Name: murine appendectomy model of chronic colitis associated colorectal cancer by precise localization of caecal patch
Uploaded: 2019-08-24T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch at JoVE.com

ويدعم هذا العمل جزئيا صناديق البحوث الأساسية للجامعة المركزية (G2018KY0302)، وصندوق تطوير البحوث الأساسية الجامعية (KT00062)، والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (81870380)، وجائزة البحوث السريرية من أول مستشفى تابع لجامعة شيان جياوتونغ في الصين (NO. XJTU1AF-CRF-2015-029). يشكر المؤلفون الدكتور تشنغشين شي على اقتراحاته التقنية خلال مرحلة الاستكشاف المبكرة لنموذج استئصال الزائدة الدودية، وكذلك عالم الأمراض الدكتور شي ليو لتقييم نتائج تلطيخ H&E من التهاب القولون وأورام القولون والمستقيم. أجرى Y.L. عرض الجراحة، وقام بتحليل البيانات، وكتب مسودة المخطوطة. شارك كل من جي إل، وجي إل، وزد بي، وي. م. في التحضير الجراحي، ومجموعات الأنسجة، وإنتاج الفيديو. M.Z. أداء قياس التدفق وELISA; وقدم كل من Q.W. وH.X. الدعم التقني لتوليد نموذج من المورين ذي الصلة سريرياً؛ قام R.X.Z. بتصميم الدراسة، والإشراف على البحث، وكتب وثبت المخطوطة؛ راجع ج. س. المخطوطة.

تمت الموافقة على جميع الإجراءات الحيوانية من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها في جامعة شيان جياوتونغ (رقم XJTULAC2019-1023).
1- استئصال الزائدة الدودية على الفئران
<ol><li>منزل 8-10 أسابيع من العمر C57BL/6 الفئران الذكور في بيئة معتمدة محددة مسببات الأمراض (SPF) لمدة أسبوع وا?...

تم الحصول على نموذج استئصال الزائدة الدودية murine من سرطان القولون والمستقيم المرتبط بالتهاب القولون والمستقيم المرتبط ة بالتهاب القولون والأمعاء باستخدام الخطوات الجراحية مع ارتفاع معدل البقاء على قيد الحياة في الفئران. وفي معظم الحالات، بما أن الcaecum كان متمركزًا تحت جدار البطن (الجدول<s...

