Name: assessment of oxidative damage in the primary mouse ocular surface cells/stem cells in response to ultraviolet-c (uv-c) damage
Uploaded: 2020-02-15T12:00:00
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Os autores reconhecem o apoio do Centro de Pesquisa Yenepoya, Yenepoya (Considerado Universidade) para as instalações de infraestrutura.

O experimento foi realizado em células oculares primárias/células-tronco derivadas do olho do rato albino suíço. O uso de animais para a colheita dos olhos para este experimento foi aprovado pelo Comitê Institucional de Ética Animal, Yenepoya (Considerado Universidade) (número de aprovação do IEAC, 6a/19.10.2016).
1. Preparativos de reagentes
NOTA: A derivação das células primárias/células-tronco da superfície ocular do camundongo está além do escopo...

<ol>
	<li>Gipson, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ocular+surface:+the+challenge+to+enable+and+protect+vision:+the+Friedenwald+lecture.">The ocular surface: the challenge to enable and protect vision: the Friedenwald lecture.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 48 (10), 4391-4398 (2007).</li><li>Sridhar, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+of+cornea+and+ocular+surface.">Anatomy of cornea and ocular surface.</a> Indian Journal of Ophthalmoogy. 66 (2), 190-194 (2018).</li><li>Betteridge, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+oxidative+stress.">What is oxidative stress.</a> Metabolism. 49 (2), 3-8 (2000).</li><li>Ray, P. D., Huang, B. W., Tsuji, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+(ROS)+homeostasis+and+redox+regulation+in+cellular+signaling.">Reactive oxygen species (ROS) homeostasis and redox regulation in cellular signaling.</a> Cell Signaling. 24 (5), 981-990 (2012).</li><li>Nita, M., Grzybowski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+the+Reactive+Oxygen+Species+and+Oxidative+Stress+in+the+Pathomechanism+of+the+Age-Related+Ocular+Diseases+and+Other+Pathologies+of+the+Anterior+and+Posterior+Eye+Segments+in+Adults.">The Role of the Reactive Oxygen Species and Oxidative Stress in the Pathomechanism of the Age-Related Ocular Diseases and Other Pathologies of the Anterior and Posterior Eye Segments in Adults.</a> Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2016, 3164734 (2016).</li><li>Covarrubias, L., Hernandez-Garcia, D., Schnabel, D., Salas-Vidal, E., Castro-Obregon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Function+of+reactive+oxygen+species+during+animal+development:+passive+or+active.">Function of reactive oxygen species during animal development: passive or active.</a> Developmental Biology. 320 (1), 1-11 (2008).</li><li>Behar-Cohen, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultraviolet+damage+to+the+eye+revisited:+eye-sun+protection+factor+(E-SPF(R)),+a+new+ultraviolet+protection+label+for+eyewear.">Ultraviolet damage to the eye revisited: eye-sun protection factor (E-SPF(R)), a new ultraviolet protection label for eyewear.</a> Clinical Ophthalmology. 8, 87-104 (2014).</li><li>Izadi, M., Jonaidi-Jafari, N., Pourazizi, M., Alemzadeh-Ansari, M. H., Hoseinpourfard, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photokeratitis+induced+by+ultraviolet+radiation+in+travelers:+A+major+health+problem.">Photokeratitis induced by ultraviolet radiation in travelers: A major health problem.</a> Journal of Postgraduate Medicine. 64 (1), 40-46 (2018).</li><li>de Jager, T. L., Cockrell, A. E., Du Plessis, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultraviolet+Light+Induced+Generation+of+Reactive+Oxygen+Species.">Ultraviolet Light Induced Generation of Reactive Oxygen Species.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 996, 15-23 (2017).</li><li>Degl'Innocenti, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxadiazon+affects+the+expression+and+activity+of+aldehyde+dehydrogenase+and+acylphosphatase+in+human+striatal+precursor+cells:+A+possible+role+in+neurotoxicity.">Oxadiazon affects the expression and activity of aldehyde dehydrogenase and acylphosphatase in human striatal precursor cells: A possible role in neurotoxicity.</a> Toxicology. 411, 110-121 (2019).</li><li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=APC-Cdh1+Regulates+Neuronal+Apoptosis+Through+Modulating+Glycolysis+and+Pentose-Phosphate+Pathway+After+Oxygen-Glucose+Deprivation+and+Reperfusion.">APC-Cdh1 Regulates Neuronal Apoptosis Through Modulating Glycolysis and Pentose-Phosphate Pathway After Oxygen-Glucose Deprivation and Reperfusion.</a> Cellular and Molecular Neurobiology. 39, 123-135 (2019).</li></ol>

O método de coloração DCFDA descrito aqui permite a visualização de ROS em células vivas oculares primárias do camundongo tratadas com radiação UV-C. Uma vantagem desse método de coloração é que ele também permite que os pesquisadores estudem os efeitos imediatos da UV-C (3 horas após a exposição ao UVC) nas células vivas e sua enumeração simultânea para a porcentagem de ros positivo, bem como, células mortas. Além disso, como o método de coloração é usado nas células vivas, as células podem ...

