fem til syv minutter ved romtemperatur. Fjern forsiktig denne supernatanten. Vask pelleten med fem milliliter PBS og fjern forsiktig supernatanten.Hvis pelleten er rød, inneholder den erytrocytter. Forsiktig resuspend pellet med 500 mikroliter av røde blodlegemer lysis buffer og inkubere ved romtemperatur i fem minutter. Deretter legger du til fem milliliter PBS.Sentrifuge med en hastighet mellom 113 og 163 ganger g i fem til syv minutter ved romtemperatur. Fjern forsiktig den overnaturlige og gjenoppuss pelleten med kulturmedium og overfør blandingen til en steril 10 centimeter rett. Inkuber kulturen ved 37 grader Celsius med 5% karbondioksid, og sørg for å erstatte mediet med serumholdig medium hver to til tre dager.I denne studien etableres pdxmodeller for magekreft og primære cellelinjer. Førstegenerasjons svulster er sett å vokse saktere enn de i senere generasjoner, tar tre uker eller lenger å nå riktig størrelse. Suksessraten for førstegenerasjons subkutan tumordannelse er over 80%Identiteten til kreftcellene fra PDX-modeller bekreftes fra PDX-modeller ved H&E-farging.Suksessraten for tumordannelse fra kryopreservert tumorvev anses å være ca 95% Tumorceller kan lett gjenkjennes av forskjeller i morfologi. De primære cellene er autentisert uavhengig av to patologer under et mikroskop. For ytterligere bekreftelse brukes H&E-farging til å observere kreftcellemorfologi etter fiksering.Frekvensen av vellykket isolering av primære cellelinjer er ca 40%Disse modellene har vist seg å være prediktive for kliniske resultater og blir brukt til preklinisk legemiddelevaluering av en markøridentifikasjon, biologiske studier og personlige medisinstrategier.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Development and Maintenance of a Preclinical Patient Derived Tumor Xenograft Model for the Investigation of Novel Anti-Cancer Therapies

Utvikling og vedlikehold av en Preklinisk Pasient Avledet Tumor Xenotransplantat Modell for Undersøkelse av Novel Anti-Cancer Therapies

Patient derived tumor xenograft (PDTX) models provide a necessary platform in facilitating anti-cancer drug development prior to human trials. Human tumor ...

Establishment of a Primary Culture of Patient-derived Soft Tissue Sarcoma

Etablering av en primære kultur for pasient-avledede bløtvev sarkom

Soft tissue sarcomas (STS) represent a spectrum of heterogeneous malignancies with a difficult diagnosis, classification, and management. To date, more ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Pasient-avledet Orthotopic Xenograft modeller for Human Urotelialt Cell kreft og tykktarmskreft tumor vekst og spontan metastasering

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Patient-derived Heterogeneous Xenograft Model of Pancreatic Cancer Using Zebrafish Larvae as Hosts for Comparative Drug Assessment

Pasient-avledet heterogen Xenograft modell av bukspyttkjertelen Cancer bruke sebrafisk larver som verter for sammenlignende Drug Assessment

Patient-derived tumor xenograft (PDX) and cell-derived tumor xenograft (CDX) are important techniques for preclinical assessment, medication guidance and ...

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

En melanom pasient-avledet Xenograft modell

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

Isolation and Characterization of Patient-derived Pancreatic Ductal Adenocarcinoma Organoid Models

Isolering og karakterisering av pasient-avledet bukspyttkjertelen ductal Adenokarsinom Organoid modeller

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is amongst the most lethal malignancies. Recently, next-generation organoid culture methods enabling the ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

Narkotikascreening av primær pasient avledet tumor xenografts i sebrafisk

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

The Establishment and Utilization of Patient Derived Xenograft Models of Central Nervous System Metastasis

Etablering og utnyttelse av pasientavledede xenograftmodeller av metastaser i sentralnervesystemet

The development of novel therapies for central nervous system (CNS) metastasis has been hindered by the lack of preclinical models that accurately ...

Generation and Expansion of Primary, Malignant Pleural Mesothelioma Tumor Lines

Generering og utvidelse av primære, ondartede pleural mesoteliom tumorlinjer

Current methodologies for the expansion of primary tumor cell lines from rare tumor types are lacking. This protocol describes methods to expand primary ...

Assessment of Chimeric Antigen Receptor T Cell-Associated Toxicities Using an Acute Lymphoblastic Leukemia Patient-Derived Xenograft Mouse Model

Vurdering av kimær antigenreseptor T-celleassosiert toksisitet ved bruk av en akutt lymfoblastisk leukemi pasientavledet xenograftmusemodell

Chimeric antigen receptor T (CART) cell therapy has emerged as a powerful tool for the treatment of multiple types of CD19+ malignancies, which has led to ...