Name: live-cell fluorescence microscopy to investigate subcellular protein localization and cell morphology changes in bacteria
Uploaded: 2019-11-23T14:00:00
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이 문서에 대한 의견에 대해 실험실 구성원에게 감사드립니다. 이 작품은 사우스 플로리다 대학에서 창업 보조금에 의해 투자되었다 (PE).

1. 일반적인 성장 조건
<ol><li>항생제로 보충된 적절한 성장 배지의 2 mL을 접종(필요한 경우) 스트레인의 단일 콜로니와 함께 이미지화한다. 이러한 종자 배양물을 22°C에서 밤새 교양하여 인큐베이터에 배양하였다. 참고: 이 문서에서 사용되는 특정 박테리아 성장 조건은 대표 결과 섹션에 제공됩니다.</li>
	<li>125 mL 플라스크에서 신선한 매체에 하룻밤 배양액을 희석하고 항생제 (필요한 경우)로...

<ol>
	<li>Coltharp, C., Xiao, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superresolution+microscopy+for+microbiology.">Superresolution microscopy for microbiology.</a> Cellular Microbiology. 14 (12), 1808-1818 (2012).</li><li>Holden, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probing+the+mechanistic+principles+of+bacterial+cell+division+with+super-resolution+microscopy.">Probing the mechanistic principles of bacterial cell division with super-resolution microscopy.</a> Current Opinion in Microbiology. 43, 84-91 (2018).</li><li>Hsu, Y. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Full+color+palette+of+fluorescent+d-amino+acids+for+in+situ+labeling+of+bacterial+cell+walls.">Full color palette of fluorescent d-amino acids for in situ labeling of bacterial cell walls.</a> Chemical Science. 8 (9), 6313-6321 (2017).</li><li>Nonejuie, P., Burkart, M., Pogliano, K., Pogliano, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+cytological+profiling+rapidly+identifies+the+cellular+pathways+targeted+by+antibacterial+molecules.">Bacterial cytological profiling rapidly identifies the cellular pathways targeted by antibacterial molecules.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA. 110 (40), 16169-16174 (2013).</li><li>Rueden, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ImageJ2:+ImageJ+for+the+next+generation+of+scientific+image+data.">ImageJ2: ImageJ for the next generation of scientific image data.</a> BioMed Central Bioinformatics. 18 (1), 529 (2017).</li><li>Colville, K., Tompkins, N., Rutenberg, A. D., Jericho, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+poly(L-lysine)+substrates+on+attached+Escherichia+coli+bacteria.">Effects of poly(L-lysine) substrates on attached Escherichia coli bacteria.</a> Langmuir. 26 (4), 2639-2644 (2010).</li><li>McNally, J. G., Karpova, T., Cooper, J., Conchello, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+imaging+by+deconvolution+microscopy.">Three-dimensional imaging by deconvolution microscopy.</a> Methods. 19 (3), 373-385 (1999).</li><li>Wallace, W., Schaefer, L. H., Swedlow, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+workingperson's+guide+to+deconvolution+in+light+microscopy.">A workingperson's guide to deconvolution in light microscopy.</a> Biotechniques. 31 (5), 1076-1082 (2001).</li><li>Eswara, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+essential+Staphylococcus+aureus+cell+division+protein+directly+regulates+FtsZ+dynamics.">An essential Staphylococcus aureus cell division protein directly regulates FtsZ dynamics.</a> Elife. 7, (2018).</li><li>Haeusser, D. P., Margolin, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Splitsville:+structural+and+functional+insights+into+the+dynamic+bacterial+Z+ring.">Splitsville: structural and functional insights into the dynamic bacterial Z ring.</a> Nature Reviews Microbiology. 14 (5), 305-319 (2016).</li><li>Du, S., Lutkenhaus, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=At+the+Heart+of+Bacterial+Cytokinesis:+The+Z+Ring.">At the Heart of Bacterial Cytokinesis: The Z Ring.