Name: preparation and characterization of nanoliposomes for the entrapment of bioactive hydrophilic globular proteins
Uploaded: 2019-08-31T14:00:00
Duration: 11 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation and Characterization of Nanoliposomes for the Entrapment of Bioactive Hydrophilic Globular Proteins at JoVE.com

המחברים מודים בפני המעבדה האלקטרונית, מעבדת מיקרוסקופ אלקטרוני ואפיון חומרים מרובי משתמשים; לד ר אדאלברטו ויירא, ד ר ג'ניפר לאו, ורפאל ליניסו, פרופסורים מאוניברסיטת אוניברסיאנדייד למען ריו דה ז'ניירו, UFRJ, ברזיל, לשימוש בultracentrifuge; לד ר אלכסנדר אפדס טורס ודניאל פרון, פרופסורים באוניברסיטודייד למשל ריו דה ז'ניירו, UFRJ, ברזיל, לשימוש של מאייד רוטרי; לפרופ ' רולנד בודמאייר וד ר אנדריי דאבצקי מהעיר הגרמנית בברלין, שסייעו במשאבים, סיפקה מתודולוגיות חדשות, והשגחת ACNTF במהלך 6 חודשי התמחות בבית ארסמוס + בגרמניה; לד ר רוג'יאנה צמאה ואלין פרנאנדס, פרופסור וטכנאי באוניברסיסיה הפדרלית, ריו דה ז'ניירו, UFRJ, ברזיל, לשימוש Zetasizer מלוורן; לבלומה גות'ר ולטסה רודריגז, פרופסור וטכנאי באוניברסיטדייד הפדרלי באוניברסיטת ריו דה ז'ניירו, UFRJ, ברזיל, לשימוש SEM; לד ר רייצ'ל אן האוזר דייוויס, חוקרת בפונדסאו אוסולדו קרוז, למלל נלווה. מחקר זה היה ממומן בחלקו על ידי המלון העליון, ברזיל (שכמיות)-קוד כספים 001 (גרנט No. 1627392; 1811605); על ידי הפונדה קרלוס צ'אס פילסו דה אמאפו à Pesquisa do אסטאדו דו ריו דה ז'ניירו (להעניק לא. E-26/202.815/2018; E-26/202.815/2018; E-26/203.039/2015 ו-E-26/202.860/2016); על ידי Conselho הלאומי דה Desenvolvimento Científico Tecnológico (CNPq) (מענק No. 406601/2018-6), ו ככלכלית דה Estudos e Projetos (FINEP).

