Name: use of viral entry assays and molecular docking analysis for the identification of antiviral candidates against coxsackievirus a16
Uploaded: 2019-07-15T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Use of Viral Entry Assays and Molecular Docking Analysis for the Identification of Antiviral Candidates against Coxsackievirus A16 at JoVE.com

Författarna är tacksamma för Dr Joshua Beckham vid University of Texas i Austin för teknisk support med molekylär dockning. Denna studie stöddes delvis av finansiering från Taiwans vetenskaps-och teknik ministerium (MOST107-2320-B-037-002 till C.-J.L. och L.-T.L.; MOST106-2320-B-038-021 och MOST107-2320-B-038-034-MY3 nätters till L.-T.L.).

Anmärkning: Alla cellkulturer och virusinfektioner måste utföras i certifierade biosäkerhets fläktar som är lämpliga för biosäkerhets nivån hos de prover som hanteras. De två tannin-klass av små molekyler chebulagic syra (CHLA) och punicalagin (mops), som observerades för att effektivt blockera CVA16 infektion9, används som exempel på kandidat inhibitoriska agenter. För grundläggande principer i virologisk teknik, virusförökning, bestämning av virus titer, och ...

<ol>
	<li>Legay, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatal+coxsackievirus+A-16+pneumonitis+in+adult.">Fatal coxsackievirus A-16 pneumonitis in adult.</a> Emerging Infectious Diseases. 13, 1084-1086 (2007).</li><li>Wang, C. Y., Li Lu, ., Wu, F., H, M., Lee, C. Y., Huang, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatal+coxsackievirus+A16+infection.">Fatal coxsackievirus A16 infection.</a> Pediatric Infectious Disease Journal. 23, 275-276 (2004).</li><li>Ren, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structures+of+coxsackievirus+A16+capsids+with+native+antigenicity:+implications+for+particle+expansion,+receptor+binding,+and+immunogenicity.">Structures of coxsackievirus A16 capsids with native antigenicity: implications for particle expansion, receptor binding, and immunogenicity.</a> Journal of Virology. 89, 10500-10511 (2015).</li><li>Nishimura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+P-selectin+glycoprotein+ligand-1+is+a+functional+receptor+for+enterovirus+71.">Human P-selectin glycoprotein ligand-1 is a functional receptor for enterovirus 71.</a> Nature Medicine. 15, 794-797 (2009).</li><li>Yamayoshi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scavenger+receptor+B2+is+a+cellular+receptor+for+enterovirus+71.">Scavenger receptor B2 is a cellular receptor for enterovirus 71.</a> Nature Medicine. 15, 798-801 (2009).</li><li>Yamayoshi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+SCARB2-dependent+infection+by+coxsackievirus+A7,+A14,+and+A16+and+enterovirus+71.">Human SCARB2-dependent infection by coxsackievirus A7, A14, and A16 and enterovirus 71.</a> Journal of Virology. 86, 5686-5696 (2012).</li><li>Lin, L. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrolyzable+tannins+(chebulagic+acid+and+punicalagin)+target+viral+glycoprotein-glycosaminoglycan+interactions+to+inhibit+herpes+simplex+virus+1+entry+and+cell-to-cell+spread.">Hydrolyzable tannins (chebulagic acid and punicalagin) target viral glycoprotein-glycosaminoglycan interactions to inhibit herpes simplex virus 1 entry and cell-to-cell spread.</a> Journal of Virology. 85, 4386-4398 (2011).</li><li>Lin, L. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Broad-spectrum+antiviral+activity+of+chebulagic+acid+and+punicalagin+against+viruses+that+use+glycosaminoglycans+for+entry.">Broad-spectrum antiviral activity of chebulagic acid and punicalagin against viruses that use glycosaminoglycans for entry.</a> BMC Microbiology. 13, 187 (2013).</li><li>Lin, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+molecules+targeting+coxsackievirus+A16+capsid+inactivate+viral+particles+and+prevent+viral+binding.">Small molecules targeting coxsackievirus A16 capsid inactivate viral particles and prevent viral binding.</a> Emerging Microbes &amp; Infections. 7, 162 (2018).</li><li>Flint, S. J., Enquist, L. W., Racaniello, V. R., Skalka, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principles of Virology. , (2008).</li><li>Velu, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BPR-3P0128+inhibits+RNA-dependent+RNA+polymerase+elongation+and+VPg+uridylylation+activities+of+Enterovirus+71.">BPR-3P0128 inhibits RNA-dependent RNA polymerase elongation and VPg uridylylation activities of Enterovirus 71.</a> Antiviral Research. 112, 18-25 (2014).</li><li>Tai, C. J., Li, C. L., Tai, C. J., Wang, C. K., Lin, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+Viral+Entry+Assays+for+the+Identification+and+Evaluation+of+Antiviral+Compounds.">Early Viral Entry Assays for the Identification and Evaluation of Antiviral Compounds.</a> Journal of Visualized Experiments. , e53124 (2015).</li><li>Lang, P. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DOCK+6:+combining+techniques+to+model+RNA-small+molecule+complexes.">DOCK 6: combining techniques to model RNA-small molecule complexes.</a> RNA. 15, 1219-1230 (2009).</li><li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coxsackievirus+A16+utilizes+cell+surface+heparan+sulfate+glycosaminoglycans+as+its+attachment+receptor.">Coxsackievirus A16 utilizes cell surface heparan sulfate glycosaminoglycans as its attachment receptor.</a> Emerging Microbes &amp; Infections. 6, 65 (2017).</li><li>Waterhouse, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SWISS-MODEL:+homology+modelling+of+protein+structures+and+complexes.">SWISS-MODEL: homology modelling of protein structures and complexes.</a> Nucleic Acids Research. 46, W296-W303 (2018).</li></ol>