A superfície ocular (OS) é uma unidade funcional composta principalmente pela camada externa e epíterlia glandular de córnea, glândula lacrimosa, glândula meibomiana, conjuntiva, parte das margens da tampa ocular e invações que transducam sinais1. A camada córnea em forma de cúpula transparente foca luz na retina. Este tecido avascular é composto por componentes celulares, como células epiteliais, ceratocitos e células endoteliais e componentes acelulares, como colágeno e glicosaminoglicanos2. A área é drenada por lágrimas que também fornecem a maioria dos nutrientes. A posição anatômica do SO obriga-o a estar em contato direto com o ambiente externo, muitas vezes expondo-o a vários componentes ásperos, como luz brilhante, micróbios, partículas de poeira e produtos químicos. Esse fator predispõe o SO a lesões físicas e o torna propenso a várias doenças.
O estresse oxidativo é causado devido ao desequilíbrio entre a produção de espécies de oxigênio reativa (ROS) e os mecanismos endógenos de defesa antioxidante3. Ros são classificados em moléculas reativas e radicais livres, ambos derivados de oxigênio molecular (O2) através da fosforilação oxidativa mitocondrial4. O antigo grupo é composto por espécies não radicais como peróxido de hidrogênio (H2O2), oxigênio singlet (1O2) e este último inclui espécies como anões de superóxido (O2-) e radicais hidroxilos(• OH),entre outras. Essas moléculas são subprodutos de processos celulares normais e seus papéis foram implicados em importantes funções fisiológicas, como transdução de sinal, expressão genética e defesa hospedeira5. Sabe-se que uma produção aprimorada de ROS é gerada em resposta a fatores como invasão de patógenos, xenobióticos e exposição à radiação ultra violeta (UV)4. Essa superprodução de ROS resulta em estresse oxidativo que leva ao dano de moléculas como ácidos nucleicos, proteínas e lipídios6.
A luz solar natural, a fonte mais predominante de radiação UV, é composta por UV-A (400-320 nm), UV-B (320-290 nm) e UV-C (290-200 nm)7. Uma correlação inversa entre o comprimento de onda e as energias espectrais foi relatada. Embora as radiações NATURAIS UV-C sejam absorvidas pela atmosfera, fontes artificiais como lâmpadas de mercúrio e instrumentos de soldagem emitem e, portanto, constituem um risco ocupacional. Os sintomas de exposição aos olhos incluem fotoqueratite e fotoqueratoconjuntivite8. A produção de ROS é um dos principais mecanismos de infligir danos celulares induzidos por UV9. No presente estudo, demonstramos a detecção de ROS utilizando o método de colorcetato diacetato de 2',7'-Diclororodihidrofluorescena (DCFDA) em células de superfície ocular primárias do camundongo/células-tronco expostas ao UV-C. A fluorescência verde foi capturada usando microscopia fluorescente. As células foram contra-manchadas com dois corantes, Hoechst 33342 e iodeto de propídio vermelho, para manchar as células vivas e mortas, respectivamente.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2&#39;,7&#39;-Dichlorofluorescein diacetate (DCFDA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D6883</td>
			<td>2&#39;,7&#39;-Dichlorofluorescein diacetate is fluorogenic probe and is permeable to cells. It is used for quantification of reactive oxygen species.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture dish (35 mm)</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>SA 003700112</td>
			<td>Sterile dishes for culturing the cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM High Glucose</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>AT007</td>
			<td>Most widely used cell culture media, contains 4500 mg/L of glucose.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, EU Origin</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>RM99955</td>
			<td>One of the most important components of cell culture media. It provides growth factors, amino acids, proteins, fat-soluble vitamins such as A, D, E, and K, carbohydrates, lipids, hormones, minerals, and trace elements.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutMax</td>
			<td>Gibco, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>35050061</td>
			<td>Used as a supplement and an alternative to L-glutamine. It helps in improving cell viability and growth.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HL-2000 Hybrilinker</td>
			<td>UVP</td>
			<td></td>
			<td>Hybridization oven/UV cross linker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33342</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B2261</td>
			<td>Hoechst stain is permeable to both live and dead cells. It binds to double starnded DNA irrespective of wether the cell is dead or alive.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td></td>
			<td>Basement membrane matrix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM Non-Essential Amino Acids (100X)</td>
			<td>Gibco, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11140050</td>
			<td>Used as a supplement to increase the cell growth and viability.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (Pen-Strep)</td>
			<td>Gibco, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15140122</td>
			<td>Penicillin and streptomycin is used to prevent the bacterial contamination in culture.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium Iodide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4170</td>
			<td>Fluorescent dye which is only permeable to dead cells. It binds with DNA and helps in distinguishing between live and dead cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TryplE Express</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>Gentle cell dissociation agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZOE Fluorescent Cell Imager</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of oxidative damage in the primary mouse ocular surface cells/stem cells in response to ultraviolet-c (uv-c) damage