استئصال الزائدة الدودية السريرية هو إجراء جراحي قياسي ينطوي على إزالة التذييل في الغالب بسبب التهاب (على سبيل المثال، التهاب الزائدة الدودية)1،2،3. ومع ذلك، فإن الوظيفة البيولوجية للتذييل البشري vermiform لا تزال مثيرة للجدل4،5،6. وقد اعتبر التذييل كبقايا دهليزية إسقاط من cecum في الأمعاء الغليظة. وحتى وقت قريب، أشارت الدراسات التطورية والمناعية والمورفولوجية والميكروبيولوجية إلى أن التذييل قد يكون له وظائف متميزة. وتشمل هذه الأدوار إنتاج الغلوبين المناعي (على سبيل المثال، IgA وIgG)، ومجموعة متنوعة من الخلايا B والخلايا T الحرجة للاستجابات المناعية التكيفية داخل الأنسجة اللمفاوية المرتبطة بالأمعاء (GALTs)، وتجديد الأمعاء الغليظة مع ميكروبيوتا كومينسال 6 , 7 , 8 , 9 , 10 سنوات , 11 , 12.
كما كشفت الدراسات الوبائية السريرية للمرضى الذين يعانون من استئصال الزائدة الدودية السابقة أو التهاب الزائدة الدودية الحاد أدوارها المحتملة في مسببات الأمراض البشرية، مثل مرض الأمعاء الالتهابي (IBD)، وسرطان القولون والمستقيم، وغير الجهاز الهضمي اضطرابات (على سبيل المثال، مرض باركنسون وأمراض القلب والأوعية الدموية)13،14،15،16،17،18. على سبيل المثال، أظهرت دراسة أترابية كبيرة للسكان الآسيويين مع 75,979 مريض استئصال الزائدة الدودية مؤخرا وجود ارتباط كبير بين استئصال الزائدة الدودية والتطور اللاحق لسرطان القولون والمستقيم، واحدة من الأورام الخبيثة الأكثر شيوعا مع ارتفاع معدل الإصابة و 14،19. وبناء على ذلك، فإن إنشاء نموذج مناسب لاستئصال الزائدة الدودية الحيوانية يشبه الإنسان سيكون مفيدا ً في التحقيق في الوظائف البيولوجية والآليات الجزيئية للتذييل في مسببات الأمراض.
تمتلك العديد من الثدييات جهازًا يشبه التذييل أو التذييل، بما في ذلك الرئيسيات، واللاغومورفي (مثل الأرانب)، وبعض القوارض، وmarsupials20. للالحيوانات المختبرية الصغيرة والشائعة الاستخدام، والأرنب تمتلك التذييل vermiform تشبه بشكل شكلي الإنسان21،22، ولكن GALT في الأرنب كبيرة للغاية بالمقارنة مع ذلك في البشر ، منذ غالبية كما توجد الأنسجة اللمفاوية في بقع باير الموجودة في كل من الأمعاء الصغيرة والغليظة21. بالإضافة إلى ذلك، يظهر الأرنب بنية مختلفة من الحويصلات اللمفاوية، وتوزيع الخلايا T، وكثافة الغلوبولين المناعي من الإنسان، مما يجعل دراسة التذييلات غير مناسبة21.
الفئران هي النموذج الحيواني الأكثر استخداما لدراسة الفيزيولوجيا المرضية البشرية واختبار مختلف الثيرابويتكس الموجودة والجديدة23،24،25. ويعتقد أن كتلة لمفية بيضاء واحدة كبيرة في قمة caecum في الفئران، والمعروفة باسم التصحيح caecal، لأداء وظائف مماثلة للتذييل البشري26،27،28. ومع ذلك، فإنه من الصعب عمليا لفصل التصحيح caecal من caecum في الفئران. حتى الآن، الإجراءات الجراحية الشائعة لتحريض التهاب الزائدة الدودية في نموذج الماوس تنطوي على شق كبير نسبيا (على سبيل المثال، 1-2 سم) من خلال جدار البطن للوصول إلى caecum كله (الجدولالتكميلي1)29، 30،31،32،33،34،35،36.
هنا، لتوليد نموذج استئصال الزائدة الدودية المرتبطة بأمراض الجهاز الهضمي، يقدم هذا التقرير بروتوكول الجراحية سهل لإزالة التصحيح caecal في الفئران. ويلي ذلك الإدارة المشتركة للعامل السامة للجينوية AOM والوكيل المؤيد للالتهابات DSS للحث على سرطان القولون والمستقيم المرتبط بالتهاب القولون والقولون والمستقيم مماثلة لتلك التي ينظر إليها في البشر. وقد ثبت أن IBD عامل خطر الإصابة بسرطان الأمعاء37،38. وقد تم تأسيس مزيج من AOM / DSS الناجمة عن سرطان القولون والمستقيم المزمن المرتبطة التهاب القولون والمستقيم ، ويمكن للقراء الرجوع إلى Neufert وآخرون ، وThaker وآخرون للإجراءات التفصيلية39،40. يمكن استخدام هذا النموذج القابل للتكرار والسريع لاستئصال الزائدة الدودية لدراسة التهاب الأمعاء المُعدَّل بالتذييل وميكروبيوتا القولون، وخاصة في تطور وتطور سرطان القولون والمستقيم.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Azoxymethane&#65288;AOM</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Inc.</td>
			<td>A5486</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran Sulfate Sodium Salt&#65288;DSS</td>
			<td>MP Biomedicals,Inc.</td>
			<td>160110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Entoiodine</td>
			<td>Shanghai likon high technology disinfection co. LTD</td>
			<td>310102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>digital caliper</td>
			<td>Ningbo yuanneng trading co. LTD</td>
			<td>4859263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 Silk Sutures</td>
			<td>Yuanlikang co. LTD</td>
			<td>20172650032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 Prolene Sutures</td>
			<td>Yuanlikang co. LTD</td>
			<td>20172650032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric coagulation pen</td>
			<td>Chuang mei medical equipment co. LTD</td>
			<td>28221777292</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disposable syringe 1ml</td>
			<td>Shengguang medical products co. LTD</td>
			<td>3262-2014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disposable syringe 10ml</td>
			<td>Shengguang medical products co. LTD</td>
			<td>3262-2014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% Medicinal alcohol</td>
			<td>Shandong anjie high-tech disinfection technology co. LTD</td>
			<td>371402AAJ008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Inc.</td>
			<td>57-33-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Physiological Saline</td>
			<td>Shandong qidu pharmaceutical co. LTD</td>
			<td>H37020766</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Cotton Swab</td>
			<td>Henan ruike medical co., LTD</td>
			<td>RK051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Instruments-Ophthalmic</td>
			<td>Jinzhong Shanghai co.LTD</td>
			<td>WA3050</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine appendectomy model of chronic colitis associated colorectal cancer by precise localization of caecal patch

