Name: murine appendectomy model of chronic colitis associated colorectal cancer by precise localization of caecal patch
Uploaded: 2019-08-24T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch at JoVE.com

Эта работа частично поддерживается фондами фундаментальных исследований для Центрального университета (G2018KY0302), Фонда фундаментальных исследований университета (KT00062), Национального фонда естественных наук Китая (81870380) и премии клинических исследований Первая аффилированная больница Университета Сиань Цзяотун в Китае (NO. XJTU1AF-CRF-2015-029). Авторы благодарят д-ра Chengxin Ши за его технические предложения на ранней стадии исследования модели аппаратной аппендэктомии, а также патологоанатом д-р Си Лю для оценки Н И Е окрашивания результатов колита и колоректального опухолей. Y.L. провела демонстрацию операции, провела анализ данных и написала черновик рукописи; J.L., G.L., З.П. и Y.M. приняли участие в хирургической подготовке, сборе тканей и видеопроизводстве; М.З. выполнял цитометрию потока и ELISA; З.В. и H.X. оказали техническую поддержку созданию клинически релевантной модели мурина; Р.Х.З. разработал исследование, руководил исследованием, писал и документировал рукопись; И.С. ознакомился с рукописью.

Все процедуры для животных были одобрены Институциональным комитетом по уходу за животными и использованию Университета Сиань Цзяотун (Нет. XJTULAC2019-1023).
1. Мышей аппендэктомия
<ol><li>Дом 8-10-недельный C57BL/6 мышей-мужчин в сертифицированной среде без патогенов (SPF) в течение 1 не...

Модель аппендэктомии, связанная с колитным колоректальным раком, была получена с помощью хирургических шагов с высокой выживаемостью у мышей. В большинстве случаев, так как caecum был расположен под брюшной стенкой (Дополнительная таблица1, Дополнительнаятаблица 2 , и ...

