Name: live-cell fluorescence microscopy to investigate subcellular protein localization and cell morphology changes in bacteria
Uploaded: 2019-11-23T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live-Cell Fluorescence Microscopy to Investigate Subcellular Protein Localization and Cell Morphology Changes in Bacteria at JoVE.com

אנו מודים לחברי המעבדה שלנו על הערותיהם במאמר זה. עבודה זו ממומנת על ידי מענק סטארט-up מאוניברסיטת דרום פלורידה (PE).

1. תנאי גדילה כלליים
<ol><li>האיחסן 2 מ ל של בינוני הצמיחה המתאים יושלם עם אנטיביוטיקה (במידת הצורך) עם מושבה אחת של הזנים (s) להיות בתמונה. לילה ב -22 ° c באינקובטור רועד. הערה: תנאי הגדילה החיידקיים הספציפיים המשמשים במאמר זה מסופקים תחת סעיף התוצאות המייצג.</li>
	<li>לדלל תרבויות לילה 1:20 במדיה טריי?...

<ol>
	<li>Coltharp, C., Xiao, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superresolution+microscopy+for+microbiology.">Superresolution microscopy for microbiology.</a> Cellular Microbiology. 14 (12), 1808-1818 (2012).</li><li>Holden, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probing+the+mechanistic+principles+of+bacterial+cell+division+with+super-resolution+microscopy.">Probing the mechanistic principles of bacterial cell division with super-resolution microscopy.</a> Current Opinion in Microbiology. 43, 84-91 (2018).</li><li>Hsu, Y. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Full+color+palette+of+fluorescent+d-amino+acids+for+in+situ+labeling+of+bacterial+cell+walls.">Full color palette of fluorescent d-amino acids for in situ labeling of bacterial cell walls.</a> Chemical Science. 8 (9), 6313-6321 (2017).</li><li>Nonejuie, P., Burkart, M., Pogliano, K., Pogliano, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+cytological+profiling+rapidly+identifies+the+cellular+pathways+targeted+by+antibacterial+molecules.">Bacterial cytological profiling rapidly identifies the cellular pathways targeted by antibacterial molecules.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA. 110 (40), 16169-16174 (2013).</li><li>Rueden, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ImageJ2:+ImageJ+for+the+next+generation+of+scientific+image+data.">ImageJ2: ImageJ for the next generation of scientific image data.</a> BioMed Central Bioinformatics. 18 (1), 529 (2017).</li><li>Colville, K., Tompkins, N., Rutenberg, A. D., Jericho, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+poly(L-lysine)+substrates+on+attached+Escherichia+coli+bacteria.">Effects of poly(L-lysine) substrates on attached Escherichia coli bacteria.</a> Langmuir. 26 (4), 2639-2644 (2010).</li><li>McNally, J. G., Karpova, T., Cooper, J., Conchello, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+imaging+by+deconvolution+microscopy.">Three-dimensional imaging by deconvolution microscopy.</a> Methods. 19 (3), 373-385 (1999).</li><li>Wallace, W., Schaefer, L. H., Swedlow, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+workingperson's+guide+to+deconvolution+in+light+microscopy.">A workingperson's guide to deconvolution in light microscopy.</a> Biotechniques. 31 (5), 1076-1082 (2001).</li><li>Eswara, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+essential+Staphylococcus+aureus+cell+division+protein+directly+regulates+FtsZ+dynamics.">An essential Staphylococcus aureus cell division protein directly regulates FtsZ dynamics.</a> Elife. 7, (2018).</li><li>Haeusser, D. P., Margolin, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Splitsville:+structural+and+functional+insights+into+the+dynamic+bacterial+Z+ring.">Splitsville: structural and functional insights into the dynamic bacterial Z ring.</a> Nature Reviews Microbiology. 14 (5), 305-319 (2016).</li><li>Du, S., Lutkenhaus, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=At+the+Heart+of+Bacterial+Cytokinesis:+The+Z+Ring.">At the Heart of Bacterial Cytokinesis: The Z Ring.</a> Trends in microbiology. , (2019).