I denna rapport beskrev vi de protokoll som är användbara för identifiering av antivirala kandidater som inriktar sig på viral inmatning, särskilt mot icke-höljeförsedda CVA16. Analyserna är utformade på ett sätt att dissekera de tidiga händelserna under viral Entry, vilket är bra att klargöra mekanismen (s) åtgärder och potentiella mål (er) av test agenterna ' antiviral aktivitet. "Tid-för-drog-addition-analysen" medger att i stort sett fastställa det potentiella målet för test föreningarna, till ex...

Hand-, mul-och klövsjuka (HFMD) är en sjukdom som oftast orsakas av coxsackievirus A16 (CVA16) och enterovirus 71 (EV71) hos små barn. Nyligen i hela Asien och Stillahavsområdet, det har varit en betydande uptick i CVA16-inducerad HFMD. Medan symtomen kan vara lindriga, allvarliga komplikationer kan förekomma som påverkar hjärnan och hjärtat, med potentiell dödsfall1,2. För närvarande finns det inga licensierade antivirala terapier eller vaccinationer tillgängliga för CVA16, och därför finns det ett trängande behov av att utveckla antivirala strategier för att bromsa framtida utbrott och tillhörande komplikationer.
CVA16 är en icke-höljeförsedda virus som har en ikosaedrisk kapsid monteras från pentamers att varje innehåller 4 strukturella proteiner nämligen VP1, VP2, VP3, och VP4. Omslutande varje femfaldig axel i pentamer är en "Canyon" region som visar som en depression och är känd för sin roll i receptorbindning3. Längst ner i denna kanjon ligger en hydrofoba ficka i VP1 regionen som innehåller en naturlig fet ligand som heter sfingosin (SPH). Cellulära receptorer, såsom humant P selektin glykoprotein ligand 1 (psgl-1) och Scavenger receptor klass B medlem 2 (SCARB2), har föreslagits för att spela en roll i viral bindning genom att förtränga denna ligand vilket resulterar i överensstämmande förändringar till kapsid och efterföljande utmatning av viral genomet till värdcellen4,5,6. Identifiera möjliga hämmare som blockerar de successiva händelserna i viral Entry-processen kan ge potentiella terapeutiska strategier mot CVA16 infektion.
Stegen i virusets livscykel kan dissekeras genom experimentella metoder som mål för att hjälpa till att identifiera läge-specifika antivirala medel. En tid-av-drog-addition analys undersöker läkemedelsbehandling effekt vid olika tidpunkter under virusinfektion, inklusive pre-entry (läggas före virusinfektion), inträde (läggas till samtidiga viruset infektion), och post-entry (läggas till efter virusinfektion)7. Effekten kan bedömas med hjälp av en vanlig plack-analys genom att kvantitera antalet virala plack som bildas i vart och ett av behandlings villkoren. Flödet cytometry-baserade viral binding assay avgör om drogen förhindrar viral fastsättning att vara värdceller. Detta uppnås genom att temperaturen förskjuts från 37 ° c, vid vilken majoriteten av humana virusinfektioner uppträder, till 4 ° c, där virionerna kan binda till värdcellytan men inte kan komma in i cellerna7. De cellmembran bundna viruspartiklarna kvantifieras sedan genom immunofärgning mot virala antigener och bedöms av flödescytometri. Viral inaktivering assay å andra sidan hjälper till att bedöma potentiella fysiska interaktioner av drogen med fria viruspartiklar, antingen avskärmning eller neutralisera virionerna, eller orsakar aggregeringar eller överensstämmande förändringar som gör dem inaktiva för efterföljande interaktioner med värd cells ytan under infektionen8,9. I detta experiment, viral inokulum är tillåtet att först Inkubera med drogen innan de späds att titrera ut drogen innan infektera värdcellen enskiktslager och utföra en standard plack assay8. Slutligen, molekylär dockning är ett kraftfullt verktyg för att förutsäga potentiella läkemedelsinteraktioner webbplatser på spjälkat virus ytan, inklusive viral glykoproteiner från höljeförsedda virus och viral kapsid proteiner från icke-höljeförsedda virus, med hjälp av Computational Algoritmer. Detta bidrar till att mekanistiskt precisera mål av läkemedlets verkningssätt och ge användbar information som kan ytterligare valideras av nedströms analyser.
