Name: purification of high yield extracellular vesicle preparations away from virus
Uploaded: 2019-09-12T14:00:00
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Wir möchten uns bei allen Mitgliedern des Kashanchi-Labors bedanken, insbesondere bei Gwen Cox. Diese Arbeit wurde von national Institutes of Health (NIH) Grants (AI078859, AI074410, AI127351-01, AI043894 und NS099029 an F.K.) unterstützt.

1. Filtration und Niederschlag von extrazellulären Vesikeln (EVs)
<ol><li>Um den Kulturüberstand aus infizierten oder transfizierten Zellen (d. h. Zelllinien und/oder Primärzellen) vorzubereiten, kulturieren Sie etwa 10 ml Late-Log-Zellen für 5 Tage bei 37 °C und 5 %CO2 in geeigneten Kulturmedien (d. h. RPMI oder DMEM mit 10 % fetalem Rinder Serum [FBS]). HINWEIS: Alle Kulturmedium-Reagenzien sollten frei von Elektrofahrzeugen sein und können entweder gekauft werden (siehe M...

<ol>
	<li>Taylor, D. D., Shah, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+of+isolating+extracellular+vesicles+impact+down-stream+analyses+of+their+cargoes.">Methods of isolating extracellular vesicles impact down-stream analyses of their cargoes.</a> Methods (San Diego, Calif). 87, 3-10 (2015).</li><li>Konoshenko, M. Y., Lekchnov, E. A., Vlassov, A. V., Laktionov, P. 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H., Kirkegaard, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remodeling+the+Endoplasmic+Reticulum+by+Poliovirus+Infection+and+by+Individual+Viral+Proteins:+an+Autophagy-Like+Origin+for+Virus-Induced+Vesicles.">Remodeling the Endoplasmic Reticulum by Poliovirus Infection and by Individual Viral Proteins: an Autophagy-Like Origin for Virus-Induced Vesicles.</a> Journal of Virology. 74 (19), 8953-8965 (2000).</li></ol>

Die skizzierte Methode ermöglicht eine verbesserte EEV-Ausbeute und die Trennung von Viren von Elektrofahrzeugen mit einem Kombinationsansatz zur Isolierung. Relativ große Mengen an Ausgangsmaterial (d. h. Zellüberstand) können vor der EV-Isolierung durch Niederschlag, DG-Trennung und Nanopartikelanreicherung gefiltert werden, was zu einem Endvolumen von 30 nachgeschaltete Assays. Die Verwendung der Nanopartikelanreicherung ist unerlässlich, da diese EV-anreichernden Nanopartikel im Vergleich zur herkömmlichen Ultr...

