Name: murine appendectomy model of chronic colitis associated colorectal cancer by precise localization of caecal patch
Uploaded: 2019-08-24T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch at JoVE.com

本研究は、中央大学基礎研究基金(G2018KY0302)、大学基礎研究開発基金(KT00062)、中国国立自然科学財団(81870380)、臨床研究賞の一部を支援しています。中国の西安Jiaotong大学の最初の提携病院(NO.XJTU1AF-CRF-2015-029)。著者らは、マウス虫垂切除モデルの初期の探査段階における彼の技術的な提案と、大腸炎および大腸腫瘍のH&E染色結果の評価に関する病理学者Xi Liu博士に感謝している。Y.L.は手術のデモンストレーションを行い、データ分析を行い、原稿の草稿を書きました。J.L.、G.L.、Z.P.、Y.M.は、外科的準備、組織コレクション、およびビデオ制作に参加しました。M.Z.はフローサイトメトリーとELISAを行った。Q.W. と H.X. は、臨床的に関連するマウス モデルを生成する技術サポートを提供しました。R.X.Z.は研究を設計し、研究を監督し、原稿を書き、校正した。J.S.は原稿を見直した。

すべての動物の手順は、西安Jiaotong大学の機関動物ケアと使用委員会によって承認されました(いいえ。XJTULAC2019-1023)。
1. マウス虫垂切除術
<ol><li>手術前1週間の認定特病原体フリー(SPF)環境における8〜10週齢のC57BL/6オスマウスを収容する。</li>
	<li>次の滅菌手術器具を準備する:マイクロハサミ1組、マイクロ鉗子1組、殺菌非吸収縫合糸の2つのサイズ(4-0および8-0)、針ホル?...

大腸炎関連大腸癌のマウス虫垂切除モデルは、マウスの生存率が高い外科的ステップを用いて得られた。ほとんどの場合、精液は腹壁の下に置かれたので(補足表1、補足表2、図2)、腹腔内目抜きなしでその位置を判断することは困難であった。この外科的プロトコルでは、バンプに触れる簡単なステップが導入され、盲液の再局所化の精度を高めるためのガ...

