Name: preparation and characterization of nanoliposomes for the entrapment of bioactive hydrophilic globular proteins
Uploaded: 2019-08-31T14:00:00
Duration: 11 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation and Characterization of Nanoliposomes for the Entrapment of Bioactive Hydrophilic Globular Proteins at JoVE.com

ويشكر المؤلفون مرافق مختبر توصيف المواد المتعددة المستخدمين التابعة لـ COPPE/UFRJ، ومختبر الفحص المجهري الإلكتروني، ومختبر توصيف المواد المتعددة المستخدمين؛ إلى الدكتور أدالبرتو فييرا، والدكتورة جنيفر لوي، ورافائيل ليندوسو، أساتذة في جامعة ريو دي جانيرو الاتحادية، الاتحاد من أجل الجمهورية، البرازيل، لاستخدام جهاز الطرد المركزي الفائق؛ إلى الدكتور ألكسندر غويديس توريس ودانيال بيروني، أستاذان في الجامعة الاتحادية في ريو دي جانيرو، الاتحاد من أجل الجمهورية، البرازيل، لاستخدام المبخر الدوار؛ إلى البروفيسور رولاند بودماير والدكتور أندري داشيفسكي من جامعة فراي في برلين، اللذين ساعدا في توفير الموارد، وزودا منهجيات جديدة، وأشرفا على ACNTF خلال زمالة Erasmus+ لمدة 6 أشهر في ألمانيا؛ إلى الدكتورة روسانا ثيري وألين فرنانديز، أستاذة وفنية في الجامعة الاتحادية في ريو دي جانيرو، الاتحاد من أجل الديمقراطية والملكية الأردنية، البرازيل، لاستخدام زيتازير مالفيرن؛ إلى بلوما غينثر وتايسا رودريغيز، أستاذ وفني في الجامعة الاتحادية دو ريو دي جانيرو، الاتحاد من أجل العدالة والتنمية، البرازيل، لاستخدام SEM؛ إلى الدكتورة راشيل آن هاوزر ديفيس، الباحثة في مؤسسة أوزوالدو كروز، للرواية. تم تمويل هذه الدراسة جزئيا من قبل Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, Brasil (CAPES) - Finance Code 001 (grant No. 1627392; 1811605); بواسطة Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro (FAPERJ) (grant No. E-26/202.815/2018؛ E-26/202.815/2018؛ E-26/203.039/2015 و E-26/202.860/2016)؛ مقدم من المجلس الوطني للدراسات العلمية (CNPq) (منحة رقم 406601/2018-6)، وFinanciadora de Estudos e Projetos (FINEP).