Die Forschung, die sich auf extrazelluläre Vesikel (EVs) konzentriert, insbesondere Exosomen, eine Art von EV im Bereich 30-120 nm und gekennzeichnet durch das Vorhandensein von drei Tetraspanin-Markern CD81, CD9 und CD63, wurde weitgehend durch die Entwicklung von Methoden zur Isolierung und die Vesikel von Interesse zu reinigen. Die Fähigkeit, vielfältige Mechanismen zu dissektieren, wurde durch komplexe und zeitaufwändige Techniken behindert, die Proben erzeugen, die aus einer heterogenen Population von Vesikeln bestehen, die über verschiedene Wege mit einer Vielzahl von Inhalten, Größen und Dichten. Während dies ein Problem für fast die gesamte EV-Forschung ist, ist es von besonderer Bedeutung bei der Untersuchung von Elektrofahrzeugen im Zusammenhang mit Virusinfektionen, da Virionen und virusähnliche Partikel (VLPs) im Durchmesser den Vesikeln von Interesse ähnlich sein können. Zum Beispiel hat das Human Immunodeficiency Virus Typ 1 (HIV-1) einen Durchmesser von etwa 100 nm, was ungefähr der Größe vieler Arten von Elektrofahrzeugen entspricht. Aus diesem Grund haben wir einen neuartigen EV-Isolations-Workflow entwickelt, um diese Probleme anzugehen.
Der aktuelle Goldstandard der EV-Isolierung ist die Ultrazentrifugation. Diese Technik nutzt die verschiedenen Vesikeldichten, die es ermöglichen, die Vesikel durch Zentrifugation mit Differentialsedimentation von Partikeln mit höherer Dichte im Vergleich zu Partikeln mit niedrigerer Dichte in jeder Stufe 1,2zu trennen. Mehrere Mittel zur Zentrifugierung mit niedriger Geschwindigkeit sind erforderlich, um intakte Zellen (300-400 x g für 10 min), Zellablagerungen (für 10 min) und apoptotische Körper/große Vesikel (10.000 x g für 10 min) zu entfernen. Auf diese anfänglichen Reinigungen folgt eine Hochgeschwindigkeits-Ultrazentrifugation (100.000-200.000 x g für 1,5-2 h) zu Sediment-EVs. Waschschritte werden durchgeführt, um die Reinheit der Evev weiter zu gewährleisten, dies führt jedoch zur Verringerung der Anzahl isolierter Elektrofahrzeuge, wodurch die Gesamtausbeute 3,4verringert wird. Der Nutzen dieser Methode wird durch den Bedarf an einer großen Anzahl von Zellen (ca. 1 x 108) und einem großen Probenvolumen (> 100 ml) weiter eingeschränkt, um angemessene Ergebnisse zu erzielen.
Um den wachsenden Bedenken Rechnung zu tragen, ist die Fällung von Vesikeln mit hydrophilen Polymeren in den letzten Jahren zu einer nützlichen Technik geworden. Polyethylenglykol (PEG) oder andere verwandte Niederschlagsreagenzien ermöglichen es dem Anwender, die Vesikel, Viren und Protein- oder Protein-RNA-Aggregate innerhalb einer Probe herunterzuziehen, indem die Probe einfach mit dem Reagenz der Wahl inkubiert wird, gefolgt von einer einzigen Zentrifugation1,2,5. Wir haben bereits berichtet, dass die Verwendung von PEG oder verwandten Methoden zur Ausscheidung von Elektrofahrzeugen im Vergleich zur herkömmlichen Ultrazentrifugation zu einer deutlich höheren Ausbeute6führt. Diese Strategie ist schnell, einfach, erfordert keine zusätzliche teure Ausrüstung, ist leicht skalierbar und behält die EV-Struktur bei. Aufgrund des promiskuitiven Charakters dieser Methode enthalten die resultierenden Proben jedoch eine Vielzahl von Produkten, darunter freie Proteine, Proteinkomplexe, eine Reihe von Elektrofahrzeugen und Virionen, die eine weitere Reinigung erfordern, um die gewünschte Population zu erhalten1 ,2,7,8.
Um die Heterogenität von Elektrofahrzeugen zu überwinden, die aus verschiedenen Niederschlagsmethoden gewonnen werden, wird die Dichtegradienten-Ultrazentrifugation (DG) genutzt, um Partikel auf der Grundlage ihrer Dichte besser zu trennen. Diese Methode wird mit einem stufenweisen Gradienten unter Verwendung eines Dichtegradientenmediums wie Iodixanol oder Saccharose durchgeführt, das die Trennung von Elektrofahrzeugen von Proteinen, Proteinkomplexen und virus- oder virusähnlichen Partikeln (VLPs) ermöglicht. Es ist wichtig zu beachten, dass, obwohl man einst dachte, dass die DG eine genauere Trennung der EV-Subpopulationen zulässt, es heute bekannt ist, dass sich Größen und Dichten verschiedener Vesikel überschneiden können. So haben Exosomen bekanntermaßen Flotationsdichten von 1,08-1,22 g/ml9, während aus dem Golgi isolierte Vesikel (COPI+ oder Clathrin+) Dichten von 1,05-1,12 g/ml und solche aus dem endoplasmatischen Retikulum (COPII+ ) Sediment bei 1,18-1,25 g/mL1,2,3,4,9. Wenn man exosomale Fraktionen mit Fraktionen vergleichen möchte, die Viruspartikel enthalten, kann dies je nach Dichte des Virus von Interesse schwieriger werden – es gibt andere Viren als HIV-1, die wahrscheinlich gleichzeitig ausgleichen. Dichte als exosomale positive Fraktionen2.
Schließlich ist die Anreicherung von EV-Preps für nachgelagerte Visualisierungen und funktionelle Assays für die EV-Forschung von entscheidender Bedeutung. Die Verwendung von EV-anreichernden Nanopartikeln, insbesondere multifunktionalen Hydrogelpartikeln mit einem Durchmesser von 700-800 nm, ist ein entscheidender Schritt zur Erreichung konzentrierter EV-Preps. Sie besitzen einen aromatischen Köder mit hoher Affinität, der von einer porösen äußeren Siebschale gekapselt wird, um die Selektivität zu fördern. Zu den in dieser Studie verwendeten Nanopartikeln gehören zwei unterschiedliche Präparate mit unterschiedlichen Kernködern (Reactive Red 120 NT80 und Cibacron Blue F3GA NT82), die nachweislich die Erfassung von Elektrofahrzeugen aus verschiedenen Reagenzien und Biofluiden erhöhen (siehe Tabelle der Materialien). )6,10,11,12,13,14,15. Die Partikel bieten eine einfache Anreicherung von Elektrofahrzeugen aus zahlreichen Ausgangsmaterialien, darunter Iodixanolfraktionen, Zellkulturüberstand, sowie Patientenbiofluide wie Plasma, Serum, zerebrale Rückenmarksflüssigkeiten (CSF) und Urin6,13 .
Die hier vorgestellte Methode verbessert die Effizienz der aktuellen EV-Reinigungstechniken durch die Kombination mehrerer Technologien; EV-Fällung, Dichtegradienten-Ultrazentrifugation und Partikelerfassung, um den Workflow zu optimieren, die Probenanforderungen zu reduzieren und die Ausbeute zu erhöhen, um eine homogenere EV-Probe für den Einsatz in allen EV-Forschungen zu erhalten. Diese Methode ist besonders nützlich bei der Untersuchung von Elektrofahrzeugen und deren Inhalt während einer Virusinfektion, da sie einen Filterschritt von 0,22 m umfasst, um große, unerwünschte Vesikel und VLPs sowie die Trennung der gesamten EV-Population auf der Grundlage der Dichte zu einer effektiven EVs von Virions zu isolieren.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>CEM CD4+ Cells</td>
			<td>NIH AIDS Reagent Program</td>
			<td>117</td>
			<td>CEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS without Ca and Mg (1X)</td>
			<td>Quality Biological</td>
			<td>114-057-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ExoMAX Opti-Enhancer</td>
			<td>Systems Biosciences</td>
			<td>EXOMAX24A-1</td>
			<td>PEG precipitation reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Exosome-Depleted FBS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A2720801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Peak Serum</td>
			<td>PS-FB3</td>
			<td>Serum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HIV-1 infected U937 Cells</td>
			<td>NIH AIDS Reagent Program</td>
			<td>165</td>
			<td>U1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene Syringe Filter 0.2 &#181;m SFCA</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>723-2520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanotrap (NT80)</td>
			<td>Ceres Nanosciences</td>
			<td>CN1030</td>
			<td>Reactive Red 120 core</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanotrap (NT82)</td>
			<td>Ceres Nanosciences</td>
			<td>CN2010</td>
			<td>Cibacron Blue F3GA core</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optima XE-980 Ultracentrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>A94471</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiPrep Density Gradient Medium</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D1556-250mL</td>
			<td>Iodixanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SW 41 Ti Swinging-Bucket Rotor</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>331362</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-Clear Tube, 14x89mm</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>344059</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