1. הכנת ליפוזומזה של טארין בננה16
הערה: יש להכין את כל ההכנות בטרילקאט כדי להשיג נפח גדול יותר (7 מ ל) ולאפשר למדגם לcentrifuged בultracentrifuge (ראו פרטים להלן).
<ol><li>שוקלים ליפופי רכיבים באמצעות איזון אנליטי, כפי שמוצג בטבלה 1.</li>
	<li>לפזר את הרכיבים השומנים בכלורופורם באמצעות מיכל 250 mL המתאים לאייד רוטרי כדי למנוע אובדן של חומר.</li>
	<li>מערבבים את התערובת ב 150 סל ד למשך 15 דקות.</li>
	<li>הסר את הכלורופורם באמצעות מאייד רוטרי בתנאים הבאים:<ol>
<li>התאימו את הפה הנפחי לתנוחה הסטנדרטית (25 °) ליעילות אופטימלית, ובמגע עם המים מאמבט החימום. הערה: זרוע הציוד צריכה להיות נוטה ב -25 ° כדי לשמור על קשר בין הבקבוקון הנפחי לבין אמבט מים, בעוד לא להשפיע על האידוי יעילות או פגיעה במדגם. התנוחה הסטנדרטית יכולה להשתנות בהתאם למותג הציוד.</li>
		<li>הגדר את טמפרטורת העבה למינימום של 3 ° c.</li>
		<li>הגדר את טמפרטורת אמבט החימום ל-40 ± 1 ° c.</li>
		<li>הגדר את הסיבוב על 120 rpm.</li>
		<li>כוונן את הוואקום ל 207 mbar ונקודת רתיחה ל-20 ° c.</li>
		<li>לאחר ~ 25 דקות, להסיר את הבקבוקון ולמחוק את הממס המואדו, הנותרים העבה, כראוי. הערה: סרט דק ואטום, המורכב מרכיבים ליפושים, נוצר בשלב זה וניתן לדמיין בקלות. הממס המואדו שנותר בתוך העבה חייב להיות מאוחסן לנמענים לסילוק (כלור) להיות מטופלים על ידי חברה מיוחדת עבור השלכת המתאים.</li>
	</ol></li>
	<li>מימה את הסרט השומנים כדי להגיע לריכוז 0.01 M השומנים ב 0.3 הפתרון אמוניום גופרתי (pH = 7.4) המכיל טארין ב 1 מ"ג/mL לנפח הסופי של 10 mL.<ol>
<li>מערבבים את התערובת עבור 40 דקות ו-דגירה לילה ב 4 ° c. הערה: שלב זה יכול להיחשב כנקודת עצירה. הדגירה של הלילה אינה חובה.</li>
	</ol></li>
	<li>לאחר הדגירה, הsonicate ההשעיה של 1 דקות ב -25 ° צ' (טמפרטורת החדר; RT) כדי להפחית את גודל הוולפוחית ולמנוע צבירה. הערה: הפחתת גודל בוצעה בsonicator אולטרה סאונד תחת התנאים הבאים: 130 W ו 40 kHz.</li>
	<li>לבצע שחול 12 מחזור באמצעות קרום הנקבובית של 0.2 יקרומטר. הערה: לפני תהליך ההבלטה, בדוק את ההרכבה המצומצמת באמצעות מים כדי להימנע מדליפה לדוגמה. קרום נקבובית 0.1 יקרומטר מתאים גם. במקרה זה, טרום לחמם את המחזיק הקטן הבלטת ממד מעל טמפרטורת המעבר ליפיד כדי להקל על שחול, תוך שמירה על המאפיינים הפיזיקליים של שני השומנים והחלבונים.<ol>
<li>התאם את חלקי הבלטת ממד המצומצם, כפי שמתואר במדריך היצרן.</li>
		<li>מניחים את קרום פוליקרבונט בין שני מסנן טרום רטוב תומך ולמקם אותו לתוך המחזיק.</li>
		<li>הכנס מזרק אחד mL ריק לתוך המכשיר, למלא את המזרק השני על הנפח הכולל שלה עם ההשעיה ליפוזומבית, ולהכניס אותו בצד הנגדי.</li>
		<li>לבצע שחול 12 מחזור באמצעות קרום הנקבובית של 0.2 יקרומטר. לדחוף את הדגימה ממזרק. אחד למשנהו, לאט לאסוף את ההשעיה הבלטת צינור טרום מקורר. הערה: קרום הפוליקרבונט צריך להיות מוחלף רק כאשר העברה לדוגמה ממזרק אחד למשנהו הופכת קשה. ההשעיה ליפוזומבית צריך להיות ברור במהלך התהליך ההבלטה כתוצאה הפחתת גודל בשל היווצרות של רכבי השטח. כ 0.2 מ ל של המדגם ניתן לאבד במהלך שלב זה.</li>
	</ol></li>
	<li>ליפוזומים נפרדים. באמצעות הסתבכות הערה: שמרו על הדגימות באמבט קרח עד שultracentrifuge מוכנה לשימוש. הפרדת רכבי השטח מהרכיבים הנותרים והאמוניום סולפט באמצעות ultracentrifuge עם רוטור הנדנדה (ראה פרטים להלן).<ol>
<li>שוקלים את המדגם בצינור טיטניום המתאים הרוטור ולאזן את הצינורות. בדוק את אמצעי האחסון המינימלי הנדרש על פי הרוטור המשמש כדי למנוע נזק הצינורות, ולהתאים את נפח ההשעיה ליפוזומעם אמוניום סולפט, במידת הצורך. הערה: דלי הנדנדה תמיד צריך להיות נתמך על המעמד כאשר מחוץ לצנטריפוגה כדי למנוע גירוד "פסים זברה" (כלומר, פסים שחור ולבן בתחתית), אשר משמשים את הצנטריפוגה כדי לקבוע את מהירות הסיבוב.</li>
		<li>הפעל את הוואקום לפני השימוש צנטריפוגה כדי לאפשר לו למקרר.</li>
		<li>להתאים את צינורות טיטניום לתוך דלי הנדנדה. הערה: הרם את הצינורות למיקום שהם מניחים בעת הפעלת כדי לוודא שהם מצוידים באופן מושלם.</li>
		<li>שחררו את הוואקום, פתחו את דלת הצנטריפוגה והניחו את הרוטור בפנים. הערה: שים לב לסימון המעגל בתחתית הרוטור, אשר חייב להתאים בכיוון ההפוך של אותו סימן מעגל לתוך הצנטריפוגה עצמה.</li>
		<li>סגור את דלת הצנטריפוגה, לחץ על ואקום ולחכות עד ואקום מגיע מ 200 כדי < 20 מיקרון או מ 26 Pa כדי < 3 Pa.</li>
		<li>כוונן את הפרמטרים בultracentrifuge התצוגה ל-150,000 x g (המקבילה ל-29,600 rpm עבור דלי הנדנדה האמור) עבור 90 דקות ב-4 ° צ' (האצת: מקסימום, האטה: מקסימום). הערה: המירו תמיד את המהירות ל-x g אם הצנטריפוגה הספציפית מוגדרת ב-rpm. השתמש באתר הצנטריפוגה כדי להמיר את היחידה בהתאם לרוטור המשמש.</li>
		<li>הקש על אחזר, בדוק את התנאים ולחץ על ' התחל ' כדי לפעול. הערה: המתן עד שהצנטריפוגה תגיע למהירות הרצויה.</li>
		<li>לאחר 90 דקות, לשחרר את הוואקום על ידי לחיצה על כפתור ואקום ולפתוח את דלת צנטריפוגה כאשר ואקום מגיע 200-700 מיקרון (שווה ערך ל 26-93 Pa).</li>
		<li>לכבות את הצנטריפוגה, להסיר את הרוטור מבפנים, ולהשאיר אותו על הספסל עם דליים להתייבש.</li>
		<li>. שמור על הדגימות של הקרח</li>
	</ol></li>
	<li>בזהירות, supernatant נפרד מן הגלולה על ידי הפיכת הצינור הפוך מטה לתוך שפופרת צנטריפוגה חד פעמי 15 מ ל כדי להפריד את supernatant ואת הגלולה. הערה: לאחסן את הסופרנטנט המכיל את החלבון שאינו מכיל ב-4 ° c. הוא ישמש לקביעת יעילות האנקפסולציה. . הגלולה מופיעה כמו ג'לי שקוף</li>
	<li>השהה את הגלולה המכילה את החלבון המכוונן ב-HEPES מלוחים באגירה (3 מ ל של 1x HBS). הערה: HBS 2x (פתרון המניה) מוכן על ידי דילול הסכומים הבאים של ריאגנטים במים מזוקקים: 140 mM הנאגל, 1.5 mM Na2hbs4, 50 מ"מ hepes, ולאחר מכן התאמת ה-pH כדי 7.4 ונפח סופי כדי 100 mL. Na2hpo4 ניתן להחליף על ידי נחקו3או מושמט כדי למנוע הפרעות אם ליפוכמה ריכוז הוא להיקבע. The HBS 2x פתרון המניה צריך להיות מדולל במים מזוקקים כדי לקבל HBS 1x לפני השימוש.</li>
</ol>2. יעילות כימוס
הערה: קבע את יעילות האנקפסולציה באמצעות פרוטוקול פיטרסון17על מנת למנוע הפרעות שומנים בדם בקוונפיקציה חלבון. יש לנתח את כל הדגימות (בתקני BSA וליפומה סופרנטאנט) בטרילקאט. הכינו גם צינורית ריקה.
<ol><li>הכנת ריאגנטים למניה ופתרונות עבודה17<ol>
