Name: murine appendectomy model of chronic colitis associated colorectal cancer by precise localization of caecal patch
Uploaded: 2019-08-24T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch at JoVE.com

Bu çalışma kısmen Merkez Üniversitesi Temel Araştırma Fonları (G2018KY0302), Üniversite Temel Araştırma Geliştirme Fonu (KT00062), Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81870380) ve Klinik Araştırma Ödülü tarafından desteklenmiştir. Çin'deki Xi'an Jiaotong Üniversitesi'nin Ilk Bağlı Hastanesi (NO. XJTU1AF-CRF-2015-029). Yazarlar murine apendektomi modelinin erken keşif aşamasında yaptığı teknik öneriler için Dr Chengxin Shi teşekkür, yanı sıra kolit ve kolorektal tümörlerin H & E boyama sonuçlarının değerlendirilmesi için patolog Dr Xi Liu. Y.L. ameliyat gösterisini yaptı, veri analizi yaptı ve taslağı yazdı; J.L., G.L., Z.P., ve Y.M. cerrahi hazırlık, doku koleksiyonları ve video prodüksiyonu nda yer aldılar; M.Z. akış sitometrisi ve ELISA'yı; Q.W. ve H.X. klinik olarak ilgili bir murine modeli nin üretilmesi için teknik destek sağladılar; R.X.Z. çalışmayı tasarladı, araştırmayı denetledi ve el yazını yazdı ve ispat etti; J.S. taslağı inceledi.

Tüm hayvan prosedürleri Xi'an Jiaotong Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylandı (No. XJTULAC2019-1023).
1. Fareler apendektomi
<ol><li>House 8-10 haftalık C57BL/6 erkek fareler ameliyattan önce 1 hafta boyunca sertifikalı spesifik patojensiz (SPF) bir ortamda.</li>
	<li>Aşağıdaki steril cerrahi aletleri hazırlayın: bir çift mikro makas, bir çift mikro-forceps, iki boy (4-0 ve 8-0) sterilize edilebilen emilemeyen dikişler, iğne tutuculu e...

Kolit ilişkili kolorektal kanserin bir murine apendektomi modeli farelerde yüksek sağkalım oranı ile cerrahi adımlar kullanılarak elde edildi. Çoğu durumda, kaecum karın duvarının altına yerleştirildiğinden (EkTablo 1, Ek Tablo 2, ve Şekil 2), laparotomi olmadan yerini önceden değerlendirmek zordu. Bu cerrahi protokolde, tümsek dokunmadan kolay bir adım getirilmiş ve çekum un ön lokalizasyonu için hassasiyeti artırmak için</stro...