purification of high yield extracellular vesicle preparations away from virus

Eine der größten Hürden auf dem Gebiet der extrazellulären Vesikelforschung (EV) ist heute die Fähigkeit, gereinigte EV-Präparate in einer Virusinfektion zu erreichen. Die vorgestellte Methode soll Elektrofahrzeuge von Virionen (d. h. HIV-1) abisolaten und eine höhere Effizienz und Ausbeute im Vergleich zu herkömmlichen Ultrazentrifugationsmethoden ermöglichen. Unser Protokoll enthält drei Schritte: EV-Ausfällung, Dichtegradiententrennung und Partikelerfassung. Downstream-Assays (z. B. Western Blot und PCR) können direkt nach der Partikelerfassung ausgeführt werden. Diese Methode ist vorteilhaft gegenüber anderen Isolationsmethoden (d. h. Ultrazentrifugation), da sie die Verwendung von minimalen Startvolumina ermöglicht. Darüber hinaus ist es benutzerfreundlicher als alternative EV-Isolationsmethoden, die mehrere Ultrazentrifugationsschritte erfordern. Die vorgestellte Methode ist jedoch in ihrem Umfang an funktionellen EV-Assays begrenzt, da es schwierig ist, intakte Elektrofahrzeuge aus unseren Partikeln zu entfernen. Darüber hinaus ist diese Methode auf einen rein forschungsbasierten Rahmen zugeschnitten und wäre kommerziell nicht rentabel.

