Name: assessment of oxidative damage in the primary mouse ocular surface cells/stem cells in response to ultraviolet-c (uv-c) damage
Uploaded: 2020-02-15T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage at JoVE.com

Författarna erkänner stöd från Yenepoya Research Centre, Yenepoya (anses vara universitet) för infrastrukturanläggningar.

Experimentet utfördes på primära okulär celler / stamceller som härrör från den schweiziska albino mus öga. Användningen av djur för att skörda ögonen för detta experiment godkändes av Institutional Animal Ethical Committee, Yenepoya (anses vara universitetet) (IEAC-godkännandenummer, 6a/19.10.2016).
1. Beredningar av reagenser
Obs: Härledning av primära celler/stamceller från musokulärt ytan ligger utanför ramen för detta protokoll. Därför visa...

<ol>
	<li>Gipson, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ocular+surface:+the+challenge+to+enable+and+protect+vision:+the+Friedenwald+lecture.">The ocular surface: the challenge to enable and protect vision: the Friedenwald lecture.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 48 (10), 4391-4398 (2007).</li><li>Sridhar, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+of+cornea+and+ocular+surface.">Anatomy of cornea and ocular surface.</a> Indian Journal of Ophthalmoogy. 66 (2), 190-194 (2018).</li><li>Betteridge, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+oxidative+stress.">What is oxidative stress.</a> Metabolism. 49 (2), 3-8 (2000).</li><li>Ray, P. D., Huang, B. W., Tsuji, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+(ROS)+homeostasis+and+redox+regulation+in+cellular+signaling.">Reactive oxygen species (ROS) homeostasis and redox regulation in cellular signaling.</a> Cell Signaling. 24 (5), 981-990 (2012).</li><li>Nita, M., Grzybowski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+the+Reactive+Oxygen+Species+and+Oxidative+Stress+in+the+Pathomechanism+of+the+Age-Related+Ocular+Diseases+and+Other+Pathologies+of+the+Anterior+and+Posterior+Eye+Segments+in+Adults.">The Role of the Reactive Oxygen Species and Oxidative Stress in the Pathomechanism of the Age-Related Ocular Diseases and Other Pathologies of the Anterior and Posterior Eye Segments in Adults.</a> Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2016, 3164734 (2016).</li><li>Covarrubias, L., Hernandez-Garcia, D., Schnabel, D., Salas-Vidal, E., Castro-Obregon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Function+of+reactive+oxygen+species+during+animal+development:+passive+or+active.">Function of reactive oxygen species during animal development: passive or active.</a> Developmental Biology. 320 (1), 1-11 (2008).</li><li>Behar-Cohen, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultraviolet+damage+to+the+eye+revisited:+eye-sun+protection+factor+(E-SPF(R)),+a+new+ultraviolet+protection+label+for+eyewear.">Ultraviolet damage to the eye revisited: eye-sun protection factor (E-SPF(R)), a new ultraviolet protection label for eyewear.</a> Clinical Ophthalmology. 8, 87-104 (2014).</li><li>Izadi, M., Jonaidi-Jafari, N., Pourazizi, M., Alemzadeh-Ansari, M. H., Hoseinpourfard, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photokeratitis+induced+by+ultraviolet+radiation+in+travelers:+A+major+health+problem.">Photokeratitis induced by ultraviolet radiation in travelers: A major health problem.</a> Journal of Postgraduate Medicine. 64 (1), 40-46 (2018).</li><li>de Jager, T. L., Cockrell, A. E., Du Plessis, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultraviolet+Light+Induced+Generation+of+Reactive+Oxygen+Species.">Ultraviolet Light Induced Generation of Reactive Oxygen Species.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 996, 15-23 (2017).</li><li>Degl'Innocenti, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxadiazon+affects+the+expression+and+activity+of+aldehyde+dehydrogenase+and+acylphosphatase+in+human+striatal+precursor+cells:+A+possible+role+in+neurotoxicity.">Oxadiazon affects the expression and activity of aldehyde dehydrogenase and acylphosphatase in human striatal precursor cells: A possible role in neurotoxicity.</a> Toxicology. 411, 110-121 (2019).</li><li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=APC-Cdh1+Regulates+Neuronal+Apoptosis+Through+Modulating+Glycolysis+and+Pentose-Phosphate+Pathway+After+Oxygen-Glucose+Deprivation+and+Reperfusion.">APC-Cdh1 Regulates Neuronal Apoptosis Through Modulating Glycolysis and Pentose-Phosphate Pathway After Oxygen-Glucose Deprivation and Reperfusion.</a> Cellular and Molecular Neurobiology. 39, 123-135 (2019).</li></ol>

DCFDA färgning metod som beskrivs här möjliggör visualisering av ROS i mus primära okulär levande celler behandlas med UV-C strålning. En fördel med denna färgning metod är att det också tillåter forskarna att studera de omedelbara effekterna av UV-C (3 timmar efter UVC exponering) på levande celler och deras samtidiga uppräkning för andelen ROS positiva, liksom, döda celler. Dessutom, eftersom färgningsmetoden används på levande celler, cellerna kan ytterligare inkuberas i samma media under en längre...

