Name: murine appendectomy model of chronic colitis associated colorectal cancer by precise localization of caecal patch
Uploaded: 2019-08-24T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch at JoVE.com

עבודה זו נתמכת באופן חלקי על ידי קרנות המחקר הבסיסי של האוניברסיטה המרכזית (G2018KY0302), האוניברסיטה הבסיסית לפיתוח מחקר באוניברסיטת (KT00062), הלאומי המדע הטבעי הקרן של סין (81870380), ואת פרס המחקר הקליני של בית החולים המסונף הראשון של אוניברסיטת שיאן Jiaotong בסין (לא. XJTU1AF-2015-029). המחברים מודים ד ר Chengxin Shi עבור הצעות טכניות שלו במהלך השלב הקודם של המחקר של המודל להסרת תוספתן murine, כמו גם הפתולוג ד ר. Xi Liu עבור הערכה של H & E כתמים תוצאות של גידולים קוליטיס המעי הגס. י ביצעה את הפגנת הניתוח, עשתה ניתוח נתונים וכתב את טיוטת כתב היד; J.L., G.L., Z.P., ו Y.M. נטלו חלק בהכנה כירורגית, אוספי רקמות והפקת וידאו; M.Z. ביצע את הזרימה cy try ו-אליסה; Q.W. ו H.X. סיפק את התמיכה הטכנית של יצירת מודל מורטין רלוונטי קלינית; R.X.Z. עיצב את המחקר, הפיקוח על המחקר, וכתב והוא הלחין את כתב היד; י. ס. בחנה את כתב היד.

כל הליכים בעלי חיים אושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים והשתמש בוועדה של שיאן Jiaotong אוניברסיטת (No. XJTULAC2019-1023).
1. הנדקטומיה של עכברים
<ol><li>בית 8 – 10-שבוע בן C57BL/6 עכברים גברים בסביבה מוסמכת מוסמך הפתוגן חינם (SPF) למשך שבוע אחד לפני הניתוח.</li>
	<li>להכין את הכלים הבאים סטרילי כירורגי:...

מודל להסרת תוספתן מורבית של סרטן המעי הגס הקשורים קוליטיס הושגה באמצעות שלבים כירורגיים עם שיעור הישרדות גבוהה בעכברים. ברוב המקרים, כיוון שהcaecum הוצב תחת קיר הבטן (שולחן משלים 1, הטבלה השלמה 2, ואיור 2), היה קשה לשפוט את מיקומו ללא כריתת אונה. בפרוטוקול כירורגי זה, צע?...

