Name: live-cell fluorescence microscopy to investigate subcellular protein localization and cell morphology changes in bacteria
Uploaded: 2019-11-23T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live-Cell Fluorescence Microscopy to Investigate Subcellular Protein Localization and Cell Morphology Changes in Bacteria at JoVE.com

Vi tackar våra labb medlemmar för deras kommentarer om den här artikeln. Detta arbete finansierades genom ett startbidrag från University of South Florida (PE).

1. allmänna tillväxtvillkor
<ol><li>Inokulera 2 mL lämpligt odlingssubstrat kompletterat med antibiotika (om så krävs) med en enda koloni av den eller de stam (er) som skall avbildas. Inkubera dessa frö kulturer över natten vid 22 ° c i en skakande inkubator. Anmärkning: de specifika bakterietillväxt villkor som används i denna artikel tillhandahålls under representativa resultat avsnitt.</li>
	<li>Späd över natten kulturer 1:20 i färska medier i en 125 mL kolv, komplettera med antibiotika (om det beh...

<ol>
	<li>Coltharp, C., Xiao, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superresolution+microscopy+for+microbiology.">Superresolution microscopy for microbiology.</a> Cellular Microbiology. 14 (12), 1808-1818 (2012).</li><li>Holden, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probing+the+mechanistic+principles+of+bacterial+cell+division+with+super-resolution+microscopy.">Probing the mechanistic principles of bacterial cell division with super-resolution microscopy.</a> Current Opinion in Microbiology. 43, 84-91 (2018).</li><li>Hsu, Y. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Full+color+palette+of+fluorescent+d-amino+acids+for+in+situ+labeling+of+bacterial+cell+walls.">Full color palette of fluorescent d-amino acids for in situ labeling of bacterial cell walls.</a> Chemical Science. 8 (9), 6313-6321 (2017).</li><li>Nonejuie, P., Burkart, M., Pogliano, K., Pogliano, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+cytological+profiling+rapidly+identifies+the+cellular+pathways+targeted+by+antibacterial+molecules.">Bacterial cytological profiling rapidly identifies the cellular pathways targeted by antibacterial molecules.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA. 110 (40), 16169-16174 (2013).</li><li>Rueden, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ImageJ2:+ImageJ+for+the+next+generation+of+scientific+image+data.">ImageJ2: ImageJ for the next generation of scientific image data.</a> BioMed Central Bioinformatics. 18 (1), 529 (2017).</li><li>Colville, K., Tompkins, N., Rutenberg, A. D., Jericho, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+poly(L-lysine)+substrates+on+attached+Escherichia+coli+bacteria.">Effects of poly(L-lysine) substrates on attached Escherichia coli bacteria.</a> Langmuir. 26 (4), 2639-2644 (2010).</li><li>McNally, J. G., Karpova, T., Cooper, J., Conchello, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+imaging+by+deconvolution+microscopy.">Three-dimensional imaging by deconvolution microscopy.</a> Methods. 19 (3), 373-385 (1999).</li><li>Wallace, W., Schaefer, L. H., Swedlow, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+workingperson's+guide+to+deconvolution+in+light+microscopy.">A workingperson's guide to deconvolution in light microscopy.</a> Biotechniques. 31 (5), 1076-1082 (2001).</li><li>Eswara, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+essential+Staphylococcus+aureus+cell+division+protein+directly+regulates+FtsZ+dynamics.">An essential Staphylococcus aureus cell division protein directly regulates FtsZ dynamics.</a> Elife. 7, (2018).</li><li>Haeusser, D. P., Margolin, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Splitsville:+structural+and+functional+insights+into+the+dynamic+bacterial+Z+ring.">Splitsville: structural and functional insights into the dynamic bacterial Z ring.