Name: live-cell fluorescence microscopy to investigate subcellular protein localization and cell morphology changes in bacteria
Uploaded: 2019-11-23T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live-Cell Fluorescence Microscopy to Investigate Subcellular Protein Localization and Cell Morphology Changes in Bacteria at JoVE.com

Vi takker vores Lab medlemmer for deres kommentarer til denne artikel. Dette arbejde blev finansieret af et opstarts stipendium fra University of South Florida (PE).

1. generelle vækstbetingelser
<ol><li>Der inokuleres 2 mL passende vækstmedium suppleret med antibiotika (hvor det er påkrævet) med en enkelt koloni af den eller de stamme, der skal imældes. Disse frøkulturer inkubates natten over ved 22 °C i en ryste inkubator. Bemærk: de specifikke bakterievækst betingelser, der anvendes i denne artikel, er angivet i afsnittet om repræsentative resultater.</li>
	<li>Fortyndes overnight kulturer 1:20 i friske medier i en 125 mL kolbe, supplement med antibiotika (hvor det ...

<ol>
	<li>Coltharp, C., Xiao, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superresolution+microscopy+for+microbiology.">Superresolution microscopy for microbiology.</a> Cellular Microbiology. 14 (12), 1808-1818 (2012).</li><li>Holden, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probing+the+mechanistic+principles+of+bacterial+cell+division+with+super-resolution+microscopy.">Probing the mechanistic principles of bacterial cell division with super-resolution microscopy.</a> Current Opinion in Microbiology. 43, 84-91 (2018).</li><li>Hsu, Y. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Full+color+palette+of+fluorescent+d-amino+acids+for+in+situ+labeling+of+bacterial+cell+walls.">Full color palette of fluorescent d-amino acids for in situ labeling of bacterial cell walls.</a> Chemical Science. 8 (9), 6313-6321 (2017).</li><li>Nonejuie, P., Burkart, M., Pogliano, K., Pogliano, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+cytological+profiling+rapidly+identifies+the+cellular+pathways+targeted+by+antibacterial+molecules.">Bacterial cytological profiling rapidly identifies the cellular pathways targeted by antibacterial molecules.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA. 110 (40), 16169-16174 (2013).</li><li>Rueden, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ImageJ2:+ImageJ+for+the+next+generation+of+scientific+image+data.">ImageJ2: ImageJ for the next generation of scientific image data.</a> BioMed Central Bioinformatics. 18 (1), 529 (2017).</li><li>Colville, K., Tompkins, N., Rutenberg, A. D., Jericho, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+poly(L-lysine)+substrates+on+attached+Escherichia+coli+bacteria.">Effects of poly(L-lysine) substrates on attached Escherichia coli bacteria.</a> Langmuir. 26 (4), 2639-2644 (2010).</li><li>McNally, J. G., Karpova, T., Cooper, J., Conchello, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+imaging+by+deconvolution+microscopy.">Three-dimensional imaging by deconvolution microscopy.</a> Methods. 19 (3), 373-385 (1999).</li><li>Wallace, W., Schaefer, L. H., Swedlow, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+workingperson's+guide+to+deconvolution+in+light+microscopy.">A workingperson's guide to deconvolution in light microscopy.</a> Biotechniques. 31 (5), 1076-1082 (2001).</li><li>Eswara, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+essential+Staphylococcus+aureus+cell+division+protein+directly+regulates+FtsZ+dynamics.">An essential Staphylococcus aureus cell division protein directly regulates FtsZ dynamics.</a> Elife. 7, (2018).</li><li>Haeusser, D. P., Margolin, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Splitsville:+structural+and+functional+insights+into+the+dynamic+bacterial+Z+ring.">Splitsville: structural and functional insights into the dynamic bacterial Z ring.