</li><li>Haranahalli, K., Tong, S., Ojima, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+the+discovery+and+development+of+antibacterial+agents+targeting+the+cell-division+protein+FtsZ.">Recent advances in the discovery and development of antibacterial agents targeting the cell-division protein FtsZ.</a> Bioorganic and Medicinal Chemistry. 24 (24), 6354-6369 (2016).</li><li>Brzozowski, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deciphering+the+Role+of+a+SLOG+Superfamily+Protein+YpsA+in+Gram-Positive+Bacteria.">Deciphering the Role of a SLOG Superfamily Protein YpsA in Gram-Positive Bacteria.</a> Frontiers in Microbiology. 10, 623 (2019).</li><li>Elsen, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+action+of+the+cell-division+inhibitor+PC190723:+modulation+of+FtsZ+assembly+cooperativity.">Mechanism of action of the cell-division inhibitor PC190723: modulation of FtsZ assembly cooperativity.</a> Journal of the American Chemical Society. 134 (30), 12342-12345 (2012).</li><li>Haydon, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inhibitor+of+FtsZ+with+potent+and+selective+anti-staphylococcal+activity.">An inhibitor of FtsZ with potent and selective anti-staphylococcal activity.</a> Science. 321 (5896), 1673-1675 (2008).</li><li>Pilhofer, M., Ladinsky, M. S., McDowall, A. W., Jensen, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+TEM:+new+insights+from+cryo-microscopy.">Bacterial TEM: new insights from cryo-microscopy.</a> Methods in Cell Biology. 96, 21-45 (2010).</li><li>Ni, Q., Mehta, S., Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+imaging+of+cell+signaling+using+genetically+encoded+fluorescent+reporters.">Live-cell imaging of cell signaling using genetically encoded fluorescent reporters.</a> Federation of European Biochemical Societies Journal. 285 (2), 203-219 (2018).</li><li>Weiss, C. A., Hoberg, J. A., Liu, K., Tu, B. P., Winkler, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-Cell+Microscopy+Reveals+That+Levels+of+Cyclic+di-GMP+Vary+among+Bacillus+subtilis+Subpopulations.">Single-Cell Microscopy Reveals That Levels of Cyclic di-GMP Vary among Bacillus subtilis Subpopulations.</a> Journal of Bacteriology. 201 (16), (2019).</li><li>Schneider, J. P., Basler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shedding+light+on+biology+of+bacterial+cells.">Shedding light on biology of bacterial cells.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences. 371 (1707), (2016).</li><li>Yao, Z., Carballido-Lopez, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+imaging+for+bacterial+cell+biology:+from+localization+to+dynamics,+from+ensembles+to+single+molecules.">Fluorescence imaging for bacterial cell biology: from localization to dynamics, from ensembles to single molecules.</a> Annual review of microbiology. 68, 459-476 (2014).</li><li>Ettinger, A., Wittmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+live+cell+imaging.">Fluorescence live cell imaging.</a> Methods in Cell Biology. 123, 77-94 (2014).</li><li>Fredborg, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+image+analysis+for+quantification+of+filamentous+bacteria.">Automated image analysis for quantification of filamentous bacteria.</a> BioMed Central Microbiology. 15, 255 (2015).</li><li>Ursell, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=precise+quantification+of+bacterial+cellular+dimensions+across+a+genomic-scale+knockout+library.">precise quantification of bacterial cellular dimensions across a genomic-scale knockout library.</a> BioMed Central Biology. 15 (1), 17 (2017).</li></ol>

המיקרוסקופיה הייתה בעלת התווך במחקרים הנוגעים לאורגניזמים מיקרוביאלית. בהתחשב בגודל התאים שלהם בקנה מידה מיקרון, מחקרים ברמת תא יחיד הסתמאו באופן מסורתי על מיקרוסקופ אלקטרונים (EM). למרות EM הפך להיות טכניקה רבת עוצמה בשנים האחרונות, יש לו מגבלות פנימיות משלו בנוסף למשתמש מוגבל גישה<sup class="x...

