Name: murine appendectomy model of chronic colitis associated colorectal cancer by precise localization of caecal patch
Uploaded: 2019-08-24T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch at JoVE.com

Este trabalho é parcialmente apoiado por fundos de investigação fundamentais para a Universidade Central (G2018KY0302), fundo de desenvolvimento de investigação fundamental da Universidade (KT00062), Fundação Nacional de ciência natural da China (81870380), e prêmio de pesquisa clínica da Primeiro hospital afiliado da Universidade de Xi ' an Jiaotong na China (NO. XJTU1AF-CRF-2015-029). Os autores agradecem o Dr. Chengxin shi por suas sugestões técnicas durante a fase adiantada da exploração do modelo murino do apendicectomia, assim como o patologista Dr. XI Liu para a avaliação de H & e que mancham resultados da colite e dos tumores colorretal. Y.L. realizou a demonstração cirúrgica, fez a análise dos dados, e escreveu o rascunho do manuscrito; A JL, a GL, a Z.P. e a Y.M. participaram da preparação cirúrgica, coleções de tecidos e produção de vídeo; M realizou citometria de fluxo e ELISA; Q.W. e H.X. forneceram o suporte técnico de gerar um modelo murino clinicamente relevante; R.X.Z. projetou o estudo, supervisionou a pesquisa, e escreveu e comprovou o manuscrito; J.S. revisou o manuscrito.

Todos os procedimentos animais foram aprovados pelo Comitê institucional de cuidados e uso de animais da Universidade de Xi ' an Jiaotong (no. XJTULAC2019-1023).
1. apendicectomia de camundongos
<ol><li>Casa 8 – 10-week-old C57BL/6 ratos machos em um certificado específico-patógeno livre (SPF) ambiente para 1 semana antes da cirurgia.</li>
	<li>Prepare os seguintes instrumentos cirúrgicos estéreis: um par de Microtesouras, um par de micro-fórceps, dois tamanhos (4-0 e 8-0) de suturas...

Um modelo murino do apendicectomia do cancro colorretal colite-associado foi obtido usando etapas cirúrgicas com uma taxa de sobrevivência elevada nos ratos. Na maioria dos casos, desde que o cécum foi posicionado a parede abdominal (tabela suplementar 1, tabela suplementar 2, e Figura 2), era difícil prejudicar sua posição sem laparotomia. Neste protocolo cirúrgico, foi introduzido um passo fácil de tocar a colisão, e a avaliação quantitativa do local do cério t...