</a> Trends in microbiology. , (2019).</li><li>Haranahalli, K., Tong, S., Ojima, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+the+discovery+and+development+of+antibacterial+agents+targeting+the+cell-division+protein+FtsZ.">Recent advances in the discovery and development of antibacterial agents targeting the cell-division protein FtsZ.</a> Bioorganic and Medicinal Chemistry. 24 (24), 6354-6369 (2016).</li><li>Brzozowski, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deciphering+the+Role+of+a+SLOG+Superfamily+Protein+YpsA+in+Gram-Positive+Bacteria.">Deciphering the Role of a SLOG Superfamily Protein YpsA in Gram-Positive Bacteria.</a> Frontiers in Microbiology. 10, 623 (2019).</li><li>Elsen, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+action+of+the+cell-division+inhibitor+PC190723:+modulation+of+FtsZ+assembly+cooperativity.">Mechanism of action of the cell-division inhibitor PC190723: modulation of FtsZ assembly cooperativity.</a> Journal of the American Chemical Society. 134 (30), 12342-12345 (2012).</li><li>Haydon, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inhibitor+of+FtsZ+with+potent+and+selective+anti-staphylococcal+activity.">An inhibitor of FtsZ with potent and selective anti-staphylococcal activity.</a> Science. 321 (5896), 1673-1675 (2008).</li><li>Pilhofer, M., Ladinsky, M. S., McDowall, A. W., Jensen, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+TEM:+new+insights+from+cryo-microscopy.">Bacterial TEM: new insights from cryo-microscopy.</a> Methods in Cell Biology. 96, 21-45 (2010).</li><li>Ni, Q., Mehta, S., Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+imaging+of+cell+signaling+using+genetically+encoded+fluorescent+reporters.">Live-cell imaging of cell signaling using genetically encoded fluorescent reporters.</a> Federation of European Biochemical Societies Journal. 285 (2), 203-219 (2018).</li><li>Weiss, C. A., Hoberg, J. A., Liu, K., Tu, B. P., Winkler, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-Cell+Microscopy+Reveals+That+Levels+of+Cyclic+di-GMP+Vary+among+Bacillus+subtilis+Subpopulations.">Single-Cell Microscopy Reveals That Levels of Cyclic di-GMP Vary among Bacillus subtilis Subpopulations.</a> Journal of Bacteriology. 201 (16), (2019).</li><li>Schneider, J. P., Basler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shedding+light+on+biology+of+bacterial+cells.">Shedding light on biology of bacterial cells.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences. 371 (1707), (2016).</li><li>Yao, Z., Carballido-Lopez, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+imaging+for+bacterial+cell+biology:+from+localization+to+dynamics,+from+ensembles+to+single+molecules.">Fluorescence imaging for bacterial cell biology: from localization to dynamics, from ensembles to single molecules.</a> Annual review of microbiology. 68, 459-476 (2014).</li><li>Ettinger, A., Wittmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+live+cell+imaging.">Fluorescence live cell imaging.</a> Methods in Cell Biology. 123, 77-94 (2014).</li><li>Fredborg, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+image+analysis+for+quantification+of+filamentous+bacteria.">Automated image analysis for quantification of filamentous bacteria.</a> BioMed Central Microbiology. 15, 255 (2015).</li><li>Ursell, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=precise+quantification+of+bacterial+cellular+dimensions+across+a+genomic-scale+knockout+library.">precise quantification of bacterial cellular dimensions across a genomic-scale knockout library.</a> BioMed Central Biology. 15 (1), 17 (2017).</li></ol>