התחום של ביולוגיה של התא בקטריאלי הופרה באופן משמעותי על ידי הפיתוחים האחרונים של טכניקות מיקרוסקופ1,2. בין השאר, מיקרוסקופים המסוגלים לבצע ניסויים במיקרוסקופיה פלואורסצנטית נותרים הם כלי רב ערך. החוקרים יכולים לפקח על אירועים פיזיולוגיים שונים בזמן אמת באמצעות חלבונים פלורסנט כגון, חלבון פלורסנט ירוק (GFP) מבוסס הכתב fusions העיתונאי, פלורסנט D-אמינו חומצות (FDAA)3, או להשתמש כתמים אחרים עבור תיוג קיר התא, קרום DNA. לכן אין שום הפתעה כי מיקרוסקופ הזריחה נשאר פופולרי בקרב ביולוגים תאים מיקרוביאלית. בנוסף פשוט מציג את הפנוטיפים הסוף, מתן מידע לגבי איך פנוטיפים נצפו להתעורר באמצעות מיקרוסקופ tim, יכול להוסיף ערך משמעותי לממצאים ולהציע רמזים לגבי מה התהליכים הסלולריים מיועדים על ידי מועמדים לסמים פוטנציאליים4.
הפרוטוקולים לביצוע הדמיה ברזולוציה גבוהה באמצעות מיקרוסקופ במלואו, הפוך, הפוכה השדה הרחב (לראות את הטבלה של חומרים) מסופקים במאמר זה. פרוטוקולים אלה יכולים להיות מותאמים כדי להתאים את הצרכים של מיקרוסקופים פלואורסצנטית אחרים אשר מסוגלים לנהל מיקרוסקופ שחלוף. למרות שהתוכנה שנדונה כאן מתאימה לתוכנה הספציפית שסופקה על-ידי היצרן כפי שמצוין בטבלת החומרים, תוכנה המסופקת בדרך כלל על-ידי יצרני מיקרוסקופ אחרים או imagej5הזמינים באופן חופשי, יש כלים שווי-ערך לניתוח נתוני מיקרוסקופ. לתנאים שבהם המשך הזמן אינו תורם, ניתן לערוך ניסויים במהלך הקורס כמתואר במאמר זה. הפרוטוקולים המתוארים כאן מספקים מדריך מפורט כדי ללמוד את השינויים הפנוטיניים בשני זנים חיידקיים שונים: B. subtilis ו -S.. שנינו ראה שולחן 1 עבור זנים המשמשים.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP160-100</td>
			<td>Molecular Biology Grade - Low EEO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D3571</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FM4-64</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>T3166</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottom dish</td>
			<td>MatTek</td>
			<td>P35G-1.5-14-C</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IPTG</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP1755-10</td>
			<td>Dioxane-free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>GE</td>
			<td>DeltaVision Elite</td>
			<td>Customized Olympus IX-71 Inverted Microscope Stand; Custom Illumination Tower and Transmitted Light Illuminator Module. Objectives: PLAPON 60X (N.A. 1.42, WD 0.15 mm); OLY 100X OIL (N.A. 1.4, WD 0.12 mm); DIC Prism Nomarski for 100X Objective; CoolSnap HQ2 camera; SSI Assembly 7-color; Environmental control chamber - opaque.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC190723</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>3445805MG</td>
			<td>FtsZ inhibitor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SoftWorx</td>
			<td>GE</td>
			<td></td>
			<td>Manufacturer-supplied imaging software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-cell fluorescence microscopy to investigate subcellular protein localization and cell morphology changes in bacteria

חקירות של גורמים המשפיעים על חלוקת תאים וצורת תא בחיידקים מבוצעים בדרך כלל בשילוב עם מיקרוסקופ פלואורסצנטית ברזולוציה גבוהה כמו תצפיות שנעשו ברמת האוכלוסייה לא באמת לשקף את מה שמתרחש ברמת תא בודד. המיקרוסקופיה מאפשרת לחוקרים לפקח על השינויים במחלקת התאים או במבנה התא המספקים תובנות יקרות לגבי לוקליזציה תת-תאית של חלבונים ותזמון של ביטוי גנטי, כפי שקורה, כדי לסייע במענה לשאלות ביולוגיות חשובות. כאן, אנו מתארים את הפרוטוקול שלנו כדי לפקח על שינויים פנוטיאריים בתוך מקרתגו subtilis ו סטיילוקוקוס האורלנו באמצעות מיקרוסקופ לפירוק ברזולוציה גבוהה. מטרת דו ח זה היא לספק פרוטוקול פשוט וברור שניתן לאמץ על ידי חוקרים אחרים המעוניינים לבצע ניסויים מיקרוסקופ פלואורסצנטית ללמוד תהליכים ביולוגיים שונים בחיידקים, כמו גם אורגניזמים אחרים.