臨床虫垂切除術は、主に炎症(例えば、虫垂炎)1、2、3に起因する虫垂の除去を伴う標準的な外科的処置である。しかし、ヒト虫垂の生物学的機能は論争の余地のある4,5,6のままである。付録は、大腸の盲腸から突出した痕跡の残骸とみなされています。最近まで、進化論的、免疫学的、形態学的、および微生物学的研究は、虫垂が異なる機能を有する可能性があることを示唆している。これらの役割には、免疫グロビンの産生(例えば、IgAおよびIgG)、腸関連リンパ組織内の適応免疫応答に重要な様々なB細胞およびT細胞(GALT)、および共生微生物叢を有する大腸の補充が含まれる。6,7,8,9,10歳,11歳,12.
前虫垂切除術または急性虫垂炎患者の臨床疫学的研究はまた、炎症性腸疾患(IBD)、大腸癌、および非胃腸などのヒト疾患の病因における潜在的な役割を明らかにした障害(例えば、パーキンソン病および心血管疾患)13、14、15、16、17、18.例えば、75,979人の虫垂切除患者を対象にしたアジアの大規模集団コホート研究では、虫垂切除術とその後の大腸癌の発症との間に有意な関連が示された。死亡率14,19.したがって、ヒトに似た適切な動物虫垂切除モデルを確立することは、疾患病因における虫垂の生物学的機能および分子機構を調べるのに役立つだろう。
多くの哺乳類は、霊長類、ラゴモルフ(例えば、ウサギ)、いくつかのげっ歯類、および群れ20を含む虫垂または虫垂のような器官を有する。小型で一般的に使用される実験動物の場合、ウサギはヒト21、22に似た形態学的に形質的に虫垂を有するが、ウサギのGALTはヒトに比べて非常に大きい。リンパ組織はまた、小腸と大腸21の両方に位置するペイヤーのパッチで見つけることができます。さらに、ウサギは、ヒトとは異なるリンパ球状構造、T細胞分布、および免疫グロブリン密度をヒトから示し、その付録の研究を不適切にする21。
マウスは、ヒト病態生理学を研究し、様々な既存および新規のセラプス23、24、25をテストするために最も一般的に使用される動物モデルである。マウスの盲液の頂点にある単一の白い大リンパ球クラスターは、caecalパッチとして知られており、ヒト虫垂26、27、28と同様の機能を果たすと考えられている。しかし、マウスのcaecumからcaecalパッチを分離することは実質的に困難です。これまでのところ、マウスモデルで虫垂炎を誘発するための一般的な外科的処置は、腹壁を通して比較的大きな切開(例えば、1〜2センチメートル)を伴い、全盲(補足表1)29、 30,31,32,33,34,35,36.
本明細書において、消化管疾患に関連する虫垂切除モデルを生成するために、この報告は、マウスにおけるCaecalパッチ除去のための顔の外科的プロトコルを提示する。これに続いて、ヒトに見られるものと同様の大腸炎関連結腸直腸癌の誘導に対するゲノキサクサク物質AOMおよびプロ炎症剤DSSの併用投与が続く。IBDは、腸癌37、38の危険因子であることが示されている。AOM/DSS誘発性慢性大腸癌の組み合わせは十分に確立されており、読者はノイフェルトら、およびThakerら詳細な手順39,40を参照することができます。この再現性と迅速なマウス虫垂切除モデルは、特にIBDおよび大腸癌の発症および進行において、虫垂変調性腸炎症および結腸微生物叢を研究するために使用することができる。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Azoxymethane&#65288;AOM</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Inc.</td>
			<td>A5486</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran Sulfate Sodium Salt&#65288;DSS</td>
			<td>MP Biomedicals,Inc.</td>
			<td>160110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Entoiodine</td>
			<td>Shanghai likon high technology disinfection co. LTD</td>
			<td>310102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>digital caliper</td>
			<td>Ningbo yuanneng trading co. LTD</td>
			<td>4859263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 Silk Sutures</td>
			<td>Yuanlikang co. LTD</td>
			<td>20172650032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 Prolene Sutures</td>
			<td>Yuanlikang co. LTD</td>
			<td>20172650032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric coagulation pen</td>
			<td>Chuang mei medical equipment co. LTD</td>
			<td>28221777292</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disposable syringe 1ml</td>
			<td>Shengguang medical products co. LTD</td>
			<td>3262-2014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disposable syringe 10ml</td>
			<td>Shengguang medical products co. LTD</td>
			<td>3262-2014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% Medicinal alcohol</td>
			<td>Shandong anjie high-tech disinfection technology co. LTD</td>
			<td>371402AAJ008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Inc.</td>
			<td>57-33-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Physiological Saline</td>
			<td>Shandong qidu pharmaceutical co. LTD</td>
			<td>H37020766</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Cotton Swab</td>
			<td>Henan ruike medical co., LTD</td>
			<td>RK051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Instruments-Ophthalmic</td>
			<td>Jinzhong Shanghai co.LTD</td>
			<td>WA3050</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine appendectomy model of chronic colitis associated colorectal cancer by precise localization of caecal patch

ヒト虫垂は最近、大腸癌、炎症性腸疾患、パーキンソン病などの様々な複雑な疾患の病因に重要な生物学的役割を果たすことを目的としています。虫垂の機能を研究するために、腸疾患関連のマウス虫垂切除モデルが確立され、そのステップバイステッププロトコルがここに記載されている。本報告では、デキストラン硫酸ナトリウム(DSS)とアゾキシメタン(AOM)の組み合わせを用いた慢性大腸炎関連大腸癌の化学誘導に続いて、マウスにおけるcaecalパッチ除去のための顔状プロトコルを導入する。IgA特異的細胞およびIgA濃度は、偽群と比較して雄C57BL/6マウスにおけるcaecalパッチの除去時に有意に減少した。同時に2%のDSSおよびAOMを投与すると、有意な体重減少なしにシャムおよび虫垂切除群の両方で約80%のマウス生存をもたらした。組織学的結果は、結腸炎症および腺癌の異なる程度を確認した。このモデルは、腸内細菌叢恒常性および腸内因性腫瘍の病因を維持する上での付録の機能的役割の研究、ならびに薬物標的治療の潜在的な開発に使用することができる。