현미경 검사법은 미생물 유기체에 관련된 연구 결과에 있는 주류를 남아 있습니다. 그들의 미크론 규모 세포 크기를 감안할 때, 단세포 수준 연구 결과는 전통적으로 전자 현미경 검사법 (EM)에 의존했습니다. EM은 최근 몇 년 동안 매우 강력한 기술이되었지만 제한된 사용자 액세스16외에도 고유의 고유한 제한 사항이 있습니다. 형광 현미경 기술의 개선과 FDAA3와</sup...

세균성 세포 생물학의 필드는 현미경 기술1,2에있는 최근 발전에 의해 현저하게 향상되었습니다. 다른 기기 들 중에서도 타임랩스 형광 현미경 실험을 수행할 수 있는 현미경은 여전히 귀중한 도구입니다. 연구원은 녹색 형광 단백질 (GFP) 기반 전사 및 번역 기자 융합, 형광 D 아미노산 (FDAA)3,또는 세포벽, 막 및 DNA를 라벨링하기 위한 다른 얼룩을 사용하여 다양한 생리적 사건을 실시간으로 모니터링할 수 있습니다. 형광 현미경 검사법은 미생물 세포 생물학자 중 인기를 유지하는 것은 놀라운 일이 아닙니다. 단순히 말기 표현형을 보여주는 것 이외에, 타임랩스 현미경을 사용하여 관찰된 표현형이 어떻게 발생하는지에 대한 정보를 제공하는 것은 연구 결과에 상당한 가치를 더할 수 있으며 잠재적으로 어떤 세포 과정이 잠재적 약물 후보에 의해 표적으로 되고 있는지에 대한 단서를 제공할 수 있다4.
완전 전동, 반전, 광시야 형광 현미경을 사용하여 고해상도 이미징을 수행하는 프로토콜(재료 표참조)이 이 문서에서 제공됩니다. 이 프로토콜은 타임랩스 현미경을 수행할 수 있는 그밖 형광 현미경의 필요에 맞게 적응될 수 있었습니다. 여기에 설명된 소프트웨어는 재료 표에표시된 특정 제조업체 제공 소프트웨어에 해당하지만 일반적으로 다른 현미경 제조업체 또는 자유롭게 사용할 수 있는 ImageJ5에서제공하는 소프트웨어에는 현미경 데이터를 분석하는 동등한 도구가 있습니다. 타임랩스가 도움이 되지 않는 조건의 경우 이 문서에서 설명한 대로 시간 코스 실험을 수행할 수 있습니다. 여기에서 기술된 프로토콜은 2개의 다른 세균성 종에 있는 표현형 변경을 공부하기 위하여 상세한 가이드를 제공합니다: B. subtilis 및 S. 아우레우스. 사용되는 균주에 대한 표 1을 참조하십시오.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP160-100</td>
			<td>Molecular Biology Grade - Low EEO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D3571</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FM4-64</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>T3166</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottom dish</td>
			<td>MatTek</td>
			<td>P35G-1.5-14-C</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IPTG</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP1755-10</td>
			<td>Dioxane-free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>GE</td>
			<td>DeltaVision Elite</td>
			<td>Customized Olympus IX-71 Inverted Microscope Stand; Custom Illumination Tower and Transmitted Light Illuminator Module. Objectives: PLAPON 60X (N.A. 1.42, WD 0.15 mm); OLY 100X OIL (N.A. 1.4, WD 0.12 mm); DIC Prism Nomarski for 100X Objective; CoolSnap HQ2 camera; SSI Assembly 7-color; Environmental control chamber - opaque.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC190723</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>3445805MG</td>
			<td>FtsZ inhibitor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SoftWorx</td>
			<td>GE</td>
			<td></td>
			<td>Manufacturer-supplied imaging software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-cell fluorescence microscopy to investigate subcellular protein localization and cell morphology changes in bacteria

박테리아에 있는 세포 분열 그리고 세포 모양에 영향을 미치는 요인의 조사는 인구 수준에서 행해진 관측이 진정으로 단 하나 세포 수준에서 일어나는 무슨을 반영하지 않을 수 있기 때문에 고해상도 형광 현미경 검사법과 함께 일반적으로 수행됩니다. 살아있는 세포 시간 경과 현미경 검사법은 잠재적으로 중요한 생물학 질문에 대답하는 것을 돕기 위하여, 일어나는 단백질의 세포 외 현지화 및 유전자 발현의 타이밍에 관하여 귀중한 통찰력을 제공하는 세포 분열 또는 세포 형태학에 있는 변경을 감시하는 것을 허용합니다. 여기에서, 우리는 고해상도 데콘볼루션 현미경을 사용하여 바실러스 subtilis 및 황색포도상구균에 있는 표현형 변경을 감시하기 위하여 우리의 프로토콜을 기술합니다. 이 보고서의 목적은 박테리아뿐만 아니라 다른 유기체에서 다른 생물학적 과정을 연구하기 위해 형광 현미경 실험을 수행에 관심이다른 조사자에 의해 채택 될 수있는 간단하고 명확한 프로토콜을 제공하는 것입니다.

GpsB 표현형 이전에 우리는 Sa-GpsB가 세포 용해9에서안티 센스 RNA 결과를 사용하여 GpsB의 고갈로 필수적인 단백질임을 보여주었습니다. 여기에서 우리는 이 문서에서 기술한 타임랩스 현미경 프로토콜을 사용하여 단백질 국소화에 있는 각종 세포 분열 표현형 그리고 변경의 출현이 어떻게 붙잡을 수 있었다는 것을 기술합니다. 이를 위해, S. 아우레우스 균주 R...

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Live-Cell Fluorescence Microscopy to Investigate Subcellular Protein Localization and Cell Morphology Changes in Bacteria

이 문서는 단백질 세포 외 지역화 역학을 조사하고 바실러스 subtilis 및 황색 포도상 구균에 있는 고분해능 형광 현미경 검사법을 사용하여 형태학적 인 변화를 감시하기 위하여 단계별 가이드를 제공합니다.

박테리아의 세포 외 단백질 국소화 및 세포 형태 변화를 조사하는 살아있는 세포 형광 현미경 검사법

Investigations of factors influencing cell division and cell shape in bacteria are commonly performed in conjunction with high-resolution fluorescence ...