</a> Nature Reviews Microbiology. 14 (5), 305-319 (2016).</li><li>Du, S., Lutkenhaus, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=At+the+Heart+of+Bacterial+Cytokinesis:+The+Z+Ring.">At the Heart of Bacterial Cytokinesis: The Z Ring.</a> Trends in microbiology. , (2019).</li><li>Haranahalli, K., Tong, S., Ojima, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+the+discovery+and+development+of+antibacterial+agents+targeting+the+cell-division+protein+FtsZ.">Recent advances in the discovery and development of antibacterial agents targeting the cell-division protein FtsZ.</a> Bioorganic and Medicinal Chemistry. 24 (24), 6354-6369 (2016).</li><li>Brzozowski, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deciphering+the+Role+of+a+SLOG+Superfamily+Protein+YpsA+in+Gram-Positive+Bacteria.">Deciphering the Role of a SLOG Superfamily Protein YpsA in Gram-Positive Bacteria.</a> Frontiers in Microbiology. 10, 623 (2019).</li><li>Elsen, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+action+of+the+cell-division+inhibitor+PC190723:+modulation+of+FtsZ+assembly+cooperativity.">Mechanism of action of the cell-division inhibitor PC190723: modulation of FtsZ assembly cooperativity.</a> Journal of the American Chemical Society. 134 (30), 12342-12345 (2012).</li><li>Haydon, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inhibitor+of+FtsZ+with+potent+and+selective+anti-staphylococcal+activity.">An inhibitor of FtsZ with potent and selective anti-staphylococcal activity.</a> Science. 321 (5896), 1673-1675 (2008).</li><li>Pilhofer, M., Ladinsky, M. S., McDowall, A. W., Jensen, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+TEM:+new+insights+from+cryo-microscopy.">Bacterial TEM: new insights from cryo-microscopy.</a> Methods in Cell Biology. 96, 21-45 (2010).</li><li>Ni, Q., Mehta, S., Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+imaging+of+cell+signaling+using+genetically+encoded+fluorescent+reporters.">Live-cell imaging of cell signaling using genetically encoded fluorescent reporters.</a> Federation of European Biochemical Societies Journal. 285 (2), 203-219 (2018).</li><li>Weiss, C. A., Hoberg, J. A., Liu, K., Tu, B. P., Winkler, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-Cell+Microscopy+Reveals+That+Levels+of+Cyclic+di-GMP+Vary+among+Bacillus+subtilis+Subpopulations.">Single-Cell Microscopy Reveals That Levels of Cyclic di-GMP Vary among Bacillus subtilis Subpopulations.</a> Journal of Bacteriology. 201 (16), (2019).</li><li>Schneider, J. P., Basler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shedding+light+on+biology+of+bacterial+cells.">Shedding light on biology of bacterial cells.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences. 371 (1707), (2016).</li><li>Yao, Z., Carballido-Lopez, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+imaging+for+bacterial+cell+biology:+from+localization+to+dynamics,+from+ensembles+to+single+molecules.">Fluorescence imaging for bacterial cell biology: from localization to dynamics, from ensembles to single molecules.</a> Annual review of microbiology. 68, 459-476 (2014).</li><li>Ettinger, A., Wittmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+live+cell+imaging.">Fluorescence live cell imaging.</a> Methods in Cell Biology. 123, 77-94 (2014).</li><li>Fredborg, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+image+analysis+for+quantification+of+filamentous+bacteria.">Automated image analysis for quantification of filamentous bacteria.</a> BioMed Central Microbiology. 15, 255 (2015).</li><li>Ursell, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=precise+quantification+of+bacterial+cellular+dimensions+across+a+genomic-scale+knockout+library.">precise quantification of bacterial cellular dimensions across a genomic-scale knockout library.</a> BioMed Central Biology. 15 (1), 17 (2017).</li></ol>