A superfície ocular é submetida a desgaste regular devido a vários fatores ambientais. A exposição à radiação UV-C constitui um risco para a saúde ocupacional. Aqui, demonstramos a exposição de células-tronco primárias da superfície ocular do rato à radiação UV-C. A formação de espécies de oxigênio reativo (ROS) é a leitura da extensão do estresse/dano oxidativo. Em um ambiente in vitro experimental, também é essencial avaliar o percentual de células mortas geradas devido ao estresse oxidativo. Neste artigo, demonstraremos a coloração de 2',7'-Diclorofluoresceindiacetato (DCFDA) de células-tronco primárias de superfície ocular exposta do rato UV-C e sua quantificação com base nas imagens fluorescentes da coloração DCFDA. A coloração DCFDA corresponde diretamente à geração ROS. Demonstramos também a quantificação de células mortas e vivas por coloração simultânea com iodeto de propídio (PI) e Hoechst 3332, respectivamente, e o percentual de células Positivas DCFDA (ROS positivo) e PI.

DCFDA é um corante incolor que é uma forma quimicamente reduzida de fluoresceína usada como indicador para detectar ROS nas células. Este corante fica preso dentro das células e é facilmente oxidado à diclorodfluoresceína fluorescente (DCF), que emite uma fluorescência verde. Essa fluorescência pode ser detectada usando microscopia fluorescente. As células podem ser visualizadas e correlacionadas com o acúmulo de ROS da seguinte forma: (i) células vivas sem ros emitem alta fluorescência azul; (ii) células ...

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Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

Este protocolo demonstra a detecção simultânea de espécies de oxigênio reativa (ROS), células vivas e células mortas em culturas primárias vivas de células superficiais do rato. 2',7'-Diclorofluoresceindiacetato, iodeto de propídio e coloração hoechst são usados para avaliar o ROS, células mortas e células vivas, respectivamente, seguidas de imagem e análise.

Avaliação de danos oxidativos nas células de superfície ocular/células-tronco do rato primário em resposta ao dano ultravioleta-C (UV-C)

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...