<ol>
	<li>Wang, X., Wang, Y., Chen, Z. G., Shin, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+of+cancer+therapy+by+nanotechnology.">Advances of cancer therapy by nanotechnology.</a> Cancer Research and Treatment: Official Journal of Korean Cancer Association. 41 (1), 1 (2009).</li><li>Keller, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomes+in+nutrition.">Liposomes in nutrition.</a> Trends in Food Science &amp; Technology. 12 (1), 25-31 (2001).</li><li>Fr&#233;zard, F., Schettini, D. A., Rocha, O. G., Demicheli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipossomas:+propriedades+f&#237;sico-qu&#237;micas+e+farmacol&#243;gicas,+aplica&#231;&#245;es+na+quimioterapia+&#224;+base+de+antim&#244;nio.">Lipossomas: propriedades f&#237;sico-qu&#237;micas e farmacol&#243;gicas, aplica&#231;&#245;es na quimioterapia &#224; base de antim&#244;nio.</a> Quimica Nova. 28 (3), 511-518 (2005).</li><li>Ferreira, D. d. S., Lopes, S. C. d. A., Franco, M. S., Oliveira, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=pH-sensitive+liposomes+for+drug+delivery+in+cancer+treatment.">pH-sensitive liposomes for drug delivery in cancer treatment.</a> Therapeutic Delivery. 4 (9), 1099-1123 (2013).</li><li>Papachristos, A., Pippa, N., Ioannidis, K., Sivolapenko, G., Demetzos, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomal+forms+of+anticancer+agents+beyond+anthracyclines:+present+and+future+perspectives.">Liposomal forms of anticancer agents beyond anthracyclines: present and future perspectives.</a> Journal of Liposome Research. 25 (2), 166-173 (2015).</li><li>Akbarzadeh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposome:+classification,+preparation,+and+applications.">Liposome: classification, preparation, and applications.</a> Nanoscale Research Letters. 8 (1), 102 (2013).</li><li>Bangham, A., Standish, M. M., Watkins, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diffusion+of+univalent+ions+across+the+lamellae+of+swollen+phospholipids.">Diffusion of univalent ions across the lamellae of swollen phospholipids.</a> Journal of Molecular Biology. 13 (1), 238-252 (1965).</li><li>Szoka, F., Papahadjopoulos, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Procedure+for+preparation+of+liposomes+with+large+internal+aqueous+space+and+high+capture+by+reverse-phase+evaporation.">Procedure for preparation of liposomes with large internal aqueous space and high capture by reverse-phase evaporation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 75 (9), 4194-4198 (1978).</li><li>Batzri, S., Korn, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+bilayer+liposomes+prepared+without+sonication.">Single bilayer liposomes prepared without sonication.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes. 298 (4), 1015-1019 (1973).</li><li>Zumbuehl, O., Weder, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomes+of+controllable+size+in+the+range+of+40+to+180+nm+by+defined+dialysis+of+lipid/detergent+mixed+micelles.">Liposomes of controllable size in the range of 40 to 180 nm by defined dialysis of lipid/detergent mixed micelles.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes. 640 (1), 252-262 (1981).</li><li>Szebeni, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidation+and+denaturation+of+hemoglobin+encapsulated+in+liposomes.">Oxidation and denaturation of hemoglobin encapsulated in liposomes.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - General Subjects. 798 (1), 60-67 (1984).</li><li>Coelho, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+delivery+systems:+Advanced+technologies+potentially+applicable+in+personalized+treatments.">Drug delivery systems: Advanced technologies potentially applicable in personalized treatments.</a> EPMA Journal. 1 (1), 164-209 (2010).</li><li>Pereira, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+and+characterization+of+the+lectin+from+taro+(Colocasia+esculenta)+and+its+effect+on+mouse+splenocyte+proliferation+in+vitro+and+in+vivo.">Purification and characterization of the lectin from taro (Colocasia esculenta) and its effect on mouse splenocyte proliferation in vitro and in vivo.</a> The Protein Journal. 33 (1), 92-99 (2014).</li><li>Pereira, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+analysis+and+binding+properties+of+isoforms+of+tarin,+the+GNA-related+lectin+from+Colocasia+esculenta.">Structural analysis and binding properties of isoforms of tarin, the GNA-related lectin from Colocasia esculenta.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Proteins and Proteomics. 1854 (1), 20-30 (2015).</li><li>Pereira, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+crystal+structures+of+Colocasia+esculenta+tarin+lectin.">High-resolution crystal structures of Colocasia esculenta tarin lectin.</a> Glycobiology. 27 (1), 50-56 (2016).</li><li>Correa, A., Vericimo, M. A., Dashevskiy, A., Pereira, P. R., Paschoalin, V. M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomal+Taro+Lectin+Nanocapsules+Control+Human+Glioblastoma+and+Mammary+Adenocarcinoma+Cell+Proliferation.">Liposomal Taro Lectin Nanocapsules Control Human Glioblastoma and Mammary Adenocarcinoma Cell Proliferation.</a> Molecules. 24 (3), 471 (2019).</li><li>Peterson, G. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplification+of+the+protein+assay+method+of+Lowry+et+al.+which+is+more+generally+applicable.">A simplification of the protein assay method of Lowry et al. which is more generally applicable.</a> Analytical Biochemistry. 83 (2), 346-356 (1977).</li><li>Merida, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tarin+stimulates+granulocyte+growth+in+bone+marrow+cell+cultures+and+minimizes+immunosuppression+by+cyclo-phosphamide+in+mice.">Tarin stimulates granulocyte growth in bone marrow cell cultures and minimizes immunosuppression by cyclo-phosphamide in mice.</a> PLoS ONE. 13 (11), e0206240 (2018).</li><li>Murtey, M. D., Ramasamy, P., Janecek, M., Kral, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sample+Preparations+for+Scanning+Electron+Microscopy+-+Life+Sciences.">Sample Preparations for Scanning Electron Microscopy - Life Sciences.</a> Modern Electron Microscopy in Physical and Life Sciences. , (2016).</li><li>Andrade, C. A., Correia, M. T., Coelho, L. C., Nascimento, S. C., Santos-Magalh&#227;es, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumor+activity+of+Cratylia+mollis+lectin+encapsulated+into+liposomes.">Antitumor activity of Cratylia mollis lectin encapsulated into liposomes.</a> International Journal of Pharmaceutics. 278 (2), 435-445 (2004).</li><li>dos Santos Ferreira, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+bone-targeted+pH-sensitive+liposomal+formulation+containing+doxorubicin:+physicochemical+characterization,+cytotoxicity,+and+biodistribution+evaluation+in+a+mouse+model+of+bone+metastasis.">Development of a bone-targeted pH-sensitive liposomal formulation containing doxorubicin: physicochemical characterization, cytotoxicity, and biodistribution evaluation in a mouse model of bone metastasis.</a> International Journal of Nanomedicine. 11, 3737 (2016).</li><li>Pereira, P. R., Corr&#234;a, A. C. N. T. F., Vericimo, M. A., Paschoalin, V. M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tarin,+a+Potential+Immunomodulator+and+COX-Inhibitor+Lectin+Found+in+Taro+(Colocasia+esculenta).">Tarin, a Potential Immunomodulator and COX-Inhibitor Lectin Found in Taro (Colocasia esculenta).</a> Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety. 17 (4), 878-891 (2018).</li><li>Olson, F., Hunt, C., Szoka, F., Vail, W., Papahadjopoulos, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+liposomes+of+defined+size+distribution+by+extrusion+through+polycarbonate+membranes.">Preparation of liposomes of defined size distribution by extrusion through polycarbonate membranes.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes. 557 (1), 9-23 (1979).</li><li>Mui, B., Chow, L., Hope, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrusion+technique+to+generate+liposomes+of+defined+size.">Extrusion technique to generate liposomes of defined size.</a> Methods in Enzymology. 367, 3 (2003).</li><li>Soo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancing+delivery+and+cytotoxicity+of+resveratrol+through+a+dual+nanoencapsulation+approach.">Enhancing delivery and cytotoxicity of resveratrol through a dual nanoencapsulation approach.</a> Journal of Colloid and Interface Science. 462, 368-374 (2016).</li></ol>

وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

تم اختبار البروتوكول الموضح هنا من قبل Correa et al.16 لتغليف التارين، وهو مناعي ومضاد للورم تنقية من كولواسيا ايسكولنتا22. وأسفرت المنهجية عن نتائج ناجحة، مما سمح بإنتاج نانوليبوسومات مستقرة ذات حجم مناسب للتطبيقات العلاجية. صياغة يعرض الإفراج عن تسيطر عليها في مستويات درجة الحموضة المختلفة في ظل الظروف الفسيولوجية. كما أنه يقوي الخصائص الدوائية التارين، مثل تثبيط الورم الأرومي الدبقي البشري U-87 MG وسرطان الثدي MDA-MB-231 خطوط الخلايا وتحفيز خلايا نخاع العظام الفئران. لم يظهر الإعداد اللبوسومال أي آثار سامة في خلايا الفئران صحية16.
الطريقة الكلاسيكية، التي وصفها لأولمرة Bangham وآخرون 7، يسمح لإنتاج الحويصلات الشحمية متعددة اللاملار كبيرة، غير متجانسة في الحجم والشكل. يتم تطبيق تعديلات هذه الطريقة، كما ورد في هذه الدراسة، بنجاح من خلال إدراج خطوات إضافية مثل سونيكيشن والنتوء من خلال غشاء البولي 0.2 م. وهذا يسمح بإنتاج تشتت أكثر تجانسا فيما يتعلق بالحجم في نطاق نانومتر16،23،24. ولذلك، لضمان تحقيق نتائج ناجحة، ينبغي اتباع بروتوكول التغليف والتركيبة الدهنية الموصوفة هنا بدقة.
تم اختيار تكوين nanoliposome بعناية من أجل ضمان تشكيل غشاء ثنائي الطبقة مع DOPE، MPEG 2000-DSPE، وCHEMS كمكونات رئيسية. هذه هي المكونات غشاء الحيوان الطبيعي ثنائي الطبقة وهذه الأخيرة يمكن أن تضفي سيولة للهندسة النانوية، وضمان تطبيق واسع النطاق لتسليم مركب نشط بيولوجيا في البشر.
الأننيوليبوسوم pegylation ضروري لضمان استقرار هيكل liposome. يؤدي غياب PEG إلى توسيع الحجم، ومؤشر تعدد التشتت العالي، وانخفاض كفاءة الفخ. يمكن الحصول على النتائج المثلى مع DOPE كعنصر liposome الرئيسي. ومع ذلك، هذا هو فوسفوليبيد عالية التكلفة. ويمكن تحقيق التكاليف المالية لإنتاج nanoliposome عن طريق استبدال DOPE مع الدهون المماثلة الأخرى مثل DOPC (1,2-ديوليل-سن-غليسيرو-3-فوسفوليو). CHEMS هو جزيء الكولسترول الموجود بشكل طبيعي في أغشية الخلايا الحيوانية، والتي لا ينبغي استبعادها من الصياغة، حيث أنه من المهم ضمان سيولة الدهون ثنائية الطبقة وليونة16.
ويمكن أيضا تكييف جوانب أخرى من بروتوكول التغليف. ويمكن بسهولة استبدال الكلوروفورم المستخدم في حل المكونات الدهنية بالميثانول مع عدم وجود آثار على متوسط الحجم، والتجانس، وكفاءة الفخ. ومع ذلك، يمكن أن يحدث بعض تسرب البروتين في التخزين تحت 4 °C16. خطوة الحضانة بين عشية وضحاها مع محلول كبريتات الأمونيوم التي تحتوي على التارين ليست إلزامية. ومع ذلك، للراحة يمكن أن يؤديها مع عدم وجود ضرر للخصائص البيوفيزيائية nanoliposomal، تغليف، أو خسائر كفاءة الاستقرار، كما هو مبين من قبل كوريا وآخرون16. يتم تنفيذ خطوة البثق في درجة حرارة الغرفة، والتي يمكن أن تقلل من معدل التدفق بين المحاقن إذا تم استخدام غشاء حجم المسام 0.1 م.
للتغلب على هذه المشكلة، ينبغي النظر في استخدام غشاء حجم المسام 0.2 م أو تسخين حامل الطارد فوق درجة حرارة انتقال الدهون. يجب على المحلل أن يكون حريصا على عدم الإضرار بالدهون أو البروتين الذي يمكن تعطيله وفقدان النشاط البيولوجي. بدلاً من ذلك، يمكن أن يكون إعداد liposomal dialyzed ضد HBS بدلاً من ultracentrifugation، وذلك باستخدام غشاء قطع وفقا ً للوزن الجزيئي البروتيني. إن اختيار الطبيعة الكيميائية للحاجز الذي يتم فيه تعليق النانوليبوسومبعد التموجات الفائقة يرتبط مباشرة بتطبيقه اللاحق. وبما أن وجهات نظر هذه الدراسة تشمل في الاختبارات الحية والمختبرية، فإن التعليق في محلول ملحي مُسحَرِّف من HEPES كان كافياً لضمان عدم وجود آثار سامة للخلايا ومجموعة من الأس الهيدروجيني قريبة من الظروف الفسيولوجية.
يجب أن تعامل liposomes بدقة، على غرار الخلايا الحية، للحصول على صور SEM أعلى جودة. إجراءات التثبيت والتجفيف مهمة لضمان التصور من الحويصلات سليمة أصغر التي تدعم القيم أعلى من 20 كيلو فولت في ظل ظروف فراغ. الشكل 2 A، B يعرض الحويصلات نانوية متوافقة مع إجراء البثق. التصور من الحويصلات تتراوح بين 51-396 نانومتر ممكن إذا تم تنفيذ إعداد عينة كافية بعد هذا الإجراء. وتشمل الخطوات التثبيت، والتجفيف عن طريق زيادة تركيزات الإيثانول، والجفاف الكيميائي لتجنب تشكيل المجاميع والحويصلات الممزقة الناجمة عن الفراغ وشعاع الإلكترون. من ناحية أخرى، يظهر الشكل 2C،D الحويصلات الدهنية المجففة تحت درجة حرارة الغرفة ولا تخضع لأي علاجات الموصوفة هنا، مما يعني أنها كانت مستعدة بشكل غير كاف. نتيجة لعدم كفاية الإجراء ، يتم تشكيل الحويصلات العملاقة ، حتى بعد البثق من خلال غشاء حجم المسام 0.2 ميكرومتر. كما لوحظ تمزق الحويصلات في كلتا اللوحتين نتيجة للفراغ وتلف شعاع الإلكترون.
وقد تم استكشاف الحويصلات Nanoliposome كتغليف ونظام التسليم للجزيئات الكارهة للماء، بما في ذلك ريسفيراترول (3،5،4'-تريهيدروكسيستيلبين)، وهو مركب نشط بيولوجيا ضد خلايا سرطان القولون والمستقيم. يمكن إجراء التغليف التغلب على الذوبان الفقراء من المركبات الدهنية بالإضافة إلى توفير التوافق البيولوجي، والتحلل البيولوجي، وعدم المناعة، والخصائص غير السمية المتأصلة في كبسولات نانوية liposome25. ويجب أن تؤخذ في الاعتبار تعديلات البروتوكولات تبعاً لمسار الإدارة والغرض منها، مثل وضع تركيبات جديدة للإدارة عن طريق الفم.