Mikroskopi er forblevet en grundpille i undersøgelser vedrørende mikrobielle organismer. På grund af deres micron-skala Cellestørrelse, har enkelt celleniveau undersøgelser traditionelt påberåbt sig elektronmikroskopi (EM). Selv om EM er blevet en ganske kraftfuld teknik i de seneste år, det har sine egne iboende begrænsninger ud over begrænset bruger adgang16. Forbedringer i Fluorescens mikroskopi teknikker og udvikling af forskellige fluorescerende sonder, såsom FDAA...

Området for bakteriel cellebiologi er blevet betydeligt forbedret af de seneste fremskridt i mikroskopi teknikker1,2. Blandt andre instrumenter, mikroskoper, der er i stand til at gennemføre timelapse Fluorescens mikroskopi eksperimenter forbliver et værdifuldt værktøj. Efterforskere kan overvåge forskellige fysiologiske hændelser i realtid ved hjælp af fluorescerende proteiner såsom grøn fluorescerende protein (GFP)-baseret transkriptional og translationel reporter fusioner, fluorescerende D-aminosyrer (FDAA)3, eller bruge andre pletter til mærkning af cellevæg, MEMBRAN og DNA. Det er derfor ikke overraskende, at Fluorescens mikroskopi fortsat er populær blandt mikrobielle celle biologer. Ud over blot at vise de endelige fænotyper, giver oplysninger om, hvordan de observerede fænotyper opstår ved hjælp af timelapse mikroskopi kunne tilføje betydelig værdi til resultaterne og potentielt give fingerpeg om, hvad cellulære processer målrettes af potentielle Drug kandidater4.
Protokollerne til at gennemføre højopløsningsbilleder ved hjælp af et fuldt motoriseret, inverteret, bredt felt fluorescens mikroskop (Se tabellen over materialer) er angivet i denne artikel. Disse protokoller kan tilpasses behovene i andre fluorescens mikroskoper, der er i stand til at gennemføre timelapse mikroskopi. Selv om den software, der diskuteres her, svarer til den specifikke producent-leverede software som angivet i tabellen over materialer, software, der almindeligvis leveres af andre mikroskop fabrikanter eller den frit tilgængelige ImageJ5, har tilsvarende værktøjer til at analysere mikroskopi data. For betingelser, hvor timelapse ikke er befordrende, kunne tidsforløb eksperimenter udføres som beskrevet i denne artikel. De protokoller, der er beskrevet her, giver en detaljeret vejledning til undersøgelse af fænotypiske ændringer i to forskellige bakteriearter: B. subtilis og S. aureus. Se tabel 1 for anvendte stammer.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP160-100</td>
			<td>Molecular Biology Grade - Low EEO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D3571</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FM4-64</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>T3166</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottom dish</td>
			<td>MatTek</td>
			<td>P35G-1.5-14-C</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IPTG</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP1755-10</td>
			<td>Dioxane-free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>GE</td>
			<td>DeltaVision Elite</td>
			<td>Customized Olympus IX-71 Inverted Microscope Stand; Custom Illumination Tower and Transmitted Light Illuminator Module. Objectives: PLAPON 60X (N.A. 1.42, WD 0.15 mm); OLY 100X OIL (N.A. 1.4, WD 0.12 mm); DIC Prism Nomarski for 100X Objective; CoolSnap HQ2 camera; SSI Assembly 7-color; Environmental control chamber - opaque.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC190723</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>3445805MG</td>
			<td>FtsZ inhibitor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SoftWorx</td>
			<td>GE</td>
			<td></td>
			<td>Manufacturer-supplied imaging software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-cell fluorescence microscopy to investigate subcellular protein localization and cell morphology changes in bacteria

Undersøgelser af faktorer, der påvirker celledeling og celle form i bakterier, udføres almindeligvis sammen med højopløsnings Fluorescens mikroskopi, da observationer foretaget på et populationsniveau måske ikke i virkeligheden afspejler, hvad der sker på et enkelt celleniveau. Live-Cell timelapse mikroskopi giver undersøgere mulighed for at overvåge ændringer i celledeling eller celle morfologi, som giver værdifuld indsigt om subcellulære lokalisering af proteiner og timing af genekspression, som det sker, til potentielt støtte i besvarelsen af vigtige biologiske spørgsmål. Her beskriver vi vores protokol til overvågning af fænotypiske ændringer i Bacillus subtilis og Staphylococcus aureus ved hjælp af et højopløsnings-devolution-mikroskop. Formålet med denne rapport er at tilvejebringe en enkel og klar protokol, som kan vedtages af andre efterforskere, der er interesseret i at gennemføre eksperimenter med Fluorescens mikroskopi for at studere forskellige biologiske processer i bakterier og andre organismer.

GpsB-fænotyper Tidligere har vi vist, at SA-GpsB er et essentielt protein, da nedbrydning af GpsB ved hjælp af et antisense RNA-resultat i celle lysis9. Her beskriver vi, hvordan fremkomsten af forskellige celle division fænotyper og ændringer i protein lokalisering kunne fanges ved hjælp af timelapse mikroskopi protokol beskrevet i denne artikel. Til dette formål, S. aureus stammer RB143 [SH1000 husly pEPSA5 (Tom vektor)] og GGS8 [SH1000 husly pGG59 (P<...

Watch this Scientific Journal Video about Live-Cell Fluorescence Microscopy to Investigate Subcellular Protein Localization and Cell Morphology Changes in Bacteria at JoVE.com

Live-Cell Fluorescence Microscopy to Investigate Subcellular Protein Localization and Cell Morphology Changes in Bacteria

Denne artikel indeholder en trinvis vejledning til undersøgelse af protein subcellulær lokaliserings dynamik og til overvågning af morfologiske ændringer ved hjælp af Fluorescens mikroskopi i høj opløsning i Bacillus subtilis og Staphylococcus aureus.