Den okulära ytan (OS) är en funktionell enhet som huvudsakligen består av det yttre lagret och körtelepithelia av hornhinnan, lachrymal körtel, meibomian körtel, bindhinnan, en del av ögonlockmarginaler och innervations som transduce signaler1. Den genomskinliga kupolformade hornhinnans skikt fokuserar ljus på näthinnan. Denna akulärvävnad består av cellulära komponenter såsom epitelceller, keratocyter och endotelceller och acellulära komponenter såsom kollagen och glykosaminoglycans2. Området dräneras av tårar som också levererar de flesta av näringsämnen. Os anatomiska position tvingar den att vara i direkt kontakt med den yttre miljön, vilket ofta utsätter det för olika hårda komponenter som starkt ljus, mikrober, dammpartiklar och kemikalier. Denna faktor predisponerar OS till fysiska skador och gör det benägna att olika sjukdomar.
Oxidativ stress orsakas på grund av obalansen mellan produktionen av reaktiva syrearter (ROS) och endogena antioxidant försvar mekanismer3. ROS klassificeras i reaktiva molekyler och fria radikaler, som båda härrör från molekylärt syre (O2) genom mitokondriell oxidativ fosforylering4. Den tidigare gruppen består av icke-radikala arter som väteperoxid (H2O2), singlet syre(1O2) och den senare omfattar arter som superoxidanioner (O2-) och hydroxylradikaler (•OH), bland annat. Dessa molekyler är biprodukter av normala cellulära processer och deras roller har varit inblandade i viktiga fysiologiska funktioner såsom signaltransduktion, genuttryck och värdförsvar5. En förbättrad produktion av ROS är känt för att genereras som svar på faktorer som patogen invasion, xenobiotika, och exponering för ultraviolett (UV) strålning4. Denna överproduktion av ROS resulterar i oxidativ stress som leder till skador av molekyler som nukleinsyror, proteiner och lipider6.
Naturligt solljus, den mest dominerande källan till UV-strålning, består av UV-A (400–320 nm), UV-B (320–290 nm) och UV-C (290–200 nm)7. Ett omvänt samband mellan våglängden och spektralenergierna har rapporterats. Även om naturliga UV-C-strålning absorberas av atmosfären, avger artificiella källor som kvicksilverlampor och svetsinstrument och utgör därför en yrkesrisk. Symtom på exponering för ögon inkluderar photokeratitis och photokeratoconjunctivit8. Produktion av ROS är en av de viktigaste mekanismerna för att tillfoga UV inducerad cellulära skador9. I den aktuella studien visar vi detektion av ROS med hjälp av 2',7'-Dichlorodifluorescein diacetate (DCFDA) färgning metod i mus primära okulär ytceller / stamceller som exponeras för UV-C. Den gröna fluorescensen fångades med fluorescerande mikroskopi. Celler var motfärgade med två färgämnen, Hoechst 33342 och röd propidium jodid, att färga levande och döda celler, respektive.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2&#39;,7&#39;-Dichlorofluorescein diacetate (DCFDA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D6883</td>
			<td>2&#39;,7&#39;-Dichlorofluorescein diacetate is fluorogenic probe and is permeable to cells. It is used for quantification of reactive oxygen species.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture dish (35 mm)</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>SA 003700112</td>
			<td>Sterile dishes for culturing the cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM High Glucose</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>AT007</td>
			<td>Most widely used cell culture media, contains 4500 mg/L of glucose.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, EU Origin</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>RM99955</td>
			<td>One of the most important components of cell culture media. It provides growth factors, amino acids, proteins, fat-soluble vitamins such as A, D, E, and K, carbohydrates, lipids, hormones, minerals, and trace elements.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutMax</td>
			<td>Gibco, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>35050061</td>
			<td>Used as a supplement and an alternative to L-glutamine. It helps in improving cell viability and growth.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HL-2000 Hybrilinker</td>
			<td>UVP</td>
			<td></td>
			<td>Hybridization oven/UV cross linker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33342</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B2261</td>
			<td>Hoechst stain is permeable to both live and dead cells. It binds to double starnded DNA irrespective of wether the cell is dead or alive.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td></td>
			<td>Basement membrane matrix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM Non-Essential Amino Acids (100X)</td>
			<td>Gibco, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11140050</td>
			<td>Used as a supplement to increase the cell growth and viability.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (Pen-Strep)</td>
			<td>Gibco, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15140122</td>
			<td>Penicillin and streptomycin is used to prevent the bacterial contamination in culture.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium Iodide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4170</td>
			<td>Fluorescent dye which is only permeable to dead cells. It binds with DNA and helps in distinguishing between live and dead cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TryplE Express</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>Gentle cell dissociation agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZOE Fluorescent Cell Imager</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of oxidative damage in the primary mouse ocular surface cells/stem cells in response to ultraviolet-c (uv-c) damage

