Name: human ipsc-derived cardiomyocyte networks on multiwell micro-electrode arrays for recurrent action potential recordings
Uploaded: 2019-07-15T14:00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Human iPSC-Derived Cardiomyocyte Networks on Multiwell Micro-electrode Arrays for Recurrent Action Potential Recordings at JoVE.com

. למחברים אין מה לגלות

במהלך השנים, היישום של אני כבר מוגבל לביצוע מדידות FP של תאים מתרגש לחקור את התכונות האלקטרופיזיולוגיות שלהם36,37,38,39. רק קבוצות מעטים דיווחו על עקבות AP מתאים אלקטרוגניים באמצעות טכנולוגיה מותאמת אישית MEA18,29,30. עם זאת, גישות אלה לא נחקרו לגבי הקלטות חוזרות ונשנות מאותן הכנות. פיתחנו מתודולוגיה חדשנית ומדויקת ללמידה APs מאותו אתר סלולרי במשך ימים במספר רב של רשתות היפרsc-CM בו3. במחקר שפורסם שלנו, הפלטפורמה multiwell gold מיקרו-זהב היה מועסק כדי להפיק AP בצורת גל ספריות מקבוצות מרובות של תרבויות היפנוsc-CM עם דיוק גבוהה עם ברזולוציה הטמפורלית של 1 μs. הפרוטוקול המתואר כאן מסביר את הזריעה של היפרsc-CMs במערך לצורך פיתוח יעיל של רשתות CM בעלת תפוקה גבוהה להקלטות AP. מספר שלבים קריטיים בפרוטוקול הם: 1) הפקה של מספר רב של בעלי טוהר גבוהה של איכות CMs מבוקרת עבור בנקאות הקפאה, 2) מאוד קיימא לאחר ההפשרה CMs עבור ציפוי והתבגרות, 3) טיפול של הצלחת הגדול ביותר של מאה ס מ זריעה, 4) דיסוציאציה של התרבות ההיפחות ב -30 ימים לאחר בידול ל-MEA ציפוי, ו -5) שחזור של האני לשימוש חוזר מרובים.
חשוב לציין כי וריאציה אצווה-to-אצווה בידול היפנוסק עלול להשפיע על תוצאות נסיוניות. השיטה המונאולייר לבידול הייתה ממוטבת בתוך הבית לייצור ברמה גבוהה של התפוקה3,40. ניתוח FACS של MLC2v ו TNNT2 סמנים של התרבויות שלנו להפגין ≥ 90% חדרית-כמו פניטיפ3. התרבויות הללו מבוקרות באיכות. שמורות למחקרים ניסיוניים גישות בידול הנוכחי להניב שילוב הטרוגנית של nodal-, פרפור-וחדר כמו תאים3,16,17,41. לכן, אסטרטגיות המועסקים עבור מסוג CM האוכלוסייה העשרה יכול לשפר עוד יותר את הספציפיות של התרבויות. בנוסף, גישות הנדסת רקמות יכול להיות מועסק כדי לשפר את ההבשלה. השיטות המוצעות כאן יכולות להיות מיושמות בקלות עבור מקורות CM אחרים.