Levende celle Fluorescens mikroskopi til at undersøge subcellulære protein lokalisering og celle morfologi ændringer i bakterier

Investigations of factors influencing cell division and cell shape in bacteria are commonly performed in conjunction with high-resolution fluorescence ...

Denne protokol letter direkte observation af forskellige fænotopyiske ændringer på et enkeltcelleniveau og muliggør løbende overvågning af protein lokalisering og genekspression timing. Den største fordel ved fluorescensmikroskopi er, at det er en enkel metode til overvågning af forskellige biologiske processer, såsom celledeling og cellemorfologiændringer i levende celler. Sørg for at være særlig opmærksom på prøveforberedelsesprotokollen og udforske mikroskopsoftwaren for at kunne finde de indstillinger og indstillinger, der er angivet i denne protokol.En visuel repræsentation af denne protokol er kritisk, fordi den giver brugerne mulighed for at se og lære de vigtige trin i teknikken, når de opretter deres egne eksperimenter. Begynd med at mærke en fem til 50-mikroliter aliquot af cellen kultur af interesse med en passende membran farvning farvestof og tilføje fem mikroliter af de farvede bakterieceller på et dække slip på bunden af en 35-milliliter glasbund kultur parabol. Anlæt en 11-millimeter diameter agaroseplade over prøven og tryk forsigtigt for at sikre, at pladen er flad mod dækslet.Derefter tilsættes ca. fem mikroliter vand omkring dækslet for at forhindre agarosepuden i at tørre og lade dyrkningsskålen komme i ligevægt til temperaturen inde i inkubationskammeret i et kontamineringsmikroskop med høj opløsning i 15 til 20 minutter. For at afbilde prøven skal du bruge den grove justeringsfokusknap for at sikre, at målet er helt sænket, før mikroskopet i mikroskopsoftwaren initialiseres. Placer en dråbe på 1,517 brydningsindeksolie i 100x olienedsænkningsmålet, og overfør glasbundskålen, der indeholder prøven, ind i metalhuskisten.Skub forsigtigt skålen ind i sceneklemmen, og brug den grove justeringsknap til at hæve målet, indtil olien kommer i kontakt med skålens glasbund. Brug okularet og finjusteringsknappen til at bringe prøven i fokus, og skift til kameratilstand. Vælg ikonet Design/Kør eksperiment i billedsoftwaren i vinduet Løs 3D.Der vises en ny dialogboks med titlen Design/Kør eksperiment. Åbn fanerne Design og Sektion i dialogboksen for at angive antallet af Z-stakke og eksempeltykkelsen. Hvis du vil måle tykkelsen af cellerne i prøven, skal du justere Z-planet ved hjælp af pil op og pil ned i dialogboksen Løs 3D, så det sted, hvor cellerne ikke er i fokus, som de øvre og nedre grænser for billedopkøb.Når du har justeret intensitetsprocenten og eksponeringens varighed for de enkelte valgte kanaler i dialogboksen Løs 3D, skal du klikke på Punktliste for at åbne pointlisten. Markér afkrydsningsfeltet Tidsforfald i fanerne Design og Tidsforfald, og angiv parametrene for tidsforfald. Vælg indstillingen Besøgspunktliste, og skriv de punkter, der skal afbildes, i tekstboksen, og adskillelse af punkterne efter kommaer eller bindestreger for komplette sekvenser.Rediger derefter filnavne og filplaceringer under fanen Kør, og vælg Afspil i dialogboksen Begynd eksperiment for at starte eksperimentet. I slutningen af analysen skal du åbne RAW-billedfiler af interesse i et passende deconvolution-program og vælge fanen Proces og Dekonvolv. Udfør manuel justering af baggrundsstøj og lysstyrkekontrast i en eller alle bølgelængdekanaler efter behov, før billedet gemmes som en TIFF-fil.Hvis du vil have kvantificering af cellelængden, skal du åbne de deconvoluterede billedfiler i producentens software eller i gratis billedbehandlingssoftware, f.eks. Vælg derefter Mål afstande, og venstreklik på start- og slutpunkterne på den ønskede billedfil for at måle cellelængden. Vælg Datainspektion for at kvantificere lysstofsignal.Tegn en boks med indstillingen Kolonne/række indstillet til den specifikke dimensions interesse, og vælg det område med det signal, der skal kvantificeres. Tilsætning af xylose at fremkalde en GGS 8 stamme resulterer i en seks-celle fænotype. Mens tomme vektor kontrol ser ud til at ligne kontrolceller dyrket i mangel af inducer.Overproduktion af staph aureus gpsB forstyrrer celledelingen i B.subtilis målt ved tidsforskænde mikroskopi og cellelængde kvantificering. Desuden kan lokaliseringsmønstrene for FtsZ eller et af de proteiner, der er forbundet med dette protein, bruges som journalist til at studere og/eller identificere nye antimikrobielle forbindelser gennem tidsforfaldsdiagnosdannelse og cellelængde kvantificering. Sørg for at bruge en olie med det relevante brydningsindeks, da brydningsindekset kan ændre sig afhængigt af den temperatur, der anvendes til billeddannelse.Deconvolution kan udføres, hvis brugeren ønsker at fjerne støj uden for fokus, og dataanalyse, der involverer lysstofrørsmåling og cellelængde- og breddemålinger, kan også udføres.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