Olá a todos, meu nome é Dr. Bipasha Bose. Trabalho como professor associado e responsável no Centro de Células-Tronco e Medicina Regenerativa, Centro de Pesquisa Yenepoya, Universidade de Yenepoya, Mangalore, Índia. Agora vamos demonstrar como detectar a presença de ROS ou seja, espécies de oxigênio reativos" nas culturas vivas das superfícies oculares do rato que foram expostas a várias doses de radiação ultravioleta-C.A vantagem dessa técnica é que aqui podemos detectar simultaneamente a presença de espécies reativas de oxigênio, células vivas e mortas, sem a necessidade de ter células Vester. O princípio desta técnica está essencialmente na permeabilidade celular viva do corante DCFDA. DCFDA é um corante incolor permeante de célula viva, que durante o estresse oxidativo é agido pelas oxidações intracelulares e é convertido em DCF fluorescente verde.Assim, a florescence verde nos permite detectar para a presença de espécies reativas de oxigênio nas células vivas. Por outro lado, o iodeto propidium é um corante permeante de células exclusivamente mortas que fluoresce vermelho. É um corante de intercalação rDNA de dupla lagartida.No entanto, o corante Hoechst é permeante para as células vivas e mortas. É uma mancha nuclear de cor azul. Portanto, este é um método muito simples no qual podemos detectar para a presença de espécies reativas de oxigênio em culturas de longo prazo de forma dependente do tempo, juntamente com a avaliação de células mortas.Placa aponta dois milhões de células por 35 milímetros de pratos de cultura. As células que estamos aplicando são as células da superfície ocular do rato. Remova o volume máximo de mídia de cada um dos pratos de cultura celular.Deixe para trás cerca de 500 microliters de mídia de cultura celular em contato próximo com as células. A quantidade mínima de mídia impedirá a secagem das células. No entanto, o objetivo da quantidade mínima de mídia é permitir a máxima penetração da exposição ao UVC.Pegue as células sob uma fonte UV, pode ser um UV Crosslinker, ou pode ser qualquer outra fonte ultravioleta-C. Exponha as células a diferentes doses de radiação UVC, como uma, 10, 100, 1.000 e 10.000 joules por metro quadrado. Quando as células são expostas à radiação ultravioleta-C, as tampas devem estar na posição aberta.Isso permitirá a penetração máxima do ultravioleta-C para as células e, portanto, mostrará a dose-resposta ideal das células à radiação ultravioleta-C. Leve as células para o capô de fluxo de ar laminar e reponha cada um dos pratos com dois mililitros de mídia completa. Esta mídia completa contém 20% de soro bovino fetal em DMEM, complementado com suplementos como aminoácidos não essenciais mínimos de 1% mínimo, e também 1% antibiótico que é penicilina e estreptomicina.Posteriormente, após a reposição com volume máximo, ou seja, dois mililitros de mídia completa, devolva as placas à incubadora e incubar por um período de três horas, a fim de ver os efeitos precoces da radiação ultravioleta-C. Prepare a mídia de coloração de células vivas nos últimos 15 minutos de três horas após a incubação de células UVC. A mídia de coloração é preparada em 10% FBS contendo DMEM pré-aquecido a 37 graus.Para fazer 10 mililitros de mídia de coloração, primeiro adicione cinco microliter de DCFDA de um estoque de 10 milimôlares para obter uma concentração final de cinco micromolar. Misture bem por pipetting para cima e para baixo. Em segundo lugar, adicione cinco microliter de solução Hoechst a partir de um estoque de 10 miligramas por mL para obter uma concentração final de cinco microgramas por mL.Agora misture bem se encanar para cima e para baixo. Por último, adicione 200 microliters de iodeto de propidium de um estoque de um miligrama por mL para obter uma concentração final de 20 microgramas por mL. Misture bem por pipetting para cima e para baixo.Agora a solução de coloração está pronta para uso. Após três horas de incubação após a exposição uvc, remova as placas da incubadora de CO2. Aspire a mídia de cada um dos pratos que foram expostos a várias doses de UVC como um, 10, 100, 1.000 e 10.000 joules por metro quadrado.Agora adicione dois mililitros de mídia de coloração de células ao vivo recém-preparadas para cada um dos pratos suavemente dos lados dos pratos. Volte as placas para a incubadora de CO2 novamente e incubar por 15 minutos para coloração de células vivas. Após 15 minutos de incubação nos meios de coloração de células vivas, remova a mídia de coloração de cada um dos pratos contendo células expostas a diferentes doses de radiação ultravioleta-C.Reabastecer as células com dois mililitros de mídia completa. Agora as células estão prontas para serem vistas. Agora coloque as células de controle sob o campo brilhante do imager fluorescente.As células parecem aparentemente normais, já que são células de controle. Sob o campo azul podemos fluorescing células totais. Sob o campo verde mostra a geração ROS.Como são células de controle, não há ros gerado. Sob o campo vermelho, as células mortas manchadas de propidium iodide são visíveis. Em seguida, mantenha o UV exposto 100 joules por metro quadrado sob o campo brilhante.Sob o campo azul, e também podemos ver o número total de células sob o campo azul. No entanto, quando nos expõem ao campo verde, células positivas dcfda são vistas, e também células mortas positivas pi são vistas. Por fim, coloque a dose máxima de UV, ou seja, 10.000 joules por metro quadrado de células expostas, sob o campo brilhante.Podemos ver morfologia celular anormal. No entanto, sob o campo azul podemos ver células azuis totais. Sob o campo verde, células positivas de fluorescing verde DCFDA são vistas indicando a geração