Клиническая аппендицитявляется является стандартной хирургической процедурой, включающей удаление аппендикса в основномиз-за воспаления (например, аппендицита) 1,2,3. Тем не менее, биологическая функция vermiformчеловеческого аппендикса остается спорным 4,5,6. Приложение было расценено как рудиментарный остаток проектирования из cecum в толстой кишке. До недавнего времени эволюционные, иммунологические, морфологические и микробиологические исследования предполагали, что аппендикс может обладать различными функциями. Эти роли включают в себя производство иммуноглобинов (например, IgA и IgG), различные В-клетки и Т-клетки, критически важные для адаптивных иммунных реакций в кишечнике связанных лимфоидных тканей (GALTs), и пополнение толстой кишки с commensal микробиоты 6 , 7 (г. , 8 , 9 До 9 , 10 Лет , 11 Год , 12.
Клинические эпидемиологические исследования пациентов с предварительной аппендэктомией или острым аппендицитом также выявили его потенциальную роль в патогенезе заболеваний человека, таких как воспалительные заболевания кишечника (IBD), колоректальный рак и нежелудочное тесте заболеваний (например, болезнь Паркинсона и сердечно-сосудистые заболевания)13,14,15,16,17,18. Например, большое исследование азиатской когорты населения с 75 979 пациентами аппендэктомии недавно показало значительную связь между аппендэктомией и последующим развитием колоректального рака, одного из наиболее распространенных злокачественных новообразований с высокой частотой и смертность14,19. Соответственно, создание подходящей модели аппендэктомии животных, напоминающей человека, будет полезно исследовать биологические функции и молекулярные механизмы аппендикса при патогенезе болезни.
Многие млекопитающие обладают аппендиксом или аппендикс-подобным органом, в ключая приматов, лагоморфы (например, кролики), некоторые грызуны и сумчатые20. Для малых и широко используемых лабораторных животных, кролик обладает vermiform приложение морфологически напоминающие человека21,22, но GALT в кролика является чрезвычайно большим по сравнению с тем, что в организме человека, так как большинство лимфоидных тканей также находятся в патчи Пейер, расположенных в тонком и толстом кишечнике21. Дополнительно, кролик показывает по-разному лимфоидную фолликулярную структуру, распределение T клеток, и плотность иммуноглобулина от человека, который делает изучение их придатков неуместным21.
Мыши являются наиболее часто используемых животных модели для изучения патофизиологии человека и проверить различные существующие и новые терапии23,24,25. Один белый большой лимфоидный кластер на вершине caecum у мышей, известный как caecal патч, как полагают, выполнять функции, аналогичные человеческого аппендикса26,27,28. Тем не менее, это практически трудно отделить caecal патч от caecum у мышей. До сих пор общие хирургические процедуры для индуцирования аппендицита в мышиной модели включают относительно большой разрез (например, 1-2 см) через брюшную стенку, чтобы получить доступ ко всему caecum (Дополнительная таблица 1)29, 30,31,32,33,34,35,36.
При этом, для создания модели аппендэктомии, связанной с желудочно-кишечного заболевания, этот доклад представляет собой легкий хирургический протокол для удаления кейковых патчов у мышей. За этим следует комбинированное введение генотоксического агента АОМ и провоспалительного агента DSS для индукции колит-ассоциированного колоректального рака, аналогичного тому, что наблюдается у людей. IBD было показано, что фактор риска развития рака кишечника37,38. Сочетание AOM / DSS-индуцированных хронический колит связанных колоректального рака была хорошо зарекомендовала себя, и читатели могут обратиться к Neufert и др., и Такер и др. для подробных процедур39,40. Эта воспроизводимая и быстрая модель аппендэктоктомии морин может быть использована для изучения аппендикса модулированного воспаления кишечника и микробиоты толстой кишки, особенно в развитии и прогрессировании IBD и колоректального рака.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Azoxymethane&#65288;AOM</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Inc.</td>
			<td>A5486</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran Sulfate Sodium Salt&#65288;DSS</td>
			<td>MP Biomedicals,Inc.</td>
			<td>160110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Entoiodine</td>
			<td>Shanghai likon high technology disinfection co. LTD</td>
			<td>310102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>digital caliper</td>
			<td>Ningbo yuanneng trading co. LTD</td>
			<td>4859263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 Silk Sutures</td>
			<td>Yuanlikang co. LTD</td>
			<td>20172650032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 Prolene Sutures</td>
			<td>Yuanlikang co. LTD</td>
			<td>20172650032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric coagulation pen</td>
			<td>Chuang mei medical equipment co. LTD</td>
			<td>28221777292</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disposable syringe 1ml</td>
			<td>Shengguang medical products co. LTD</td>
			<td>3262-2014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disposable syringe 10ml</td>
			<td>Shengguang medical products co. LTD</td>
			<td>3262-2014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% Medicinal alcohol</td>
			<td>Shandong anjie high-tech disinfection technology co. LTD</td>
			<td>371402AAJ008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Inc.</td>
			<td>57-33-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Physiological Saline</td>
			<td>Shandong qidu pharmaceutical co. LTD</td>
			<td>H37020766</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Cotton Swab</td>
			<td>Henan ruike medical co., LTD</td>
			<td>RK051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Instruments-Ophthalmic</td>
			<td>Jinzhong Shanghai co.LTD</td>
			<td>WA3050</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine appendectomy model of chronic colitis associated colorectal cancer by precise localization of caecal patch

Человеческий аппендикс был недавно вовлечен играть важную биологическую роль в патогенезе различных сложных заболеваний, таких как колоректальный рак, воспалительные заболевания кишечника, и болезнь Паркинсона. Для изучения функции аппендикса была создана модель аппендэктомии, связанной с заболеваниями кишечника, и описана здесь ее пошаговая протокол. В настоящем докладе вводится протокол легкого для удаления цекаляных патчов у мышей, а затем химическая индукция хронического колит-ассоциированного колоректального рака с использованием комбинации декеспна сульфата натрия (DSS) и азоксиметана (AOM). IgA специфических клеток и Концентрация IgA были значительно сокращены после удаления caecal патч у мужчин C57BL/6 мышей по сравнению с теми, в фиктивной группе. Одновременное введение 2% DSS и AOM привело к почти 80% выживаемости мышей в как фиктивных, так и в группах аппендэктомии без значительной потери веса тела. Гистологические результаты подтвердили воспаление толстой кишки и различные степени аденокарциномы. Эта модель может быть использована для изучения функциональной роли аппендикса в поддержании кишечной микробиоты гомеостаза и патогенеза кишечного колита и злокачественных новообразований, а также для потенциального развития лекарственной терапии.