マウス虫垂切除モデルの確立
この慢性大腸炎関連大腸癌のこのマウス虫垂切除モデルは、図1に示すように順次外科的および誘導ステップに従うことによって生成することができる。caecumの最も頻繁な位置は、腹部の中央線に続く左右の腸毛フォッサにあります(図2)。触診法を用いて腹部切開前のカエカムの事前?...

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Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch

提示されたプロトコルは、マウスにおける付録(caecalパッチ)の顔外科的除去を記述し、続いて炎症性腸疾患関連結腸直腸癌の誘導を示す。このマウス虫垂切除モデルは、ヒト胃腸疾患の病因における虫垂の生物学的役割の調査を可能にする。

慢性大腸炎関連大腸癌のマウス虫垂切除モデル、ケーカルパッチの正確な局在化

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal ...

全体的なプロトコルは、マウスのcaecalパッチとして知られている付録を除去する外科的処置を容易に行う記述する。マウス虫垂切除術モデルは、ヒト胃腸疾患の病因における虫垂の生物学的役割を研究するために使用することができる。人間の付録は論争の余地のある器官です。最近の研究は、付録が腸の健康を維持する上で重要な役割を果たしていることを示唆しています。.虫垂の生物学的機能を研究するためには、疾患関連の虫垂切除術動物モデルの生成が重要である。このプロトコルでは、マウスのcaecalパッチとして知られている付録を除去する簡単で安全な外科的ステップについて説明します。このモデルを成功させるために、次のビデオで示すように、3 つの重要な手順があります。まず、手術前にマウスのケカムを見つける。第二に、腹部に小さな切開を行います。第三に、カエカムの切り株を消毒して閉じます。最初の部分は、マウス虫垂切除術である。手術前に無菌手術器具と洗浄液を準備してください。手術中の姿勢の動きを防ぐために四肢に4本の粘着テープを置くことで、プラットフォーム上のマウスを麻酔し、座り込みます。マウスの腹部全体にやさしく触れると、バンプ感を見つけることができます。ドレープを覆い、2回のエントヨジンを使用して、できるだけ広いマウス腹部の剃った領域を消毒します。腹部の正中線で0.5センチメートルから1センチメートルの範囲の縦切開を行います。caecumの所定の位置に従って、caecumを求め、約1センチメートルの長さから穏やかに外側に向けて、caecalパッチを識別します。事前に温められており、無菌の生理食塩水を使用して腸を水分補給します。術後出血および感染の潜在的な合併症を防ぐために、8-0を使用して、カイカムの腸間膜血管をリゲート縫合。生理食塩水でカエカムを水分補給します。近位結腸のcaecumの頂点付近の開いたループで4-0縫合を使用して切除領域をマークします。マイクロハサミを使用してマーク切除部の下のcaecalパッチを切断し、医療綿棒で残留ケーカル含有量を一掃します。エントヨウ素でカエカムの切り株を消毒します。8-0を使用して縫合を実行して切り株を閉じる縫合。慎重に4-0スレッドループを削除します, 以前にcaecumの切り株で切除をマークするために使用.エントヨウ素を用いて縫合位置を殺菌する。食塩水で切断領域を水分補給します。8-0 を使用して、ランニング縫合で筋力レイヤーを閉じます縫合糸。4-0縫合糸で中断された縫合糸を使用して皮膚層を閉じます。手術用切り傷を2回、エントヨジンで消毒する。その後、75%の医療用アルコールを使用してヨウ素を除去する。マウスをそっと後ろにひっくり返します。皮下にブプレノルフィンの体重1キログラムあたり0.1ミリグラム、生理食塩水の0.4ミリリットルを注入する。そして、それが意識に戻るまで、ヒートパッドの上にマウスを置きます。マウスを無菌ケージに戻し、回復を確実にするために手術後3日間の痛みの徴候についてマウスを注意深く監視します。第二部:アゾキシメタン、AOM、デキストラン硫酸ナトリウム、DSS、虫垂切除後7日間の大腸炎関連大腸癌の誘発。AOMの1アリコートを解凍し、0.9%の正常な生理食塩水を使用して1ミリリットルあたり1ミリグラムに希釈する。全体の準備プロセスは、ヒュームフードで行われます。2%DSSを調製するために200ミリリットルのオートクレーブ水溶液に4グラムのDSS粉末を溶解します。各ケージには5匹のマウスが含まれています。AOMの腹腔内注射を行い、その重量に基づいてマウスあたりグラム当たり0.01ミリリットルを使用します。オートクレーブ水を2%DSSに5日間交換してください。マウスは、追加の2サイクルのためにオートクレーブ水を供給されます。第3部:結果。フローおよびELISAの結果は、caecalパッチの正常な除去を示す。この手順は、重度の血便、アヌス脱、および腹部abcesのために高い死亡率と有意な体重変化を有する3%DSSと比較して、大腸における分泌性IgAの明らかな変化であるIgA特異的形質細胞の有意な減少に寄与することができる。2%DSSは、その高い生存率が80%近く、および偽および虫垂切除グループの両方で合理的な体重変化のための全体のプロセスに適しています。これらの画像に示すように、我々は大腸炎関連大腸腫瘍を誘導に成功した。H&E染色画像では、黒矢印は粘膜潰瘍を示し、矢印は腺癌を示し、白い矢印は腺間の好中球浸潤を示す。腺癌の異なる段階は、偽と虫垂切除の両方のグループで見ることができます。この費用対効果の高いマウス虫垂切除術モデルは、腸内細菌の調節における付録の役割と、それが腸関連リンパ組織における免疫応答にどのように関与するかなど、いくつかの重要な質問に答えるために使用することができます。腸の付着の損傷を避けるために、caecumの前の位置および小さい皮膚切開が重要であることを覚えておいてください。また、2%DSSを用いて大腸炎を誘発した。しかし、DSSの濃度が高い他のマウス株に使用されてもよいです。