Klinik apendektomi çoğunlukla inflamasyon nedeniyle apandisit çıkarılması içeren standart bir cerrahi işlemdir (örneğin, apandisit)1,2,3. Ancak, vermiform insan apandisbiyolojik işlevi tartışmalıkalır 4,5,6. Apandis, kalın bağırsaktaki çekumdan yansıtılan bir kalıntı olarak kabul edilmiştir. Yakın zamana kadar, evrimsel, immünolojik, morfolojik ve mikrobiyolojik çalışmalar apandisin farklı işlevlere sahip olabileceğini ileri sürmüştür. Bu roller immünglobinlerin üretimi (örneğin, IgA ve IgG), bağırsakilişkili lenfoid dokularda adaptif immün yanıtlar için kritik olan çeşitli B hücreleri ve T hücreleri (GALTs) ve kalın bağırsağın kommensal mikrobiyotalarla doldurulmasıdır. 6.000 , 7.000 , 8.000 , 9.000 , 10.000 , 11.11.20 , 12. Yıl.
Daha önce apendektomi veya akut apandisit olan hastaların klinik epidemiyolojik çalışmaları da inflamatuar barsak hastalığı (IBD), kolorektal kanser ve non-gastrointestinal gibi insan hastalıklarının patogenezinde potansiyel rollerini ortaya koymuştur. bozuklukları (örneğin, Parkinson hastalığı ve kardiyovasküler hastalık)13,14,15,16,17,18. Örneğin, 75.979 apendektomi hastası olan büyük bir Asya popülasyon kohort çalışması, yakın zamanda apendektomi ile kolorektal kanserin sonraki gelişimi arasında anlamlı bir ilişki olduğunu gösterdi. mortalite14,19. Buna göre, bir insana benzeyen uygun bir hayvan apendektomi modelinin oluşturulması, hastalık patogenezinde apandisin biyolojik fonksiyonlarını ve moleküler mekanizmalarını araştırmak için yararlı olacaktır.
Birçok memeli primatlar, lagomorphs (örneğin, tavşan), bazı kemirgenler ve keseli20dahil olmak üzere bir apandis veya apandis benzeri organ, sahip. Küçük ve yaygın olarak kullanılan laboratuvar hayvanları için, tavşan vermiform apendiks morfolojik insan 21 benzeyen sahiptir 21,22, ama tavşan GALT son derece büyük insanlarda göre, çoğunluğu beri lenfoid dokular da Peyer's yamalar hem ince hem de kalın bağırsaklarda bulunan bulunur21. Ayrıca, tavşan farklı bir lenfoid foliküler yapı gösterir, T hücre dağılımı, ve insan dan immünglobulin yoğunluğu, hangi onların ekleri uygun olmayan çalışma yapar21.
Fareler insan patofizyolojisi çalışma ve çeşitli mevcut ve roman therapuetics23,24,25test etmek için en yaygın olarak kullanılan hayvan modelidir. Farelerde caecum apeks tek beyaz büyük lenfoid küme, kaekal yama olarak bilinen, insan apandis26 benzer işlevleri gerçekleştirmek için düşünülmektedir26,27,28. Ancak, farelerde caecum caecal yama ayırmak için pratik olarak zordur. Şimdiye kadar, bir fare modeliapit indükleme için ortak cerrahi prosedürler nispeten büyük bir kesi içerir (örneğin, 1-2 cm) karın duvarı üzerinden tüm caecum erişim elde etmek için (Ek Tablo 1)29, 30,31,32,33,34,35,36.
Burada, gastrointestinal hastalık ile ilişkili bir apendektomi modeli oluşturmak için, Bu rapor farelerde kaecal yama çıkarılması için kolay bir cerrahi protokol sunuyor. Bu insanlarda görülen benzer kolit ilişkili kolorektal kanser indüksiyon uyğun için genotoksik ajan AOM ve pro-inflamatuar ajan DSS kombine uygulaması tarafından takip edilir. IBD bağırsak kanseri bir risk faktörü olduğu gösterilmiştir37,38. AOM / DSS kaynaklı kronik kolit ilişkili kolorektal kanser kombinasyonu iyi kurulmuş olmuştur, ve okuyucular Neufert ve ark başvurabilirsiniz, ve Thaker ve ark ayrıntılı prosedürler için39,40. Bu tekrarlanabilir ve hızlı murine apendektomi modeli apandis-modüle bağırsak iltihabı ve kolon mikrobiyota çalışma için kullanılabilir, özellikle gelişimi ve İBTorital kanser ilerlemesi.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Azoxymethane&#65288;AOM</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Inc.</td>
			<td>A5486</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran Sulfate Sodium Salt&#65288;DSS</td>
			<td>MP Biomedicals,Inc.</td>
			<td>160110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Entoiodine</td>
			<td>Shanghai likon high technology disinfection co. LTD</td>
			<td>310102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>digital caliper</td>
			<td>Ningbo yuanneng trading co. LTD</td>
			<td>4859263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 Silk Sutures</td>
			<td>Yuanlikang co. LTD</td>
			<td>20172650032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 Prolene Sutures</td>
			<td>Yuanlikang co. LTD</td>
			<td>20172650032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric coagulation pen</td>
			<td>Chuang mei medical equipment co. LTD</td>
			<td>28221777292</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disposable syringe 1ml</td>
			<td>Shengguang medical products co. LTD</td>
			<td>3262-2014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disposable syringe 10ml</td>
			<td>Shengguang medical products co. LTD</td>
			<td>3262-2014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% Medicinal alcohol</td>
			<td>Shandong anjie high-tech disinfection technology co. LTD</td>
			<td>371402AAJ008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Inc.</td>
			<td>57-33-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Physiological Saline</td>
			<td>Shandong qidu pharmaceutical co. LTD</td>
			<td>H37020766</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Cotton Swab</td>
			<td>Henan ruike medical co., LTD</td>
			<td>RK051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Instruments-Ophthalmic</td>
			<td>Jinzhong Shanghai co.LTD</td>
			<td>WA3050</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine appendectomy model of chronic colitis associated colorectal cancer by precise localization of caecal patch

