Name: murine appendectomy model of chronic colitis associated colorectal cancer by precise localization of caecal patch
Uploaded: 2019-08-24T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch at JoVE.com

이 작품은 중앙대학 기초연구기금(G2018KY0302), 대학 기초연구개발기금(KT00062), 중국국립자연과학재단(81870380), 임상연구상(81870380) 등에서 부분적으로 지원되고 있다. 중국 시안 자오퉁 대학 의 첫 번째 제휴 병원 (NO. XJTU1AF-CRF-2015-029). 저자는 뮤린 충수 모델의 초기 탐사 단계에서 그의 기술적 제안에 대한 Chengxin Shi 박사뿐만 아니라 대장염과 대장 종양의 H&E 염색 결과의 평가에 대한 병리학자 Xi Liu 박사에게 감사드립니다. Y.L.은 수술 데모를 수행하고, 데이터 분석을 수행하고, 원고 초안을 작성했습니다. J.L., G.L., Z.P., 및 Y.M.은 외과 준비, 조직 수집 및 비디오 제작에 참여했습니다. M.Z.는 유세포분석 및 ELISA를 수행; Q.W. 및 H.X.는 임상적으로 관련된 뮤린 모델을 생성하는 기술 지원을 제공했습니다. R.X.Z.는 연구를 설계하고 연구를 감독하며 원고를 작성하고 증명했습니다. J.S.는 원고를 검토했습니다.

모든 동물 절차는 시안 자오퉁 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었다 (아니. XJTULAC2019-1023).
1. 마우스 충수 절제술
<ol><li>집 8-10 주 오래 된 C57BL/6 수 컷 마우스 인증 된 특정 병원 체 무료 (SPF) 환경 에 대 한 1 수술 전에 주.</li>
	<li>다음 멸균 수술 기구를 준비하십시오 : 마이크로 가위 1 쌍, 마이크로 집게 1 쌍, 살균 된 비 흡수성 봉합사의 두 가지 크기 (4-0 및...

대장염 관련 대장암의 뮤린 충수 절제술 모델은 마우스에서 높은 생존율을 가진 수술 단계를 사용하여 수득되었다. 대부분의 경우, 케이쿰이 복벽 아래에 위치했기때문에(보충표 1, 보충표 2및 도2), 개복술 없이 그 위치를 미리 판단하는 것이 어려웠다. 이러한 외과 적 프로토콜에서는, 범프를 만지기 쉬운 단계가 도입되었고, 소양 위치의 정량적 평가는 또한 소...