وقد تورط التذييل البشري مؤخرا للعب أدوار بيولوجية هامة في مسببات الأمراض من مختلف الأمراض المعقدة، مثل سرطان القولون والمستقيم، وأمراض الأمعاء الالتهابية، ومرض باركنسون. لدراسة وظيفة التذييل، تم إنشاء نموذج استئصال الزائدة الدودية المورين المرتبطة بأمراض الأمعاء ويرد وصف بروتوكوله خطوة بخطوة هنا. يقدم هذا التقرير بروتوكول سهل لإزالة التصحيح القحيفي في الفئران متبوعاً بالحث الكيميائي لسرطان القولون والمستقيم المزمن المرتبط بالتهاب القولون والمستقيم باستخدام مزيج من كبريتات الدإكستران الصوديوم (DSS) وأزوكسيميثان (AOM). تم تخفيض الخلايا المحددة IgA وتركيز IgA بشكل كبير عند إزالة التصحيح caecal في الفئران C57BL/6 الذكور مقارنة مع تلك الموجودة في مجموعة الشام. في وقت واحد إدارة 2٪ DSS وAOM أدى إلى ما يقرب من 80٪ بقاء الفئران في كل من مجموعات الشام واستئصال الزائدة الدودية دون فقدان كبير لوزن الجسم. أكدت النتائج النسيجية التهاب القولون ودرجات مختلفة من سرطان الغدة الدرقية. ويمكن استخدام هذا النموذج لدراسة الدور الوظيفي للتذييل في الحفاظ على الأمعاء المجهرية التوازن ومسببات الأمراض من التهاب القولون الأمعاء والأورام الخبيثة، وكذلك لتطوير محتمل للعلاجات استهداف المخدرات.

إنشاء نموذج استئصال الزائدة الدودية murine
يمكن إنشاء نموذج استئصال الزائدة الدودية هذا من التهاب القولون المزمن المرتبط بسرطان القولون والمستقيم باتباع الخطوات الجراحية والتعريفية المتسلسلة كما هو موضح في الشكل 1. المواقف الأكثر شيوعا من caecum هي في ...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch at JoVE.com

Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch

يصف البروتوكول المعروض إزالة جراحية سهلة للتذييل (تصحيح caecal) في فأر يتبعه تحريض سرطان القولون والمستقيم المرتبط بمرض الأمعاء الالتهابي. هذا النموذج استئصال الزائدة الدودية murine تمكن من التحقيق في الدور البيولوجي للتذييل في مسببات الأمراض من أمراض الجهاز الهضمي البشري.

نموذج استئصال الزائدة الدودية Murine من التهاب القولون المزمن المرتبطة سرطان القولون والمستقيم عن طريق توطين دقيق من التصحيح Caecal

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal ...