<li>עבור ריאגנטים במלאי, להכין נחושת-tartrate-קרבונט (CTC) על ידי ערבוב 10 מ ל של 20% נתרן פחמתי, 200 μL של 0.1% נחושת סולפט, 200 μL של 0.2% אשלגן tartrate עם 9.6 mL של מים מזוקקים. הכינו 100 mL של 10% נתרן dodecyl סולפט (SDS) ו 0.8 N הידרוקסיד נתרן (NaOH).</li>
		<li>עבור פתרונות עבודה, להכין 10 מ ל של 0.15% נתרן deאוקסיבלשנות (DOC) ו 72% חומצה אצטית טריכלור (TCA). התמוססות 10 מ ג של סרום הפרה אלבומין (BSA) ב 10 מ ל של מים מזוקקים כדי להשיג 1 mg/mL פתרון סטנדרטי. הכן מגיב על ידי הוספת חלקים שווים של CTC, NaOH, SDS, ו-H2O. הכנת מגיב B על ידי דילול folin-Ciocalteu פנול מגיב 1:5 במים מזוקקים. הערה: מגיב A דורש 1 mL עבור כל צינור התגובה, בעוד מגיב B דורש 0.5 mL. כדי לקבוע את הכרכים הסופיים של ריאגנטים A ו-B, ראשית להגדיר את מספר צינורות התגובה לשמש, בהתחשב בשלושה ריכוזים שונים של BSA, ריק, ודגימות בטריליטה. מגיב יש להיות הומוגניים היטב לפני השימוש ניתן לאחסן ב 25 ° צ' (RT) עבור 2 שבועות. מגיב B הוא גם יציב ב -25 ° צ' (RT) אם מאוחסן בבקבוק ענבר.</li>
	</ol></li>
	<li>משקעים הערה: שלב זה מבוצע בצינורות מיקרוצנטריפוגה.<ol>
<li>לדלל את ליפומי supernatant עם מים לנפח הסופי של 1 mL המכיל 5-100 μg של חלבון. הערה: הצינור הריק צריך להיות מלא 1 מ ל של מים מזוקקים.</li>
		<li>הוסף 0.1 mL של 0.15% DOC, הומוגון על ידי vortexing, ו-דגירה עבור 10 דקות ב RT.</li>
		<li>הוסף 0.1 mL של 72% TCA, מערבבים היטב, וצנטריפוגה ב 3,000 x g ו RT עבור 15 דקות. הערה: DOC-TCA מקדמת משקעים בחלבון, ויוצרים שני שלבים נפרדים. חלבון היעד ניתן לשחזר על ידי צנטריפוגה, הימנעות הפרעות שומנים בדם.</li>
		<li>השמט בזהירות את הסופרנטנט על-ידי הסטת הצינורית כלפי מטה והנחת הצינור על נייר סופג. שמור את הגלולה לשלב הבא. הערה: הגלולה יכולה להיות קשה מאוד לראות, אבל הצינור צריך להיות מתהפך גם אם זה לא נראה.</li>
	</ol></li>
	<li>ספקטרופוטומטר<ol>
<li>להשעות את הגלולה שהתקבל משלב 2.2.4 ב 1 מ ל של מים מזוקקים. מערבבים ביסודיות כדי לוודא את הגלולה היא התפרקה ולהעביר את המדגם למבחנה חדשה בדיקה.</li>
		<li>הכנת מדלל סטנדרטים של אלבומין (BSA) לנפח סופי של 1 mL. הערה: תקני חלבון חייבים להיות מוכנים בין 5-100 μg/mL.</li>
		<li>להוסיף 1 מ ל של מגיב A אל הצינורות משלב 2.3.1 ו 2.3.2 ללא יוצא מן הכלל, לערבב היטב, ו דגירה עבור 10 דקות ב RT. הערה: SDS יכולים להקל על הפרעות השומנים אפשרי בעוד לסייע בפתרון חלבון.</li>
		<li>הוסף 0.5 mL של מגיב B על הצינורות משלב 2.3.1 ו 2.3.2, לערבב היטב, ו דגירה עבור 30 דקות ב-RT בזמן מוגן מפני האור. הערה: מגיב Follin-Ciocalteu של פנול הוא תערובת של פוספומוליב ו phosphotungstate משמש לצביעת מטרי של תרכובות המכילות חנקן, כגון חלבונים. Complexation נחושת מגבירה את הפעילות החוזרת של פנולים כלפי מגיב זה, הפקת מתחם כחול/סגול על פי ריכוז חלבונים.</li>
		<li>קביעת ספיגת ב750 ננומטר באמצעות ספקטרוסקופיה.</li>
		<li>לחשב את ריכוז החלבון בסופרנטנט על בסיס העקומה הסטנדרטית כדלקמן.<ol>
<li>ערך בספיגת העלילה (Abs) vs. bsa ריכוז (Mg/mL) כדי להשיג את מקדם זוויתי (k) בהתחשב קו נטייה ליניארית.</li>
			<li>לקבוע את ריכוז חלבון סופרנטאנט (C) ביחס בין ערך הספיגה לבין מקדם זוויתי (k), ולאחר מכן להכפיל על ידי הנפח הכולל כדלקמן: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/59900/59900eq1.jpg">
</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>קבע את יעילות האנקפסולציה בהתאם לנוסחה הבאה: <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/59900/59900eq2.jpg"></li>
	<li>כאשר טעון חלבון = 10 מ"ג, חלבון שאינו כימוע = ערך של C התקבל בשלב 2.3.6.2. הערה: במקרה זה, סך של 10 מ"ג טארין מומס בתמיסה אמוניום גופרתי (1 מ"ג/mL) משמש לביצוע הליך האנקפסולציה, כיוון שריכוז זה מספיק כדי להשיג את השפעות החוץ-גופית13,16, . שמונה עשרה</li>
</ol>3. קביעת גודל ויציבות
הערה: התפלגות הגודל והחלוקה של התרופות (PdI) של ההכנות ליפוזוממים מוערכים על ידי פיזור אור דינאמי (DLS). PdI קרוב ל 0.1 מציין הכנה הומוגנית. לקביעת יציבות, ליפוזומים בחנות ב -4 ° c ובדיקת גודל הממוצע באופן קבוע.
<ol><li>הפעל את הציוד DLS 30 דקות לפני השימוש כדי לחמם את מנורת הלייזר.</li>
	<li>העבר את ההכנה ליפוזומבית שהתקבל בשלב 1.10 לקובט לשינוי גודל חד פעמי.</li>
	<li>הגדר את פרמטרי הציוד כדלקמן: דיפרסנט סוג = מים (RI = 1.33); חומר = שומנים (RI = 1.45); ו-RT.</li>
	<li>לחץ על התחל והמתן בזמן שהציוד מסיים את קריאתו.</li>
	<li>הסר את הקובט וכבה את הציוד. הערה: יש להעביר את המדגם מקובט בחזרה ל 15 מ ל שפופרת צנטריפוגה חד פעמית עבור ניתוחים הבאים, או להשליך אותו אם יש סכום מספיק עבור קריאות חדשות.</li>
</ol>4. אפיון מורפולוגית
הערה: ליפומין אפיון מבוצע על פי מורטיי ורמסניי19. דגימות המכילות nanoliposomes שהתקבלו בשלב 1.10 מוכנים בטרילקאט.
<ol><li>לתקן את שמיכות זכוכית (קוטר 13 מ"מ) בחלק התחתון של צלחת פטרי עם קלטת דו צדדית. חותכים את הקלטת לחלקים קטנים (הגודל המתאים לתיקון הכיסויים), מסירים את הנייר המגן מתחת ומסדרים אותו בתחתית צלחת פטרי. בעזרת מלקחיים, הסר את נייר המגן על גבי הקלטת ותקן את הכיסויים. הערה: היזהר בשלבים הבאים כדי לא לשחרר את הכיסויים, ולהשתמש בקלטת חזקה.</li>
	<li>. המעיל מחליק עם פולי-ל-ליזין מניחים ניירות מסנן רטוב בתוך צלחת פטרי כדי לשמור על לחות הדגירה 1 h ב RT (25 ° c).</li>
	<li>לאחר ציפוי, לשטוף את הכיסויים עם מים מזוקקים.</li>
	<li>למלא את הכיסויים עם טיפה של המדגם משלב 1.10 ולאפשר להם להתייבש 1 h ב RT.</li>
	<li>כדי לתקן את הדגימות, לכסות אותם עם 4% גלוטאלדהיד מוכן 0.1 M פוספט מאגר, pH = 7.2. מניחים ניירות מסנן רטוב בתוך צלחת פטרי וחותם את הצלחת כדי לשמור על רמות לחות. מודטה ב -4 ° c עבור 48 h.</li>
	<li>לשטוף את 3x שמיכות עבור 5 דקות עם מאגר פוספט זהה.</li>
	<li>דוגמאות מייבשים כדלקמן: 35% אתנול 1x עבור 15 דקות, 50% אתנול 1x עבור 15 דקות, 75% אתנול 1x עבור 15 דקות, 95% אתנול 2x עבור 15 דקות, ו אתנול מוחלט 3x עבור 20 דקות.</li>
	<li>מייבשים את הדגימות על ידי הטבילה ב-2x ב-1-2 מ ל של החוקרים במשך 10 דקות. הערה: יש לתמרן את ה-HMDS בזהירות בתוך מכסה המנוע. ניתן לאפשר לdesiccator להתייבש בתוך הלילה או בתוך מייבש המנוע ב-RT.</li>
	<li>הר את הדגימות מיובש על stub עם דבק פחמן מוליך דבק.</li>
	<li>שטחו את פני השטח של שמיכות בוואקום עם שכבת מוליך חשמלית (20 ננומטר) של זהב-פלדיום.</li>
	<li>הקלטת תמונות עם מיקרוסקופ אלקטרוני סריקה (SEM) במצב ואקום נמוכה ומתח נמוך (20 kV).</li>
</ol>