İnsan apandisi son zamanlarda kolorektal kanser, inflamatuar barsak hastalığı ve Parkinson hastalığı gibi çeşitli karmaşık hastalıkların patogenezinde önemli biyolojik roller oynamaktadır. Apandisin işlevini incelemek için bağırsak hastalığı ile ilişkili bir murine apendektomi modeli oluşturulmuş ve adım adım protokolü burada tanımlanmıştır. Bu rapor, dekstran sülfat sodyum (DSS) ve azoksimetan (AOM) kombinasyonunu kullanarak kronik kolit ilişkili kolorektal kanserin kimyasal indüksiyonu takip farelerde kaekal yama kaldırma için bir kolay protokol tanımaktadır. Erkek C57BL/6 farelerinde kaekal yamanın çıkarılmasıyla igA spesifik hücreler ve IgA konsantrasyonu önemli ölçüde azaldı. Aynı anda % 2 DSS ve AOM uygulanması önemli vücut ağırlığı kaybı olmadan hem sham hem de apendektomi gruplarında yaklaşık% 80 fareler in sağkalım sonuçlandı. Histolojik sonuçlar kolon iltihabı ve farklı derecelerde adenokarsinom olduğunu doğruladı. Bu model bağırsak mikrobiyota homeostazve bağırsak kolit ve malignite patogenezi bakımında ek fonksiyonel rolü çalışma için kullanılabilir, yanı sıra ilaç hedefleme tedavilerin potansiyel gelişimi için.

Murine apendektomi modelinin kurulması
Kronik kolit ilişkili kolorektal kanserin bu murine apendektomi modeli Şekil1'de gösterildiği gibi sıralı cerrahi ve indüksiyon adımlarını izleyerek oluşturulabilir. Kaecumun en sık pozisyonları sol ve sağ iliak fossa ve ardından karın orta hattındadır (Şekil 2). Palpasyon yöntemi ile karın kesiği nden önce kaecumun ön lokalizasyonunun başarılı oranı ...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch at JoVE.com

Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch

Sunulan protokol, inflamatuar barsak hastalığı ile ilişkili kolorektal kanserin indüksiyonu takip eden bir farede apandisin (kaekal yama) kolay bir cerrahi olarak çıkarılmasını açıklar. Bu murine apendektomi modeli insan gastrointestinal hastalığın patogenezinde apandisin biyolojik rolünün araştırılmasını sağlar.

Kaekal Patch Kesin Lokalizasyonu ile Kronik Kolit İlişkili Kolorektal Kanser Murine Apendektomi Modeli

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal ...