PEG-Niederschlag erhöht EV-Ausbeute Unser Kombinationsansatz zur EV-Isolierung ist in Bezug auf die EV-Rückgewinnung deutlich effizienter als bei der herkömmlichen Ultrazentrifugation, wie die 90%ige Reduzierung des benötigten Ausgangsmaterials zeigt. Ultrazentrifugation, der aktuelle Goldstandard in der EV-Isolierung, benötigt ca. 100 ml Kulturüberstand, um eine adäquate EV-Vorbereitung für nachgeschaltete Assays zu erzeugen, während unser neuartiges Protokol...

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Purification of High Yield Extracellular Vesicle Preparations Away from Virus

Dieses Protokoll isoliert extrazelluläre Vesikel (EVs) von Virionen mit hoher Effizienz und Ausbeute, indem EV-Fällung, Dichtegradient-Ultrazentrifugation und Partikelerfassung integriert werden, um einen optimierten Workflow und eine Reduzierung des Startens zu ermöglichen. Mengenanforderungen, die zu reproduzierbaren Präparaten für den Einsatz in allen EV-Forschungen führen.

Reinigung von hochertragreichen extrazellulären Vesikelpräparaten weg vom Virus

One of the major hurdles in the field of extracellular vesicle (EV) research today is the ability to achieve purified EV preparations in a viral infection ...