A apendicectomia clínica é um procedimento cirúrgico padrão que envolve a remoção do apêndice principalmente devido à inflamação (por exemplo, apendicite)1,2,3. No entanto, a função biológica do apêndice humano vermiforme permanece controversa4,5,6. O apêndice foi considerado como um remanescente vestigial que projeta-se do ceco no intestino grosso. Até recentemente, estudos evolucionários, imunológicos, morfológicos e microbiológicos sugeriram que o apêndice pode possuir funções distintas. Estas funções incluem a produção de imunoglobinas (por exemplo, IgA e IgG), uma variedade de células B e células T críticas para respostas imunes adaptativas dentro dos tecidos linfoides associados ao intestino (Galts), e reposição do intestino grosso com intestinal comensais 6 anos de , 7 anos de , 8 . º , 9 anos de , 10 de , 11 anos de , doze anos.
Os estudos epidemiológicos clínicos dos pacientes com apendicectomia prévio ou apendicite aguda igualmente revelaram seus papéis potenciais na patogénese de doenças humanas, tais como a doença de entranhas inflamatório (IBD), o cancro colorretal, e não-gastrintestinal distúrbios (por exemplo, doença de Parkinson e doença cardiovascular)13,14,15,16,17,18. Por exemplo, um grande estudo de coorte da população asiática com 75.979 pacientes com apendicectomia mostrou recentemente uma associação significativa entre a apendicectomia e o desenvolvimento subseqüente do câncer colorretal, uma das neoplasias malignas mais comuns com alta incidência e mortalidade14,19. Conformemente, estabelecer um modelo animal apropriado do apendicectomia que se assemelhe a um ser humano será útil investigar as funções biológicas e os mecanismos moleculars do apêndice na patogénese da doença.
Muitos mamíferos possuem um apêndice ou órgão apêndice-like, incluindo primatas, lagomorfos (por exemplo, coelhos), alguns roedores, e marsupiais20. Para animais de laboratório pequenos e comumente usados, o coelho possui o apêndice vermiforme morfologicamente parecido com o humano21,22, mas Galt no coelho é extremamente grande em comparação com o que em seres humanos, uma vez que a maioria dos os tecidos lymphoid são encontrados igualmente em Peyer ' remendos de s situados nos intestinos pequenos e grandes21. Adicionalmente, o coelho mostra uma estrutura folicular lymphoid diferente, uma distribuição da pilha de T, e uma densidade da imunoglobulina do ser humano, que faz o estudo de seus apêndices inadequados21.
Os camundongos são o modelo animal mais comumente utilizado para estudar a fisiopatologia humana e testar os vários therapuetics existentes e novos23,24,25. O único grande aglomerado branco linfoide no ápice do cécum em camundongos, conhecido como o remendo caecal, é pensado para executar funções semelhantes ao apêndice humano26,27,28. No entanto, é praticamente difícil separar o remendo caecal de cécum em camundongos. Até o momento, os procedimentos cirúrgicos comuns para induzir a apendicite em um modelo de camundongo envolvem uma incisão relativamente grande (por exemplo, 1 – 2 cm) através da parede abdominal para obter acesso a todo o cécum (tabela suplementar 1)29, 30,31,32,33,34,35,36.
Nisto, para gerar um modelo do apendicectomia associado com a doença gastrintestinal, este relatório apresenta um protocolo cirúrgico facile para a remoção caecal do remendo nos ratos. Isto é seguido pela administração combinada do agente genotóxico Aom e pelo agente pró-inflamatório DSS para a indução do cancro colorretal colite-associado similar àquele visto nos seres humanos. O IBD demonstrou ser um fator de risco do câncer intestinal37,38. A combinação do câncer colorretal associado à colite crônica induzida por Aom/DSS tem sido bem estabelecida, e os leitores podem se referir a Neufert et al., e Thaker et al. para procedimentos detalhados39,40. Este modelo reprodutível e rápido de apendicectomia Murina pode ser usado para estudar a inflamação intestinal modulada por apêndice e a microbiota do cólon, especialmente no desenvolvimento e progressão do IBD e do câncer colorretal.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Azoxymethane&#65288;AOM</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Inc.</td>
			<td>A5486</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran Sulfate Sodium Salt&#65288;DSS</td>
			<td>MP Biomedicals,Inc.</td>
			<td>160110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Entoiodine</td>
			<td>Shanghai likon high technology disinfection co. LTD</td>
			<td>310102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>digital caliper</td>
			<td>Ningbo yuanneng trading co. LTD</td>
			<td>4859263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 Silk Sutures</td>
			<td>Yuanlikang co. LTD</td>
			<td>20172650032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 Prolene Sutures</td>
			<td>Yuanlikang co. LTD</td>
			<td>20172650032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric coagulation pen</td>
			<td>Chuang mei medical equipment co. LTD</td>
			<td>28221777292</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disposable syringe 1ml</td>
			<td>Shengguang medical products co. LTD</td>
			<td>3262-2014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disposable syringe 10ml</td>
			<td>Shengguang medical products co. LTD</td>
			<td>3262-2014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% Medicinal alcohol</td>
			<td>Shandong anjie high-tech disinfection technology co. LTD</td>
			<td>371402AAJ008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Inc.</td>
			<td>57-33-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Physiological Saline</td>
			<td>Shandong qidu pharmaceutical co. LTD</td>
			<td>H37020766</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Cotton Swab</td>
			<td>Henan ruike medical co., LTD</td>
			<td>RK051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Instruments-Ophthalmic</td>
			<td>Jinzhong Shanghai co.LTD</td>
			<td>WA3050</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine appendectomy model of chronic colitis associated colorectal cancer by precise localization of caecal patch