הטפסים AP גל שנרשמו באמצעות מאה היו דומים לאלה שנרשמו מרשתות של קרדיומיקוציטים על ידי מיפוי אופטי42,43, מוליכים למחצה משלימים תחמוצת המתכת מבוסס מאה18,21, ו-AP מדומה באמצעות הקלטות FP20. כדי לטפל במנגנון של מדידות AP באמצעות MEA חי ו ספירואה25 הפגינו כי ממשק אלקטרופור-אלקטרודה לחקות את טכניקת מיקרואלקטרודה חד זכוכית הוקמה. עם זאת, הפוטנציאל קרום מנוחה וערכי משרעת אמיתי במחקר שלנו לא ניתן להקים בהינתן כי ממשק אלקטרופור-אלקטרודה במערכות ה-MEA לא מכויל, וכי משרעת היא פונקציה של הרגישות והרזולוציה של טכניקה. הגישה שלנו משתפת מגבלות דומות מיפוי אופטי כשמדובר משרעת AP.
הקריאות המבוססות על בסיס מרובה מבוססות-AP שדווחו כאן פותחות אפשרויות חדשות להערכת בטיחות הסמים. למרות הספונטניות, מונאולאיירס האלה היכו בקצב קבוע. ניתוח פרמטרי APD ברשתות מרובות מספק תובנה על טרוגניות חשמליים (איור 13). עם זאת, מנתח הפיצויים APD מקיף חייב לכלול מרווחי זמן לפני הדיאסטולי. יתר על כן, טפסים באיכות גבוהה AP גל שנרשמו מאותו אתר תא מעל 96 h (איור 11B) הוא הדו הראשון לעקוב אחר אלקטרודינמיקה קרום לאורך זמן אשר יהיה ערך בפיתוח ובמחלות.
הפרוטוקול המתואר כאן כדי לכמת את פרמטרי AP ניתן להשתמש כדי ליצור עקומות במינון תגובה כדי לבדוק תרכובות. כפי שדווח לאחרונה על ידי אדוארדס et al.3, התגובה המינון של norepinephrine, איזופנול ו-E 4031 מותווים עבור apd בשלבים שונים רה-פולריזציה. המחקר שפורסם הראה את הדיוק והאמינות של הגישה לזיהוי שינויים עדינים התלויים במינון בטפסי גל AP בזמן אמת. טכניקה זו יכולה בקלות להיות מורחבת עבור תרכובות אחרות או ספריות מולקולה קטנות להבנת תגובות אלקטרופיסיולוגיים שונים.
הגישה המבוססת על ה-MEA למדידות AP שהוצגו במחקר זה, תהיה מעניינת לא רק לאלקטרו-מולוגים אלא גם לביולוגים תאים ומודלים בעלי סיליקו . יתר על כן, FP/AP הקלטות מאותו אתר תא ב-היסק-CMs תאפשר לחוקרים ליצור ספריות מידע קינטיות של מגוון רחב של רשתות סלולריות להתרגש בתוך פרק זמן קצר. הזמינות של משאבים אלה תהיה בעלת ערך עבור תגליות סמים ומידול מחלות.