<ol>
	<li>Wang, X., Wang, Y., Chen, Z. G., Shin, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+of+cancer+therapy+by+nanotechnology.">Advances of cancer therapy by nanotechnology.</a> Cancer Research and Treatment: Official Journal of Korean Cancer Association. 41 (1), 1 (2009).</li><li>Keller, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomes+in+nutrition.">Liposomes in nutrition.</a> Trends in Food Science &amp; Technology. 12 (1), 25-31 (2001).</li><li>Fr&#233;zard, F., Schettini, D. A., Rocha, O. G., Demicheli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipossomas:+propriedades+f&#237;sico-qu&#237;micas+e+farmacol&#243;gicas,+aplica&#231;&#245;es+na+quimioterapia+&#224;+base+de+antim&#244;nio.">Lipossomas: propriedades f&#237;sico-qu&#237;micas e farmacol&#243;gicas, aplica&#231;&#245;es na quimioterapia &#224; base de antim&#244;nio.</a> Quimica Nova. 28 (3), 511-518 (2005).</li><li>Ferreira, D. d. S., Lopes, S. C. d. A., Franco, M. S., Oliveira, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=pH-sensitive+liposomes+for+drug+delivery+in+cancer+treatment.">pH-sensitive liposomes for drug delivery in cancer treatment.</a> Therapeutic Delivery. 4 (9), 1099-1123 (2013).</li><li>Papachristos, A., Pippa, N., Ioannidis, K., Sivolapenko, G., Demetzos, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomal+forms+of+anticancer+agents+beyond+anthracyclines:+present+and+future+perspectives.">Liposomal forms of anticancer agents beyond anthracyclines: present and future perspectives.</a> Journal of Liposome Research. 25 (2), 166-173 (2015).</li><li>Akbarzadeh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposome:+classification,+preparation,+and+applications.">Liposome: classification, preparation, and applications.</a> Nanoscale Research Letters. 8 (1), 102 (2013).</li><li>Bangham, A., Standish, M. M., Watkins, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diffusion+of+univalent+ions+across+the+lamellae+of+swollen+phospholipids.">Diffusion of univalent ions across the lamellae of swollen phospholipids.</a> Journal of Molecular Biology. 13 (1), 238-252 (1965).</li><li>Szoka, F., Papahadjopoulos, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Procedure+for+preparation+of+liposomes+with+large+internal+aqueous+space+and+high+capture+by+reverse-phase+evaporation.">Procedure for preparation of liposomes with large internal aqueous space and high capture by reverse-phase evaporation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 75 (9), 4194-4198 (1978).</li><li>Batzri, S., Korn, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+bilayer+liposomes+prepared+without+sonication.">Single bilayer liposomes prepared without sonication.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes. 298 (4), 1015-1019 (1973).</li><li>Zumbuehl, O., Weder, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomes+of+controllable+size+in+the+range+of+40+to+180+nm+by+defined+dialysis+of+lipid/detergent+mixed+micelles.">Liposomes of controllable size in the range of 40 to 180 nm by defined dialysis of lipid/detergent mixed micelles.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes. 640 (1), 252-262 (1981).</li><li>Szebeni, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidation+and+denaturation+of+hemoglobin+encapsulated+in+liposomes.">Oxidation and denaturation of hemoglobin encapsulated in liposomes.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - General Subjects. 798 (1), 60-67 (1984).</li><li>Coelho, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+delivery+systems:+Advanced+technologies+potentially+applicable+in+personalized+treatments.">Drug delivery systems: Advanced technologies potentially applicable in personalized treatments.</a> EPMA Journal. 1 (1), 164-209 (2010).</li><li>Pereira, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+and+characterization+of+the+lectin+from+taro+(Colocasia+esculenta)+and+its+effect+on+mouse+splenocyte+proliferation+in+vitro+and+in+vivo.">Purification and characterization of the lectin from taro (Colocasia esculenta) and its effect on mouse splenocyte proliferation in vitro and in vivo.</a> The Protein Journal. 33 (1), 92-99 (2014).</li><li>Pereira, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+analysis+and+binding+properties+of+isoforms+of+tarin,+the+GNA-related+lectin+from+Colocasia+esculenta.">Structural analysis and binding properties of isoforms of tarin, the GNA-related lectin from Colocasia esculenta.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Proteins and Proteomics. 1854 (1), 20-30 (2015).</li><li>Pereira, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+crystal+structures+of+Colocasia+esculenta+tarin+lectin.">High-resolution crystal structures of Colocasia esculenta tarin lectin.</a> Glycobiology. 27 (1), 50-56 (2016).</li><li>Correa, A., Vericimo, M. A., Dashevskiy, A., Pereira, P. R., Paschoalin, V. M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomal+Taro+Lectin+Nanocapsules+Control+Human+Glioblastoma+and+Mammary+Adenocarcinoma+Cell+Proliferation.">Liposomal Taro Lectin Nanocapsules Control Human Glioblastoma and Mammary Adenocarcinoma Cell Proliferation.</a> Molecules. 24 (3), 471 (2019).</li><li>Peterson, G. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplification+of+the+protein+assay+method+of+Lowry+et+al.+which+is+more+generally+applicable.">A simplification of the protein assay method of Lowry et al. which is more generally applicable.</a> Analytical Biochemistry. 83 (2), 346-356 (1977).</li><li>Merida, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tarin+stimulates+granulocyte+growth+in+bone+marrow+cell+cultures+and+minimizes+immunosuppression+by+cyclo-phosphamide+in+mice.">Tarin stimulates granulocyte growth in bone marrow cell cultures and minimizes immunosuppression by cyclo-phosphamide in mice.</a> PLoS ONE. 13 (11), e0206240 (2018).</li><li>Murtey, M. D., Ramasamy, P., Janecek, M., Kral, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sample+Preparations+for+Scanning+Electron+Microscopy+-+Life+Sciences.">Sample Preparations for Scanning Electron Microscopy - Life Sciences.</a> Modern Electron Microscopy in Physical and Life Sciences. , (2016).</li><li>Andrade, C. A., Correia, M. T., Coelho, L. C., Nascimento, S. C., Santos-Magalh&#227;es, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumor+activity+of+Cratylia+mollis+lectin+encapsulated+into+liposomes.">Antitumor activity of Cratylia mollis lectin encapsulated into liposomes.</a> International Journal of Pharmaceutics. 278 (2), 435-445 (2004).</li><li>dos Santos Ferreira, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+bone-targeted+pH-sensitive+liposomal+formulation+containing+doxorubicin:+physicochemical+characterization,+cytotoxicity,+and+biodistribution+evaluation+in+a+mouse+model+of+bone+metastasis.">Development of a bone-targeted pH-sensitive liposomal formulation containing doxorubicin: physicochemical characterization, cytotoxicity, and biodistribution evaluation in a mouse model of bone metastasis.</a> International Journal of Nanomedicine. 11, 3737 (2016).</li><li>Pereira, P. R., Corr&#234;a, A. C. N. T. F., Vericimo, M. A., Paschoalin, V. M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tarin,+a+Potential+Immunomodulator+and+COX-Inhibitor+Lectin+Found+in+Taro+(Colocasia+esculenta).">Tarin, a Potential Immunomodulator and COX-Inhibitor Lectin Found in Taro (Colocasia esculenta).</a> Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety. 17 (4), 878-891 (2018).</li><li>Olson, F., Hunt, C., Szoka, F., Vail, W., Papahadjopoulos, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+liposomes+of+defined+size+distribution+by+extrusion+through+polycarbonate+membranes.">Preparation of liposomes of defined size distribution by extrusion through polycarbonate membranes.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes. 557 (1), 9-23 (1979).</li><li>Mui, B., Chow, L., Hope, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrusion+technique+to+generate+liposomes+of+defined+size.">Extrusion technique to generate liposomes of defined size.</a> Methods in Enzymology. 367, 3 (2003).</li><li>Soo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancing+delivery+and+cytotoxicity+of+resveratrol+through+a+dual+nanoencapsulation+approach.">Enhancing delivery and cytotoxicity of resveratrol through a dual nanoencapsulation approach.</a> Journal of Colloid and Interface Science. 462, 368-374 (2016).</li></ol>