Dieses Protokoll ist wichtig, weil es extrazelluläre Vesikel, Elektrofahrzeuge, durch eine Kombination von Technologien konzentriert, während es die Trennung von Virionen weg von Elektrofahrzeugen ermöglicht. Diese Methode maximiert die EV-Wiederherstellung über dem aktuellen Goldstandard der Ultrazentrifugation für die mehrfache nachgeschaltete Analyse und Charakterisierung von virenfreien EV-Preps. Dieses Protokoll ist ideal für die Untersuchung von EVs und virusviralen Infektionen.Diese Methode kann an andere Virussysteme wie HTLV, Ebola, Zika und mehr angepasst werden. Ich würde erwarten, dass ein erstmaliger Benutzer dieser Methode mit der Nanopartikelpräparation zu kämpfen hat, daher empfehlen wir, unsere Spezifikationen sorgfältig zu befolgen. Je nach System kann eine gewisse Optimierung erforderlich sein.Die visuelle Demonstration dieser Methode ist wichtig, um den gesamten Arbeitsablauf und die Nuancen des Protokolls zu veranschaulichen, wodurch Zeit und Fehler für Erstbenutzer reduziert werden. Beginnen Sie mit der Vorbereitung von Kulturüberstand aus infizierten oder transfizierten Zellen. Kultur etwa 10 Milliliter späte Logzellen für fünf Tage bei 37 Grad Celsius und 5% Kohlendioxid, um sicherzustellen, dass alle mittleren Reagenzien frei von extrazellulären Vesikelsind sind.Wenn die Kultur fertig ist, pellet die Zellen durch Zentrifugation bei 3.000 mal G für fünf Minuten und entsorgen Sie das Pellet. Filtern Sie den Überstand mit einem sterilen 0,22 Mikrometer Filter und sammeln Sie das Filtrat in einem Röhrchen. Fügen Sie dem Filtrat ein gleiches Volumen von PEG-Fällungsreagenzien hinzu und invertieren Sie das Rohr mehrmals, um es zu mischen.Inkubieren Sie die Mischung bei vier Grad Celsius über Nacht. Zentrifugieren Sie die Mischung nach der Inkubation 30 Minuten lang bei 1500-fachem G, um ein heterogenes extrazelluläres Vesikel oder EV-Pellet zu ergeben. Entsorgen Sie den Überstand und setzen Sie das Pellet in 150 bis 300 Mikroliter 1X PBS wieder auf, ohne Kalzium und Magnesium.Halten Sie das Pellet auf Eis, während Sie einen Dichtegradienten vorbereiten. Bereiten Sie das Odixanol Dichte Gradientenmedium mit 11 Dichtefraktionen, die von sechs bis 18%iodixanol, wie in der Handschrift beschrieben. Mischen Sie jedes Rohr durch Wirbeln und schichten Sie die Dichtefraktionen in ein sauberes und trockenes schwingendes Eimer-Ultrazentrifugenrohr.Fügen Sie das wieder aufgehängte EV-Pellet an die Spitze des geschichteten Farbverlaufs und ultrazentrifugieren Sie das Rohr bei 10 000 mal G und vier Grad Celsius für 90 Minuten. Übertragen Sie jede Fraktion vorsichtig aus dem Ultrazentrifugenrohr auf ein neues Mikrozentrifugenrohr. Bereiten Sie eine 30%-Schlämme von Nanopartikeln für die EV-Fraktionanreicherung vor, indem Sie gleiche Volumina von NT80, NT82 und 1X-PBS mischen.Wirbel das Nanopartikel-Gemisch, um Homogenität zu gewährleisten. Fügen Sie 30 Mikroliter der Gülle zu jeder Dichtefraktion hinzu und mischen Sie sie entweder durch Pipettieren oder Invertieren der Rohre. Der kritischste Schritt ist die Zugabe der Nano-Artikel, um Eves nach der Dichtegradiententrennung zu konzentrieren.Ohne dies ist die Erholung der Elektrofahrzeuge schlecht. Drehen Sie das Nanopartikel, das Dichtefraktionen enthält, über Nacht bei vier Grad Celsius. Zentrifugieren Sie dann die Dichtefraktionen bei 20.000 mal G für fünf Minuten bei Raumtemperatur.Entsorgen Sie die Flüssigkeit und waschen Sie das EV-Pellet zweimal mit 1X-PBS. Um das Pellet für die RNA-Isolierung vorzubereiten, setzen Sie es 50 Mikroliter autoklaviertes, entionisiertes Wasser wieder aus, gefiltert und mit Depsie behandelt, gemäß den Manuskriptanweisungen. Die RNA kann dann mit einem kommerziellen Kit isoliert werden.Zur Analyse mit Gelelektrophorese das Pellet in 15 Mikroliter Laemmli-Puffer wieder aufsetzen. Die Probe drei Minuten lang auf 95 Grad Celsius erhitzen. Wiederholen Sie den Heizschritt zwei weitere Male, wirbeln Sie sanft und drehen Sie die Probe zwischen den Wärmezyklen nach unten.Zentrifugieren Sie die Probe 15 Sekunden lang bei 20.000 mal G und laden Sie den Überstand direkt auf das Gel. Um optimale Ergebnisse zu erzielen, begrenzen Sie die Menge der partikelbelasteten Partikel auf das Gel und führen Sie es mit 100 Volt aus, um zu verhindern, dass geladene Nanopartikel in das Gel gelangen. PEG-Fällung ermöglicht eine deutlich effizientere EV-Rückgewinnung als herkömmliche Ultrazentrifugation.Bei Verwendung von 10 Milliliter Kultur führt dieser Ansatz zu einer etwa 500-fach höheren Ausbeute als ultrazentrifugation. Dieser Ansatz führt auch zu einer erhöhten Isolationseffizienz von Exosomen, was sich durch höhere Konzentrationen von Exosomen-Markerproteinen zeigt. Die Western PLA-Analyse zeigt, dass CD81 um das 3000-fache, CD63 um das Vierfache und CD9 um das 40-fache zugenommen hat.Darüber hinaus ermöglicht dieses Protokoll nachgelagerte Studien von EV-vermittelten Mechanismen bei HIV1-Infektionen, indem EEv es von Verionen isoliert werden. Westliche PLA-Analysen zeigen, dass Eves in drei Gruppenpopulationen gefunden werden. Während das Virus in nur zwei von ihnen vorhanden ist.Die Verletzung von EV 10,8 bis 12 ist frei von Viruskontamination. Das Wichtigste ist, dass die Nanopartikel entscheidend für eine optimale EV-Anreicherung sind. Ihre Ergänzung ist ein Muss.Viele nachgeschaltete Assays, wie Western Blot, PCR, reine Diomechanalyse durch Massenspektrometrie in plattenbasierten zellulären Assays können durchgeführt werden. Diese ermöglichen Charakterisierung, mechanistische und/oder funktionelle Studien. Diese Technik ermöglicht spezifische Studien, die EV-Ladung und Funktionalität untersuchen, ohne den viralen Hintergrund zu kontaminieren.Dies bietet eine Grundlage für die Untersuchung von EVs in Pathogenese und Entwicklung von potenziellen Therapeutika. Um die Grenzen dieser Technik zu überwinden und die EV-Vorbereitung und -Isolierung auf große Volumina anzuwenden, empfehlen wir den Einsatz fortschrittlicher Systeme, wie z. B. tangentiale Strömungsfiltration. Das gefährlichste Instrument ist die Ultrazentrifuge während der Dichtegradiententrennung.Stellen Sie sicher, dass alle Zentrifugenrohre gleich wiegen, um Ungleichgewichte und potenzielle Rotorausfälle zu vermeiden.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