ניתוח התוספתן הקליני הוא הליך כירורגי סטנדרטי מעורבים הסרת התוספתן בעיקר בשל דלקת (למשל, התוספתן)1,2,3. עם זאת, הפונקציה הביולוגית של התוספתן האנושי תוספתן נשאר שנוי במחלוקת4,5,6. התוספתן נחשב כשריד שריד הקרנת מתוך המעי הגס במעיים גדולים. עד לאחרונה, מחקרים אבולוציוניים, אימונולוגיים, מורפולוגיים ומיקרוביולוגית הציעו כי הנספח עשוי להחזיק בפונקציות שונות. תפקידים אלה כוללים את הייצור של החיסוני (g., IgA ו IgG), מגוון של תאים B ו-T תאים קריטיים עבור תגובות החיסונית אדפטיבית בתוך רקמות הלימפה הקשורות המעיים (GALTs), ואת חידוש של המעי הגס עם microsal מיקרוביוטים מיכל בן 6 , מיכל סבן , בן שמונה , מיכל בן 10 , מיכל עשור , מיכל בן 11 , . שתיים עשרה
מחקרים אפידמיולוגיים קליני של חולים עם ניתוח להסרת תוספתן מראש או חריפה גם חשף את תפקידה הפוטנציאלי בפתוגנזה של מחלות האדם, כגון מחלת המעי הגס (IBD), סרטן המעי הגס, ולא מערכת העיכול הפרעות (למשל, מחלת פרקינסון ומחלות לב וכלי דם)13,14,15,16,17,18. לדוגמה, אוכלוסיה אסיאתית גדולה מחקר עם 75,979 לאחרונה הראו הקשר משמעותי בין התוספתן והתפתחות הבאים של סרטן המעי הגס, אחד ממאירות הנפוצות ביותר עם שכיחות גבוהה ו תמותה14,19. בהתאם לכך, הקמת מודל מתאים להסרת תוספתן בעלי חיים הדומה לאדם יסייע לחקור את התפקודים הביולוגיים ואת המנגנונים המולקולריים של הנספח בפתוגנזה המחלה.
יונקים רבים מחזיקים בנספח או בעוגב דומה, כולל פרימטים, לאגמורים (למשל, ארנבים), כמה מכרסמים וחיות כיס20. עבור בעלי חיים קטנים ונפוצים במעבדה, הארנב בעל נספח תוספתן מורפולוגית הדומה לאדם21,22, אבל גולט בארנב הוא גדול מאוד לעומת זה בבני אדם, מאז רוב רקמות הלימפה נמצאים גם הטלאים של Peyer ממוקם במעיים קטנים וגדולים21. בנוסף, הארנב מראה מבנה פוליקולרית הלימפה שונים, התפלגות תא T, וצפיפות חיסוני האדם, מה שהופך את הלמידה של הנספחים שלהם הולם21.
עכברים הם המודל החי הנפוץ ביותר כדי ללמוד פתופסיולוגיה האדם ולבדוק את הטיפול הקיימים והחדשניים שונים23,24,25. האשכול הלימפה הגדול הלבן בקודקוד caecum בעכברים, המכונה טלאי caecum, הוא חשב לבצע פונקציות דומה נספח האדם26,27,28. עדיין, זה כמעט קשה להפריד את התיקון caecal מן caecal בעכברים. עד כה, הליכים כירורגי נפוצות לגרימת דלקת התוספתן במודל העכבר כרוך חתך גדול יחסית (למשל, 1 – 2 ס מ) דרך הקיר הבטן כדי לקבל גישה caecum כולו (שולחן משלים 1)29, 30,31,32,33,34,35,36.
להלן, כדי ליצור מודל להסרת תוספתן הקשורים למחלת העיכול, דו ח זה מציג פרוטוקול ניתוח להסרת התיקון caecal בעכברים. זה ואחריו המינהל המשולב של הסוכן הגנומי AOM ו-pro-דלקתיות סוכן DSS עבור אינדוקציה של סרטן המעי הגס הקשורים בדומה לזה שנראה אצל בני אדם. Ibd הוכח להיות גורם סיכון של סרטן המעי37,38. השילוב של aom/DSS-המושרה קוליטיס כרונית סרטן המעי הגס הקשורים כבר היטב, והקוראים יכולים להפנות אל מנופרט אל, ואת הפרטים על הליכים מפורטים39,40. זה מודל הנדנדקטומיה מהיר ומהירה להסרת התוספתן ניתן להשתמש כדי ללמוד נספח-מאופנן דלקת המעי הגס microbiota קולון, במיוחד בפיתוח והתקדמות של סרטן IBD ו המעי הגס.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Azoxymethane&#65288;AOM</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Inc.</td>
			<td>A5486</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran Sulfate Sodium Salt&#65288;DSS</td>
			<td>MP Biomedicals,Inc.</td>
			<td>160110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Entoiodine</td>
			<td>Shanghai likon high technology disinfection co. LTD</td>
			<td>310102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>digital caliper</td>
			<td>Ningbo yuanneng trading co. LTD</td>
			<td>4859263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 Silk Sutures</td>
			<td>Yuanlikang co. LTD</td>
			<td>20172650032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 Prolene Sutures</td>
			<td>Yuanlikang co. LTD</td>
			<td>20172650032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric coagulation pen</td>
			<td>Chuang mei medical equipment co. LTD</td>
			<td>28221777292</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disposable syringe 1ml</td>
			<td>Shengguang medical products co. LTD</td>
			<td>3262-2014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disposable syringe 10ml</td>
			<td>Shengguang medical products co. LTD</td>
			<td>3262-2014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% Medicinal alcohol</td>
			<td>Shandong anjie high-tech disinfection technology co. LTD</td>
			<td>371402AAJ008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Inc.</td>
			<td>57-33-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Physiological Saline</td>
			<td>Shandong qidu pharmaceutical co. LTD</td>
			<td>H37020766</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Cotton Swab</td>
			<td>Henan ruike medical co., LTD</td>
			<td>RK051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Instruments-Ophthalmic</td>
			<td>Jinzhong Shanghai co.LTD</td>
			<td>WA3050</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine appendectomy model of chronic colitis associated colorectal cancer by precise localization of caecal patch