Создание модели аппендэктомии морин
Эта модель мурин аппендэктомии хронического колита, связанного с колоректальным раком, может быть получена путем последующих последовательных хирургических и индукционных шагов, как показано на рисунке 1. Н?...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch at JoVE.com

Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch

Представленный протокол описывает легкое хирургическое удаление аппендикса (кейкальный патч) в мыши с последующим индукцией воспалительных заболеваний кишечника, связанных колоректального рака. Эта модель аппаратной системы мурин позволяет иссмотреть биологическую роль аппендикса в патогенезе желудочно-кишечного заболевания человека.

Murine Appendectomy Модель хронический колит связанный колоректальный рак по точной локализации Caecal патч

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal ...

Общий протокол описывает легко выполняемые хирургические процедуры удаления аппендикса, известного как кекальный пластырь у мышей. Модель аппендэктомии мурина может быть использована для изучения биологических ролей аппендикса при патогенезах желудочно-кишечных заболеваний человека. Человеческий аппендикс является спорным органом.Недавние исследования показали, что приложение играет важную роль в поддержании здоровья кишечника. Для изучения биологической функции аппендикса крайне важно создать связанную с болезнью модель аппендэктомии животных. В этом протоколе мы опишем простые и безопасные хирургические шаги по удалению аппендикса, известного как кекальный пластырь у мышей.Для обеспечения успеха этой модели, Есть три ключевых шага, как вы увидите в следующем видео. Во-первых, найти caecum мышей до операции. Во-вторых, сделать небольшой разрез в брюшной полости.В-третьих, дезинфицировать и закрыть пень caecum. Первая часть, аппендэктомия мышей. Подготовка стерильных хирургических инструментов и чистящих средств перед операцией.Анестезировать и обеспечить мышь на платформе в положении на спине, поместив четыре полосы медицинской клейкой лентой через конечности, чтобы предотвратить постуральное движение во время операции. Аккуратно коснитесь всего живота мыши, чтобы найти ощущение удара. Обложка драпировки и дезинфицировать бритую область живота мыши как можно более широко, используя два раза энтоиодина.Сделайте продольный разрез в диапазоне от 0,5 сантиметра до одного сантиметра в средней линии живота. В соответствии с предопределенным расположением caecum, искать caecum и осторожно экстерьера его примерно на один сантиметр длиной, чтобы определить caecal патч. Используйте предварительно разогретый и стерильный физиологический солевой раствор для увлажнения кишечника.Для предотвращения потенциальных осложнений послеоперационного кровотечения и инфекции, ligate мезентерических кровеносных сосудов caecum с помощью 8-0 Шов. Гидрат caecum с солевым раствором. Отметьте область ресекции с помощью шов 4-0 с открытой петлей вблизи вершины кекума в проксимальной толстой кишке.Отрежьте кекальный патч ниже отмеченной ресекции с помощью микро-ножниц и уничтожить остаточный caecal содержание с медицинской ватные тампоны. Дезинфицировать пень caecum с энтоиодином. Закрыть пень с работает шов с помощью 8-0 Шов.Аккуратно удалите петлю потока 4-0, ранее используемую для маркировки ресекции на пне caecum. Стерилизовать заулное положение с помощью энтоиодина. Увлажнить режущей области с солевым раствором.Закройте слой мускулатуры бегущим швом с помощью 8-0 шовная нить. Закройте слои кожи с помощью прерванных швов с 4-0 шовной нитью. Дезинфицировать хирургический разрез дважды энтоиодином.Затем удалите йод с помощью 75%медицинского спирта. Аккуратно переверните мышь назад. Подкожно вводят 0,1 миллиграмма на килограмм массы бупренорфина и 0,4 миллилитров физиологического солевого раствора.И покоим мышь на тепловой площадке, пока она не вернется в сознание. Положите мышь обратно в стерильную клетку, и внимательно следить за мышью для признаков боли в течение трех дней после операции, чтобы обеспечить его восстановление. Вторая часть: Индукция колит-ассоциированного колоректального рака с азоксиметаном, AOM, и Декстран Сульфат натрия, DSS, семь дней после аппендэктомии.Оттепель один aliquot AOM и разбавить его до 1 миллиграмма на миллилитр с помощью 0,9% нормального солевого раствора. Весь процесс подготовки осуществляется в дымовой капот. Растворите четыре грамма порошка DSS в 200 миллилитров autoclaved раствор воды для подготовки 2%DSS.Каждая клетка содержит пять мышей. Сделайте внутриперитонеальную инъекцию AOM с 0,01 миллилитра на грамм на мышь, основываясь на его весе. Замените автоматическую воду на 2%DSS в течение пяти дней.Мышей будут кормить автоклавной водой в течение дополнительных двух циклов. Третья часть:Результаты. Результаты Flow и ELISA свидетельствуют об успешном удалении патча caecal.Эта процедура может способствовать значительному сокращению IgA-специфических плазменных клеток, очевидное изменение секреторий IgA в толстой кишки, по сравнению с 3%DSS, который имеет высокий уровень смертности и значительное изменение веса из-за тяжелой кровавый стул, анус пролапс, и брюшной abcess. 2%DSS подходит для всего процесса для его высокой выживаемости почти до 80% и разумное изменение веса как в фиктивных и аппендэктомии групп. Как показано на этих изображениях, мы успешно индуцированных колит связанных колоректальных опухолей.На изображениях окрашивания Н И Э черная стрелка указывает на слизистую язву, наконечник стрелы указывает на аденокарциному, а белая стрелка указывает на инфильтрацию нейтрофила между железами. Различные стадии аденокарциномы можно увидеть как в фиктивных, так и в аппендицитных группах. Эта экономически эффективная модель аппендэктомии Murine может быть использована для ответа на некоторые важные вопросы, такие как: какова роль приложения в регуляции кишечных бактерий и как он участвует в иммунном ответе в кишечнике связанных лимфоидной ткани.Помните, что, чтобы избежать повреждений в адгезии кишечника, предварительное расположение caecum и небольшой разрез кожи имеют важное значение. Кроме того, мы использовали 2%DSS, чтобы вызвать колит. Но более высокая концентрация DSS может быть использована для других штаммов мышей.