High-throughput Detection Method for Influenza Virus

High-Throughput Nachweisverfahren für Influenza-Virus

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Affinity Purification of Influenza Virus Ribonucleoprotein Complexes from the Chromatin of Infected Cells

Affinitätsreinigung des Influenza-Virus Ribonukleoproteinkomplexe aus dem Chromatin der infizierten Zellen

Like all negative-strand RNA viruses, the genome of influenza viruses is packaged in the form of viral ribonucleoprotein complexes (vRNP), in which the ...

Purification of Pathogen Vacuoles from Legionella-infected Phagocytes

Purification of Pathogen Vacuoles from Legionella-infected Phagocytes

Die Reinigung von Pathogen Vakuolen aus<em&gt; Legionellen</em&gt;-Infizierten Phagozyten

The opportunistic pathogen Legionella pneumophila is an amoeba-resistant bacterium, which also replicates in alveolar macrophages thus causing the severe ...

Rescue of Recombinant Newcastle Disease Virus from cDNA

Rettung von rekombinanten Newcastle Disease Virus aus cDNA

Newcastle disease virus (NDV), the prototype member of  the Avulavirus genus of the family Paramyxoviridae1, is a non-segmented,  negative-sense, ...

High Yield Purification of Plasmodium falciparum Merozoites For Use in Opsonizing Antibody Assays

High Yield Purification of Plasmodium falciparum Merozoites For Use in Opsonizing Antibody Assays

High Yield Reinigung von<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt; Merozoiten Zur Verwendung in opsonierende Antikörper-Assays

Plasmodium falciparum merozoite antigens are under development as potential malaria vaccines. One aspect of immunity against malaria is the removal of ...

An Efficient and High Yield Method for Isolation of Mouse Dendritic Cell Subsets

Eine effiziente und High-Yield-Methode zur Isolierung von Maus über dendritische Zellen Subsets

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Neutrophilen-Isolierung und Analyse zur Bestimmung ihrer Rolle in der Lymphom-Zellempfindlichkeit therapeutische Mittel

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Detection and Removal of Nuclease Contamination During Purification of Recombinant Prototype Foamy Virus Integrase

Erkennung und Entfernung von Nuklease Kontamination während der Reinigung von rekombinanten Prototyp schaumig Virus Integrase

The integrase (IN) protein of the retrovirus prototype foamy virus (PFV) is a model enzyme for studying the mechanism of retroviral integration. Compared ...

Evaluation of Extracellular Vesicle Function During Malaria Infection

Auswertung der extrazellulären Vesikel Funktion im Malaria-Infektion

Malaria is a life-threatening disease caused by Plasmodium parasites, with P. falciparum being the most prevalent on the African continent and responsible ...

Assembly and Purification of Prototype Foamy Virus Intasomes

Montage und Reinigung der Prototyp schaumig Virus Intasomes

A defining feature and necessary step of the retrovirus life cycle is the integration of the viral genome into the host genome. All retroviruses encode an ...