הפנוטיפים של GpsB בעבר הצגנו כי Sa-GpsB הוא חלבון חיוני כמו דלדול של GpsB באמצעות ה-RNA אנטי תחושה התוצאות לפירוק התא9. כאן אנו מתארים כיצד הופעתה של הפנוטיפים לחלוקת תאים שונים ושינויים בלוקליזציה של חלבונים ניתן ללכוד באמצעות פרוטוקול מיקרוסקופ השעון המתואר במאמר זה. למטר...

Watch this Scientific Journal Video about Live-Cell Fluorescence Microscopy to Investigate Subcellular Protein Localization and Cell Morphology Changes in Bacteria at JoVE.com

Live-Cell Fluorescence Microscopy to Investigate Subcellular Protein Localization and Cell Morphology Changes in Bacteria

מאמר זה מספק מדריך צעד אחר צעד כדי לחקור את הדינמיקה לוקליזציה של חלבון subcellular ולנטר שינויים מורפולוגיים באמצעות מיקרוסקופ קרינה פלואורסצנטית ברזולוציה גבוהה ב subtilis מקרתגו ו סטיילוולוקוקוס.

מיקרוסקופ הקרינה הפלואורסצנטית החיה כדי לחקור את הלוקליזציה של חלבון Subcellular ושינויי מורפולוגיה של תאים בחיידקים

Investigations of factors influencing cell division and cell shape in bacteria are commonly performed in conjunction with high-resolution fluorescence ...