Research

JoVE Journal

Medicine

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

Ортотопическая модели мышей раку мочевого пузыря

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane (AOM) and Dextran Sulfate Sodium (DSS)

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane AOM and Dextran Sulfate Sodium DSS

Моделирование колит, связанного с раком Azoxymethane (ОСО) и декстран сульфат натрия (DSS)

Individuals with inflammatory bowel disease (IBD), such as Crohn's disease (CD) or ulcerative colitis (UC) are at increased risk of developing colorectal ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Ортотопическая мышиной модели человеческого рака простаты Метастазы

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

Молекулярная профилирования из инвазивным опухоли микроокружения в 3-мерной модели клеток колоректального рака и<em&gt; Экс естественных</em&gt; Фибробласты

Invading colorectal cancer (CRC) cells have acquired the capacity to break free from their sister cells, infiltrate the stroma, and remodel the ...

Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

Локализация, идентификация и Удаление мышиный жировой депо

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 ...

Murine Model of Femoral Artery Wire Injury with Implantation of a Perivascular Drug Delivery Patch

Мышиной модели бедренной артерии Wire травмы с имплантацией Периваскулярный Drug Delivery Patch

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

Murine Isolated Heart Model of Myocardial Stunning Associated with Cardioplegic Arrest

Мышиные Изолированные Сердце Модель инфаркта Потрясающие, связанных с кардиоплегического ареста

The following protocol is of use to evaluate impaired cardiac function or myocardial stunning following moderate ischemic insults. The technique is useful ...

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

Доклинические Ортотопическая мышиной модели рака простаты человека

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

Количественная визуализация инфильтрата лейкоцитов в мышиной модели фульминантного миокардита методом микроскопии легких листов

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...