Vi anställde nyligen ovan beskrivna metoder för att identifiera antivirala föreningar som effektivt blockerade infektion av icke-höljeförsedda CVA169. Häri beskrivs och diskuteras de detaljerade protokollen som användes.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:824px;" width="824">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">4% Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:205px;">Sigma</td>
			<td style="width:171px;">AL-158127-500G</td>
			<td style="width:232px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Alexa 488-conjugated anti-mouse IgG</td>
			<td style="width:205px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:171px;">A11029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Amphotericin B</td>
			<td style="width:205px;">GIBCO</td>
			<td style="width:171px;">15290-018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:216px;">Anti-VP1 antibody</td>
			<td style="width:205px;">Merck-Millipore</td>
			<td style="width:171px;">MAB979</td>
			<td style="width:232px;">Anti-Enterovirus 71 Antibody, cross-reacts with Coxsackie A16, clone 422-8D-4C-4D</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Beckman Coulter Cytometer</td>
			<td style="width:205px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:171px;">FC500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Corina</td>
			<td style="width:205px;">Molecular Networks GmbH</td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Crystal violet</td>
			<td style="width:205px;">Sigma</td>
			<td style="width:171px;">C3886-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">DMEM</td>
			<td style="width:205px;">GIBCO</td>
			<td style="width:171px;">11995-040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">DMSO</td>
			<td style="width:205px;">Sigma</td>
			<td style="width:171px;">D5879</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">FBS</td>
			<td style="width:205px;">GIBCO</td>
			<td style="width:171px;">26140-079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Formaldehyde</td>
			<td style="width:205px;">Sigma</td>
			<td style="width:171px;">F8775</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Graphpad Prism</td>
			<td style="width:205px;">GraphPad</td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Heparin sodium salt</td>
			<td style="width:205px;">Sigma</td>
			<td style="width:171px;">H3393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">In vitro toxicology assay kit, XTT-based</td>
			<td style="width:205px;">Sigma</td>
			<td style="width:171px;">TOX2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Methylcellulose</td>
			<td style="width:205px;">Sigma</td>
			<td style="width:171px;">M0512-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">PBS pH 7.4</td>
			<td style="width:205px;">GIBCO</td>
			<td style="width:171px;">10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:205px;">GIBCO</td>
			<td style="width:171px;">15070-063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">PyMol</td>
			<td style="width:205px;">Schr&#246;dinger</td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">UCSF Chimera</td>
			<td style="width:205px;">University of California, San Francisco</td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of viral entry assays and molecular docking analysis for the identification of antiviral candidates against coxsackievirus a16

Antiviral analyser som mekanistiskt undersöka viral inträde är relevanta för att urskilja vid vilken steg de utvärderade agenterna är mest effektiva, och möjliggöra identifiering av kandidaten viral Entry-hämmare. Här presenterar vi experimentella metoder för identifiering av små molekyler som kan blockera infektion av den icke-höljeförsedda coxsackievirus A16 (CVA16) genom att rikta in viruspartiklarna eller specifika steg i tidig viral inmatning. Analyser inkluderar tid-av-drog-addition analys, flödescytometri-baserade viral binding assay, och viral inaktivering assay. Vi presenterar också ett molekylärt docknings protokoll som utnyttjar virus kapsid proteiner för att förutsäga potentiella rester riktade av de antivirala föreningarna. Dessa analyser bör bidra till att identifiera kandidat antivirala medel som verkar på viral inträde. Framtida riktningar kan utforska dessa möjliga hämmare för ytterligare läkemedelsutveckling.