وقد ارتفع في السنوات الأخيرة عدد الدراسات التي تحقق في كفاءة نظم إيصال المخدرات. ومع ذلك، لا تزال هناك حاجة إلى تجاوز قيود مثل التطهير السريع، وسوء التوزيع البيولوجي، والذوبان في درجة الحموضة الفسيولوجية وعدم كفاية الكمية الخلوية. وقد برز استخدام النظم النانوية مع التقدم المحرز مؤخرا في علاج السرطان، المطبق لزيادة التركيز داخل الخلايا من الأدوية داخل الخلايا السرطانية مع تقليل السمية في الخلايا السليمة. وعلاوة على ذلك، يجري حالياً تطبيق الجسيمات النانوية التي يتم الحصول عليها من مجموعة مختلفة من المواد (أي البوليمرات، والدندريمرات، والدهون، والفيروسات، والأنابيب النانوية الكربونية، والمعادن مثل أكسيد الحديد والذهب) لتعزيز آثار مكافحة السرطان والحد من النظم سمية1. وقد تم تطبيق كبسولات نانوية Liposome على وجه الخصوص لأغراض عديدة في الصناعات الصيدلانية ومستحضرات التجميل والصناعات الغذائية. في السنوات الأخيرة ، تم صياغة مختلف المنتجات المغذيات مثل الفيتامينات والانزيمات والمستخلصات العشبية باستخدام تكنولوجيا liposome2.
Liposomes هي حويصلات كروية تتكون من واحد أو أكثر من ثنائيات الدهون متحدة المركز التي شكلت تلقائيا من خلال تشتت الدهون الفوسفاتية في وسائل الإعلام المائية3،4. وتقع الرؤوس القطبية للفوسفوليبيدات على الأسطح الخارجية والداخلية للأغشية، في اتصال مع البيئة المائية. وعلى النقيض من ذلك، تشكل سلاسل الأحماض الدهنية النواة الكارهة للماء من الأغشية ومحمية من الماء5. بعض الصفات من liposomes التي تجعلها نظم تسليم المخدرات جذابة وتشمل التوافق البيولوجي، والتحلل البيولوجي، وعدم المناعة، وعدم السمية، والقدرة على فخ كل من المركبات المائية والكارهة للماء6.
يمكن إعداد Liposomes باستخدام خطوات عمليات مختلفة مثل التحريض، سونيكيشن، البثق، التحلل، التجميد، والذوبان. وتشمل الطرق الكلاسيكية التبخر في المرحلة العكسية، وحقن المذيبات، وغسيل الكلى المنظفات. الطريقة الأكثر تطبيقًا هي ترطيب الدهون الرقيقة، والمعروفة أيضًا باسم طريقة Bangham، والتي تستخدم للحصول على أشكال الدهون الحويصلية7و8و9و10و11. Lamellarity (عدد ثنائيات الدهون الفوسفاتية) وحجم الجسيمات هي المعلمات الكلاسيكية المستخدمة لوصف liposomes إما 1) حويصلات unilamellar (ULVs)، التي شكلتها ثنائية الدهون الفوسفاتية فريدة من نوعها ومتفاوتة في الحجم على النحو التالي: '1) unilamellar الصغيرة الحويصلات (سيارات الدفع الرباعي، ~ 0.02-0.20 ميكرومتر)، 2) حويصلات unilamellar كبيرة (LUVs، ~ 0.2-1.0 ميكرومتر)، و 3) الحويصلات يونيلاميلار العملاقة (GUVs، > 1 ميكرومتر)؛ أو 2) الحويصلات multilamellar (MLVs، >0.1 م) 3،12. حجم الحويصلة هو معلمة هامة عند النظر في الاستخدام العلاجي، كما هو الحال في علاج السرطان، حيث أحجام <200 نانومتر مثالية للسماحnanovesicles لعبور الحاجز البطانية والوصول إلى الأنسجة الورمية 4.
هنا، تم وصف إجراء التغليف بعد الترطيب الكلاسيكي لتقنية فيلم الدهون رقيقة7 باستخدام التارين، وهو نبات اللكتين يتميز بالبروتين الكروي المائي13،14،15 . يتم إنتاج الحويصلات نانوية الحجم من خلال بما في ذلك خطوات sonication والنتوء في التقنية الرئيسية، مما أدى إلى nanovesicless s liposomal مستقرة مع كفاءة عالية الفخ16.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ammonium Sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>A4418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analitycal Ballance Mettler H10Tw</td>
			<td>Mettler Inc.</td>
			<td>417870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beckman DU-640 Spectrophotometer</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>8043-30-1090</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>5470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BUCHI Rotavapor R-300 Rotary Evaporator with Controller and V-300 Pump</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>05-001-022PM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHEMS (cholesterylhemisuccinate)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>C6512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>48520-U</td>
			<td>CAUTION</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper (II) Sulfate (Pentahydrate)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>209198</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips (13mm diameter)</td>
			<td>Thermo Scientific Nunc</td>
			<td>EW-01839-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DOPE(1,2-dioleoyl-sn-glycerol-3-phosphoethanolamine)</td>
			<td>Lipoid GMBH</td>
			<td>565600.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol Absolute</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>32205</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Folin -Ciocalteu phenol reagent</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>F9252</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>G5882</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>H3375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexamethyldisilazane (HMDS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>440191</td>
			<td>CAUTION</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>JEOL JSM-6460 LV Sacnning Electron Microscope</td>
			<td>JEOL LTD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini Extruder 7</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>610000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MPEG 2000-DSPE 1,2-distearoyl-sn-glycero-3- phosphoethanolamine-N-[amino(polyethylene glycol)-2000] (ammonium salt)</td>
			<td>Lipoid GMBH</td>
			<td>588200.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optima L-90k Ultracentrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>PN LL-IM-12AB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffer</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>P3619</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poli-L-lysine</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>P8920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium L-tartrate monobasic</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>243531</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Carbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>S7795</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Deoxycholate (DOC)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>D6750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Dodecyl Sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>L3771</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>S8045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic anhydrous</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>RES20908-A7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TESCAN VEGA 3 Scanning Electron Microscope</td>
			<td>Tescan</td>
			<td>#657874</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichloroacetic Acid (TCA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>91230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zetasizer Nano ZSP</td>
			<td>Malvern Panalytical LTD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cleaning bath model 2510</td>
			<td>Branson</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation and characterization of nanoliposomes for the entrapment of bioactive hydrophilic globular proteins