. למחברים אין מה לגלות

הפרוטוקול המתואר במסמך זה נבדק על ידי Correa et al.16 כדי לכסיאת טארין, מתוקקים ואנטי מוסרי לאנטין מטוהרים מקולקסיה . המתודולוגיה הניבה תוצאות מוצלחות, המאפשר ייצור nanoliposomes יציבים בגודל המתאים עבור יישומים טיפוליים. ניסוח מציג שחרור נשלט ברמות pH שונים בתנאים פיסיולוגיים. זה גם פוטנציאל התכונות הפרמקולוגית של טארין, כגון עיכוב של האדם גליובלסטומה U-87 MG וסרטן השד מד א-MB-231 תאים וגירוי של תאים במח העצם העצמות. הכנה ליפוזומלית הציגה השפעות רעילים בתאי עכברים בריאים בתאים16.
השיטה הקלאסית, שתוארה לראשונה על-ידי באנגהאם ואח '7, מאפשרת ייצור ליפולי מולטיצ'יני גדול ושלפוחיות, הטרוגנית בגודל ובצורה. עיבודים של שיטה זו, כפי שדווחו במחקר הנוכחי, מוחלים בהצלחה על ידי כולל שלבים נוספים כגון sonication ו שחול באמצעות קרום פוליקרבונט 0.2 יקרומטר. זה מאפשר ייצור של פיזור הומוגנית יותר לגבי גודל בטווח ננומטר16,23,24. לכן, כדי להבטיח תוצאות מוצלחות, פרוטוקול עטיפת האנקפסולציה וניסוח היפוזומיום המתוארים כאן יש לעקוב בקפדנות.
הרכב nanoliposome סוימים נבחר בקפידה על מנת להבטיח את היווצרות קרום bilayer עם סמים, MPEG 2000-DSPE, ו CHEMS כמו המרכיבים העיקריים. אלה הם טבעי בעלי חיים ממברנה bilayer המרכיבים והאחרון יכול להיוועץ נזילות כדי nanoliposome סוימים אדריכלות, להבטיח יישום רחב עבור המסירה מורכבים אקטיביים בבני אדם.
הננו-פוטוליציה היא חיונית כדי להבטיח ליפוכמה יציבות המבנה. העדר של פג מוביל להגדלת גודל, מדד רב מאוד באיכות גבוהה, ויעילות מלכודת נמוכה. תוצאות אופטימליות ניתן להשיג עם סמים כמו המרכיב העיקרי ליפוחלק. עם זאת, זהו פוספוליפיד בעלות גבוהה. העלויות הכספיות של הייצור nanoliposome יכול להיות מושגת על ידי החלפת סמים עם שומנים דומים אחרים כגון הדוג (1, 2-dioleoyl-sn-גליקו-3-פוספהולין). CHEMS היא מולקולה כולסטרול נמצא באופן טבעי ממברנות תא בעלי חיים, אשר לא צריך להיות מנשלל מן הניסוח, מאז חשוב להבטיח נזילות bilayer השומנים ו malleability16.
היבטים אחרים של פרוטוקול אנקפסולציה ניתן גם להתאים. הכלורופורם המשמש לפזר את הרכיבים ליפוזומיום יכול בקלות להיות מוחלף על ידי מתנול ללא השפעות על גודל ממוצע, הומוגניות, ויעילות מלכודת. עם זאת, דליפת חלבונים מסוימים עלולה להתרחש באחסון תחת 4 ° צ'16. השלב הדגירה לילה עם פתרון אמוניום גופרתי המכיל טארין אינו חובה; עם זאת, לנוחות זה יכול להתבצע ללא כל נזק nanolipoזומבית מאפיינים, עטיפת משנה, או יעילות הפסדים ביציבות, כפי שמתואר על ידי Correa et al.16. השלב ההבלטה מבוצע בטמפרטורת החדר, אשר יכול להקטין את קצב הזרימה בין מזרקים אם הממברנה 0.1 יקרומטר בגודל הנקבוביות משמש.
כדי להתגבר על בעיה זו, השימוש 0.2 יקרומטר ממברנה בגודל הנקבוביות או חימום של המחזיק הבלטת ממד מעל טמפרטורת המעבר ליפיד צריך להיחשב. על האנליסט להיזהר שלא לפגוע בשומנים או בחלבון שניתן להשבית ולאבד פעילות ביולוגית. לחילופין, הכנה ליפוזומלית יכול להיות דיאליזה נגד hbs במקום להשתמש בקרום לגזור על פי משקל מולקולרי חלבון. הבחירה של הטבע הכימי של המאגר שבו nanoliposomes מושעה לאחר השעיית הקשר קשורה ישירות היישום הבאים. מאז פרספקטיבות של מחקר זה כוללים vivo ו בתחום מבחנה, ההשעיה ב-HEPES מלוחים באגירה היה מספיק כדי להבטיח לא השפעות ציטוטוקסיו טווח pH קרוב לתנאים פיסיולוגיים.
ליפוזומים צריך להיות מטופלים באופן דק, בדומה לתאים חיים, כדי להשיג תמונות SEM באיכות גבוהה יותר. הליכי קיבוע וייבוש חשובים כדי להבטיח את ההדמיה של שלפוחיות קטנות ללא פגע התומכות בערכים גבוהים מ -20 kV תחת תנאי ואקום. איור 2 A, B מציג הננו-שלפוחית בינונית תואמת את הליך ההבלטה. ויזואליזציה של שלפוחיות החל מ 51-396 nm אפשרי אם הכנה לדוגמה הולם בעקבות הליך זה מבוצע. השלבים כוללים קיבעון, ייבוש על ידי הגדלת ריכוזי האתנול, והתייבשות כימית כדי למנוע היווצרות של אגרגטים ושלפוחיות הנגרמת על ידי ואקום והאלקטרונים קרן. מצד שני, איור 2ג, D מראה ליפושלפוחיות מיובשות בטמפרטורת החדר ולא נתון כל הטיפולים המתוארים כאן, כלומר הם היו מוכנים כראוי. כתוצאה מהליך מתאים, שלפוחיות ענק נוצרות, גם לאחר שחול באמצעות קרום 0.2 יקרומטר בגודל הנקבוביות. שלפוחיות שנקרעו נצפו גם הן בחלוניות כתוצאה מפגיעה בוואקום ובקרן האלקטרונים.
Nanoliposome סוימים ושלפוחיות נחקרו כמערכת אנקפסולציה ומשלוח עבור מולקולות הידרופובי, כולל רזברטרול (3, 5, 4 '-trihydroxyבנות), מתחם אקטיביים נגד תאים סרטניים המעי הגס. הליך האנקפסולציה יכול להתגבר על מסיסות העניים של תרכובות ליפופילית בנוסף לאספקת biocompatibility, biodegradability, non-אימונוגלוגניות, ומאפיינים שאינם רעילות הטבועה ליפוכמה nanocapsules25. יש לקחת בחשבון את העיבודים בפרוטוקול, בהתאם לתוואי הניהול ולמטרה, כגון פיתוח ליפופי ניסוחים חדשים לניהול בעל פה.

מספר המחקרים היעילים העלו בשנים האחרונות את מערכות אספקת הסמים היעילות. עם זאת, מגבלות כגון הסיווג מהיר, ביולוגי עני התפלגות, מסיסות ב-pH פיזיולוגי וספיגת הסלולר מספיק עדיין צריך להיות מעל. השימוש במערכות ננו התפתחה כהתקדמות האחרונה בסרטן therapeutics, להחיל כדי להגדיל את הריכוז התאיים של תרופות בתוך תאים סרטניים תוך מזעור רעילות בתאים בריאים. יתר על כן, חלקיקים שהתקבלו ממגוון שונים של חומרים (כלומר, פולימרים, דנדריטים, ליפוזומים, וירוסים, פחמן צינוריות, ומתכות כגון תחמוצת ברזל וזהב) מוחלים כרגע כדי לשפר את ההשפעות נגד סרטן ולהפחית מערכתי רעילות1. ליפוכמה nanocapsules בפרט הוחלו למטרות רבות בתעשיית התרופות, קוסמטיקה, ומזון. בשנים האחרונות, מוצרים נוטראטיים שונים כגון ויטמינים, אנזימים, ותמציות צמחים כבר גובשה באמצעות ליפוכמה טכנולוגיה2.
ליפוזומים הם כדוריים ושלפוחיות המורכב של אחד או יותר bilayers שומנים באופן ספונטני נוצר על ידי פיזור של פוספוליפידים במדיה ימית3,4. ראשי הקוטב של הפוספוליפידים ממוקמים על המשטחים החיצוניים והפנימיים של הקרומים, במגע עם הסביבה הימית. לעומת זאת, שרשראות חומצת שומן יוצרות את ליבת ההידרופובי של הקרומים ומוגנות מהמים5. תכונות מסוימות של ליפוזומים הגורמים להם מערכות מסירה מושכת של סמים כוללים תאימות ביולוגית שלהם, biodegradability, לא חיסוני, לא רעילות, ואת היכולת להוסיף הן תרכובות הידרופיפילית ו הידרו פוביות6.
ניתן להכין ליפוזומים באמצעות שלבים שונים כגון עצבנות, sonication, שחול, ליטוטיזציה, הקפאה והפשרה. שיטות קלאסיות כוללות אידוי לשלב הפוך, הזרקת ממס, וכלי ניקוי דיאליזה. השיטה המוחלת ביותר היא לחות דק השומנים הסרט, המכונה גם השיטה של bangham, אשר משמש להשגת צורות השומנים vesicular7,8,9,10,11. לאמטיות (מספרם של הזרחן) וגודל החלקיקים הם פרמטרים קלאסיים המשמשים לאפיון ליפוזומים כמו 1) unilamellar ושלפוחיות (ULVs), נוצר על ידי בילוליפיד זרחן ייחודי משתנה בגודל כדלקמן: i) קטן unilamellar שלפוחיות (רכבי השטח, ~ 0.02-0.20 μm), ii) גדול unilamellar ושלפוחיות (LUVs, ~ 0.2-1.0 μm), ו-iii) ענק unilamellar שלפוחיות (GUVs, > 1 μm); או 2) מולטיצ שלפוחיות (mlvs, > 0.1 μm)3,12. גודל שלפוחית הוא פרמטר חשוב כאשר בוחנים שימוש תרפויטי, כגון טיפול בסרטן, שבו גדלים של < 200 ננומטר הם אידיאליים כדי לאפשר ננו שלפוחיות לחצות את מחסום האנדותל ולהגיע רקמות מוסרי4.
בזאת, את ההליך אנקפסולציה לאחר הליחות הקלאסית של טכניקת השומנים הדק הסרט7 תוארה באמצעות טארין, צמח לקטין המאופיין חלבון כדורי הידרופילי13,14,15 . שלפוחיות ננו בגודל מיוצרים על ידי כלילת שלבים sonication ו ההבלטה בטכניקה העיקרית, וכתוצאה מכך שלפוחית ליפוזומלית יציבה עם יעילות מלכודת גבוהה16.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ammonium Sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>A4418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analitycal Ballance Mettler H10Tw</td>
			<td>Mettler Inc.</td>
			<td>417870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beckman DU-640 Spectrophotometer</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>8043-30-1090</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>5470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BUCHI Rotavapor R-300 Rotary Evaporator with Controller and V-300 Pump</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>05-001-022PM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHEMS (cholesterylhemisuccinate)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>C6512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>48520-U</td>
			<td>CAUTION</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper (II) Sulfate (Pentahydrate)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>209198</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips (13mm diameter)</td>
			<td>Thermo Scientific Nunc</td>
			<td>EW-01839-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DOPE(1,2-dioleoyl-sn-glycerol-3-phosphoethanolamine)</td>
			<td>Lipoid GMBH</td>
			<td>565600.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol Absolute</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>32205</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Folin -Ciocalteu phenol reagent</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>F9252</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>G5882</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>H3375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexamethyldisilazane (HMDS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>440191</td>
			<td>CAUTION</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>JEOL JSM-6460 LV Sacnning Electron Microscope</td>
			<td>JEOL LTD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini Extruder 7</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>610000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MPEG 2000-DSPE 1,2-distearoyl-sn-glycero-3- phosphoethanolamine-N-[amino(polyethylene glycol)-2000] (ammonium salt)</td>
			<td>Lipoid GMBH</td>
			<td>588200.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optima L-90k Ultracentrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>PN LL-IM-12AB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffer</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>P3619</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poli-L-lysine</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>P8920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium L-tartrate monobasic</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>243531</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Carbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>S7795</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Deoxycholate (DOC)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>D6750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Dodecyl Sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>L3771</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>S8045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic anhydrous</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>RES20908-A7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TESCAN VEGA 3 Scanning Electron Microscope</td>
			<td>Tescan</td>
			<td>#657874</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichloroacetic Acid (TCA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co</td>
			<td>91230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zetasizer Nano ZSP</td>
			<td>Malvern Panalytical LTD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cleaning bath model 2510</td>
			<td>Branson</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation and characterization of nanoliposomes for the entrapment of bioactive hydrophilic globular proteins