يصف البروتوكول العام الإجراءات الجراحية التي يتم تنفيذها بسهولة لإزالة التذييل المعروف باسم التصحيح caecal في الفئران. يمكن استخدام نموذج استئصال الزائدة الدودية المورين لدراسة الأدوار البيولوجية للتذييل في التسبب في أمراض الجهاز الهضمي البشري. التذييل البشري هو عضو متنازع عليه.وقد أشارت الدراسات الحديثة إلى أن الملحق يلعب دورا هاما في الحفاظ على صحة الأمعاء. لدراسة الوظيفة البيولوجية للتذييل، فإن توليد نموذج حيواني مرتبط باستئصال الزائدة الدودية مرتبط بالمرض أمر بالغ الأهمية. في هذا البروتوكول، سوف نصف خطوات بسيطة وآمنة الجراحية لإزالة الزائدة الدودية، والمعروفة باسم التصحيح caecal في الفئران.لضمان نجاح هذا النموذج، هناك ثلاث خطوات رئيسية كما سترى في الفيديو التالي. أولاً، حدد مكان فئران الفئران قبل الجراحة. ثانياً، قم بعمل شق صغير في البطن.ثالثا ، تطهير وإغلاق جذع caecum. الجزء الأول، استئصال الزائدة الدودية الفئران. إعداد أدوات جراحية معقمة وحلول تنظيف قبل الجراحة.تخدير وتأمين الماوس على منصة في وضع supine عن طريق وضع أربعة شرائط من شريط لاصق طبي عبر الأطراف لمنع حركة الوضعية أثناء الجراحة. بلطف لمس البطن كله من الماوس للعثور على الشعور عثرة. تغطية الستائر وتطهير منطقة حلق من البطن الماوس واسعة قدر الإمكان باستخدام مرتين من اليود.إجراء شق طولي يتراوح بين 0.5 سنتيمتر إلى سنتيمتر واحد في منتصف البطن. وفقا لموقع محدد سلفا من caecum، والبحث عن caecum وإضفاء مظهر بلطف لمدة سنتيمتر واحد تقريبا لتحديد التصحيح caecal. استخدم محلولًا فسيولوجيًا مُدفأًا مسبقًا ومعقّمًا لترطيب الأمعاء.لمنع المضاعفات المحتملة من نزيف ما بعد العملية الجراحية والعدوى، ligate الأوعية الدموية mesenteric من caecum باستخدام 8-0 خياطه. هيدرات caecum مع المالحة. وضع علامة على منطقة استئصال باستخدام خياطة 4-0 مع حلقة مفتوحة بالقرب من قمة caecum في القولون القريب.قطع التصحيح caecal تحت استئصال ملحوظ باستخدام مقص صغير والقضاء على محتوى caecal المتبقية مع مسحات القطن الطبية. تطهير جذع من caecum مع اليود. إغلاق الجذع مع خياطة تشغيل باستخدام 8-0 خياطه.إزالة بعناية حلقة الموضوع 4-0، المستخدمة سابقا لوضع علامة على استئصال في جذع caecum. تعقيم الموقف خياطة باستخدام اليود. إعادة هيدرات منطقة القطع مع المالحة.إغلاق طبقة العضلات مع خياطة تشغيل باستخدام 8-0 الخيط خياطة. أغلق طبقات الجلد باستخدام خياطة متقطعة مع 4-0 خياطة الخيط. تطهير قطع الجراحية مرتين مع اليود.ثم، إزالة اليود باستخدام 75٪ الكحول الطبية. الوجه بلطف الماوس مرة أخرى. حقن تحت الجلد 0.1 مليغرام لكل كيلوغرام من وزن الجسم من البوبرينورفين، و 0.4 ملليلتر من المالحة الفسيولوجية.وبقية الماوس على وسادة الحرارة، حتى يعود إلى وعيه. وضع الماوس مرة أخرى إلى القفص العقيم، ومراقبة عن كثب الماوس لعلامات الألم لمدة ثلاثة أيام بعد الجراحة لضمان شفائها. الجزء الثاني: تحريض سرطان القولون المرتبط بالتهاب القولون مع أزوكسي الميثان، AOM، وDextran كبريتات الصوديوم، DSS، سبعة أيام بعد استئصال الزائدة الدودية.ذوبان aliquot واحد من AOM وتمييعه إلى 1 مليغرام لكل ملليلتر باستخدام 0.9٪ المالحة العادية. تتم عملية التحضير بأكملها في غطاء الدخان. قم بحل أربعة غرامات مسحوق DSS في 200 ملليلتر محلول المياه autoclaved لإعداد 2٪ DSS.كل قفص يحتوي على خمسة فئران. جعل حقن داخل الصفاق من AOM مع 0.01 ملليلتر لكل غرام لكل فأرة على أساس وزنه. استبدال المياه autoclaved مع 2 ٪ DSS لمدة خمسة أيام.سيتم تغذية الفئران بالماء المُقلَد ذاتيًا لدورتين إضافيتين. الجزء الثالث: النتائج. تدفق و ELISA النتائج تشير إلى إزالة ناجحة من التصحيح caecal.هذا الإجراء يمكن أن تسهم في خفض كبير من خلايا البلازما IgA محددة, تغيير واضح من IgA الإفرازية في الأمعاء الغليزية, مقارنة مع 3٪ DSS, التي لديها معدل وفيات عالية وتغير كبير في الوزن بسبب البراز الدموي الشديد, الشرج التدلى, والبطن abces. و 2٪ DSS مناسبة للعملية برمتها لمعدل البقاء على قيد الحياة عالية إلى ما يقرب من 80٪ وتغيير الوزن المعقول في كل من الصورية ومجموعات استئصال الزائدة الدودية. كما هو موضح في هذه الصور، قمنا بنجاح بتسبّب أورام القولون المرتبطة بالتهاب القولون.في صور تلطيخ H&E، يشير السهم الأسود إلى القرحة المخاطية، ويشير رأس السهم إلى الورم الغدي، ويشير السهم الأبيض إلى تسلل العدلات بين الغدد. يمكن رؤية مراحل مختلفة من غدية في كل من الصورية ومجموعات استئصال الزائدة الدودية. يمكن استخدام هذا النموذج الزائدي المورين فعالة من حيث التكلفة للإجابة على بعض الأسئلة الهامة مثل: ما هو دور التذييل في تنظيم بكتيريا الأمعاء وكيف يشارك في الاستجابة المناعية في الأنسجة اللمفاوية المرتبطة الأمعاء.تذكر، لتجنب الضرر في التصاق الأمعاء، قبل موقع caecum وشق الجلد الصغيرة مهمة. بالإضافة إلى ذلك، استخدمنا 2٪ DSS للحث على التهاب القولون. ولكن يمكن استخدام تركيز أعلى من DSS لسلالات الفئران الأخرى.