Genel protokol farelerde kaekal yama olarak bilinen apandisçıkarma kolayca uygulanan cerrahi prosedürleri açıklar. Murine apendektomi modeli, apendiksin insan gastrointestinal hastalığının patogenezindeki biyolojik rollerini incelemek için kullanılabilir. İnsan apandisiti tartışılmaz bir organdır.Son çalışmalar apandisin bağırsak sağlığının korunmasında önemli bir rol oynadığını ileri sürmüşlerdir. Apandisin biyolojik işlevini incelemek için hastalıkla ilişkili apendektomi hayvan modeli nin üretilmesi çok önemlidir. Bu protokolde, farelerde kaekal yama olarak bilinen apandisi çıkarmanın basit ve güvenli bir cerrahi adımını açıklayacağız.Bu modelin başarısını sağlamak için, aşağıdaki videoda göreceğiniz gibi üç önemli adım vardır. İlk olarak, ameliyattan önce farelerin kaecum bulmak. İkincisi, karın küçük bir kesi yapmak.Üçüncüsü, caecum kütüğünün dezenfekte edin ve kapatın. İlk bölüm, fareler apendektomi. Ameliyat öncesi steril cerrahi aletler ve temizlik solüsyonları hazırlayın.Ameliyat sırasında postural hareketi önlemek için ekstremiteler boyunca tıbbi yapışkan bant dört şeritler yerleştirerek bir supine pozisyonda bir platform üzerinde fare anestezi ve güvenli. Yavaşça yumru hissi bulmak için farenin tüm karın dokunun. Örtünün üzerini örtün ve fare karnının tıraş lı bölgesini iki kez entoyodin kullanarak mümkün olduğunca geniş bir şekilde dezenfekte edin.Karın orta hattında 0,5 santimetre ile bir santimetre arasında değişen uzunlamasına bir kesi yapın. Kaecum önceden belirlenmiş konumuna göre, caecum aramak ve yavaşça yaklaşık bir santimetre uzunluğunda kaecal yama tanımlamak için dışa. Bağırsak nemlendirmek için önceden ısıtılmış ve steril fizyolojik salin kullanın.Postoperatif kanama ve enfeksiyon olası komplikasyonları önlemek için, 8-0 kullanarak kaecum mezenterik kan damarları ligate Dikiş. Caecum'u tuzlu suyla nemlendirin. Proksimal kolonda caecum apeks yakın açık döngü ile 4-0 sütür kullanarak rezeksiyon bölgesi işaretleyin.Mikro makas kullanarak işaretli rezeksiyonun altındaki kaekal yamasını kesin ve tıbbi pamuklu bezlerle kalan kaecal içeriğini silin. Kaecum kütüğünün entoiyomu ile dezenfekte edin. 8-0'ı kullanarak kütüğü çalıştırarak kapatın Dikiş.Daha önce kaecum kütüğünde rezeksiyon işaretleme için kullanılan 4-0 iplik döngü, dikkatle çıkarın. Entoiyot kullanarak dikişli konumu sterilize. Kesme alanını tuzlu su ile yeniden nemlendirin.8-0 kullanarak çalışan dikiş ile kas tabakasını kapatın dikiş iplik. 4-0 dikiş ipliği ile kesilen dikişleri kullanarak cilt tabakalarını kapatın. Cerrahi kesiği entoiyom ile iki kez dezenfekte edin.Sonra, % 75 tıbbi alkol kullanarak iyot çıkarın. Fareyi yavaşça geri çevirin. Subkutan buprenorfin kilogram vücut ağırlığı başına 0.1 miligram enjekte, ve fizyolojik tuzlu 0.4 mililitre.Ve fareyi ısı yastığında dinlendirin, ta ki bilinçliliğe dönene kadar. Fareyi steril kafese geri koyun ve iyileşmesini sağlamak için ameliyattan sonra üç gün boyunca ağrı belirtileri için fareyi yakından izleyin. İkinci bölüm: Azoksimetan ile Kolit İlişkili Kolorektal Kanser indüksiyonu, AOM, ve Dekstran Sodyum Sülfat, DSS, yedi gün post-apendektomi.AOM bir aliquot eritin ve% 0.9 normal tuzlu kullanarak mililitre başına 1 miligram seyreltin. Tüm hazırlık süreci duman kaputunda gerçekleştirilir. % 2 DSS hazırlamak için 200 mililitre otoklavlı su çözeltisi dört gram DSS tozu çözünür.Her kafeste beş fare var. Ağırlığına göre fare başına gram başına 0,01 mililitre ile Intraperitoneal AOM enjeksiyonu yapın. Otoklavlı suyu beş gün boyunca %2 DSS ile değiştirin.Fareler ek iki döngü için otoklavlı su ile beslenir. Üçüncü bölüm:Sonuçlar. Akış ve ELISA sonuçları kaecal yamanın başarılı bir şekilde kaldırıldığını gösterir.Bu işlem IgA özgü plazma hücrelerinin önemli azalma katkıda bulunabilir, kalın bağırsakta salgı IgA bariz bir değişiklik, karşılaştırıldığında 3%DSS, şiddetli kanlı dışkı nedeniyle yüksek mortalite oranı ve önemli kilo değişikliği vardır, anüs prolapsus, ve abdominal abcess. %2'lik DSS, yüksek sağkalım oranının yaklaşık %80'e kadar olması ve hem sham hem de apendektomi gruplarında makul kilo değişimi için tüm süreç için uygundur. Bu görüntülerde gösterildiği gibi kolitle ilişkili kolorektal tümörleri başarıyla indükledik.H & E boyama görüntülerde, siyah ok mukozal ülser gösterir, ok ucu adenokarsinom gösterir, ve beyaz bir ok bezleri arasında nötrofil infiltrasyon gösterir. Adenokarsinomun farklı evreleri hem sham hem de apendektomi gruplarında görülebilir. Bu uygun maliyetli Murine Apendektomi Modeli gibi bazı önemli soruları cevaplamak için kullanılabilir: bağırsak bakterilerinin düzenlenmesinde apandis rolü nedir ve nasıl bağırsak ilişkili lenfoid dokuda bağışıklık yanıtı katılır.Unutmayın, bağırsak yapışmasında hasar görmesini önlemek için, kaecum ve küçük deri kesisi ön konumu önemlidir. Buna ek olarak, kolit indüklemek için% 2 DSS kullanılır. Ancak diğer fare suşları için daha yüksek bir DSS konsantrasyonu kullanılabilir.