פרוטוקול זה מאפשר התבוננות ישירה בשינויים פנוטיפיים שונים ברמה של תא יחיד ומאפשר ניטור מתמשך של לוקליזציה של חלבונים ותזמון ביטוי גנים. היתרון העיקרי של מיקרוסקופיה פלואורסצנטית הוא שזו שיטה פשוטה לניטור תהליכים ביולוגיים שונים, כגון חלוקת תאים ושינויים במורפולוגיה של תאים בתאים חיים. הקפד להקדיש תשומת לב מיוחדת לפרוטוקול ההכנה לדוגמה ולחקור את תוכנת המיקרוסקופ כדי שתוכל לאתר את ההגדרות והאפשרויות המפורטות בפרוטוקול זה.ייצוג חזותי של פרוטוקול זה הוא קריטי מכיוון שהוא מאפשר למשתמשים לצפות וללמוד את השלבים המשמעותיים של הטכניקה בזמן שהם מגדירים ניסויים משלהם. התחל על ידי תיוג aliquot 5-50 מיקרוליטר של תרבות התא של עניין עם צבע ויטראז קרום מתאים והוספת חמישה microliters של תאי חיידקים ויטראז'ים על להחליק כיסוי על החלק התחתון של צלחת תרבות תחתונה זכוכית 35 מיליליטר. מניחים לוח אגרוז בקוטר 11 מ"מ מעל המדגם ומקש בעדינות כדי לוודא שהלוח שטוח כנגד החלקת המכסה.לאחר מכן מוסיפים כחמישה מיקרוליטרים של מים סביב החלקת הכיסוי כדי למנוע את ייבוש כרית אגרוז ולאפשר צלחת התרבות כדי לצייד את הטמפרטורה בתוך תא הדגירה של מיקרוסקופ deconvolution ברזולוציה גבוהה במשך 15 עד 20 דקות. כדי לדמיין את הדגימה, השתמשו בכופת המיקוד של ההתאמה גסה כדי לוודא שהמטרה יורדת במלואה לפני אתחול המיקרוסקופ בתוכנת המיקרוסקופ. מניחים ירידה של 1.517 שמן מדד שבירה לתוך המטרה טבילת שמן 100x, ולהעביר את המנה התחתונה זכוכית המכילה את המדגם לתוך ארון המתכת דיור.מחליקים בעדינות את המנה לתוך מהדק הבמה, ולהשתמש ידית התאמה גסה כדי להעלות את המטרה עד השמן יוצר קשר עם תחתית הזכוכית של המנה. השתמשו בעין ובמושת ההתאמה העדינה כדי להתמקד בדגימה, ולעבור למצב מצלמה. בתוכנת הדימות בחלון 'פתור תלת-ממדי', בחר בסמל 'ניסוי עיצוב/הפעלה'.תיבת דו-שיח חדשה תופיע בשם ניסוי עיצוב/הפעלה. פתח את הכרטיסיות עיצוב ומקטעים בתיבת הדו-שיח כדי להגדיר את מספר ערימות Z ואת עובי הדגימה. כדי למדוד את עובי התאים בדגימה, התאם בהדרגה את מישור ה- Z באמצעות החצים למעלה ולמטה בתיבת הדו-שיח פתרון תלת-מימד, והפוך את המקום שבו התאים יוצאים מחוץ לפוקוס כמגבלות העליונות והתחתונות עבור רכישת תמונה.לאחר התאמת תיבת הדו-שיח 'אחוזי שידור' בעוצמת האור ומשך החשיפה לערוצים הבודדים שנבחרו בתיבת הדו-שיח 'פתור תלת-שיח תלת-מימד', לחצו על 'רשימת נקודות' לפתיחת רשימת הנקודות. בכרטיסיות עיצוב ושגות זמן, בחר בתיבת הסימון זמן לשגות והזן את הפרמטרים לשגות זמן. בחרו באפשרות הרשימה 'נקודת ביקור' והזינו את הנקודות להדמיה בתיבת המלל, המפרידות בין הנקודות באמצעות פסיקים או מקפים לרצפים שלמים.לאחר מכן ערכו שמות קבצים ומיקומי קבצים בכרטיסיה 'הפעלה' ובחרו 'הפעל' בתיבת הדו-שיח 'התחל ניסוי' כדי להתחיל בניסוי. בסוף הניתוח, פתח את קבצי התמונה RAW המעניינים בתוכנית פירוק מתאימה ובחר בכרטיסיה תהליך וב- Deconvolve. בצעו כל חיסור ידני של רעשי רקע והתאמת ניגודיות בהירות בכל אחד מהערוצים באורך הגל או באורך הגל לפי הצורך לפני שמירת התמונה כקובץ TIFF.לכימות אורך תא, פתח את קבצי התמונה המפותלים בתוכנה שסופקה על-ידי היצרן או בתוכנת דימות חופשית, כגון ImageJ, ופתח את הכרטיסיה כלי. לאחר מכן בחרו 'מדידת מרחקים' ולחצו שמאלה על נקודות ההתחלה והסיום בקובץ התמונה הרצוי למדידת אורך התא. לכמות אותות פלואורסצנטיים, בחר מפקח נתונים.צייר תיבה כאשר האפשרות עמודה/שורה מוגדרת לממד העניין הספציפי ובחר את האזור עם האות לכמת. התוספת של קסילוז כדי לגרום GGS 8 זן תוצאות פנוטיפ שישה תאים. בעוד שפקדים וקטוריים ריקים נראים דומים לתאי בקרה הגדלים בהיעדר מעורר.ייצור יתר של staph aureus GPSB משבש את חלוקת התאים ב- B.subtilis כפי שנמדד על ידי מיקרוסקופיה לשגות זמן וכמות אורך התא. בנוסף, דפוסי לוקליזציה של FtsZ או אחד החלבונים הקשורים חלבון זה ניתן להשתמש כתב ללמוד ו / או לזהות תרכובות מיקרוביאלית הרומן דרך זמן לשגות הדמיה וכימות אורך התא. הקפד להשתמש בשמן עם אינדקס השחזור המתאים גם כאשר מדד השחזור עשוי להשתנות בהתאם לטמפרטורה המשמשת להדמיה.Deconvolution יכול להתבצע אם המשתמש רוצה להסיר רעש מחוץ לפוקוס, וניתוח נתונים מעורבים כימות אותות פלואורסצנטי ומדידות אורך ורוחב התא יכול להתבצע גם.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

תא הדמיה חיה של Bacillus subtilis ו Streptococcus pneumoniae באמצעות מיקרוסקופית אוטומטי זמן לשגות

During the last few years scientists became increasingly aware that average data obtained from microbial population based experiments are not ...