임상 충수 절제술은 주로 염증 (예를 들어, 맹장염)으로 인해 맹장의 제거를 포함하는 표준외과 적 수술입니다 1,2,3. 그러나, vermiform 인간의 부록의 생물학적 기능은논란의 여지가 남아 4,5,6. 부록은 큰 창자에 있는 장에서 장에서 투영하는 흔적 남은 으로 여겨졌습니다. 최근까지, 진화, 면역학, 형태학 및 미생물 학적 연구는 부록이 뚜렷한 기능을 가질 수 있음을 제안했다. 이러한 역할은 면역 글로빈의 생산을 포함 (예를 들어, IgA와 IgG), 다양한 B 세포와 T 세포는 창자 관련 림프 조직 내에서 적응 면역 반응에 대한 중요한 (GALTs), 및 공생 미생물과 큰 장의 보충 6개 , 7명 , 8개 , 9개 , 10개 , 11세 , 12.
이전 충수 절제술 또는 급성 충수염 환자의 임상 역학 연구는 염증성 장 질환 (IBD), 대장암 및 비 위장관과 같은 인간 질병의 발병기전에 잠재적 인 역할을 밝혀냈습니다. 장애 (예를 들어, 파킨슨 병 및 심혈관 질환)13,14,15,16,17,18. 예를 들면, 75,979명의 충수 절제술 환자를 가진 큰 아시아 인구 코호트 연구 결과는 최근에 대장암의 충수 및 후속 발달 사이 중요한 협회를 보여주었습니다, 높은 부각을 가진 일반적인 악성의 한개및 필멸의 삶14,19. 따라서, 인간과 유사한 적합한 동물 충수 절제술 모델을 확립하는 것은 질병 병인에서 부록의 생물학적 기능 및 분자 기전을 조사하는 데 도움이 될 것이다.
많은 포유동물은 영장류, 라고모프(예를 들어, 토끼), 일부 설치류 및 marsupials20을포함하는 부록 또는 부록 과 같은 기관을 가지고 있다. 작고 일반적으로 사용되는 실험실 동물의 경우, 토끼는 인간21,22를닮은 형태학적으로 버미폼 부록을 가지고 있지만 토끼의 GALT는 인간에 비해 매우 크지 않습니다. 림프성 조직은 또한 작은 창자 및 대장21에있는 Peyer의 패치에서 있습니다. 부가적으로, 토끼는 인간으로부터상이다른 림프성 여포 구조, T 세포 분포 및 면역글로불린 밀도를 나타내며, 이는 그들의 부록의 연구를 부적절한21로만든다.
마우스는 인간 병리생리학을 연구하고 다양한 기존 및 신규 신개념 신생물을 시험하기 위해 가장 일반적으로 사용되는 동물 모델(23,24,25)이다. 케칼 패치로 알려진 마우스에서 의 케쿰의 정점에 있는 단일 백색 대형 림프군은 인간 부록26,27,28과유사한 기능을 수행하는 것으로 생각된다. 그러나, 마우스에서 케이쿰으로부터 케이칼 패치를 분리하는 것은 실질적으로 어렵다. 지금까지, 마우스 모델에서 장수염을 유도하기위한 일반적인 외과 적 수술은 전체 계개에 대한 액세스를 얻기 위해 복벽을 통해 상대적으로 큰 절개 (예를 들어, 1-2cm)를 포함한다 (보충표1)29, 30,31,32,33,34,35,36.
본 명세서에서, 위장관 질환과 관련된 충수 절제술 모델을 생성하기 위해, 본 보고서는 마우스에서 케이칼 패치 제거를 위한 막다른 수술 프로토콜을 제시한다. 이것은 인간에서 보인 것과 유사한 대장염 관련 대장암의 유도를 위한 genotoxic 에이전트 AOM 및 pro-inflammatory agent DSS의 결합한 관리에 선행됩니다. IBD는 장암 37,38의위험인자인 것으로 나타났다. AOM/DSS-유도 된 만성 대장염 관련 대장암의 조합은 잘 확립되었으며, 독자는 상세한 절차에 대한 Neufert et al., 및 Thaker 등을 참조 할 수 있습니다39,40. 이 재현 가능하고 빠른 뮤린 충수 절제술 모델은 특히 IBD 및 대장암의 발달과 진행에서 부록 변조 된 대장 염증 및 결장 미생물을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Azoxymethane&#65288;AOM</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Inc.</td>
			<td>A5486</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran Sulfate Sodium Salt&#65288;DSS</td>
			<td>MP Biomedicals,Inc.</td>
			<td>160110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Entoiodine</td>
			<td>Shanghai likon high technology disinfection co. LTD</td>
			<td>310102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>digital caliper</td>
			<td>Ningbo yuanneng trading co. LTD</td>
			<td>4859263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 Silk Sutures</td>
			<td>Yuanlikang co. LTD</td>
			<td>20172650032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 Prolene Sutures</td>
			<td>Yuanlikang co. LTD</td>
			<td>20172650032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric coagulation pen</td>
			<td>Chuang mei medical equipment co. LTD</td>
			<td>28221777292</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disposable syringe 1ml</td>
			<td>Shengguang medical products co. LTD</td>
			<td>3262-2014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disposable syringe 10ml</td>
			<td>Shengguang medical products co. LTD</td>
			<td>3262-2014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% Medicinal alcohol</td>
			<td>Shandong anjie high-tech disinfection technology co. LTD</td>
			<td>371402AAJ008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Inc.</td>
			<td>57-33-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Physiological Saline</td>
			<td>Shandong qidu pharmaceutical co. LTD</td>
			<td>H37020766</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Cotton Swab</td>
			<td>Henan ruike medical co., LTD</td>
			<td>RK051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Instruments-Ophthalmic</td>
			<td>Jinzhong Shanghai co.LTD</td>
			<td>WA3050</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine appendectomy model of chronic colitis associated colorectal cancer by precise localization of caecal patch