During the last few years scientists became increasingly aware that average data obtained from microbial population based experiments are not ...

Single-cell Analysis of Bacillus subtilis Biofilms Using Fluorescence Microscopy and Flow Cytometry

Single-cell Analysis of Bacillus subtilis Biofilms Using Fluorescence Microscopy and Flow Cytometry

Encellede Analyse af Bacillus subtilis Biofilm Brug fluorescensmikroskopi og Flowcytometri

Biofilm formation is a general attribute to almost all bacteria 1-6. When bacteria form biofilms, cells are encased in extracellular matrix that is mostly ...

Visualization of Bacterial Toxin Induced Responses Using Live Cell Fluorescence Microscopy

Visualisering af bakterielt toksin Inducerede Responses Brug af Live Cell Fluorescence Microscopy

Bacterial toxins bind to cholesterol in membranes, forming pores that allow for leakage of cellular contents and influx of materials from the external ...

Live-cell Video Microscopy of Fungal Pathogen Phagocytosis

Live-cell Video Microscopy af svampepatogen Fagocytose

Phagocytic clearance of fungal pathogens, and microorganisms more generally, may be considered to consist of four distinct stages: (i) migration of ...

Live Cell Imaging of Alphaherpes Virus Anterograde Transport and Spread

Levende Cell Imaging af Alphaherpes Virus Anterograd Transport og Spread

Advances in live cell fluorescence microscopy  techniques, as well as the construction of recombinant viral strains that  express fluorescent fusion ...

Fluorescence Microscopy Methods for Determining the Viability of Bacteria in Association with Mammalian Cells

Fluorescensmikroskopi Metoder til bestemmelse af levedygtighed Bakterier i foreningen med pattedvrceller

Central to the field of bacterial pathogenesis is the ability to define if and how microbes survive after exposure to eukaryotic cells. Current protocols ...

Fluorescence in situ Hybridizations (FISH) for the Localization of Viruses and Endosymbiotic Bacteria in Plant and Insect Tissues

Fluorescence in situ Hybridizations FISH for the Localization of Viruses and Endosymbiotic Bacteria in Plant and Insect Tissues

Fluorescens<em&gt; In situ</em&gt; Hybridiseringer (FISH) til lokalisering af vira og Endosymbiotic Bakterier i plante-og insektliv Væv

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a name given to a variety of techniques commonly used for visualizing gene transcripts in eukaryotic cells ...

Identification of Plasmodesmal Localization Sequences in Proteins In Planta

Identification of Plasmodesmal Localization Sequences in Proteins In Planta

Identifikation af Plasmodesmal lokalisering sekvenser i proteiner i Planta

Plasmodesmata (Pd) are cell-to-cell connections that function as gateways through which small and large molecules are transported between plant cells. ...

In Vitro Canine Neutrophil Extracellular Trap Formation: Dynamic and Quantitative Analysis by Fluorescence Microscopy

In Vitro Canine Neutrophil Extracellular Trap Formation: Dynamic and Quantitative Analysis by Fluorescence Microscopy

In Vitro Canine neutrofile ekstracellulære fælde dannelse: Dynamisk og kvantitativ analyse af Fluorescens mikroskopi

In response to invading pathogens, neutrophils release neutrophil extracellular traps (NETs), which are extracellular networks of DNA decorated with ...

Quantification of Efferocytosis by Single-cell Fluorescence Microscopy

Kvantificering af Efferocytosis af encellede Fluorescens mikroskopi

Studying the regulation of efferocytosis requires methods that are able to accurately quantify the uptake of apoptotic cells and to probe the signaling ...