Den okulära ytan utsätts för vanligt slitage på grund av olika miljöfaktorer. Exponering för UV-C-strålning utgör en hälsorisk för arbetsplatsen. Här visar vi exponeringen av primära stamceller från musokulär yta till UV-C-strålning. Reaktiv syreart (ROS) bildning är avläsningen av omfattningen av oxidativ stress/skada. I en experimentell in vitro-miljö är det också viktigt att bedöma andelen döda celler som genereras på grund av oxidativ stress. I den här artikeln kommer vi att visa 2',7'-Diklorfluoresceceindiacetate (DCFDA) färgning av UV-C exponerade mus primära okulär ytstamceller och deras kvantifiering baserat på fluorescerande bilder av DCFDA färgning. DCFDA färgning motsvarar direkt ROS generation. Vi visar också kvantifieringen av döda och levande celler genom samtidig färgning med propidiumjodid (PI) och Hoechst 3332 respektive och andelen DCFDA (ROS positiva) och PI positiva celler.

DCFDA är ett färglöst färgämne som är en kemiskt minskad form av fluorescein som används som en indikator för att upptäcka ROS i celler. Detta färgämne fastnar inuti celler och oxideras lätt till fluorescerande dichlorodihydrofluorescein (DCF), som avger en grön fluorescens. Denna fluorescens kan detekteras med fluorescerande mikroskopi. Cellerna kan visualiseras och korreleras med ROS ackumulering enligt följande: (i) levande celler utan ROS avger hög blå fluorescens; ii) Levande celler med ROS-ansamling...

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage at JoVE.com

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

Detta protokoll visar samtidig upptäckt av reaktiva syrearter (ROS), levande celler och döda celler i levande primära kulturer från musokulära ytceller. 2',7'-Diklorfluoresceindiacetate, propidium jodid och Hoechst färgning används för att bedöma ROS, döda celler och levande celler, respektive, följt av bildbehandling och analys.

Bedömning av oxidativ skada i de primära musokulära ytcellerna/stamcellerna som svar på ultraviolett-C (UV-C) Skada

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...