Den tid-för-drog-addition assay anges i figur 1 och visar påverkan från behandling med hjälp av små molekyler CHLA och pug på CVA16 infektion antingen pre-viral inträde (förbehandling), under viral entry (co-tillägg), eller post-viral inträde ( efter infektion). Båda små molekylerna producerade endast marginell påverkan mot CVA16 smittsamhet vare sig vid förbehandling av värdcellerna före virusinfektion (figur 1a)...

Watch this Scientific Journal Video about Use of Viral Entry Assays and Molecular Docking Analysis for the Identification of Antiviral Candidates against Coxsackievirus A16 at JoVE.com

Use of Viral Entry Assays and Molecular Docking Analysis for the Identification of Antiviral Candidates against Coxsackievirus A16

Användning av viral Entry-analyser och molekylär docknings analys för identifiering av antivirala kandidater mot Coxsackievirus A16

Målet med protokollet är att illustrera de olika analyser som avser viral inmatning som kan användas för att identifiera kandidat virus inläggs hämmare.

Antiviral assays that mechanistically examine viral entry are pertinent to discern at which step the evaluated agents are most effective, and allow for ...

Detta protokoll kan stöd i upptäckten av potentiella antivirala små molekyler genom en mekanism driven strategi. Tiden för additionsanalys bestämmer vid vilket steg av infektionen den lilla molekylen uppvisar dess antivirala aktivitet. Molekylär dockning förutsäger samspelet mellan den lilla molekylen och virusproteinerna.För att utvärdera påverkan av läkemedel på värdceller före virusinfektion, utsäde RD celler i 12-brunn plattor på en två gånger 10 till de femte cellerna per välplätering densitet. Inkubera cellerna i 37 grader Celsius i en 5%koldioxidinkubator över natten. Nästa morgon, behandla varje brunn av RD monolayer med en testförening av intresse, i tre exemplar, vid giftfria koncentrationer i en milliliter basalt medium för en eller fyra timmar.I slutet av behandlingsinkubationen tvättar du cellerna med en milliliter PBS innan du lägger till 50 plackbildande enheter av virus i 300 mikroliter basalt medium per brunn i en timme, med gungande var 15:e minut. Vid slutet av infektionsinkubationen, tvätta cellerna med PBS och överlagra cellerna med en milliliter färskt basalt medium som innehåller 0,8%metylcellulosa. Efter 72 timmar i inkubatorn för cellodling tvättar du varje brunn med två milliliter PBS och fixerar cellerna med 0,5 milliliter 37%formaldehyd per brunn i 15 minuter.Vid slutet av fixeringen tvättar du brunnarna med PBS och färgar cellerna med 0,5 milliliter 0,5%kristallviolettlösning per brunn. Efter två minuter, tvätta brunnarna med en mild ström av vatten och låt plattan lufttorka. Placera sedan plattan på en vit ljuslåda för räkning och beräkna procenten av coxsackievirusinfekterade celler enligt formeln.För molekylär dockningsanalys, ladda ner 3D-molekyler av testföreningarna från PubChem. Om en molekyl inte har en 3D-struktur uppladdad, ladda ner 2D-strukturen eller använd SMILE-strängsekvensen för att omvandla strukturen till en 3D-molekyl via ett lämpligt molekylärt program. Därefter ladda ner en viral biologisk monteringsenhet från RCSB Protein Data Bank.Med hjälp av ett lämpligt bio-computing program, radera lösningsmedel från Protein Data Bank filen, ersätta ofullständiga sidokedjor med hjälp av data från Dunbrack 2010 rotamer biblioteket och lägga väten och avgifter till strukturen som tidigare rapporterats. För att docka testföreningarna på den förberedda virusenheten, ladda upp testblandningsfilen till University of California San Francisco Chimera som ligand och välj hela det beredda virusproteinet som receptorn för att utföra blind dockning. För ytterligare dockning begränsar du dockningsplatsen till det virala proteinet till regioner av intresse som härrör från blinddockningsresultaten genom att minska sökvolymen ytterligare.Sedan ladda upp dockningsfilen i en lämplig molekylär grafik system för att analysera bindning läge positioner. Välj liganden för att hitta polära kontakter från föreningen till virusproteinet, identifiera de polära kontakterna med alternativet till alla atomer. Båda de små molekyler som testades i detta representativa experiment, endast produceras en marginell inverkan mot coxsackievirus A16 smittsamhet, vare sig i förbehandling av värdceller före virusinfektion eller i efter infektion behandling.Däremot upphävde molekylerna effektivt infektionen med större än 80%i co-addition behandling, vilket tyder på att de två föreningarna är de mest effektiva när de är samtidigt närvarande med viruspartiklar på värdcellsytan under infektionen. Flödescytometri baserad bindningsanalys bekräftar att de två tanniner hindrade coxsackievirus A16 smittsamhet inträde genom att förhindra viral partikel bindning till värdcellerna. Molekylär dockning av tanniner indikerar att de båda förutspås binda i kanjonregionen av coxsackievirus pentamer, strax ovanför fickan ingången som håller fickan faktor och spelar en viktig roll för medla coxsackievirus bindning och inträde i värdcellen.I dessa ytprojektioner kan de unika rester som förutsagts från de små molekylernas polarkontakter runt fickingången observeras, med asparagin-85, lysin-257 och asparagin-417 gemensamt mellan de två tanninerna. För molekylär dockning behöver viralproteinens topologi beaktas vid rangordning av bindningsramarna. Ytterligare experiment kan omfatta testning av den antivirala aktiviteten hos föreningen på rekombinanta virus, med mutationer på aminosyror som upptäckts för att validera deras betydelse för läkemedlets effekt.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