인간 부록은 최근에 대장암, 염증성 장 질환 및 파킨슨 병과 같은 다양한 복합 질병의 발병기전에서 중요한 생물학적 역할을 하는 것으로 연루되어 있다. 부록의 기능을 연구하기 위해, 장 질환 관련 뮤린 충수 모델이 설립되었으며 단계별 프로토콜이 여기에 설명되어 있습니다. 이 보고서는 dextran 황산나트륨 (DSS)와 아조시메탄 (AOM)의 조합을 사용하여 만성 대장염 관련 대장암의 화학 유도에 이어 마우스에서 케이칼 패치 제거를위한 막강 프로토콜을 소개합니다. IgA 특이적 세포 및 IgA 농도는 샴 그룹에서 그들에 비해 남성 C57BL/6 마우스에서 케이칼 패치의 제거시 유의하게 감소되었다. 동시에 관리 2% DSS와 AOM 거의 결과 80% 상당한 체중 감소 없이 sham 및 충 수 군모두에서 마우스 생존. 조직학적 결과는 대장 염증과 다른 정도의 선암을 확인했습니다. 이 모델은 장내 미생물 항상성 및 장내 대장염 및 악성 종양의 병인을 유지하는 부록의 기능적 역할에 대한 연구뿐만 아니라 약물 표적 치료의 잠재적 개발에 사용될 수 있습니다.

뮤린 충수 모델의 설립
이러한 만성 대장염 관련 대장암의 무린 충수 절제술 모델은 도1에 도시된 바와 같이 순차적 외과 및 유도 단계를 수행함으로써 생성될 수 있다. caecum의 가장 빈번한 위치는 복부의 중간 선 뒤에 좌우 장골 fossa에있습니다 (그림 2). 촉진 방법을 사용하여 복부 절개 전에 카이쿰의 사전 국소화의 ?...

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Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch

제시된 프로토콜은 염증성 장 질환 관련 대장암의 유도에 이어 마우스에서 부록(caecal patch)의 막강 외과적 제거를 기술한다. 이 뮤린 충수 절제술 모델은 인간 위장 병기의 병인에서 부록의 생물학적 역할을 조사 할 수 있습니다.

만성 대장염 관련 대장암의 뮤린 충수 절제술 모델은 Caecal 패치의 정확한 국소화에 의해

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal ...