وقد تم تطبيق كبسولات نانوية Liposome لأغراض عديدة في الصناعات الصيدلانية ومستحضرات التجميل والصناعات الغذائية. وتشمل سمات liposomes توافقها البيولوجي، والتحلل البيولوجي، وعدم المناعة، وعدم السمية، والقدرة على فخ كل من المركبات المائية والكارهة للماء. يتم تطبيق الترطيب الكلاسيكي للأغشية الدهنية رقيقة في المذيبات العضوية هنا كتقنية لتغليف التارين، اللكتين النبات، في nanoliposomes. يتم وصف حجم Nanoliposome، والاستقرار، وكفاءة الفخ، والتوصيف المورفولوجي بالتفصيل. يتم إعداد nanoliposomes باستخدام 1,2-ديوليل-سن-الجلسرين-3-فوسفوتيلونامين (DOPE)، 1،2-ديستيويل-سن-غليسيرو-3-فوسفويلولامين-N-[أمينو(البولي ايثيلين غليكول)-2000] (ملح الأمونيوم. DSPE-MPEG 2000)، وcholesterylhemisuccinate (CHEMS) كمكونات رئيسية. يتم حل الدهون لأول مرة في الكلوروفورم للحصول على فيلم الدهون رقيقة التي يتم إعادة ترطيبها في وقت لاحق في محلول كبريتات الأمونيوم التي تحتوي على البروتين أن تكون محاصرة وحضانة بين عشية وضحاها. ثم، يتم تطبيق تقنيات sonication والنتوء لتوليد الحويصلات unilamellar نانوية الحجم. يتم تحديد حجم ومؤشر التشتت المتعدد للnanovesicles عن طريق تشتت الضوء الديناميكي، في حين يتم تقييم مورفولوجيا النانوفيكل عن طريق المسح المجهري الإلكتروني. يتم تحديد كفاءة الفخ من خلال نسبة كمية البروتين غير المغلف إلى الكمية الأصلية من البروتين المحملة في البداية. يتم الحصول على liposomes متجانسة مع متوسط حجم 155 نانومتر وقيمة مؤشر تعدد التشتت من 0.168. يتم تحقيق كفاءة عالية في الفخ من 83٪.

الشكل 1 يصف إعداد nanoliposome16،20،21. فوسفوليبيدات، 1،2-ديوليل-سن-غليسيرول-3-فوسفوإيثانولامين (DOPE)، 1،2-ديستيويل-سن-غليسيرو-3-فوسفويلولامين-ن-[أمينو(البولي ايثيلين غليكول)-2000] (ملح الأمونيوم؛ DSPE-MPEG 2000)، وcholesterylhemisuccinate (CHEMS)، والمكونات الرئيسية liposome، تم حلها لأول مرة في الكلوروفورم للحصول على فيلم الدهون. ثم تم إعادة ترطيب فيلم الدهون في محلول كبريتات الأمونيوم التي تحتوي على البروتين المائي (تارين) لتكون محاصرين، ويتم الحضانة بين عشية وضحاها. ثم، تم تطبيق تقنيات sonication والنتوء لتوليد الحويصلات unilamellar الصغيرة. وفصلت خطوة التثرجوة عن إعداد الدهون الدهنية عن الدهون الحرة والبروتين غير المغلف، في حين تم استخدام supernatant لتحديد كفاءة الفخ.
وقد أظهرت النانوليبوسومات المنتجة باستخدام المنهجية المذكورة أعلاه توزيعاً بحجم يتراوح بين51 و396 نانومتر ومتوسط حجم قدره 155 نانومتر (الجدول 2). كان التحضير متجانسة, بما أنّ ال [بولّفرقتي] فهرسة كان 0.168. ويمكن التوصل إلى كفاءة عالية في الفخ بنسبة 83٪ إذا تم مقذوف liposomesمن خلال غشاء حجم المسام 0.2 م (الجدول 2).
تم تقييم الخصائص النانوليبولوجية من قبل SEM. الشكل 2A،B يعرض الحويصلات الشحمية على شكل دائري في نطاق 121 نانومتر وتحليلها في 20 كيلوفولت، في حين أن الشكل 2C،D يعرض غير مهيأ بشكل كاف عينات. وقد جفت النانوليبوسومات ببساطة الهواء دون تثبيت السابقة أو أي علاج آخر وصفها في هذه الدراسة. ونتيجة لذلك، لوحظت حويصلات أكبر وتالفة في نطاق 332 ميكرومتر وتحليلها في 5 كيلوفولت.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59900/59900fig1.jpg"> الشكل 1: التمثيل التخطيطي لإعداد النانوليبوسوم. تم حل DOPE، PEG، وCHEMS، المكونات الرئيسية liposome، لأول مرة في الكلوروفورم للحصول على فيلم الدهون(1، 2،3). ثم تم إعادة ترطيب فيلم الدهون في عازلة ملحية تحتوي على البروتين المائي (تارين) لتكون محاصرين، وتم إجراء الحضانة بين عشية وضحاها (4). ثم، تم تطبيق تقنيات sonication والنتوء لتوليد سيارات الدفع الرباعي(5،6). وفصلت خطوة ultracentrifugation إعداد liposomal من الدهون الحرة والبروتين غير مغلفة، في حين تم استخدام supernatant لتحديد كفاءة الفخ (7). وقد تم تعديل هذا الرقم من Correa et al.16. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59900/59900fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59900/59900fig2.jpg"> الشكل 2: الفحص الضوئي النانوليبوسوم بواسطة SEM. (ألف،باء) صور من الحويصلات الشحمية على شكل دائري في نطاق 121 نانومتر وتحليلها في 20 كيلو فولت. (C,D) صور عينات غير معدة بشكل كاف. عينات يساء معاملتها يسمح لمراقبة الحويصلات أكبر و / أو التالفة، والتي لا يمكن أن تقاوم فراغ و / أو ظروف الجهد في 5 كيلوفولت. وقد تم تعديل هذا الرقم من Correa et al.16. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59900/59900fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>مكونات ليبوسوم</td>
			<td>الوزن (ز)</td>
			<td>التركيز (mM)</td>
			<td>المجلد النهائي</td>
		</tr>
<tr>
<td>المخدرات</td>
			<td>0.0420</td>
			<td>5.7</td>
			<td rowspan="3">10 مل</td>
		</tr>
<tr>
<td>MPEG 2000-DSPE</td>
			<td>0.1059</td>
			<td>3.8</td>
		</tr>
<tr>
<td>في ما يُم</td>
			<td>0.0024</td>
			<td>0.5</td>
		</tr>
</tbody></table>DOPE - 1،2-ديوليل-سن-غليسيرول-3-فوسفوإيثانولامين)؛ MPEG 2000-DSPE - 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N- [amino (البولي ايثيلين غليكول)-2000] (ملح الأمونيوم); CHEMS – تشوليستريميستشينوت.
الجدول 1: إعداد كبسولات نانوية ليبوسومال تارين.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>حجم المسام الغشاء (ميكرومتر)</td>
			<td>توزيع الحجم (نانومتر)</td>
			<td>متوسط الحجم (نانومتر)</td>
			<td>فهرس التشتت المتعدد (PdI)</td>
			<td>الذروة (نانومتر)</td>
			<td>كفاءة الفخ</td>
		</tr>
<tr>
<td>0.2</td>
			<td>51 - 396</td>
			<td>155</td>
			<td>0. 168</td>
			<td>94 ± 39</td>
			<td>0.83</td>
		</tr>
</tbody></table>تم تقييم مؤشر الحجم والتشتت المتعدد من خلال تشتت الضوء الديناميكي، في حين تم تحديد كفاءة التغليف وفقا لبيترسون17.
الجدول 2: الحجم، ومؤشر التشتت، وكفاءة الوقوع في فخ إعداد nanoliposome.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation and Characterization of Nanoliposomes for the Entrapment of Bioactive Hydrophilic Globular Proteins at JoVE.com