O apêndice humano foi recentemente implicado para desempenhar papéis biológicos importantes na patogénese de várias doenças complexas, tais como câncer colorretal, doença inflamatória intestinal, e doença de Parkinson. Para estudar a função do apêndice, um modelo de apendicectomia Murina associada à doença intestinal foi estabelecido e seu protocolo passo a passo é descrito aqui. Este relatório introduz um protocolo facile para a remoção caecal do remendo nos ratos seguidos pela indução química do cancro colorretal colite-associado crônico usando uma combinação de sódio do sulfato do dextrano (DSS) e do azoximetano (Aom). As pilhas específicas de IgA e a concentração de IgA foram reduzidas significativamente em cima da remoção do remendo caecal nos ratos C57BL/6 masculinos comparados àqueles no grupo Sham. Simultaneamente administrar 2% DSS e AOM resultaram em quase 80% de sobrevida de camundongos em grupos de Sham e apendicectomia sem perda significativa de peso corporal. Os resultados histológicos confirmaram a inflamação relativa ao cólon e os graus diferentes de adenocarcinoma. Este modelo pode ser usado para o estudo do papel funcional do apêndice em manter a homeostase da microbiota do intestino e a patogénese da colite e das malignidades do intestino, assim como para o desenvolvimento potencial de terapias de segmentação da droga.

Estabelecimento de modelo de apendicectomia murina
Este modelo de apendicectomia Murina do câncer colorretal associado à colite crônica pode ser gerado seguindo as etapas cirúrgicas e de indução seqüenciais, conforme ilustrado na Figura 1. As posições mais freqüentes do cécum estão na fossa ilíaca esquerda e direita seguida da linha média do abdome (Figura 2). A taxa bem sucedida de pré-localização do...

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Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch

O protocolo apresentado descreve uma remoção cirúrgica facile do apêndice (remendo caecal) em um rato seguido pela indução do cancro colorretal da doença de entranhas inflamatório-associado. Este modelo murino do apendicectomia permite a investigação do papel biológico do apêndice na patogénese da doença gastrintestinal humana.

Modelo de apendicectomia Murina de colite crônica câncer colorretal associado por localização precisa do remendo de Caecal

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal ...