ליפוכמה nanocapsules הוחלו למטרות רבות בתעשיית התרופות, קוסמטיקה, ומזון. תכונות של ליפוזומים כוללים תאימות ביולוגית שלהם, biodegradability, לא חיסוני, חוסר רעילות, ויכולת להוסיף גם תרכובות הידרופיפילית והידרו-פוביות. הידרציה הקלאסית של סרטי השומנים הדק בממס אורגני מיושם כאן כטכניקה לכמס טארין, לקטין צמח, ב nanoliposomes. Nanoliposome גודל, יציבות, מלכודת יעילות, ואפיון מורפולוגית מתוארים בפרוטרוט. הננו-פוטזומים מוכנים באמצעות 1, 2-dioleoyl-sn-גליצרול-3-פוספולאטאנאמין (סם), 1, 2-dioleoyl-sn-גליקו-3-פוספהואנתאנאואמין-N-[אמינו (פוליאתילן גליקול)-2000] (אמוניום מלח; DSPE-MPEG 2000), ו cholesterylhemisuccinate (CHEMS) כמו המרכיבים העיקריים. שומנים מומס הראשון ב כלורופורם כדי להשיג סרט השומנים דק כי הוא הנוזלים לאחר מכן בתמיסה אמוניום גופרתי המכיל את החלבון להיות לכוד ומודבטים לילה. לאחר מכן, טכניקות sonication ושחול מוחלים כדי ליצור unilamellar שלפוחיות ננו-בינוניות. המדד הגדול והרב של הננו-שלפוחית נקבעים על ידי פיזור אור דינמי, ואילו מורפולוגיה ננו-שלפוחית מוערך על ידי סריקת מיקרוסקופ אלקטרוני. יעילות מלכודת נקבעת על ידי היחס של כמות החלבון שאינו כימוס לכמות המקורית של חלבון טעון בתחילה. ליפוזומים הומוגנית מתקבלים בגודל ממוצע של 155 ננומטר וערך המדד של 0.168. יעילות מלכודת גבוהה של 83% מושגת.

איור 1 מתאר את nanoliposome סוימים הכנה16,20,21. פוספוליפידים, 1, 2-dioleoyl-sn-לגליצרול-3-פוספולאטאנאמין (סם), 1, 2-דיסטארוקסיל-sn-גליקו-3-פוספהואטאנאואמין-N-[אמינו (פוליאתילן גליקול)-2000] (אמוניום מלח; DSPE-MPEG 2000), ו cholesterylhemisuccinate (CHEMS), המרכיבים העיקריים ליפוחלק, היו הומס הראשון ב כלורופורם כדי להשיג את הסרט ליפיד. הסרט השומנים היה לאחר מכן בתמיסה אמוניום גופרתי המכיל את החלבון הידרופילי (טארין) להיות לכוד, ואת הדגירה בוצעה לילה. לאחר מכן, sonication וטכניקות שחול הוחלו על הפקת unilamellar שלפוחיות קטנות. הצעד המקביל הפריד את ההכנה ליפוזומלית משומנים בחינם וחלבון ללא כימוס, ואילו הסופרנטאנט שימש לקביעת יעילות מלכודת.
Nanoliposomes המיוצר באמצעות המתודולוגיה הנ ל הציגה התפלגות גודל החל 51-396 nm ו בגודל ממוצע של 155 ננומטר (שולחן 2). ההכנה הייתה הומוגנית, מאחר והמדד הפולידיסטילי היה 0.168. יעילות מלכודת גבוהה של 83% ניתן להגיע אם ליפוזומים הם הבלטת דרך ממברנה בגודל 0.2 יקרומטר הנקבוביות (שולחן 2).
ננואוליפומורפולוגית מאפיינים הוערכו על ידי SEM. איור 2A, B מציג בצורה עגולה שלפוחיות שלפוחית בטווח של 121 ננומטר ונותחו ב 20 KV, בעוד איור 2ג, D מציג כראוי מוכן דגימות. Nanoliposomes היו פשוט מיובשים האוויר ללא הקיבעון הקודם או כל טיפול אחר המתואר במחקר זה. כתוצאה מכך, שלפוחיות גדולות ופגועות בטווח של 332 יקרומטר ונותחו ב 5 kV נצפו.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59900/59900fig1.jpg"> איור 1: ייצוג סכמטי של הכנת הננו. סמים, פג, ו CHEMS, המרכיבים העיקריים של הרכיבים, היו הומס הראשון ב כלורופורם כדי להשיג את הסרט ליפיד (1, 2, 3). הסרט השומנים היה לאחר מכן במאגר מלוחים המכיל את החלבון הידרופילי (טארין) להיות לכוד, ואת הדגירה בוצעה לילה (4). לאחר מכן, טכניקות sonication ו ההבלטה יושמו כדי ליצור רכבי שטח (5, 6). הצעד המקביל הפריד את ההכנה ליפוזומלית משומנים חופשיים וחלבון ללא כימוס, ואילו הסופרנטאנט שימש לקביעת יעילות מלכודת (7). דמות זו שונתה מ Correa ואח '16. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59900/59900fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59900/59900fig2.jpg"> איור 2: שנאוליפוכמה photomicroscopy על ידי SEM. (א, ב) תמונות של ליפוזומתיים עגולות בצורת שלפוחיות בטווח של 121 ננומטר ונותחו ב -20 kV. (ג, ד) תמונות של דגימות. שהוכנו בצורה מספקת דגימות שאינן מורשות להתבונן על שלפוחיות גדולות ו/או פגומות, שאינן יכולות להתנגד למצבי ואקום ו/או מתח ב-5 kV. דמות זו שונתה מ Correa ואח '16. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59900/59900fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>ליפוכמה רכיבים</td>
			<td>משקל (גר')</td>
			<td>ריכוז (ממ)</td>
			<td>נפח סופי</td>
		</tr>
<tr>
<td>סמים</td>
			<td>0.0420</td>
			<td>5.7</td>
			<td rowspan="3">10 מ ל</td>
		</tr>
<tr>
<td>MPEG 2000-DSPE</td>
			<td>0.1059</td>
			<td>3.8</td>
		</tr>
<tr>
<td>מיכל כימי</td>
			<td>0.0024</td>
			<td>0.5</td>
		</tr>
</tbody></table>סמים-1, 2-dioleoyl-sn-גליצרול-3-פוספולאטיאנאמין); MPEG 2000-DSPE-1, 2-distearoyl-sn-גליליקו-3-פוספהואטאנאואמין-N-[אמינו (פוליאתילן גליקול)-2000] (אמוניום מלח); מcholesterylhemisuccinate.
שולחן 1: הכנת ליפוזומלי הננו של טארין.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>גודל נקבובית של ממברנה (μm)</td>
			<td>התפלגות גודל (nm)</td>
			<td>גודל ממוצע (nm)</td>
			<td>מדד פולידיסטיסיטה (PdI)</td>
			<td>שיא (nm)</td>
			<td>יעילות מלכודת</td>
		</tr>
<tr>
<td>0.2</td>
			<td>51-396</td>
			<td>155</td>
			<td>0.168</td>
			<td>94 ± 39</td>
			<td>0.83</td>
		</tr>
</tbody></table>מדד גודל ומפזרים הוערכו על ידי פיזור אור דינמי, בעוד היעילות אנקפסולציה נקבע על פי פיטרסון17.
שולחן 2: גודל, מפוליפרופילן מדד, ויעילות מלכודת של nanoliposome סוימים הכנה.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation and Characterization of Nanoliposomes for the Entrapment of Bioactive Hydrophilic Globular Proteins at JoVE.com