Preparation and Characterization of Nanoliposomes for the Entrapment of Bioactive Hydrophilic Globular Proteins

تصف هذه الدراسة الترطيب الكلاسيكي باستخدام طريقة فيلم الدهون الرقيقة لإعداد nanoliposome متبوعاً بتوصيف الجسيمات النانوية. يتم تغليف بروتين 47 كيلودا-هيدروفيليك وكروي، تارين، بنجاح كاستراتيجية لتحسين الاستقرار، وتجنب التطهير السريع، وتعزيز الإفراج الخاضع للرقابة. ويمكن تكييف هذه الطريقة مع تغليف الجزيئات الكارهة للماء.

إعداد وتوصيف Nanoliposomes لفخ البروتينات الكروية المائية النشطة بيولوجيا

Liposome nanocapsules have been applied for many purposes in the pharmaceutical, cosmetic, and food industries. Attributes of liposomes include their ...

سيتم إعداد الكبسولات النانوية الدهنية بواسطة تقنية البثق خطوة بخطوة في فخ القارين 48 كيلودالتون globular في البروتين المائي المنقى من الإسكونتا colocasia سيتم إثباته. جميع الإجراءات لتحديد خصائص الكبسولات النانوية تشمل المجهر الإلكتروني المسح وسيتم أيضا اتباع تشتت الضوء الديناميكي. يمكن أن تواجه إجراءات التبويب بعض التحديات من اختيار الدهون إلى تحقيق التغليف عالي الكفاءة ، والحفاظ على النشاط الحيوي للجزيئات المحنط.ويمكن للبروتوكول الذي سيتم وصفه أن يتغلب على بعض هذه الصعوبات. وزن مكونات الليبوزوم باستخدام توازن تحليلي. قم بتبخير مكونات الدهون في الكلوروفورم باستخدام قارورة حجمية تناسبها في المبخر الدوار لتجنب فقدان المواد.يُحرّك المزيج عند 150 دورة في الدقيقة لمدة 15 دقيقة. إزالة الكلوروفورم باستخدام المبخر الدوارة. ضبط الفم قارورة الحجمي إلى الموقف القياسي للحصول على أفضل كفاءة، في حين في اتصال مع الماء من حمام التدفئة.تعيين المعلمات وفقا للبروتوكول الموصوف. بعد حوالي 25 دقيقة، وإزالة القارورة، والتخلص من المذيبات المتبخرة بشكل مناسب. يتم تشكيل فيلم رقيقة ومبهمة ويمكن تصورها بسهولة.هيدرات فيلم الدهون في محلول كبريتات الأمونيوم التي تحتوي على القارين في مليغرام واحد لكل ملليلتر. يُحرّك الخليط لمدّة 40 دقيقة ويُحتضن بين عشية وضحاها عند أربع درجات مئوية. ثم، سونيكات تعليق لمدة دقيقة واحدة في 25 درجة مئوية، ودرجة حرارة الغرفة.للحد من حجم الفُيَس وتجنب التجميع، ضع غشاء البولي بين اثنين من دعامات الفلتر قبل الرطب وضعه في الحامل. أدخل حقنة فارغة واحدة في الجهاز، وملء الأخرى بميليلتر واحد من التعليق liposomal، وإدراجها على الجانب الآخر. إجراء 12 دورة البثق من خلال 2 ميكرومتر بولي كربونات المسام غشاء.دفع العينة من حقنة واحدة إلى أخرى ببطء. في النهاية، يجب أن يصبح التعليق liposomal واضحة أثناء عملية النزهة، نتيجة للحد من حجم. يمكن أن يتم فقدان حوالي 2 ملليلتر من العينة أثناء هذه الخطوة.فصل liposomes عن طريق الطرد فائقة التركيز. أولاً، وزن العينة في أنبوب التيتانيوم وتحقيق التوازن بين الأنابيب. تحقق من الحد الأدنى لحجم التي سيتم ملؤها، وإذا لزم الأمر، ضبط وحدة التخزين مع كبريتات الأمونيوم.تناسب أنابيب التيتانيوم في دلو سوينغ. افتح باب جهاز الطرد المركزي ووضع الدوار في الداخل. أغلق باب جهاز الطرد المركزي، والفراغ الصحفي، وانتظر حتى يصل الفراغ من 200 إلى أقل من 20 ميكرون.اضبط المعلمات في شاشة الطرد الفائقة. اضغط على الاستدعاء، وتحقق من الظروف، وابدأ تشغيل. بعد 90 دقيقة، الافراج عن فراغ عن طريق النقر على زر فراغ وفتح باب الطرد المركزي.إزالة الدوار من الداخل. الحفاظ على عينة فائقة التركيز على الجليد ومن ثم فصل سوبرنات من بيليه، عن طريق تحويل أنبوب رأسا على عقب، إلى جهاز طرد مركزي يمكن التخلص منها 59 مليون لفصل عظمى من بيليه. تخزين فائقة تحتوي على البروتين غير المُكتَبَّل عند أربع درجات مئوية.سيتم استخدام هذا لتحديد كفاءة التغليف. يتم تقديم بيليه كهلام شفاف. تعليق بيليه والحرارة HEPES المخزنة محلول ملحي.الرجاء مراجعة البروتوكول للحصول على مزيد من المعلومات. تحديد كفاءة التغليف من قبل بروتوكول بيترسون، من أجل تجنب تدخل الدهون في كمية البروتين. وينبغي تحليل العينات في ثلاث ية.في أنبوب microfuge، تمييع شفة عظمى أو BSA في واحد مليغرام لكل ملليلتر مع الماء إلى حجم النهائي من ملليلتر واحد. أضف DOC واحتضان لمدة 10 دقائق. إضافة 1 ملليلتر من 72٪ TCA واخلط جيدا.