תאי גזע בעלי השפעה של האדם (היפנוטית-CMs) הם תקן הזהב עבור מספר גדל והולך של מעבדות1,2,3,4,5,6 ,7,8,9,10 מכות embryoidגופות 11,12,13 ומונאולייר3,7,10,11,12 , 13,14,15,16,17 בידול הן השיטות המועדפות עבור הפקת הקרדיוציט ומערך רב-אלקטרודה (MEA) הפך למודאליות משותפת לניטור האלקטרו-דינמיקה של רשתות אלה18,19,20. בעוד פרמטרים שניתן לחלץ מתוך פוטנציאל השדה (FPs) כגון קצב המכות, משרעת, משך מרווחי RR הם תגובות אלקטרופיזיולוגיות בסיסית של הכאתו ספונטנית monolayers18,21, 22,23, הרכיבים הפוטנציאליים לפעולה (AP) מתבססים על אותות בעלי כלים אלה, קשה לנחש24. הפרסום האחרון שלנו על גילוי של יישום של אני עבור מדידות ap חוזרים ישירה מספק הוכחה של מתודולוגיה עבור מופת למופת מחדש ap לדוגמה עם ניתוח בצורת גל נרחב בשלבים שונים רה-פולריזציה על פני מספר אצוות הקרדיוציט הנגזרות מרשת3. במחקר הדגמנו כי המסירה של פולסים אלקטרופורטינג לרשתות של הקרדיוציטים הנגזרות מאפשרת גישה תאיים להקלטות AP. הקלטות AP זמניות אלה תלויות בהחלמה פוטנציאלית על שחזורים פוטנציאליים שנצפו דרך הפגיעה באתר3,25,26. צורות גל שנרשמו דרך ה-MEA ו-מלחציים טלאי במחקר שלנו הראה AP מורפולוגיות דומות ובכך לאמת את האמינות של הגישה3.
כמה מעבדות דיווחו על מדידת גישה מתוך תאים אלקטרוגניים שונים באמצעות מותאם אישית אני בנוי18,21,26,27,28,29, 30, אך המהימנות של שימוש ב-אני למדידות AP עקביות וחוזרות לא הוערך. כיום, תקן זהב תיקון מהדק הטכניקה מוגבלת הקלטות מסוף7,31 בעוד, מאה מבוססי AP מדידות הם ארעי ולכן ניתן לנהל מספר פעמים על אותו תא. כמו כן, אנו מראים שניתן להקליט בקלות אותות AP איכותיים בטווח המילי-וולט המחייב סינון מינימלי. החוקרים יכולים אפוא לנהל לא רק חריפה אלא גם לימודי סמים כרוניים בהכנות אותן באמצעות אני. בנוסף, טכנולוגיה זו מאפשרת במקביל FP/AP מדידה הפקת ספריות אלקטרו-biome בפרק זמן קצר. בהינתן הדגש הגובר על חיזוי הפרעה בקצב הלב והתרופות24,32,33,34,35, שילוב של מדידת AP גישות ישפרו את בטיחות הסמים ואת הערכות היעילות.
כאן, אנו מציגים פרוטוקולים עבור 1) ציפוי מראש של cryopreserved-CMs עבור התבגרות, 2) הנתק והציפוי של היפנוsc-CMs על מרובת היטב, 3) הקלטה של FPs ו-APs מרשתות היפנוסי-CM, 4) הפחתה וחילוץ הנתונים לניתוח, ו 5) שחזור המערכים לשימוש חוזר מרובים. כל שלב ממוטב להדגיש שלבים קריטיים בכל מקום שהוא רלוונטי. דרישות עבור מצורף לתא כדי להבטיח מכות מונאולייר המוקשר הם דנו ונהלים עבור שחזור מאה הטוב ביותר עבור מחקרים אלקטרולוגיים חוזרים מוסברים. לבסוף, GUI מותאם אישית שפותחה במעבדה מוצגת להפקת אות AP, אבטחת איכות, ופילוח זרימת עבודה כדי לכמת ולנתח פרמטרים AP.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A6964-100ML</td>
			<td>cell dissociation solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acquisition software</td>
			<td>Multichannel Systems</td>
			<td>Multiwell-Screen v 1.9.2.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>17504-044</td>
			<td>CM media supplement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Converter software</td>
			<td>Multichannel Systems</td>
			<td>MultiChannel DataManager</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>11330-032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-PBS</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14190-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SH3007103HI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibronectin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F1141-5MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Geltrex</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A1413202</td>
			<td>coating substrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Interface board</td>
			<td>Multichannel Systems</td>
			<td>MCS-IFB 3.0 Multiboot Interface Board</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiwell MEA Plate</td>
			<td>Multichannel Systems</td>
			<td>24W300/30G-288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>11875-093</td>
			<td>CM base medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Terg-a-zyme</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z273287-1EA</td>
			<td>enzymatic detergent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipettes, individually wrapped</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1371148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T8154-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure sterile water</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>10977-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well tissue-culture treated plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