O protocolo geral descreve procedimentos cirúrgicos facilmente realizados de remoção do apêndice conhecido como patch de caecal em camundongos. O modelo de apendicectomia de murina pode ser usado para estudar os papéis biológicos do apêndice em patogênese da doença gastrointestinal humana. O apêndice humano é um órgão discutível.Estudos recentes sugerem que o apêndice desempenha um papel importante na manutenção da saúde intestinal. Estudar a função biológica do apêndice, gerar um modelo animal de apendicectomia associado à doença é fundamental. Neste protocolo, descreveremos uma etapa cirúrgica simples e segura de remoção do apêndice, conhecido como patch de caecal em camundongos.Para garantir o sucesso deste modelo, existem três passos-chave como você verá no vídeo a seguir. Primeiro, localize o caecum dos ratos antes da cirurgia. Segundo, faça uma pequena incisão no abdômen.Terceiro, desinfete e feche o toco de caecum. A primeira parte, apendicectomia de ratos. Prepare instrumentos cirúrgicos estéreis e soluções de limpeza antes da cirurgia.Anestesiar e fixar o mouse em uma plataforma em uma posição supina, colocando quatro tiras de fita adesiva médica nos membros para evitar o movimento postural durante a cirurgia. Toque suavemente em todo o abdômen do mouse para encontrar a sensação de colisão. Cubra a cortina e desinfete a área raspada do abdômen do rato o mais largo possível usando duas vezes de entoiodina.Faça uma incisão longitudinal variando de 0,5 centímetro a um centímetro na linha média do abdômen. De acordo com a localização predeterminada do caecum, procure o caecum e exteriorize-o suavemente por aproximadamente um centímetro de comprimento para identificar o patch caecal. Use um soro fisiológico pré-aquecido e estéril para hidratar o intestino.Para evitar possíveis complicações de hemorragia pós-operatória e infecção, ligante os vasos sanguíneos mesentéricos de caecum usando o 8-0 Sutura. Hidrate o caecum com o soro fisiológico. Marque a região de ressecção usando a sutura 4-0 com laço aberto perto do ápice do caecum no cólon proximal.Corte o patch de caecal abaixo da ressecção marcada usando micro-tesouras e elimine o teor de caecal residual com cotonetes de algodão médicos. Desinfete o toco de caecum com entoiodina. Feche o toco com sutura de corrida usando o 8-0 Sutura.Remova cuidadosamente o laço de rosca 4-0, anteriormente usado para marcar a ressecção no toco do caecum. Esterilize a posição suturada usando entoiodina. Reidratar a área de corte com o soro fisiológico.Feche a camada de musculatura com sutura de corrida usando 8-0 fio de sutura. Feche as camadas da pele usando suturas interrompidas com rosca de sutura 4-0. Desinfete o corte cirúrgico duas vezes com entoiodina.Em seguida, remova o iodo usando 75% de álcool médico. Vire suavemente o mouse para trás. Injetar subcutâneamente 0,1 miligrama por quilograma de peso corporal de buprenorfina e 0,4 mililitros de soro fisiológico.E descanse o rato na almofada de calor, até que ele volte à consciência. Coloque o rato de volta na gaiola estéril e monitore de perto o rato para obter sinais de dor durante três dias após a cirurgia para garantir sua recuperação. A segunda parte:Indução do Câncer Colorretal Associado à Colitis com Azoxymetano, AOM e Sulfato de Sódio Dextran, DSS, sete dias após apendicectomia.Descongele uma alíquota de AOM e dilui-a ao 1 mililitro usando soro fisiológico 0,9%. Todo o processo de preparação é realizado no capô da fumaça. Dissolva quatro gramas de pó DSS em 200 mililitros autoclaved solução de água para preparar 2%DSS.Cada gaiola contém cinco ratos. Faça uma injeção intraperitoneal de AOM com 0,01 mililitro por grama por mouse baseando-se em seu peso. Substitua a água autoclavada por 2%DSS por cinco dias.Os ratos serão alimentados com água autoclavada por dois ciclos adicionais. A terceira parte:Resultados. Os resultados de Fluxo e ELISA indicam a remoção bem sucedida do patch caecal.Este procedimento pode contribuir para uma redução significativa das células plasmáticas específicas da IgA, uma mudança óbvia do IgA secreto no intestino grosso, em comparação com 3%DSS, que tem alta taxa de mortalidade e mudança significativa de peso por causa de fezes sangrentas graves, prolapso ânus e abcess abdominal. O DSS de 2%é adequado para todo o processo para sua alta taxa de sobrevivência para quase 80% e mudança de peso razoável em grupos de sham e apendicectomia. Como mostrado nestas imagens, induzímos com sucesso os tumores colorretais associados à colite.Nas imagens de manchas de H&E, a seta preta indica úlcera mucosa, ponta de flecha indica adenocarcinoma, e uma seta branca indica infiltração de neutrófilo entre glândulas. Diferentes estágios do adenocarcinoma podem ser vistos em grupos de apendicectomia e apendicectomia. Este modelo de apendicectomia murina econômica pode ser usado para responder a algumas perguntas importantes como: qual é o papel do apêndice na regulação de bactérias intestinais e como ela participa da resposta imune no tecido linfoide associado ao intestino.Lembre-se, para evitar o dano na adesão do intestino, a pré-localização do caeco e a pequena incisão da pele são importantes. Além disso, usamos o DSS 2%para induzir colite. Mas uma maior concentração de DSS pode ser usada para outras cepas de camundongos.

Research

JoVE Journal

Medicine

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

Um modelo ortotópico de câncer de bexiga murino

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Medicina

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane (AOM) and Dextran Sulfate Sodium (DSS)

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane AOM and Dextran Sulfate Sodium DSS

Câncer de modelagem Colite Associada com Azoximetano (OMA) e sulfato de sódio Dextran (DSS)

Individuals with inflammatory bowel disease (IBD), such as Crohn's disease (CD) or ulcerative colitis (UC) are at increased risk of developing colorectal ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Um Modelo murino de próstata humana Metástase Ortotópico

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

Profiling Molecular do microambiente do tumor invasivo em um modelo 3-Dimensional de células de câncer colorretal e<em&gt; Ex vivo</em&gt; Os fibroblastos

Invading colorectal cancer (CRC) cells have acquired the capacity to break free from their sister cells, infiltrate the stroma, and remodel the ...

Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

Localização, identificação e excisão de Depots Murino adiposo

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 ...

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Modelo murino de artéria femoral Injury fio com a implantação de uma droga patch Entrega perivascular

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

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The following protocol is of use to evaluate impaired cardiac function or myocardial stunning following moderate ischemic insults. The technique is useful ...

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

Pré-clínica Ortotópico Modelo murino de cancro da próstata humano

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

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Visualização Quantitativa de Infiltrado de Leucócitos em um Modelo Murino de Miocardite Fulminante por Microscopia de Folha de Luz

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