Preparation and Characterization of Nanoliposomes for the Entrapment of Bioactive Hydrophilic Globular Proteins

מחקר זה מתאר לחות קלאסית באמצעות שיטת הסרט דק השומנים לקראת nanoliposome סוימים ואחריו ננו-חלקיק אפיון. 47 kDa-hydrophilic וחלבון כדורי, טארין, הוא כיום בהצלחה כאסטרטגיה כדי לשפר את היציבות, להימנע הרשאה מהירה, ולקדם שחרור מבוקר. ניתן להתאים את השיטה לעטיפת מולקולות הידרופובי.

הכנה ואפיון ננו-פוטזומים לצורך מלכודת הידרופיזיאליות של חלבונים ביולוגיים

Liposome nanocapsules have been applied for many purposes in the pharmaceutical, cosmetic, and food industries. Attributes of liposomes include their ...

הכנת nanocapsules liposomal על ידי טכניקת שולט יבוצע צעד אחר צעד במלכוד של טארין 48 קילודלטונים כדורי בחלבון הידרופילי מטוהרים קולוקסיה esculenta יוכח. כל ההליכים לאפיון הננו-קאפ כוללים את מיקרוסקופ האלקטרונים הסריקה וגם פיזור האור הדינמי יבוצעו. הליכי כיסה יכולים להתמודד עם כמה אתגרים מן הבחירה שומנים להישג של אנקפסולציה יעילות גבוהה, שמירה על הפעילות הביולוגית של מולקולות לכודים.פרוטוקול שיתואר יכול להתגבר על חלק מקשיים אלה. שקלו את רכיבי ליפוזום באמצעות איזון אנליטי. ממיסים את רכיבי השומנים בכלורופורם באמצעות בקבוקון נפחי שמתאים לאידוי סיבובי כדי למנוע אובדן חומר.מערבבים את התערובת ב 150 סל"ד במשך 15 דקות. הסר את הכלורופורם באמצעות מאייד סיבובי. כווננו את פי הבקבוקים הנפחי למיקום הסטנדרטי ליעילות מיטבית, תוך מגע עם המים מהאמבטיה לחימום.הגדר את הפרמטרים בהתאם לפרוטוקול המתואר. לאחר כ 25 דקות, להסיר את הבקבוק, ולהשליך את הממס התאדה כראוי. נוצר סרט דק ואטום ונוצר בקלות.לחות את הסרט השומנים בתתבת אמוניום גופרתי המכיל טרנטין במיליגרם אחד למיליליטר. מערבבים את התערובת במשך 40 דקות ו דגירה לילה בארבע מעלות צלזיוס. לאחר מכן, sonicate ההשעיה לדקה אחת ב 25 מעלות צלזיוס, טמפרטורת החדר.כדי להקטין את גודל הצמחייה ולהימנע מצבור, מניחים את קרום הפוליקרבונט בין שתי תמיכות מסנן רטובות מראש ומציבים אותו במחזיק. הכנס מזרק ריק אחד לתוך המכשיר, למלא את השני עם מיליליטר אחד של ההשעיה liposomal, ולהכניס אותו בצד הנגדי. בצע שבלט 12 מחזור דרך קרום נקבובית פוליקרבונט 2 מיקרומטר.דחוף את הדגימה ממזרק אחד לאחר לאט. בסופו של דבר, ההשעיה ליפוזומלית צריכה להיות ברורה במהלך תהליך הטיול, כתוצאה מהפחתת גודל. כ 2 מיליליטר של המדגם יכול ללכת לאיבוד במהלך שלב זה.להפריד את ליפוזומים על ידי אולטרהצנטריפוגציה. ראשית, לשקול את הדגימה לתוך צינור טיטניום ולאזן את הצינורות. בדוק את הנפח המינימלי שיש למלא, וב במידת הצורך, כוונן את עוצמת הקול עם אמוניום סולפט.התאם את צינורות הטיטניום לתוך דלי הנדנדה. פתח את דלת הצנטריפוגה והצב את הרוטור בפנים. סגרו את דלת הצנטריפוגה, לחצו על ואקום והמתינו עד שהוואקום יגיע מ-200 לפחות מ-20 מיקרון.התאם את הפרמטרים בתצוגה האולטרה-מרכזית. לחץ על אחזור, בדוק את התנאים והתחל את הריצה. לאחר 90 דקות, לשחרר את הוואקום על ידי לחיצה על כפתור ואקום ולפתוח את דלת הצנטריפוגה.הסר את הרוטור מבפנים. שמור על דגימת אולטרהצנטריפוגה על קרח ולאחר מכן להפריד את supernatant מן גלולה, על ידי הפיכת הצינור במהופך, לתוך צנטריפוגה חד פעמית 59 מיל להפריד את העל טבעי מן גלולה. לאחסן את supernatant המכיל את החלבון unencapsulated בארבע מעלות צלזיוס.זה ישמש כדי לקבוע את יעילות אנקפסולציה. גלולה מוצגת כמו ג'לי שקוף. להשעות את גלולה וחום HEPES אגירה תמיסת מלח.נא בדוק את הפרוטוקול לקבלת מידע נוסף. לקבוע את יעילות אנקפסולציה על ידי הפרוטוקול של פיטרסון, על מנת למנוע הפרעות שומנים כימות חלבון. יש לנתח דגימות ב- triplicate.בצינור microfuge, לדלל את על טבעי lipsomal או BSA במיליגרם אחד למיליליטר עם מים לנפח סופי של מיליליטר אחד. מוסיפים DOC ודגירה במשך 10 דקות. מוסיפים מיליליטר אחד של 72% TCA ומערבבים היטב.צנטריפוגה ב 3, 000 גרם במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר. בזהירות להשליך את supernatant על ידי היפוך הצינור כלפי מטה, הנחת אותו על נייר סופג ולתת לו להתייבש. להשעות את גלולה במיליליטר אחד של מים.מערבבים היטב כדי לוודא שהכדור מומס. לאחר מכן, להעביר את הדגימה למבחנות. מוסיפים מיליליטר אחד של רריג'נט A, מערבבים ו דגירה במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר.מוסיפים 5 מיליליטר של רריג'נט B, מערבבים ו דגירה במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר, מוגנים מפני אור. לקבוע את הספיגה ב 750 ננומטר ולחשב את יעילות אנקפסולציה. ממוצע הגודל והתפלגות הגודל נקבעים על-ידי פיזור אור דינמי.מעבירים את הננו-חלקיקים השפתיים לקוראט גודל חד פעמי. התאם את הכובטה לתוך הציוד. הגדר את פרמטרי הציוד.לקביעת יציבות, יש לאחסן את הליפוזומים בארבע מעלות צלזיוס ולבדוק את התפלגות הגודל ואת ממוצע הגודל באופן קבוע. אפיון ליפוזום על ידי סריקת מיקרוסקופ אלקטרונים מתבצע על פי מורטה ו Ramasamy ב טריליקט. תקן את החלקות כיסוי הזכוכית בתחתית צלחת פטרי עם קלטת.מעיל את החלקות הכיסוי עם פולי-ל-לינזין. מניחים נייר סינון רטוב בתוך צלחת פטרי כדי לשמור על לחות דגירה במשך שעה אחת. יש לשטוף במים מזוקקים.מוסיפים טיפה מהדגימה ומאפשרים לה להתייבש במשך שעה, בטמפרטורת החדר. כדי לתקן את הדגימות, לכסות אותם עם glutaraldehyde, מוכן במאגר פוספט. מניחים ניירות סינון רטובים בתוך צלחת פטרי.חשוב לאטום את צלחת פטרי. דגירה בארבע מעלות צלזיוס במשך 48 שעות. שוטפים את הכיסוי שלוש פעמים במשך חמש דקות כל אחד, עם אותו מאגר פוספט.לייבש את הדגימות כדלקמן על ידי כביסה בתת פתרון ריכוז אתנול הגדלת מ 35% לאתנול מוחלט. כימית לייבש את הדגימות עם hexamethyldisilazane במשך 10 דקות. הקסמתילדיסילאזאן צריך להיות מניפולציה בזהירות בתוך מכסה המנוע אדים.יש לאפשר לדגימות להתייבש בן לילה בתוך מייבש או בתוך מכסה המנוע של האדים בטמפרטורת החדר. הר את הדגימות המיובשת על ספח, עם סרט דבק מוליך פחמן. סוטר את הדגמים בזהב.הקלט תמונות SEM עם מיקרוסקופ אלקטרונים סורק, SEM, במצב ואקום נמוך ומתח נמוך, 20 קילו-וולט. איור אחד מתאר את הכנת ליפוזום ננו. פוספוליפידים, סמים, יתד, כימים, המרכיבים העיקריים ליפוזום, היו מומסים לראשונה כלורופורם כדי להשיג את הסרט השומנים.סרט השומנים היה אז rehydrated במאגר מלוחים, המכיל את החלבון הידרופילי, tarin, להיות entrapt, ואת הדגירה צריך להיות preformed בן לילה. לאחר מכן, sonication ו שחול מוחלים כדי ליצור וריים יונימלריים קטנים. שלב האולטרה-צנטריפוגה מפריד בין הכנה ליפוזומלית לבין שומנים חופשיים, וחלבון לא מכווץ.בעוד העל-טבעי משמש לקביעת יעילות המלכודת. ננו-ליפוזומים המיוצרים באמצעות המתודולוגיה הנ"ל מציגים התפלגות גודל הנעה בין 51 ל-396 ננומטר, וגודל ממוצע של 155 ננומטר. ההכנה היא הומוגנית, שכן מדד הפולידיספרסיות הוא של 168.יעילות מלכודת גבוהה של 83% הוא הגיע אם ליפוזומים מובלטים דרך קרום בגודל נקבובית 2 מיקרומטר. מאפייני ננו-ליפוזום מורפולוגיים הוערכו על ידי סריקת מיקרוסקופ אלקטרונים. ליפוזומים יש סוף סוף מטופלים באופן דומה לתאים חיים, כדי לקבל תמונות באיכות טובה יותר.הליכי קיבוע וייבוש חשובים כדי להבטיח הדמיה של יבלות שלמות קטנות יותר התומכות ביותר מ-20 קילו-וולט בתנאי ואקום. איורים 2A ו- 2B מציגים יבלות ליפוזומליות עגולות בטווח של 121 ננומטר, שנותחו ב- 20 קילו-וולט. בעוד שנתונים 2C ו- 2D, הצג דגימות שהוכנו כראוי.דגימות שעברו התעללות מותרות רק לתצפית על וריכים גדולים יותר או פגומים, אשר אינם יכולים לעמוד בתנאי ואקום או מתח. פרוטוקול המתואר, כאן ב, מותר לייצור של וריונים להתרבות המציגים צורה עגולה, משטח קטן, וגודל ממוצע של כ 150 ננומטר. השיטה יכולה לשמש כדי ללכוד מולקולות מורכבות וגדולות, כמו חלבון tetrameric, המציג מתקן הידרופילי.מלכוד עצמי לקוי גבוה מ-80% וקצב הדליפה נמוך מאוד, נחות מ-1.5% כאשר הננו-קפסול מאוחסנים בארבע מעלות צלזיוס. אנו מקווים כי וידאו זה יעזור לך אנקפסולציה של מולקולות גדולות, כגון טרי.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Synthesis, Assembly, and Characterization of Monolayer Protected Gold Nanoparticle Films for Protein Monolayer Electrochemistry