</a> Nature Reviews Microbiology. 14 (5), 305-319 (2016).</li><li>Du, S., Lutkenhaus, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=At+the+Heart+of+Bacterial+Cytokinesis:+The+Z+Ring.">At the Heart of Bacterial Cytokinesis: The Z Ring.</a> Trends in microbiology. , (2019).</li><li>Haranahalli, K., Tong, S., Ojima, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+the+discovery+and+development+of+antibacterial+agents+targeting+the+cell-division+protein+FtsZ.">Recent advances in the discovery and development of antibacterial agents targeting the cell-division protein FtsZ.</a> Bioorganic and Medicinal Chemistry. 24 (24), 6354-6369 (2016).</li><li>Brzozowski, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deciphering+the+Role+of+a+SLOG+Superfamily+Protein+YpsA+in+Gram-Positive+Bacteria.">Deciphering the Role of a SLOG Superfamily Protein YpsA in Gram-Positive Bacteria.</a> Frontiers in Microbiology. 10, 623 (2019).</li><li>Elsen, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+action+of+the+cell-division+inhibitor+PC190723:+modulation+of+FtsZ+assembly+cooperativity.">Mechanism of action of the cell-division inhibitor PC190723: modulation of FtsZ assembly cooperativity.</a> Journal of the American Chemical Society. 134 (30), 12342-12345 (2012).</li><li>Haydon, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inhibitor+of+FtsZ+with+potent+and+selective+anti-staphylococcal+activity.">An inhibitor of FtsZ with potent and selective anti-staphylococcal activity.</a> Science. 321 (5896), 1673-1675 (2008).</li><li>Pilhofer, M., Ladinsky, M. S., McDowall, A. W., Jensen, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+TEM:+new+insights+from+cryo-microscopy.">Bacterial TEM: new insights from cryo-microscopy.</a> Methods in Cell Biology. 96, 21-45 (2010).</li><li>Ni, Q., Mehta, S., Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+imaging+of+cell+signaling+using+genetically+encoded+fluorescent+reporters.">Live-cell imaging of cell signaling using genetically encoded fluorescent reporters.</a> Federation of European Biochemical Societies Journal. 285 (2), 203-219 (2018).</li><li>Weiss, C. A., Hoberg, J. A., Liu, K., Tu, B. P., Winkler, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-Cell+Microscopy+Reveals+That+Levels+of+Cyclic+di-GMP+Vary+among+Bacillus+subtilis+Subpopulations.">Single-Cell Microscopy Reveals That Levels of Cyclic di-GMP Vary among Bacillus subtilis Subpopulations.</a> Journal of Bacteriology. 201 (16), (2019).</li><li>Schneider, J. P., Basler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shedding+light+on+biology+of+bacterial+cells.">Shedding light on biology of bacterial cells.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences. 371 (1707), (2016).</li><li>Yao, Z., Carballido-Lopez, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+imaging+for+bacterial+cell+biology:+from+localization+to+dynamics,+from+ensembles+to+single+molecules.">Fluorescence imaging for bacterial cell biology: from localization to dynamics, from ensembles to single molecules.</a> Annual review of microbiology. 68, 459-476 (2014).</li><li>Ettinger, A., Wittmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+live+cell+imaging.">Fluorescence live cell imaging.</a> Methods in Cell Biology. 123, 77-94 (2014).</li><li>Fredborg, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+image+analysis+for+quantification+of+filamentous+bacteria.">Automated image analysis for quantification of filamentous bacteria.</a> BioMed Central Microbiology. 15, 255 (2015).</li><li>Ursell, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=precise+quantification+of+bacterial+cellular+dimensions+across+a+genomic-scale+knockout+library.">precise quantification of bacterial cellular dimensions across a genomic-scale knockout library.</a> BioMed Central Biology. 15 (1), 17 (2017).</li></ol>