human ipsc-derived cardiomyocyte networks on multiwell micro-electrode arrays for recurrent action potential recordings

הקרנת בטיחות הלב היא בעלת חשיבות עליונה לגילוי סמים וtherapeutics. לכן, ההתפתחות של הרומן החדשני התפוקה החשמלית אלקטרופיסיולוגית ההכנות הנגזרות היפנוסי-CM (היסק-ס) נדרשת הרבה עבור בדיקות תרופות יעילות. למרות מערכים רב אלקטרודה (אני) מועסקים לעתים קרובות עבור מדידות פוטנציאליות בשדה של תאים להתרגש, פרסום שנערך לאחרונה על ידי Joshi-מוקהרג ועמיתים תיאר ואימת את היישום שלה עבור הקלטות פוטנציאליות של פעולה חוזרת (AP) מאותה הכנה היפנוסי-CM בימים. המטרה כאן היא לספק שיטות מפורטות צעד אחר צעד לזריעת CMs ולמדידת צורות AP גל באמצעות אלקטרופורציה עם דיוק גבוה וברזולוציה טמפורלית של 1 μs. גישה זו מטפלת בחוסר מתודולוגיה קלה לשימוש כדי להשיג גישה תאיים למדידות AP בתפוקה גבוהה לחקירות אלקטרו-פיזיולוגיות אמינות. זרימת עבודה מפורטת ושיטות לציפוי היפנוסי-CMs בלוחות מרובת היטב מפורטים בדגש על שלבים קריטיים בכל מקום רלוונטי. בנוסף, מותאם אישית MATLAB סקריפט לטיפול בנתונים מהירה, החילוץ והניתוח הוא דיווח לחקירה מקיפה של ניתוח צורת גל כדי לכמת הבדלים עדינים במבנה של פרמטרים שונים המשך AP מעורב הפרעה בקצב הלב והקרדיולוקסיטי.

Watch this Scientific Journal Video about Human iPSC-Derived Cardiomyocyte Networks on Multiwell Micro-electrode Arrays for Recurrent Action Potential Recordings at JoVE.com

Human iPSC-Derived Cardiomyocyte Networks on Multiwell Micro-electrode Arrays for Recurrent Action Potential Recordings

מאמר זה מכיל קבוצה של פרוטוקולים לפיתוח של האדם המושרה הנגרמת לתאי גזע (היפנוsc-CM) רשתות המתורבתות על לוחות בעלי השפעה מרובת המידות כדי electroporate הפיך קרום התא עבור מדידות פוטנציאליות פעולה. הקלטות תפוקה גבוהה מתקבלות מאותם אתרי תא במשך ימים ברציפות.

האדם הנגזר iPSC האנטי נטוורקס רשתות על Multiwell מיקרו מערכים אלקטרודה לפעולה ונשנים הקלטות פוטנציאליות

Cardiac safety screening is of paramount importance for drug discovery and therapeutics. Therefore, the development of novel high-throughput ...