Single-cell Analysis of Bacillus subtilis Biofilms Using Fluorescence Microscopy and Flow Cytometry

Single-cell Analysis of Bacillus subtilis Biofilms Using Fluorescence Microscopy and Flow Cytometry

מתא בודד ניתוח בצילוס subtilis Biofilms באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי ו cytometry זרימה

Biofilm formation is a general attribute to almost all bacteria 1-6. When bacteria form biofilms, cells are encased in extracellular matrix that is mostly ...

Visualization of Bacterial Toxin Induced Responses Using Live Cell Fluorescence Microscopy

ויזואליזציה של תגובות מושרות רעלן של חיידקים באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי תא החי

Bacterial toxins bind to cholesterol in membranes, forming pores that allow for leakage of cellular contents and influx of materials from the external ...

Live-cell Video Microscopy of Fungal Pathogen Phagocytosis

מיקרוסקופיה וידאו חי מתא phagocytosis הפתוגן פטרייתיים

Phagocytic clearance of fungal pathogens, and microorganisms more generally, may be considered to consist of four distinct stages: (i) migration of ...

Live Cell Imaging of Alphaherpes Virus Anterograde Transport and Spread

הדמיה של תא חי התחבורה אנטרוגרדית וירוס Alphaherpes ומורחים

Advances in live cell fluorescence microscopy  techniques, as well as the construction of recombinant viral strains that  express fluorescent fusion ...

Fluorescence Microscopy Methods for Determining the Viability of Bacteria in Association with Mammalian Cells

שיטות מיקרוסקופית הקרינה לקביעת הכדאיות של חיידקים באיגוד עם תאי יונקים

Central to the field of bacterial pathogenesis is the ability to define if and how microbes survive after exposure to eukaryotic cells. Current protocols ...

Fluorescence in situ Hybridizations (FISH) for the Localization of Viruses and Endosymbiotic Bacteria in Plant and Insect Tissues

Fluorescence in situ Hybridizations FISH for the Localization of Viruses and Endosymbiotic Bacteria in Plant and Insect Tissues

פלואורסצנציה<em&gt; באתר</em&gt; הכלאות (דגים) ללוקליזציה של וירוסים וחיידקים Endosymbiotic בצמח ורקמות חרקים

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a name given to a variety of techniques commonly used for visualizing gene transcripts in eukaryotic cells ...

Identification of Plasmodesmal Localization Sequences in Proteins In Planta

Identification of Plasmodesmal Localization Sequences in Proteins In Planta

זיהוי של לוקליזציה Plasmodesmal רצפי חלבונים ב הפיסקו

Plasmodesmata (Pd) are cell-to-cell connections that function as gateways through which small and large molecules are transported between plant cells. ...

In Vitro Canine Neutrophil Extracellular Trap Formation: Dynamic and Quantitative Analysis by Fluorescence Microscopy

In Vitro Canine Neutrophil Extracellular Trap Formation: Dynamic and Quantitative Analysis by Fluorescence Microscopy

במבחנה מבנה הכלבי נויטרופילים מלכודת חוץ-תאית: דינמי וניתוח כמותי על-ידי קרינה פלואורסצנטית מיקרוסקופ

In response to invading pathogens, neutrophils release neutrophil extracellular traps (NETs), which are extracellular networks of DNA decorated with ...

Quantification of Efferocytosis by Single-cell Fluorescence Microscopy

כימות של Efferocytosis על-ידי קרינה פלואורסצנטית תא בודד מיקרוסקופ

Studying the regulation of efferocytosis requires methods that are able to accurately quantify the uptake of apoptotic cells and to probe the signaling ...