Mikroskopi har varit en stöttepelare i studier som rör mikrobiella organismer. Med tanke på deras micron skala Cellstorlek, encellig nivå studier har traditionellt förlitat sig på elektronmikroskopi (EM). Även om EM har blivit en ganska kraftfull teknik under de senaste åren har det sina egna inneboende begränsningar utöver begränsad användaråtkomst16. Förbättringar i fluorescensmikroskopi tekniker och utveckling av olika fluorescerande sonder, såsom FDAA3, ...

Området för bakteriell cellbiologi har förbättrats avsevärt genom de senaste framstegen inom mikroskopi tekniker1,2. Bland andra instrument, Mikroskop som kan utföra Timelapse fluorescens mikroskopi experiment förblir ett värdefullt verktyg. Utredare kan övervaka olika fysiologiska händelser i realtid med hjälp av fluorescerande proteiner som, grön fluorescerande protein (GFP)-baserade transkriptionella och translationella reporter fusioner, fluorescerande D-aminosyror (FDAA)3, eller använda andra fläckar för märkning av cellväggen, membran och DNA. Det är därför ingen överraskning att fluorescensmikroskopi fortfarande är populärt bland mikrobiella cellbiologer. Förutom att bara visa slutet fenotyper, ge information om hur de observerade fenotyperna uppstår med hjälp av Timelapse mikroskopi kan tillföra betydande värde till resultaten och potentiellt ge ledtrådar om vilka cellulära processer som riktas mot potentiella läkemedelskandidater4.
Protokollen för att genomföra högupplösta bilder med hjälp av ett helt motoriserat, inverterat, brett fält fluorescens-Mikroskop (se material tabellen) finns i denna artikel. Dessa protokoll kan anpassas för att passa behoven hos andra fluorescensmikroskop som kan utföra Timelapse-mikroskopi. Även om programvaran diskuteras här motsvarar den specifika tillverkaren medföljande programvara som anges i tabellen av material, programvara som vanligen tillhandahålls av andra Mikroskop tillverkare eller fritt tillgängliga imagej5, har likvärdiga verktyg för att analysera mikroskopi data. För villkor där Timelapse inte bidrar, kan tidsförlopp experiment utföras enligt beskrivningen i denna artikel. De protokoll som beskrivs här ger en detaljerad guide för att studera fenotypiska förändringar i två olika bakteriearter: B. subtilis och S. aureus. Se tabell 1 för stammar som används.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP160-100</td>
			<td>Molecular Biology Grade - Low EEO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D3571</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FM4-64</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>T3166</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottom dish</td>
			<td>MatTek</td>
			<td>P35G-1.5-14-C</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IPTG</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP1755-10</td>
			<td>Dioxane-free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>GE</td>
			<td>DeltaVision Elite</td>
			<td>Customized Olympus IX-71 Inverted Microscope Stand; Custom Illumination Tower and Transmitted Light Illuminator Module. Objectives: PLAPON 60X (N.A. 1.42, WD 0.15 mm); OLY 100X OIL (N.A. 1.4, WD 0.12 mm); DIC Prism Nomarski for 100X Objective; CoolSnap HQ2 camera; SSI Assembly 7-color; Environmental control chamber - opaque.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC190723</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>3445805MG</td>
			<td>FtsZ inhibitor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SoftWorx</td>
			<td>GE</td>
			<td></td>
			<td>Manufacturer-supplied imaging software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-cell fluorescence microscopy to investigate subcellular protein localization and cell morphology changes in bacteria

Undersökningar av faktorer som påverkar celldelning och cell form hos bakterier utförs vanligen tillsammans med högupplöst fluorescens-mikroskopi, eftersom observationer som gjorts på populationsnivå inte riktigt återspeglar vad som sker på en enda cellnivå. Live-cell Timelapse mikroskopi kan utredarna att övervaka förändringar i celldelning eller cellmorfologi som ger värdefulla insikter om subcellulär lokalisering av proteiner och timing av genuttryck, som det händer, till potentiellt stöd i att besvara viktiga biologiska frågor. Här, vi beskriver vårt protokoll för att övervaka fenotypiska förändringar i Bacillus subtilis och Staphylococcus aureus med hjälp av en högupplöst deconvolution Mikroskop. Syftet med denna rapport är att tillhandahålla ett enkelt och tydligt protokoll som kan antas av andra utredare som är intresserade av att bedriva fluorescensmikroskopi experiment för att studera olika biologiska processer i bakterier och andra organismer.

GpsB fenotyper Tidigare har vi visat att sa-GpsB är ett viktigt protein som utarmning av GpsB med hjälp av ett antisense RNA resultat i cell lysis9. Här beskriver vi hur uppkomsten av olika cell Division fenotyper och förändringar i protein lokalisering kan fångas med hjälp av Timelapse mikroskopi protokollet som beskrivs i denna artikel. För detta ändamål, S. aureus stammar RB143 [SH1000 hyser pEPSA5 (tom vektor)] och GGS8 [SH1000 hyser pGG59 (P<sub...

Watch this Scientific Journal Video about Live-Cell Fluorescence Microscopy to Investigate Subcellular Protein Localization and Cell Morphology Changes in Bacteria at JoVE.com

Live-Cell Fluorescence Microscopy to Investigate Subcellular Protein Localization and Cell Morphology Changes in Bacteria

Den här artikeln innehåller en steg-för-steg-guide för att undersöka protein subcellulär lokalisering dynamik och övervaka morfologiska förändringar med högupplöst fluorescens mikroskopi i Bacillus subtilis och Staphylococcus aureus.