התוספתן האנושי היה מעורב לאחרונה לשחק תפקידים ביולוגיים חשובים בפתוגנזה של מחלות מורכבות שונות, כגון סרטן המעי הגס, מחלות מעי דלקתיות, מחלת פרקינסון. כדי ללמוד את התפקוד של הנספח, מודל מושפע מחלת התוספתן הקשורים murine הוקמה והפרוטוקול צעד אחר צעד שלה מתואר כאן. דו ח זה מציג פרוטוקול נתיישב להסרת תיקון caecal בעכברים ואחריו אינדוקציה כימית של סרטן המעי הגס כרונית הקשורים באמצעות שילוב של דטרן סולפט נתרן (DSS) ו האזובתאן (aom). IgA התאים הספציפיים ריכוז IgA הופחת באופן משמעותי עם הסרת התיקון caecal בזכר C57BL/6 עכברים לעומת אלה בקבוצה המזויף. במקביל ניהול 2% DSS ו AOM הביא כמעט 80% עכברים הישרדות הן התחזות ו לנדקטומיה קבוצות ללא ירידה משמעותית במשקל הגוף. תוצאות היסטולוגית אישר דלקת חוקן ודרגות שונות של אדנוקרצינומה. מודל זה יכול לשמש למחקר של התפקיד הפונקציונלי של הנספח בשמירה על המעיים microbiota המעי הפתוגנזה של הבטן קוליטיס וממאירות, כמו גם עבור פיתוח פוטנציאלי של תרופות לפילוח טיפולים.

הקמת מודל להסרת תוספתן
זה מודל מורנדקטומיה המודל של קוליטיס כרונית הקשורים סרטן המעי הגס יכול להיווצר על ידי ביצוע צעדים כירורגיים רציפים האינדוקציה מומחש באיור 1. המקומות התכופים ביותר של caecum הם בתוך השמאל והימין פוסה ואחריו קו האמצע של הבטן (<strong ...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch at JoVE.com

Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch

הפרוטוקול המוצג מתאר הסרה כירורגית נתיישב של התוספתן (טלאי caecal) בעכבר ואחריו אינדוקציה של מחלת המעי הגס מחלות הקיבה הקשורים סרטן. המודל להסרת התוספתן של murine מאפשר חקירה של התפקיד הביולוגי של התוספתן בפתוגנזה של מחלת העיכול האנושית.

מורנה הנדנדקטומיה מודל של קוליטיס כרונית הקשורים סרטן המעי הגס על ידי לוקליזציה מדויקת של תיקון Caecal

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal ...