Research

JoVE Journal

Medicine

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

マウス膀胱癌の同所性モデル

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane (AOM) and Dextran Sulfate Sodium (DSS)

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane AOM and Dextran Sulfate Sodium DSS

アゾキシメタン（AOM）とデキストラン硫酸ナトリウム（DSS）によるモデリング大腸炎関連癌

Individuals with inflammatory bowel disease (IBD), such as Crohn's disease (CD) or ulcerative colitis (UC) are at increased risk of developing colorectal ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

ヒト前立腺癌転移の同所マウスモデル

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

大腸癌細胞の3次元モデルにおける侵襲性腫瘍微小環境の分子プロファイリングと<em&gt;生体外</em&gt;線維芽細胞

Invading colorectal cancer (CRC) cells have acquired the capacity to break free from their sister cells, infiltrate the stroma, and remodel the ...

Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

マウス脂肪デポのローカライズ、識別、および切除

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 ...

Murine Model of Femoral Artery Wire Injury with Implantation of a Perivascular Drug Delivery Patch

血管周囲ドラッグデリバリーパッチの移植に大腿動脈ワイヤ傷害のマウスモデル

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

Murine Isolated Heart Model of Myocardial Stunning Associated with Cardioplegic Arrest

心臓麻痺逮捕と気絶心筋関連のマウス単離された心臓モデル

The following protocol is of use to evaluate impaired cardiac function or myocardial stunning following moderate ischemic insults. The technique is useful ...

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

ヒト前立腺癌の前臨床同所性マウスモデル

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

光シート顕微鏡による劇症心筋炎のマウスモデルにおける白血球浸潤の定量的可視化

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...