Live-Cellfluorescens mikroskopi för att undersöka subcellulära protein lokalisering och cellmorfologi förändringar i bakterier

Investigations of factors influencing cell division and cell shape in bacteria are commonly performed in conjunction with high-resolution fluorescence ...

Detta protokoll underlättar direkt observation av olika fenotypiska förändringar på en encellsnivå och möjliggör kontinuerlig övervakning av protein lokalisering och genuttryck timing. Den största fördelen med fluorescensmikroskopi är att det är en okomplicerad metod för att övervaka olika biologiska processer, såsom celldelning och cellmorfologiförändringar i levande celler. Var noga med att ägna särskild uppmärksamhet åt protokollet prov förberedelse och att utforska mikroskop programvara för att kunna lokalisera de inställningar och alternativ som anges i detta protokoll.En visuell representation av detta protokoll är avgörande eftersom det tillåter användare att titta på och lära sig de betydande stegen i tekniken när de ställer in sina egna experiment. Börja med att märka en fem till 50-mikroliter alikvot av cellen kultur av intresse med en lämplig membran färgning färgämne och lägga till fem mikroliter av de färgade bakterieceller på ett lock slip på botten av en 35-milliliter glas botten kultur skålen. Placera en 11-millimeters diameter agaros platta över provet och försiktigt peka för att se till att plattan är platt mot locket slip.Tillsätt sedan cirka fem mikroliter vatten runt täcksligen för att förhindra att agarospaden torkar och låt odlingsskålen balansera till temperaturen inuti inkubationskammaren i ett högupplöst deconvolutionmikroskop i 15 till 20 minuter. För att avbilda provet, använd ratten för grovjusteringsfokus för att se till att målsättningen är helt sänkt innan mikroskopet inom mikroskopets programvara initieras. Placera en droppe 1,517 brytningsindex olja i 100x olja nedsänkning mål, och överföra glas botten skålen som innehåller provet i metallhuset kistan.Skjut försiktigt skålen i scenen klämma, och använda grov justering ratten för att höja målet tills oljan kommer i kontakt med glaset botten av skålen. Använd okularet och finjusteringsratten för att få provet i fokus, och byt till Kameraläge. I bildhanteringsprogrammet på Resolve 3D-fönstret väljer du ikonen Design/Run Experiment.En ny dialogruta kommer att visas med rubriken Design/Run Experiment. Öppna flikarna Design och avsnittsuppsättning i dialogrutan för att ställa in antalet Z-stackar och provtjockleken. Om du vill mäta cellernas tjocklek i provet justerar du stegvis Z-planet med hjälp av upp- och nedpilarna i dialogrutan Lös 3D, vilket gör att där cellerna går ur fokus som övre och nedre gränser för Bildinhämtningen.När du har justerat Ljusintensitetens Procentöverföring och exponeringens varaktighet för de enskilda markerade kanalerna i dialogrutan Lös 3D klickar du på Punktlista för att öppna poänglistan. I flikarna Design och Tidsfördröjning markerar du kryssrutan Tidsfördröjning och anger parametrarna för tidsfördröjning. Markera alternativet Besök punktlista och ange de punkter som ska avbildas i textrutan, och avgränsa punkterna efter kommatecken eller bindestreck för fullständiga sekvenser.Redigera sedan filnamn och filplatser på fliken Kör och välj Spela upp i dialogrutan Begin Experiment för att starta experimentet. I slutet av analysen öppnar du RAW-bildfilerna av intresse i ett lämpligt deconvolution-program och väljer fliken Process och Deconvolve. Utför eventuell manuell bakgrundsbrus-subtraktion och justering av ljusstyrkakontrasten i någon eller alla våglängdskanaler efter behov innan du sparar bilden som en TIFF-fil.För celllängdskvantifiering, öppna de dekonvoluterade bildfilerna i tillverkaren medföljande programvara eller i fri bildhanteringsprogram, till exempel ImageJ, och öppna fliken Verktyg. Välj sedan Mät Avstånd och vänsterklicka på start- och slutpunkterna på den önskade bildfilen för att mäta celllängden. För fluorescerande signalkvantifiering väljer du Datainspektör.Rita en ruta med alternativet Kolumn/rad inställt på den specifika dimensionen av intresse och välj området med den signal som ska kvantifieras. Tillsats av xylose för att inducera en GGS 8-stam resulterar i en sex-cells fenotyp. Medan tomma vektor kontroller visas liknar kontroll celler odlas i avsaknad av inducerare.Överproduktion av Staph aureus gpsB stör celldelning i B.subtilis mätt med tidsförloppsmikroskopi och celllängdskvantifiering. Dessutom kan lokaliseringsmönster av FtsZ eller ett av de proteiner som är associerade med detta protein användas en reporter för att studera och/eller identifiera nya antimikrobiella föreningar genom tidsförloppen imaging och celllängd kvantifiering. Var noga med att använda en olja med lämpligt brytningsindex eftersom brytningsindex kan ändras beroende på vilken temperatur som används för bildåtergivningen.Deconvolution kan utföras om användaren vill ta bort out-of-fokus buller, och dataanalys som omfattar fluorescerande signal kvantifiering och celllängd och bredd mätningar kan också utföras.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Levande cell imaging av Bacillus subtilis Och Streptococcus pneumoniae Med hjälp av automatiserade Time-lapse Mikroskopi