전반적인 프로토콜은 마우스에서 개칼 패치로 알려진 부록을 제거하는 수술 적 절차를 쉽게 수행 설명합니다. 뮤린 부수 절제술 모델은 인간 위장 질환의 병인에서 부록의 생물학적 역할을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 인간 부록은 논쟁의 여지가있는 기관입니다.최근 연구는 부록창 건강을 유지하는 데 중요한 역할을한다는 것을 건의했습니다. 부록의 생물학적 기능을 연구하기 위해 질병 관련 충수 동물 모델을 생성하는 것이 중요합니다. 이 프로토콜에서, 우리는 부록을 제거하는 간단하고 안전한 수술 단계를 설명 합니다., 마우스에 있는 caecal 패치로 알려진.이 모델의 성공을 보장하기 위해 다음 비디오에서 볼 수 있듯이 세 가지 주요 단계가 있습니다. 먼저 수술 전에 마우스의 케이쿰을 찾아보냅니다. 둘째, 복부에 작은 절개를합니다.셋째, 소독하고 케이쿰 그루터기를 닫습니다. 첫 번째 부분, 마우스 충수. 수술 전에 멸균 수술 기구 및 청소 솔루션을 준비하십시오.수술 중 자세 이동을 방지하기 위해 사지에 의료 용 접착 테이프의 네 스트립을 배치하여 supine 위치에 플랫폼에 마우스를 마취하고 고정합니다. 마우스의 복부 전체를 부드럽게 만져 범프감을 찾습니다. 드레이프를 덮고 두 번의 entoiodine을 사용하여 마우스 복부의 면도 부위를 가능한 한 넓게 소독하십시오.복부의 중간선에서 0.5 센티미터에서 1 센티미터에 이르는 세로 절개를 합니다. caecum의 소정의 위치에 따르면, caecum을 찾아 서 약 1 센티미터 길이에 대 한 부드럽게 외부화 케이칼 패치를 식별 합니다. 미리 데워진 멸균 생리식염수에 사용하여 내장에 수분을 공급합니다.수술 후 출혈과 감염의 잠재적인 합병증을 방지하기 위해 8-0을 사용하여 caecum의 막진 혈관을 리게이트하십시오. 봉합 사. 식염수로 케이컴을 수분처리합니다. 근위 결장의 케이쿰 정점 근처의 열린 루프로 4-0 봉합사를 사용하여 절제술 영역을 표시합니다.마이크로 가위를 사용하여 표시된 절제술 아래의 위장 패치를 잘라 내고 의료 용 면 봉면으로 잔류 위장 함량을 닦아냅니다. 엔토오딘으로 케이쿰의 그루터기를 소독하십시오. 8-0을 사용하여 실행 봉합사와 그루터기를 닫습니다 봉합 사.이전에 는 caecum의 그루터기에서 절제술을 표시하는 데 사용 되 었던 4-0 스레드 루프를 주의 깊게 제거합니다. 엔토이오딘을 사용하여 봉제된 자세를 살균합니다. 식염수로 절단 부위를 다시 수분처리합니다.8-0을 사용하여 실행 봉합사로 근육 층을 닫습니다 봉합사 스레드. 4-0 봉합사 실로 중단된 봉합사를 사용하여 피부 층을 닫습니다. 엔토오딘으로 수술 컷을 두 번 소독하십시오.그런 다음 75 %의 의료 알코올을 사용하여 요오드를 제거하십시오. 마우스를 부드럽게 뒤집습니다. 피하 부프레노르핀의 킬로그램 체중당 0.1 밀리그램, 생리식염수 0.4 밀리리터를 피하한다.그리고 열 패드에 마우스를 휴식, 그것은 의식에 반환 될 때까지. 마우스를 멸균 케이지에 다시 넣고 마우스를 면밀히 모니터링하여 3일 동안 통증의 징후를 면밀히 모니터링하여 수술을 통해 회복을 보장합니다. 두 번째 부분: 아조옥시메탄, AOM, Dextran 나트륨 황산염, DSS, 7 일 후 충수 절제술을 가진 대장염 관련 대장암의 유도.AOM의 알리쿼트 1개를 해동하여 0.9%의 일반 식염수를 사용하여 밀리리터당 1밀리그램으로 희석합니다. 전체 준비 과정은 연기 후드에서 수행됩니다. 200 밀리리터 오토클레이브 물 용액에 4그램DS 분말을 녹여 2%DSS를 준비합니다.각 케이지에는 5마리의 마우스가 포함되어 있습니다. 무게에 마우스 당 그램 당 0.01 밀리리터와 AOM의 내 분간 주사를 확인합니다. 5일 동안 자동식물을 2%DSS로 교체합니다.마우스는 추가 2주기동안 오토클레이브 워터로 공급될 것이다. 세 번째 부분:결과. 흐름 및 ELISA 결과는 케이칼 패치의 성공적인 제거를 나타낸다.이 절차는 IgA 특정 혈장 세포의 상당한 감소에 기여할 수 있습니다., 큰 창 자에 분 비 이 IgA의 명백한 변화, 3%DSS에 비해, 높은 사망률 및 심각한 피 묻은 대변, 항 문 탈출, 그리고 복 부 애초 때문에 상당한 체중 변화. 2%DSS는 높은 생존율에서 80%에 가까운 공정과 샴및 충수군 모두에서 합당한 체중 변화에 적합합니다. 이 심상에 도시된 바와 같이, 우리는 대장염 관련 대장 종양을 성공적으로 유도했습니다.H&E 염색 이미지에서 검은 색 화살표는 점막 궤양을 나타내고, 화살촉은 선암을 나타내며, 흰색 화살표는 땀샘 사이의 호중구 침투를 나타냅니다. 아데노암의 다른 단계는 샴과 충수 성 그룹 모두에서 볼 수 있습니다. 이 비용 효율적인 Murine Appendectomy 모델 같은 몇 가지 중요 한 질문에 대답에 사용할 수 있습니다:창 자 박테리아의 규칙에 부록의 역할 및 창 자 관련 림프 조직에서 면역 반응에 참여 하는 방법.장 접착의 손상을 피하기 위해, 케이쿰과 작은 피부 절개의 사전 위치가 중요하다는 것을 기억하십시오. 또한, 대장염을 유도하기 위해 2%DSS를 사용했습니다. 그러나 DSS의 높은 농도는 그밖 마우스 긴장에 사용될 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Medicine

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In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

연구

의학

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane (AOM) and Dextran Sulfate Sodium (DSS)

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Azoxymethane (AOM)과 Dextran의 황산 나트륨 (DSS)와 모델링 대장염 - 관련 암

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