הפרוטוקול הבא מתאר את ההתפתחות של רשתות קרדיומיוציטים המושרות על ידי תאי גזע פלוריפוטנטיים הנגרמים על ידי בני אדם על לוחות MEA מרובי חלקים כדי להפוך את ממברנות התא למדידות פוטנציאליות לפעולה. פרמטרים פוטנציאליים פעולה לאחר מכן ניתן להשתמש כדי ליצור עקומות תגובה אלה כדי לבדוק תרכובות עבור אלקטרופיזיולוגיה. קידוד MEA רב-וואל וציפוי תאים הם הצעדים המאתגרים ביותר הזקוקים לתשומת לב מיוחדת.יש לבצע צעדים אלה בחריצות ובהירות כדי למנוע טיפות מתפשטות ומתייבשות. עם תרגול, זה יכול להיות להתגבר בקלות. פיתחנו ממשק משתמש גרפי מותאם אישית עבור פילוח יחיד, אבטחת איכות והפקת פרמטרים.זרימת העבודה החזקה שלנו של MATLAB יושמה כדי להפחית במהירות כמויות גדולות של נתונים ניסיוניים גולמיים לקבוצה בלתי משוחדת של צורות גל פוטנציאליות לפעולה. התחל בהפשרת תאי גזע פלוריפוטנטיים הנגרמים על ידי בני אדם על ידי קרדיומיוציטים על פי הוראות כתב היד. להשעות בעדינות את התאים באמצעות פיפטה העברה כדי לנטרל גושי תאים.לאחר מכן מחלקים בזהירות שני מיליליטר של השעיית תאים לתוך כל באר של צלחת שש באר מצופה מצעים ומנחים את הצלחת באינקובטור של תרבות התאים ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו-חמצני. תאים צריכים לדבוק בדרכי הג'ל על ידי 24 שעות והיכו באופן ספונטני ב 48 שעות לאחר ציפוי. יומיים לפני הציפוי להוסיף 0.5 מיליליטר של תאוות קרדיומיוציטים iPSC אנושי בינוני לכל באר של מערך רב אלקטרודה 24 היטב, או צלחת MEA, ולבצע הקלטה בסיסית כדי לאמת את יחס אות לרעש כבדיקה איכותית של MEAs.לאחר מכן, שאפו את התקשורת, שטפו את בארות במים סטריליים, וערקו תחת אור UV במכסה המנוע של זרימה למינארית בן לילה. למחרת, להוסיף 0.1 מיליליטר של FBS לכל באר לטיפול הידרופילי של משטחי MEA הדגירה את הצלחת בטמפרטורת החדר במשך 30 דקות. לאחר מכן שאפו את ה- FBS, ושטוף כל באר פעמיים עם 0.5 מיליליטר של מים סטריליים.השאירו את הצלחת להתייבש במכסה המנוע לזרימת למינאר לילה. ביום שלמחרת, פיפטה חמישה microliters של דילול fibronectin עובד בזהירות לחלק את טיפה במרכז כל באר כדי לכסות את כל 12 אלקטרודות. מיד מניחים את הצלחת על משטח מוגבה בתוך תא לח המכיל מספיק מים סטריליים כדי לכסות את משטח המנה כולו.מניחים את התא עם הצלחת באינקובטור תרבות התא במשך שלוש שעות ולאחר מכן להמשיך עם ציפוי התא. כאשר מוכן צלחת cardiomyocytes, להתאים את צפיפות התא ל 6, 000 תאים לכל microliter על ידי דילול אותם במדיום הפשרת iPSC אנושי. השתמש בהצלבה עדינה כדי למנוע מהתאים לטפטף.הביאו את צלחת ה- MEA למכסה המנוע של הזרימה למינאר והסירו בזהירות את טיפת הפיברונקין עם פיפטה P10 מבלי לגעת באלקטרודות. מחלקים מיד טיפת תא חמישה מיקרוליטר למרכז הבאר ומוודאים לכסות את כל 12 האלקטרודות. לעשות את זה טוב בכל פעם כדי למנוע פיברונקין ייבוש.לאחר סיום הציפוי, מניחים את צלחת MEA בחזרה בתא הלחות המפויח באופן רופף ומחזירים אותו לחממת תרבות התא במשך שלוש שעות. לאחר הדגירה, השתמש פיפטה P200 להוסיף בזהירות 200 microliters של אדם iPSC קרדיומיוציט הפשרת בינוני לכל באר מבלי להפריע לתאים. מניחים את צלחת MEA בחזרה באינקובטור תרבות התא ולהחליף תרבות בינונית 24 שעות לאחר הציפוי.