جهاز طرد مركزي في 3،000 غرام لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. تجاهل بعناية المافق عن طريق تجنب أنبوب أسفل، ووضعها على ورقة ماصة والسماح لها الجافة. تعليق بيليه في ملليلتر واحد من الماء.تخلط جيدا للتأكد من حل بيليه. ثم، نقل العينة إلى أنابيب الاختبار. إضافة ملليلتر واحد من الكاشف A، مزيج واحتضان لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة.إضافة 5 ملليلتر من الكاشف B، مزيج واحتضان لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، محمية من الضوء. تحديد امتصاص في 750 نانومتر وحساب كفاءة التغليف. يتم تحديد متوسط الحجم وتوزيع الحجم بواسطة تشتت الضوء الديناميكي.نقل نانوفيسلات الليبوسوم إلى cuvette التحجيم المتاح. تناسب cuvette داخل المعدات. تعيين معلمات المعدات.لتحديد الاستقرار، وتخزين liposomes في أربع درجات مئوية والتحقق من توزيع حجم ومتوسط الحجم بانتظام. يتم تنفيذ توصيف الليبوسومات عن طريق مسح المجهر الإلكتروني وفقا لمرتا وRamasamy في ثلاثية. إصلاح زلات الغطاء الزجاجي في الجزء السفلي من طبق بيتري مع شريط.معطف الغطاء ينزلق مع بولي-L-ليسين. ضع ورقة تصفية مبللة داخل طبق بيتري للحفاظ على الرطوبة واحتضان لمدة ساعة واحدة. شطف مع الماء المقطر.إضافة قطرة من العينة والسماح لها لتجف لمدة ساعة واحدة، في درجة حرارة الغرفة. لإصلاح العينات، وتغطيتها بالغلوتارالدهيد، المعدة في عازل الفوسفات. ضع أوراق التصفية الرطبة داخل طبق بيتري.من المهم أن ختم طبق بيتري. احتضان في أربع درجات مئوية لمدة 48 ساعة. شطف الغطاء ينزلق ثلاث مرات لمدة خمس دقائق لكل من، مع نفس العازلة الفوسفات.يجفف العينات على النحو التالي عن طريق الغسيل في محلول تركيز الإيثانول المتزايد من 35٪ إلى الإيثانول المطلق. كيميائياً الجافة العينات مع سداسية الميثيلديسيلازان لمدة 10 دقائق. وينبغي التلاعب سداسيةthyldisilazane بعناية داخل غطاء محرك الدخان.يجب السماح للعينات بالجفاف بين عشية وضحاها داخل مجفف أو داخل غطاء الدخان في درجة حرارة الغرفة. جبل العينات المجففة على كعب، مع شريط لاصق موصل الكربون. ابصق كعب مع الذهب.تسجيل الصور SEM مع المجهر الإلكتروني المسح الضوئي، SEM، في وضع فراغ منخفض والجهد المنخفض، 20 كيلوفولت. يصف الشكل الأول إعداد الليبوسومات النانوية. فوسفوليبيدس، مخدر، ربط، وخماوي، مكونات ليبوسوم الرئيسية، تم حلها لأول مرة في الكلوروفورم للحصول على فيلم الدهون.ثم تم إعادة تهوية فيلم الدهون في عازلة المالحة، التي تحتوي على البروتين المائي، والقطين، ليكون entrapt، وينبغي أن تكون الحضانة preformed بين عشية وضحاها. ثم، يتم تطبيق سونيكيشن وبثق لتوليد هييكليس unilamellar الصغيرة. تفصل خطوة الطارد الفائقة بين إعداد الدهون الدهنية من الدهون المجانية، والبروتين غير المقنوم.في حين يتم استخدام supernatant لتحديد كفاءة الفخ. يعرض نانوليبوسومات المنتجة باستخدام المنهجية المذكورة أعلاه توزيع حجم يتراوح بين 51 و 396 نانومتر، ومتوسط حجم 155 نانومتر. التحضير متجانسة، منذ مؤشر polidispersity هو من 168.يتم التوصل إلى كفاءة فخ عالية من 83٪إذا تم بثق liposomes من خلال 2 ميكرومتر المسام حجم غشاء. تم تقييم خصائص نانوليبوسومات المورفولوجية عن طريق مسح المجهر الإلكتروني. وينبغي أخيرا علاج الليبوزومات على نحو مماثل للخلايا الحية، للحصول على صور ذات جودة أفضل.إجراءات التثبيت والتجفيف مهمة لضمان التصور من أصغر الحفيات سليمة التي تدعم أكثر من 20 كيلوفولت في ظل ظروف فراغ. الأرقام 2A و 2B عرض الحويصلات الدهنية على شكل جولة في حدود 121 نانومتر، وتحليلها في 20 كيلوفولت. في حين أن الأرقام 2C و 2D، وعرض العينات غير مستعدة بشكل كاف.سمحت عينات أساء فقط لمراقبة من إتلاف أو كبيرة حشي, أيّ يستطيع لا يقاوم فراغ وطبّيّة شروط. البروتوكول الموصوف، هنا في، سمح لإنتاج vesicles استنساخ عرض شكل دائري، سطح صغير، ومتوسط حجم ما يقرب من 150 نانومتر. ويمكن استخدام هذه الطريقة لالقاء الجزيئات المعقدة والكبيرة، كبروتين رباعية سخيرية، مما يعرض مصحح ماء.نقص الفخ الذاتي هو أعلى من 80٪، ومعدل التسرب منخفض جدا، أدنى من 1.5٪عندما يتم تخزين الكبسولات النانوية في أربع درجات مئوية. نأمل أن يساعدك هذا الفيديو في تغليف الجزيئات الكبيرة ، مثل teri.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Synthesis, Assembly, and Characterization of Monolayer Protected Gold Nanoparticle Films for Protein Monolayer Electrochemistry