סינתזה, הרכבה, אפיון monolayer מוגן סרטים Nanoparticle זהב עבור אלקטרוכימיה monolayer חלבון

Colloidal gold nanoparticles protected with alkanethiolate ligands called monolayer protected gold clusters (MPCs) are synthesized and subsequently ...

Isolation and Characterization Of Chimeric Human Fc-expressing Proteins Using Protein A Membrane Adsorbers And A Streamlined Workflow

בידוד ואפיון של חלבונים דוברי Fc אנושיים כימריים באמצעות חלבון ספיחה ממברנה וזרימת עבודה יעילה

Laboratory scale to industrial scale purification of biomolecules from cell culture supernatants and lysed cell solutions can be accomplished using ...

Aplysia Ganglia Preparation for Electrophysiological and Molecular Analyses of Single Neurons

Aplysia Ganglia Preparation for Electrophysiological and Molecular Analyses of Single Neurons

אקליפסיה (1991) הכנת גנגליה לניתוחים אלקטרופיזיולוגיים ומולקולריים של נוירונים בודדים

A major challenge in neurobiology is to understand the molecular underpinnings of neural circuitry that govern a specific behavior. Once the specific ...

Fabrication of a Bioactive, PCL-based "Self-fitting" Shape Memory Polymer Scaffold

ייצור של זיכרון מבוסס PCL יו, &quot;עצמית הולם&quot; צורת פולימר פיגום

Tissue engineering has been explored as an alternative strategy for the treatment of critical-sized cranio-maxillofacial (CMF) bone defects. Essential to ...

Fabrication of Mechanically Tunable and Bioactive Metal Scaffolds for Biomedical Applications

המצאה של מכאני מתכוונן ויו מתכת פיגומים עבור יישומים ביו

Biometal systems have been widely used for biomedical applications, in particular, as load-bearing materials. However, major challenges are high stiffness ...

Preparation and Characterization of Lipophilic Doxorubicin Pro-drug Micelles

הכנה ואפיון של דוקסורוביצין lipophilic Micelles פרו-סמים

Micelles have been successfully used for the delivery of anticancer drugs. Amphiphilic polymers form core-shell structured micelles in an aqueous ...

Preparation and Characterization of Novel HDL-mimicking Nanoparticles for Nerve Growth Factor Encapsulation

הכנה ואפיון של נוזל HDL מחקה ננו-חלקיקים עבור אנקפסולציה גורם העצב הגדילה

The objective of this article is to introduce preparation and characterization methods for nerve growth factor (NGF)-loaded, high-density, lipoprotein ...

Patterning Bioactive Proteins or Peptides on Hydrogel Using Photochemistry for Biological Applications

תכנים חלבונים ביו או פפטידים על הידרוג באמצעות פוטוכימיה עבור יישומים ביולוגיים

There are many biological stimuli that can influence cell behavior and stem cell differentiation. General cell culture approaches rely on soluble factors ...

Rapid, Scalable Assembly and Loading of Bioactive Proteins and Immunostimulants into Diverse Synthetic Nanocarriers Via Flash Nanoprecipitation

הרכבה מהירה, מדרגי וטעינה של חלבונים ביו, Immunostimulants לתוך Nanocarriers סינתטי מגוונות באמצעות פלאש Nanoprecipitation

Nanomaterials present a wide range of options to customize the controlled delivery of single and combined molecular payloads for therapeutic and imaging ...

Generation of Cationic Nanoliposomes for the Efficient Delivery of In Vitro Transcribed Messenger RNA

Generation of Cationic Nanoliposomes for the Efficient Delivery of In Vitro Transcribed Messenger RNA

דור של Cationic Nanoliposomes למסירה יעיל של במבחנה עיבד RNA שליח

The development of messenger RNA (mRNA)-based therapeutics for the treatment of various diseases becomes more and more important because of the positive ...