כאשר מוכן לרכוש אות מן cardiomyocytes, ליזום את תוכנת הרכישה ולהכניס את לוח MEA על פי הוראות כתב היד. לחץ על לחצן סייר כדי להמחיש את האות בכל הבארים ולאמת את איכות האות בתנאי מצב יציבים. רשום הערות על אלקטרודות עם פוטנציאל שדה, או FP, אותות בטווח המילי-וולט.לאחר מכן לחץ על אותו לחצן כדי לעצור את המחקר. עד לנקודה זו לא נרשמו נתונים. לחץ על לחצן עבור כדי להתחיל בהקלטה.האלקטרודות בכל באר יראה אותות FP בחלון הנתונים הגולמיים. לאחר 30 שניות של הקלטה, לחץ על כפתור Stimulate ולאפשר electroporation להתקיים באתרים שנבחרו במשך 30 שניות. לאחר מכן לחץ על אותו כפתור כדי לעצור את הסימולציה ולהמשיך להקליט במשך 60 שניות.השתמש בתוכנה המותאמת אישית המבוססת על MATLAB כדי למקטע ולחלץ פרמטרי נתונים פוטנציאליים שונים של פוטנציאל שדה ופעולה. תחילה, הפעל את קוד ניתוח צורת הגל ולחץ על קובץ ובחר Process.h5. חפש ובחר את ה- mwd שנוצר קודם לכן.h5 קובץ. לחץ על לחצן שמור ספריה כדי לשנות את מיקום האחסון של קבצי הפלט. לאחר מכן צור תור עיבוד אותות על-ידי בחירת האלקטרודה ושילובי עניין טובים ולאחר מכן לחיצה על לחצן תור.חזור על שלב זה כדי להוסיף אלקטרודה נוספת ושילובים טובים לתור. אם התאים טופלו בסמים, ניתן לערוך את התור על ידי לחיצה ישירה על שם Med, Med Concentration. לאחר שהתור יושלם, לחץ על לחצן אתחל צורות גל, שיתחיל את העיבוד הראשוני שבו האותות מזוהים ומופקים עבור פילוח.בסיום העיבוד, לחצו על הלחצן 'התקרבות', ובחרו את פוטנציאל הפעולה, או AP, אזור מעניין. לחצו על הלחצן 'שמור' וסקורו את החלניות. הפסגות והשוקת מזוהות עבור כל צורת גל, וה- APs המנורמלים נמצאים על-אף.לאחר שתסיים, לחץ על לחצן שמור כדי לעבור למעקב הבא בתור, וחזור על התהליך עבור שאר האותות האלקטרודה והשילוב היטב. הכדאיות וצפיפות ציפוי של cardiomyocytes שלאחר מופשר הוא קריטי עבור תרבות MEA רב-שכבתית. ציפוי נכון גורם לתרבות מונוליאר בריאה עם מכות ספונטניות ב 48 שעות, בעוד הכדאיות התא עניים תוצאות תרבויות עם אחוז גבוה של אוכלוסיות שאינן myocyte.פיזור טיפת תא משפיע על צפיפות התרבות והוא יכול אפילו להוביל למוות של תאים, ולכן מיקום תאים מדויק חשוב. התאים בתרבות על MEAs כפופים לבדיקה איכותית של פעילות חשמלית 48 שעות לאחר הציפוי. אם 50% מהאלקטרודות ברשת ו-70% מכלל הרשתות אינן מייצרות אותות FP, התרבות תת-אופטימלית.ניתן להשיג הקלטות AP מתווכים אלקטרופורציה מספר פעמים 48 שעות לאחר ציפוי MEA. אלקטרופורציה מרובה של אותו אתר תא באפס, 24, 48, 72 ו-96 שעות אין השפעה משמעותית על צורת AP לאורך זמן. בנוסף, לא נצפתה מתאם בין משרעת AP של FP לבין משרעת AP לאחר אלקטרופולציה מאותו אתר תא.יתרון משמעותי של שיטה זו הוא כי צלחת MEA multiwell ניתן לעשות שימוש חוזר מספר פעמים. כדי להדגים את המהימנות של מערך זה, 3, 815 צורות גל AP נמשכות משלוש אצוות שחזור, ותווכי משך AP מופצים כדי לבחון את יכולת החזרה של התוצאות. כאשר עניין, ניתן לבצע בדיקות נוספות, כגון ביטוי גנים, מדידות סידן ארעי ומהדק תיקון כדי לחקור את ההתנהגות של זרמים יוניים ספציפיים.טכניקה זו סוללת את הדרך עבור חוקרים כדי לשפר את ההבשלה האלקטרופיזיולוגית, כמו גם כדי לסנן השפעות מינון כרוני על cardiomyocytes.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Plasma Lithography Surface Patterning for Creation of Cell Networks