הפרוטוקול הכולל מתאר הליכים כירורגיים שבוצעו בקלות של הסרת התוספתן המכונה תיקון caecal בעכברים. מודל כריתת התוספתן מורין יכול לשמש לחקר התפקידים הביולוגיים של נספח בפתוגנזה של מחלת מערכת העיכול האנושית. התוספתן האנושי הוא איבר שנוי במחלוקת.מחקרים שנעשו לאחרונה הראו כי הנספח ממלא תפקיד חשוב בשמירה על בריאות המעיים. כדי לחקור את הפונקציה הביולוגית של נספח, יצירת מודל בעלי חיים הקשורים למחלה הקשורים לתוספתן הוא קריטי. בפרוטוקול זה, נתאר צעדים כירורגיים פשוטים ובטוחים של הסרת נספח, המכונה תיקון caecal בעכברים.כדי להבטיח את הצלחתו של מודל זה, קיימים שלושה שלבים מרכזיים כפי שתראה בסרטון הבא. ראשית, לאתר את caecum של העכברים לפני הניתוח. שנית, לעשות חתך קטן בבטן.שלישית, לחטא ולסגור את גדם caecum. החלק הראשון, כריתת תוספתן של עכברים. הכינו מכשירים כירורגיים סטריליים ופתרונות ניקוי לפני הניתוח.הרדמה ואבטח את העכבר על פלטפורמה בתמרה על-חושית על-ידי הנחת ארבע רצועות של סרט הדבקה רפואי על-פני הגפיים כדי למנוע תנועה יציבה במהלך הניתוח. בעדינות לגעת בכל הבטן של העכבר כדי למצוא את התחושה של בליטה. מכסים את הווילון ומחטאים את האזור המגולח של בטן העכבר רחב ככל האפשר באמצעות פעמיים של אנטויודין.בצע חתך אורך הנע בין 0.5 ס"מ לס"מ אחד במרכז הבטן. על פי המיקום מראש של caecum, לחפש את caecum בעדינות החיצונית אותו במשך סנטימטר אחד בערך כדי לזהות את תיקון caecal. השתמש מלוח פיזיולוגי מחומם מראש סטרילי כדי לחות את המעי.כדי למנוע סיבוכים פוטנציאליים של דימום וזיהום לאחר הניתוח, ligate כלי הדם mesenteric של caecum באמצעות 8-0 תפר. לחות את caecum עם מלוחים. סמן את אזור החלקה באמצעות התפר 4-0 עם לולאה פתוחה ליד לשיא של caecum במעי הגס הפרוקסימלי.חותכים את התיקון caecal מתחת כריתה מסומנת באמצעות מיקרו מספריים ולמחוק את התוכן caecal שיורית עם ספוגיות כותנה רפואית. לחטא את הגדם של caecum עם entoiodine. סגור את הגדם עם תפר פועל באמצעות 8-0 תפר.הסר בזהירות את לולאת הליך המשנה 4-0, ששימשה בעבר לסימון החלקה על הגדם של caecum. לעקר את המיקום ת התפר באמצעות entoiodine. rehydrate אזור החיתוך עם מלוחים.סגור את שכבת השרירים עם תפר פועל באמצעות 8-0 חוט תפר. סגור את שכבות העור באמצעות תפרים מופרעים עם חוט תפר 4-0. לחטא את החתך הכירורגי פעמיים עם entoiodine.לאחר מכן, להסיר יוד באמצעות 75% אלכוהול רפואי. בעדינות להפוך את העכבר בחזרה. להזריק תת עורית 0.1 מיליגרם לקילוגרם משקל גוף של buprenorphine, ו 0.4 מיליליטר של מלוחים פיזיולוגיים.ותנו את העכבר על כרית החום, עד שהוא יחזור להכרה. להחזיר את העכבר לכלוב הסטרילי, ולפקח מקרוב על העכבר לסימני הכאב במשך שלושה ימים לאחר הניתוח כדי להבטיח את החלמתו. החלק השני:אינדוקציה של סרטן המעי הגס הקשורים קוליטיס עם Azoxymethane, AOM, ו Dextran נתרן סולפט, DSS, שבעה ימים לאחר כריתת התוספתן.להפשיר aliquot אחד של AOM ולדלל אותו 1 מיליגרם למיליליטר באמצעות 0.9% מלוחים נורמליים. כל תהליך ההכנה מתבצע במכסה המנוע של האדים. ממיסים ארבעה גרם אבקת DSS בתמיסת מים אוטומטית של 200 מיליליטר להכנת 2%DSS.כל כלוב מכיל חמישה עכברים. בצע הזרקה תוך-אישית של AOM עם 0.01 מיליליטר לגרם לעכבר המבסס על משקלו. החלף את המים האוטומטיים ב- 2%DSS למשך חמישה ימים.העכברים מוזנים במים אוטו-סלאביים במשך שני מחזורים נוספים. החלק השלישי:תוצאות. תוצאות זרימה ו- ELISA מציינות הסרה מוצלחת של תיקון ה- caecal.הליך זה יכול לתרום להפחתה משמעותית של תאי פלזמה ספציפיים ל- IgA, שינוי ברור של הפרשת IgA במעיים גדולים, לעומת 3% DSS, אשר יש שיעור תמותה גבוה ושינוי משקל משמעותי בגלל צואה עקובה מדם חמורה, ירידה פי הטבעת, ו abcess הבטן. ה-2%DSS מתאים לכל התהליך לקצב ההישרדות הגבוה שלו לכמעט 80% ושינוי משקל סביר הן בקבוצות מזויפות והן בקבוצות כריתת תוספתן. כפי שמוצג בתמונות אלה, יש לנו בהצלחה המושרה קוליטיס הקשורים גידולים המעיים.בתמונות מכתים H&E, חץ שחור מציין כיב ריר, ראש חץ מציין אדנוקרצינומה, וחץ לבן מציין חדירת נויטרופילים בין בלוטות. שלבים שונים של אדנוקרצינומה ניתן לראות הן בקבוצות מזויפות והן בקבוצות כריתת תוספתן. מודל חסכוני זה של כריתת התוספתן של מורין יכול לשמש למענה על כמה שאלות חשובות כגון: מה תפקידו של התוספתן בוויסות חיידקי המעיים וכיצד הוא משתתף בתגובה החיסונית ברקמת הלימפה הקשורה למעיים.זכור, כדי למנוע את הנזק בהיתוך המעי, המיקום מראש של caecum וחתך עור קטן חשובים. בנוסף, השתמשנו 2% DSS כדי לגרום קוליטיס. אבל ריכוז גבוה יותר של DSS עשוי לשמש עבור זני עכברים אחרים.