Research

JoVE Journal

Medicine

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

نموذج مثلي من سرطان المثانة الفئران

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane (AOM) and Dextran Sulfate Sodium (DSS)

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane AOM and Dextran Sulfate Sodium DSS

النمذجة التهاب القولون المتعاونة مع السرطان مع Azoxymethane (AOM) ودكستران كبريتات الصوديوم (DSS)

Individuals with inflammatory bowel disease (IBD), such as Crohn's disease (CD) or ulcerative colitis (UC) are at increased risk of developing colorectal ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

على الفئران نموذج مثلي من سرطان البروستاتا البشرية الانبثاث

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

التنميط الجزيئي للالمكروية ورم الغازية في نموذج 3 الأبعاد للخلايا سرطان القولون والمستقيم و<em&gt; خارج الحي</em&gt; الخلايا الليفية

Invading colorectal cancer (CRC) cells have acquired the capacity to break free from their sister cells, infiltrate the stroma, and remodel the ...

Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

الأقلمة، تحديد الهوية، واستئصال مستودعات الفئران الدهنية

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 ...

Murine Model of Femoral Artery Wire Injury with Implantation of a Perivascular Drug Delivery Patch

نموذج الفئران من فخذي الشريان إصابة سلك مع غرس المحيطة بالأوعية تسليم المخدرات التصحيح

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

Murine Isolated Heart Model of Myocardial Stunning Associated with Cardioplegic Arrest

عزل فأري موديل قلب عضلة القلب مذهل المصاحبة اعتقال شلل القلب

The following protocol is of use to evaluate impaired cardiac function or myocardial stunning following moderate ischemic insults. The technique is useful ...

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

ما قبل السريرية مثلي فأري موديل سرطان البروستاتا البشرية

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

التصور الكمي من التسلل الكريات البيض في نموذج الفئران من التهاب عضلة القلب مداهم من قبل ورقة ضوء المجهري

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...