이 프로토콜은 단일 세포 수준에서 다양한 표현성 변화의 직접적인 관찰을 용이하게하고 단백질 국소화 및 유전자 발현 타이밍의 지속적인 모니터링을 허용한다. 형광 현미경 검사법의 주요 장점은 살아있는 세포에 있는 세포 분열 및 세포 형태 변경과 같은 각종 생물학 프로세스를 감시하기 위한 간단한 방법이다. 샘플 준비 프로토콜에 특히 주의를 기울이고 이 프로토콜에 나열된 설정 및 옵션을 찾을 수 있는 현미경 소프트웨어를 살펴보십시오.이 프로토콜의 시각적 표현은 사용자가 자체 실험을 설정할 때 기술의 중요한 단계를 보고 배울 수 있기 때문에 중요합니다. 먼저 관심 있는 세포 배양의 5~50마이크로리터 알리쿼트를 적절한 멤브레인 염색염으로 라벨을 붙이고 스테인드 세균 세포의 5마이크로리터를 35밀리리터 유리 바닥 배양 접시의 바닥에 있는 커버 슬립에 첨가하여 시작합니다. 11mm 직경의 아가로즈 슬래브를 샘플 위에 놓고 부드럽게 탭하여 슬래브가 커버 슬립에 평평하도록 합니다.그런 다음 커버 슬립 주위에 약 5개의 마이크로리터를 추가하여 아가로즈 패드가 건조되는 것을 방지하고 배양 접시가 15~20분 동안 고해상도 감착 현미경의 인큐베이션 챔버 내부의 온도에 평형화되도록 합니다. 샘플을 이미지화하려면 거친 조정 포커스 노브를 사용하여 현미경 소프트웨어 내에서 현미경을 초기화하기 전에 목표가 완전히 낮아졌는지 확인합니다. 1.517 굴절성 지수 오일을 100배 오일 침수 목표에 넣고 샘플을 포함하는 유리 바닥 접시를 금속 하우징 관으로 옮킨다.접시를 스테이지 클램프에 부드럽게 밀어 넣고 거친 조정 노브를 사용하여 기름이 접시의 유리 바닥과 접촉할 때까지 목표를 높입니다. 접안렌즈와 미세 조정 노브를 사용하여 샘플을 초점으로 만들고 카메라 모드로 전환합니다. 3D 해결 창의 이미징 소프트웨어에서 실험 설계/실행 아이콘을 선택합니다.디자인/실행 실험이라는 제목의 새 대화 상자가 나타납니다. 대화 상자에서 디자인 및 단면 탭을 열어 Z 스택 수와 샘플 두께를 설정합니다. 샘플내의 셀 두께를 측정하려면 3D 대화 상자의 위쪽 및 아래쪽 화살표를 사용하여 Z 평면을 점진적으로 조정하여 셀이 이미지 수집의 상하한으로 초점이 바 나는 위치를 만듭니다.라이트 강도의 백분율 전송과 3D 대화 상자에서 선택한 개별 채널에 대한 노출 지속 시간을 조정한 후 점 목록을 클릭하여 포인트 목록을 엽니다. 디자인 및 시간 경과 탭에서 시간 경과 확인란을 선택하고 시간 경과 매개 변수를 입력합니다. 방문 점 목록 옵션을 선택하고 텍스트 상자에 이미지할 점을 입력하여 전체 시퀀스를 위해 쉼표 또는 하이픈으로 점을 분리합니다.그런 다음 실행 탭에서 파일 이름과 파일 위치를 편집하고 실험 시작 대화 상자에서 재생을 선택하여 실험을 시작합니다. 분석이 끝나면 적절한 deconvolution 프로그램에 관심있는 RAW 이미지 파일을 열고 프로세스 탭 및 Deconvolve를 선택합니다. TIFF 파일로 이미지를 저장하기 전에 필요에 따라 필요에 따라 모든 파장 채널에서 수동 배경 노이즈 뺄셈 및 밝기 콘트라스트 조정을 수행합니다.셀 길이 정량화의 경우 제조업체에서 제공된 소프트웨어 또는 ImageJ와 같은 무료 이미징 소프트웨어에서 deconvoluted 이미지 파일을 열고 도구 탭을 엽니다. 그런 다음 거리 측정값을 선택하고 원하는 이미지 파일의 시작 점과 끝점을 왼쪽 단추로 클릭하여 셀 길이를 측정합니다. 형광 신호 정량화의 경우 데이터 관리자를 선택합니다.특정 관심 크기로 설정된 열/행 옵션이 있는 상자를 그리고 정량화할 신호가 있는 영역을 선택합니다. GGS 8 스트레인을 유도하는 xylose를 첨가하면 6세포 표현형이 발생한다. 빈 벡터 컨트롤은 유도자가 없는 상태에서 성장한 제어 셀과 유사하게 나타납니다.포도상 구균 gpsB의 과잉 생산은 시간 경과 현미경 검사법과 세포 길이 정량화에 의해 측정된 바와 같이 B.subtilis에 있는 세포 분열을 방해합니다. 또한, FtsZ 또는 이 단백질과 관련된 단백질 중 하나의 국소화 패턴은 시간 경과 이미징 및 세포 길이 정량화를 통해 새로운 항균 화합물을 연구 및/또는 식별하는 기자를 사용할 수 있다. 굴절률은 이미징에 사용되는 온도에 따라 변경될 수 있기 때문에 적절한 굴절률을 가진 오일을 사용해야 합니다.사용자가 초점 외 노이즈를 제거하려는 경우 절충볼루션을 수행할 수 있으며 형광 신호 정량화 및 셀 길이 및 폭 측정과 관련된 데이터 분석도 수행될 수 있다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