التوليف ، والجمعية ، وتوصيف أحادي الطبقة المحمية الجسيمات النانوية الذهبية للأفلام كهربية البروتين أحادي الطبقة

Colloidal gold nanoparticles protected with alkanethiolate ligands called monolayer protected gold clusters (MPCs) are synthesized and subsequently ...

Isolation and Characterization Of Chimeric Human Fc-expressing Proteins Using Protein A Membrane Adsorbers And A Streamlined Workflow

عزل وتوصيف البروتينات التعبير عن مدينة Chimeric الإنسان باستخدام البروتين A غشاء Adsorbers وسير عمل مبسطة

Laboratory scale to industrial scale purification of biomolecules from cell culture supernatants and lysed cell solutions can be accomplished using ...

Aplysia Ganglia Preparation for Electrophysiological and Molecular Analyses of Single Neurons

Aplysia Ganglia Preparation for Electrophysiological and Molecular Analyses of Single Neurons

أأليسيا إعداد Ganglia للتحليلات الكهربية والجزيئية للخلايا العصبية المفردة

A major challenge in neurobiology is to understand the molecular underpinnings of neural circuitry that govern a specific behavior. Once the specific ...

Fabrication of a Bioactive, PCL-based "Self-fitting" Shape Memory Polymer Scaffold

تصنيع يستند إلى PCL النشطة بيولوجيا، &quot;تركيب الذاتي&quot; الشكل الذاكرة البوليمرات سقالة

Tissue engineering has been explored as an alternative strategy for the treatment of critical-sized cranio-maxillofacial (CMF) bone defects. Essential to ...

Fabrication of Mechanically Tunable and Bioactive Metal Scaffolds for Biomedical Applications

تصنيع ميكانيكيا الانضباطي والحيويه المعادن سقالات للتطبيقات الطبية الحيوية

Biometal systems have been widely used for biomedical applications, in particular, as load-bearing materials. However, major challenges are high stiffness ...

Preparation and Characterization of Lipophilic Doxorubicin Pro-drug Micelles

إعداد وتوصيف محبة للدهون دوكسوروبيسين المذيلات الموالية للعقار

Micelles have been successfully used for the delivery of anticancer drugs. Amphiphilic polymers form core-shell structured micelles in an aqueous ...

Preparation and Characterization of Novel HDL-mimicking Nanoparticles for Nerve Growth Factor Encapsulation

إعداد وتوصيف رواية هدل-محاكاة الجسيمات النانوية لتغليف عامل النمو العصبي

The objective of this article is to introduce preparation and characterization methods for nerve growth factor (NGF)-loaded, high-density, lipoprotein ...

Patterning Bioactive Proteins or Peptides on Hydrogel Using Photochemistry for Biological Applications

الزخرفة البروتينات النشطة بيولوجيا أو الببتيدات على استخدام الكيمياء الضوئية للتطبيقات البيولوجية المائية

There are many biological stimuli that can influence cell behavior and stem cell differentiation. General cell culture approaches rely on soluble factors ...

Rapid, Scalable Assembly and Loading of Bioactive Proteins and Immunostimulants into Diverse Synthetic Nanocarriers Via Flash Nanoprecipitation

الجمعية السريع، وقابلة للتطوير والتحميل من البروتينات النشطة بيولوجيا، وإيمونوستيمولانتس إلى نانوكاريرس الاصطناعية المتنوعة عبر نانوبريسيبيتيشن فلاش

Nanomaterials present a wide range of options to customize the controlled delivery of single and combined molecular payloads for therapeutic and imaging ...

Generation of Cationic Nanoliposomes for the Efficient Delivery of In Vitro Transcribed Messenger RNA

Generation of Cationic Nanoliposomes for the Efficient Delivery of In Vitro Transcribed Messenger RNA

جيل نانوليبوسوميس الموجبة لتسليم كفاءة في المختبر نسخها رسول الجيش الملكي النيبالي

The development of messenger RNA (mRNA)-based therapeutics for the treatment of various diseases becomes more and more important because of the positive ...