ROS.Quando as células são expostas ao campo vermelho, todas as células estavam fluorescing vermelho indicando um grande número de morte celular quando as células são tratadas com 10.000 joules por metro quadrado de dosagem UV. Agora organize as imagens capturadas em vários canais em um único painel de imagem composto correspondente às doses ultravioleta-C e controles não expostos. As imagens são organizadas em um único painel em grupo.Primeiro, o campo brilhante. Segundo, a mancha nuclear azul Hoechst. Terceiro, a mancha de iodeto de propídio quanto aos núcleos mortos.Em quarto lugar, DCFDA para células positivas ROS. E quinto, a imagem mesclada. Quando olhamos para a primeira e a segunda linha de imagens, que é o controle não exposto e as células expostas à dose de UVC um joule por metro quadrado, observamos que não havia células positivas PI nem ROS que haviam iluminado, indicando assim uma completa ausência de ROS e morte celular em controles não expostos e uma dose tão baixa de UVC de um joule por metro quadrado.Agora chegando à terceira fileira de imagens compostas das células que foram expostas a 100 joules por metro quadrado. Uma porcentagem muito baixa de células, cerca de 10% foram positivas tanto para pi quanto para DCFDA nesta dose, indicando assim baixa quantidade de geração ROS e morte celular. Agora passamos para uma dose mais alta de exposição à radiação UVC, que é de 1.000 joules por metro quadrado como indicado na quarta fileira da imagem composta.Aqui, cerca de 70% das células foram positivas para PI e DCFDA. Finalmente, passamos para a maior dose de exposição uvc, que é de 10.000 joules por metro quadrado como representado na quinta fileira da imagem composta. Aqui foram encontrados que quase 100% das células foram positivas tanto para pi quanto para DCFDA, indicando assim uma morte 100% celular e geração ROS nesta dose uvc específica.Transfira as imagens para o software de imagem. Primeiro abra a imagem azul indicando os núcleos manchados de Hoescht, que é o número total de células. Abra a ferramenta de contagem e clique em cada uma das células uma de cada vez para ter o número.Agora abra a imagem capturada sob o canal vermelho indicando as células mortas positivas do PI. Abra a ferramenta de contagem e clique em cada uma das manchas vermelhas indicando a contagem para as células mortas positivas pi. Uma vez que a contagem das células mortas acabou, clique nas células capturadas do canal verde e abra a ferramenta de contagem e clique em cada uma das manchas verdes indicando as células que mostram a geração ROS.Complete a contagem das células verdes capturadas sob o canal verde e, em seguida, usando a fórmula enumerar a porcentagem de morte celular por dano UVC e porcentagem da produção de ROS por dano de UVC. Isso é calculado usando o simples número de fórmula de células positivas de PI, que são as células fluorescentes vermelhas, divididas pelo número de células positivas hoechst multiplicadas por 100. A porcentagem da produção de ROS por dano UV é calculada usando a fórmula, número de células fluorescentes positivas ou verdes, divididas pelo número de células positivas hoechst multiplicadas por 100.Uma vez que você tenha os dois percentuais, que é a porcentagem de morte celular e a porcentagem da produção de ROS, use esses valores para traçar um gráfico de barras. Eixo X indica a dosagem de UV, enquanto o eixo y indica a porcentagem de células. As barras verdes indicam a porcentagem da geração ROS, enquanto a barra vermelha indica a porcentagem de morte celular.Após a análise, é evidente que na dose de UVC 100 joules há célula geradora de 10% ROS, bem como uma morte celular de 10%. Considerando que na dose UVC 10 elevou para três joules por metro quadrado, 70% das células apresentaram geração ROS, bem como morte celular. Enquanto na dose mais alta de UVC, que é 10 elevado a quatro joules por metro quadrado, cerca de 100% das células apresentaram morte celular, bem como a produção de ROS.Assim, pode-se concluir que há uma forte correlação positiva entre a geração ROS e a morte celular. Em conclusão, essa técnica é muito útil para avaliação simultânea de espécies reativas de oxigênio, células vivas e mortas em cultura de eventos ao vivo e normal. Esta técnica também é útil para avaliação limitada de espécies reativas de oxigênio, células vivas e mortas, em culturas de longo prazo que foram expostas a vários agentes prejudiciais celulares, tais como radiação ultravioleta, ou agentes químicos.E essa técnica também pode orientar um pesquisador para determinar o tempo ideal para a colheita das células em 50% ROS, 75% ROS, assim e assim por diante, como pode haver para muitas aplicações a jusante, como QR para PCR e inchaço ocidental.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

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Produção e Uso de Lentivírus a seletivamente transduzem Primária Oligodendrocyte células precursoras para<em&gt; In Vitro</em&gt; Os ensaios mielinização

Myelination is a complex process that involves both neurons and the myelin forming glial cells, oligodendrocytes in the central nervous system (CNS) and ...

Biologia do Desenvolvimento

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Otimização do Ensaio Wound zero para detectar mudanças na Murino estromais mesenquimais migração celular após a lesão por Extract fumo do cigarro Solúvel

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Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

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Técnica ao Target microinjeção para o desenvolvimento<em&gt; Xenopus</em&gt; Kidney

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