During the last few years scientists became increasingly aware that average data obtained from microbial population based experiments are not ...

Single-cell Analysis of Bacillus subtilis Biofilms Using Fluorescence Microscopy and Flow Cytometry

Single-cell Analysis of Bacillus subtilis Biofilms Using Fluorescence Microscopy and Flow Cytometry

Encelliga Analys av Bacillus subtilis Biofilmer Använda fluorescensmikroskopi och flödescytometri

Biofilm formation is a general attribute to almost all bacteria 1-6. When bacteria form biofilms, cells are encased in extracellular matrix that is mostly ...

Visualization of Bacterial Toxin Induced Responses Using Live Cell Fluorescence Microscopy

Visualisering av bakterietoxin Inducerade svar Använda Live Mikroskopi Cell Fluorescens

Bacterial toxins bind to cholesterol in membranes, forming pores that allow for leakage of cellular contents and influx of materials from the external ...

Live-cell Video Microscopy of Fungal Pathogen Phagocytosis

Live-cell videomikroskopi av svamppatogen Fagocytos

Phagocytic clearance of fungal pathogens, and microorganisms more generally, may be considered to consist of four distinct stages: (i) migration of ...

Live Cell Imaging of Alphaherpes Virus Anterograde Transport and Spread

Levande cell imaging av Alphaherpes Virus Anterograd Transport och Spread

Advances in live cell fluorescence microscopy  techniques, as well as the construction of recombinant viral strains that  express fluorescent fusion ...

Fluorescence Microscopy Methods for Determining the Viability of Bacteria in Association with Mammalian Cells

Fluorescensmikroskopi Metoder för att fastställa livskraft bakterier i föreningen med däggdjursceller

Central to the field of bacterial pathogenesis is the ability to define if and how microbes survive after exposure to eukaryotic cells. Current protocols ...

Fluorescence in situ Hybridizations (FISH) for the Localization of Viruses and Endosymbiotic Bacteria in Plant and Insect Tissues

Fluorescence in situ Hybridizations FISH for the Localization of Viruses and Endosymbiotic Bacteria in Plant and Insect Tissues

Fluorescens<em&gt; In situ</em&gt; Hybridiseringar (FISH) för lokalisering av virus och endosymbiotiska Bakterier i växt-och insekts vävnader

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a name given to a variety of techniques commonly used for visualizing gene transcripts in eukaryotic cells ...

Identification of Plasmodesmal Localization Sequences in Proteins In Planta

Identification of Plasmodesmal Localization Sequences in Proteins In Planta

Identifiering av Plasmodesmal lokalisering sekvenser i proteiner i Planta

Plasmodesmata (Pd) are cell-to-cell connections that function as gateways through which small and large molecules are transported between plant cells. ...

In Vitro Canine Neutrophil Extracellular Trap Formation: Dynamic and Quantitative Analysis by Fluorescence Microscopy

In Vitro Canine Neutrophil Extracellular Trap Formation: Dynamic and Quantitative Analysis by Fluorescence Microscopy

In Vitro Hundarnas neutrofila extracellulära fälla bildandet: Dynamiska och kvantitativ analys av fluorescensmikroskopi

In response to invading pathogens, neutrophils release neutrophil extracellular traps (NETs), which are extracellular networks of DNA decorated with ...

Quantification of Efferocytosis by Single-cell Fluorescence Microscopy

Kvantifiering av Efferocytosis av Single-cell fluorescensmikroskopi

Studying the regulation of efferocytosis requires methods that are able to accurately quantify the uptake of apoptotic cells and to probe the signaling ...