Research

JoVE Journal

Medicine

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

דגם orthotopic של סרטן שלפוחית ​​השתן Murine

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane (AOM) and Dextran Sulfate Sodium (DSS)

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane AOM and Dextran Sulfate Sodium DSS

דוגמנות סרטן קוליטיס-Associated עם Azoxymethane (AOM) ונתרן סולפט dextran (DSS)

Individuals with inflammatory bowel disease (IBD), such as Crohn's disease (CD) or ulcerative colitis (UC) are at increased risk of developing colorectal ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

מודל Murine orthotopic של אדם סרטן ערמונית גרורה

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

מולקולרי פרופיל של microenvironment הגידול פולש במודל 3 ממדים של תאי סרטן המעי הגס ו<em&gt; Ex vivo</em&gt; פיברובלסטים

Invading colorectal cancer (CRC) cells have acquired the capacity to break free from their sister cells, infiltrate the stroma, and remodel the ...

Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

לוקליזציה, זיהוי, וכריתה של בסיס מיון Murine שומן

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 ...

Murine Model of Femoral Artery Wire Injury with Implantation of a Perivascular Drug Delivery Patch

דגם Murine של עורק הירך חוט פגיעה בהשרשה של perivascular החדרת תרופות תיקון

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

Murine Isolated Heart Model of Myocardial Stunning Associated with Cardioplegic Arrest

דגם לב מבודד עכברי של Associated מקסימה שריר הלב עם מעצר Cardioplegic

The following protocol is of use to evaluate impaired cardiac function or myocardial stunning following moderate ischemic insults. The technique is useful ...

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

דגם Murine Orthotopic פרה-קליני של סרטן ערמונית האדם

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

ויזואליזציה כמותית של ליקוציטים לחדור במודל Murine של שריר הלב הדוקרני על ידי מיקרוסקופית גיליון אור

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...