Research

JoVE Journal

Medicine

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

Murin Mesane Kanseri bir Ortotopik Model

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane (AOM) and Dextran Sulfate Sodium (DSS)

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane AOM and Dextran Sulfate Sodium DSS

Azoxymethane (AOM) ve Dekstran Sülfat Sodyum (DSS) ile Modelleme Kolit-İlişkili Kanser

Individuals with inflammatory bowel disease (IBD), such as Crohn's disease (CD) or ulcerative colitis (UC) are at increased risk of developing colorectal ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

İnsan Prostat Kanser metastaz Ortotopik fare modeli

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

Moleküler Kolorektal Kanser Hücrelerinin bir 3-Boyutlu Modeli İnvaziv tümör mikro Profili ve<em&gt; Ex vivo</em&gt; Fibroblastlar

Invading colorectal cancer (CRC) cells have acquired the capacity to break free from their sister cells, infiltrate the stroma, and remodel the ...

Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

Yerelleştirme, Kimlik ve Eksizyon Kemirgen Yağ depolarının

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 ...

Murine Model of Femoral Artery Wire Injury with Implantation of a Perivascular Drug Delivery Patch

Bir Perivasküler Drug Delivery Patch İmplantasyonunda ile Femoral Arter Tel Yaralanma sıçan Modeli

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

Murine Isolated Heart Model of Myocardial Stunning Associated with Cardioplegic Arrest

Kardiyoplejik Tutuklanma ile Miyokard Çarpıcı İlişkili sıçan İzole Kalp Modeli

The following protocol is of use to evaluate impaired cardiac function or myocardial stunning following moderate ischemic insults. The technique is useful ...

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

İnsan Prostat Kanseri klinik öncesi Ortotopik murin modeli

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

Bir Fulminan Miyokardit Modelinde Işık Yeri Mikroskopisi İle Lökosit İnfiltrasyonunun Nicel Görselleştirilmesi

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...