Surface פלזמה ליתוגרפיה דפוסים של יצירת רשתות Cell

Systematic manipulation of a cell microenvironment with micro- and nanoscale resolution is often required for deciphering various cellular and molecular ...

Mass Cytometry: Protocol for Daily Tuning and Running Cell Samples on a CyTOF Mass Cytometer

Cytometry המוני: פרוטוקול לכוונון יומי ודגימות תאים פועלים על Cytometer המוני CyTOF

In recent years, the rapid analysis of single cells has commonly been performed using flow cytometry and fluorescently-labeled antibodies. However, the ...

Analysis of Tubular Membrane Networks in Cardiac Myocytes from Atria and Ventricles

ניתוח של Tubular ממברנה רשתות בלב myocytes מאטרייה וחדרי לב

In cardiac myocytes a complex network of membrane tubules - the transverse-axial tubule system (TATS) - controls deep intracellular signaling functions. ...

Sealable Femtoliter Chamber Arrays for Cell-free Biology

מערכים רבים סגר Femtoliter הלשכה לביולוגיה ללא סלולארי

Cell-free systems provide a flexible platform for probing specific networks of biological reactions isolated from the complex resource sharing (e.g., ...

Production, Characterization and Potential Uses of a 3D Tissue-engineered Human Esophageal Mucosal Model

ייצור, אפיון ופוטנציאל שימושים של הוושט רירי דגם אדם מהונדס-רקמות 3D

The incidence of both esophageal adenocarcinoma and its precursor, Barrett&#8217;s Metaplasia, are rising rapidly in the western world. Furthermore ...

Easy and Accurate Mechano-profiling on Micropost Arrays

Mechano-פרופיל קל ומדויק על מערכי Micropost

Cell culture substrates with integrated flexible microposts enable a user to study the mechanical interactions between cells and their immediate ...

Standardized and Scalable Assay to Study Perfused 3D Angiogenic Sprouting of iPSC-derived Endothelial Cells In Vitro

שיטת הלימוד הסטנדרטית והמדמדית למחקר בלבלוב אנגיוגנטית בתלת-ממד של התאים הנגזרים מתוך מבחנה

Pre-clinical drug research of vascular diseases requires in vitro models of vasculature that are amendable to high-throughput screening. However, current ...

Fabricating Multi-Component Lipid Nanotube Networks Using the Gliding Kinesin Motility Assay

ייצור רשתות ננו-צינוריות ליפידים מרובות רכיבים באמצעות בדיקת תנועתיות Kinesin Gliding

Lipid nanotube (LNT) networks represent an in vitro model system for studying molecular transport and lipid biophysics with relevance to the ubiquitous ...

Fabrication of 3D Cardiac Microtissue Arrays using Human iPSC-Derived Cardiomyocytes, Cardiac Fibroblasts, and Endothelial Cells

ייצור מערכי מיקרוטיסו לב תלת-ממדיים באמצעות קרדיומיוציטים אנושיים שמקורם ב-IPSC, פיברובלסטים לבביים ותאי אנדותל

Generation of human cardiomyocytes (CMs), cardiac fibroblasts (CFs), and endothelial cells (ECs) from induced pluripotent stem cells (iPSCs) has provided ...

Single-Cell Optical Action Potential Measurement in Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes

מדידה פוטנציאלית לפעולה אופטית חד-תאית בקרדיומיוציטים שמקורם בתאי גזע מושרים על ידי תאי גזע אנושיים

Conventional intracellular microelectrode techniques to quantify cardiomyocyte electrophysiology are extremely complex, labor intensive, and typically ...