라이브 셀 이미징 바실러스 subtilis과 연쇄상 구균 pneumoniae 자동 시간 저속 현미경을 사용하여

During the last few years scientists became increasingly aware that average data obtained from microbial population based experiments are not ...

연구

면역학 및 감염병학

Single-cell Analysis of Bacillus subtilis Biofilms Using Fluorescence Microscopy and Flow Cytometry

Single-cell Analysis of Bacillus subtilis Biofilms Using Fluorescence Microscopy and Flow Cytometry

의 단일 세포 분석 바실러스 subtilis</em형광 현미경 및 유동세포계측법 사용> Biofilms

Biofilm formation is a general attribute to almost all bacteria 1-6. When bacteria form biofilms, cells are encased in extracellular matrix that is mostly ...

Visualization of Bacterial Toxin Induced Responses Using Live Cell Fluorescence Microscopy

라이브 세포 형광 현미경을 사용하여 박테리아 독소 유도 응답의 시각화

Bacterial toxins bind to cholesterol in membranes, forming pores that allow for leakage of cellular contents and influx of materials from the external ...

Live-cell Video Microscopy of Fungal Pathogen Phagocytosis

곰팡이 병원체 Phagocytosis의 라이브 셀 비디오 현미경

Phagocytic clearance of fungal pathogens, and microorganisms more generally, may be considered to consist of four distinct stages: (i) migration of ...

Live Cell Imaging of Alphaherpes Virus Anterograde Transport and Spread

Alphaherpes 바이러스 선행 성 전송 및 확산의 라이브 셀 이미징

Advances in live cell fluorescence microscopy  techniques, as well as the construction of recombinant viral strains that  express fluorescent fusion ...

Fluorescence Microscopy Methods for Determining the Viability of Bacteria in Association with Mammalian Cells

포유 동물 세포와 관련있는 박테리아의 생존을 확인하는 방법에 대한 형광 현미경 방법

Central to the field of bacterial pathogenesis is the ability to define if and how microbes survive after exposure to eukaryotic cells. Current protocols ...

Fluorescence in situ Hybridizations (FISH) for the Localization of Viruses and Endosymbiotic Bacteria in Plant and Insect Tissues

Fluorescence in situ Hybridizations FISH for the Localization of Viruses and Endosymbiotic Bacteria in Plant and Insect Tissues

형광<em&gt; 현장에서</em바이러스 및 식물과 곤충 조직에서 Endosymbiotic 박테리아의 지역화를위한&gt; 혼성화 (FISH)

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a name given to a variety of techniques commonly used for visualizing gene transcripts in eukaryotic cells ...

Identification of Plasmodesmal Localization Sequences in Proteins In Planta

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Plasmodesmal 지역화 시퀀스 Planta에 단백질의 식별

Plasmodesmata (Pd) are cell-to-cell connections that function as gateways through which small and large molecules are transported between plant cells. ...

In Vitro Canine Neutrophil Extracellular Trap Formation: Dynamic and Quantitative Analysis by Fluorescence Microscopy

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생체 외에서 형광 현미경 검사 법에 의해 개 호 중구 Extracellular 함정 형성: 역동적이 고 양적 분석

In response to invading pathogens, neutrophils release neutrophil extracellular traps (NETs), which are extracellular networks of DNA decorated with ...

Quantification of Efferocytosis by Single-cell Fluorescence Microscopy

단일 세포 형광 현미경 검사 법에 의해 Efferocytosis의 정량화

Studying the regulation of efferocytosis requires methods that are able to accurately quantify the uptake of apoptotic cells and to probe the signaling ...