The Use of Drip Flow and Rotating Disk Reactors for Staphylococcus aureus Biofilm Analysis

The Use of Drip Flow and Rotating Disk Reactors for Staphylococcus aureus Biofilm Analysis

Användning av Drip Flow och roterande reaktorer Disk för Staphylococcus aureus Biofilm Analys

Most microbes in nature are thought to exist as surface-associated communities in biofilms.1  Bacterial biofilms are encased within a matrix and attached ...

Quantitative Analyses of all Influenza Type A Viral Hemagglutinins and Neuraminidases using Universal Antibodies in Simple Slot Blot Assays

Kvantitativa analyser av alla influensa typ A Viral Hemagglutinins och neuroaminidaser använda Universal antikroppar i enkla mätmetoder Slot Blot

Hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) are two surface proteins of influenza viruses which are known to play important roles in the viral life cycle ...

Amplifying and Quantifying HIV-1 RNA in HIV Infected Individuals with Viral Loads Below the Limit of Detection by Standard Clinical Assays

Förstärka och kvantifiera HIV-1 RNA i hiv-infekterade individer med virusnivåer under gränsen för upptäckt med vanliga kliniska analyser

Amplifying viral genes and quantifying HIV-1 RNA in HIV-1 infected individuals with viral loads below the limit of detection by standard assays (below ...

Assays for the Identification of Novel Antivirals against Bluetongue Virus

Analyser för identifiering av nya Virushämmande medel mot blåtungevirus

To identify potential antivirals against BTV, we have  developed, optimized and validated three assays presented here. The CPE-based  assay was the first ...

Viral Concentration Determination Through Plaque Assays: Using Traditional and Novel Overlay Systems

Viral Koncentration Fastställande Genom plackanalyser: med hjälp av traditionella och Novel Overlay Systems

Plaque assays remain one of the most accurate methods for the direct quantification of infectious virons and antiviral substances through the counting of ...

Immunofluorescence to Monitor the Cellular Uptake of Human Lactoferrin and its Associated Antiviral Activity Against the Hepatitis C Virus

Immunofluorescens att Övervaka Cellular Upptag av humant laktoferrin och dess associerade antiviral aktivitet mot hepatit C-virus

Immunofluorescence is a laboratory technique commonly used to study many aspects of biology. It is typically used to visualize the distribution and/or ...

Early Viral Entry Assays for the Identification and Evaluation of Antiviral Compounds

Tidig viralt inträde Analyser för identifiering och utvärdering av antivirala föreningarna

Cell-based systems are useful for discovering antiviral agents. Dissecting the viral life cycle, particularly the early entry stages, allows a mechanistic ...

The Development of Lyophilized Loop-mediated Isothermal Amplification Reagents for the Detection of Coxiella burnetii

The Development of Lyophilized Loop-mediated Isothermal Amplification Reagents for the Detection of Coxiella burnetii

Utvecklingen av lyofiliserad Loop-medie Isothermal amplifieringsreagenserna för detektion av<em&gt; Coxiella burnetii</em

Coxiella burnetii, the agent causing Q fever, is an obligate intracellular bacterium. PCR based diagnostic assays have been developed for detecting C. ...

Swab Sampling Method for the Detection of Human Norovirus on Surfaces

Pinnurvalsmetoden för påvisande av humana Norovirus på ytor

Human noroviruses are a leading cause of epidemic and sporadic gastroenteritis worldwide. Because most infections are either spread directly via the ...