Hej allihopa, jag heter Dr.Bipasha Bose. Jag arbetar som docent och ansvarig i Stem Cells and Regenerative Medicine Center, Yenepoya Research Center, Yenepoya University, Mangalore, Indien. Nu ska vi demonstrera hur man kan upptäcka för närvaron för ROS det vill säga reaktiva syrearter "i levande kulturer från musen okulär ytor som har utsatts för olika doser av ultraviolett-C strålning.Fördelen med denna teknik är att här kan vi samtidigt upptäcka för närvaron av reaktiva syrearter, levande och döda celler, utan att behöva ha Vester celler. Principen för denna teknik ligger i huvudsak i den levande cellen permeabilitet av färgämnet DCFDA. DCFDA är en levande cell permeant färglös färgämne, som under oxidativ stress blir agerat på av de intracellulära oxidaserna och får omvandlas till gröna fluorescerande DCF.Därför gör den gröna florescence oss möjlighet att upptäcka för förekomsten av reaktiva syrearter i de levande cellerna. Å andra sidan är propidium iodide en uteslutande död cell permeant färgämne som fluorescerande rött. Det är en rDNA dubbelsträngad intercalating färgämne.Men färgen Hoechst är permeant till både levande och döda celler. Det är en blå färg nukleär fläck. Därför är detta en mycket enkel metod där vi kan upptäcka för förekomst av reaktiva syrearter i långsiktiga kulturer i en tid beroende sätt tillsammans med bedömningen av döda celler.Tallrik punkt två miljoner celler per 35 millimeters kultur rätter. De celler vi tillämpar är cellerna från mus okulär yta. Ta bort maximal volym av media från var och en av cellkulturens rätter.Lämna efter sig cirka 500 mikroliter cellodlingsmedier i nära kontakt med cellerna. Minimal mängd media kommer att förhindra att cellerna torkas. Men syftet med minimal mängd media är att tillåta maximal penetration av UVC-exponering.Ta cellerna under en UV-källa, det kan vara antingen en UV Crosslinker, eller kan vara någon annan ultraviolett-C källa. Exponera cellerna för olika dosering av UVC-strålning som en, 10, 100, 1, 000, och 10, 000 joule per meter kvadrat. När cellerna har utsatt för ultraviolett-C-strålning ska locken vara i öppet läge.Detta kommer att möjliggöra maximal penetration av ultraviolett-C till cellerna och därmed visa den optimala dos-respons av cellerna till ultraviolett-C strålning. Ta cellerna till laminära luftflödet huva och fylla på var och en av disken med två milliliter av kompletta medier. Denna kompletta medier innehåller 20%fetala nötkreatur serum i DMEM, kompletteras med kosttillskott såsom 1%minimum icke-essentiella aminosyror, och även 1%antibiotikum som är penicillin och streptomycin.Efteråt, efter påfyllning med maximal volym, det är två milliliter av kompletta medier, returnera plattorna till inkubatorn och inkubera under en period av tre timmar för att se tidiga effekter av ultraviolett-C strålning. Förbered den levande cellen färgning media under de sista 15 minuterna av tre timmars post UVC cell inkubation. Färgning media är beredd i 10%FBS som innehåller DMEM förvlöst till 37 grader.För att göra 10 milliliter färgning media, först lägga till fem mikroliter DCFDA från ett lager av 10 millimolar för att få en slutlig koncentration av fem mikromolar. Blanda väl genom att pipettera upp och ner. För det andra, tillsätt fem microliter av Hoechst lösning från ett lager av 10 milligram per ml för att få en slutlig koncentration på fem mikrogram per mL.Blanda nu väl genom att pipettera upp och ner. Slutligen lägga 200 mikroliter av propidium iodid från ett lager av ett milligram per mL för att få en slutlig koncentration av 20 mikrogram per ml. Blanda väl genom att pipettera upp och ner.Nu är färgningslösningen klar för användning. Efter tre timmars inkuberingspost UVC-exponering, avlägsna plattorna från CO2-inkubatorn. Aspirera ut media från var och en av de rätter som har utsatts för olika dosering av UVC såsom en, 10, 100, 1, 000, och 10, 000 joule per meter kvadrat.Nu lägga till två milliliter av nylagade levande cell färgning media till var och en av disken försiktigt från sidorna av disken. Återför plattorna till CO2-inkubatorn igen och inkubera i 15 minuter för levande cellfärgning. Efter 15 minuters inkubation i den levande cellen färgning media, ta bort färgning media från var och en av de rätter som innehåller celler som utsätts för olika doser av ultraviolett-C strålning.Fyll på cellerna med två milliliter av komplett media. Nu är cellerna redo för visning. Placera nu kontrollcellerna under den ljusstarka bildarens ljusfält.Cellerna ser tydligen normala eftersom de är kontroll celler. Under det blå fältet kan vi de fluorescerande totala cellerna. Under det gröna fältet visar ROS-generationen.Eftersom dessa är kontrollceller, det finns ingen ROS genereras. Under det röda fältet syns propidium-iodiden som färgats döda celler. Håll sedan UV exponerade 100 joule per meter kvadrat under det ljusa fältet.Under det blå fältet, och även vi kan se den totala cellen nummer under det blå fältet. Men när vi utsätter för grönt fält, SES DCFDA positiva celler, och även PI positiva döda celler ses. Slutligen, placera den maximala UV-dosen, det är 10, 000 joule per meter kvadratmeter exponerade celler, under den ljusa-fältet.Vi kan se onormal cellmorfologi. Men under det blå fältet kan vi se totala blå celler. Under det gröna fältet, gröna fluorescerande DCFDA positiva celler ses som anger ROS generationen.När cellerna utsätts för rött fält, var alla cellerna fluorescing rött anger ett stort antal celldöd när cellerna behandlas med 10, 000 joule per meter kvadratmeter UV-dosering. Nu ordna bilderna tagna i olika kanaler i en enda sammansatt bild panel som motsvarar de ultravioletta-C doser och oexponerade kontroller. Bilderna är ordnade i en enda panel i grupp.Först det ljusa fältet. För det andra, Hoechst blå nukleär fläck. Tredje, propidium iodid färgning som för döda atomkärnor.Fjärde, DCFDA för ROS positiva celler. Och femte, den sammanslagna bilden. När vi tittar på den första och den andra raden av bilder, det är oexponerad kontroll och de celler som utsätts för UVC-dosen en joule per meter kvadrat, observerade vi att det varken fanns PI eller ROS positiva celler som hade lyst upp, vilket tyder på en fullständig frånvaro av ROS och celldöd i oexponerade kontroller och en sådan låg UVC-dos av en joule per meter kvadrat.Nu kommer till den tredje raden av sammansatta bilder av de celler som var utsatta för 100 joule per meter kvadrat. En mycket låg andel celler, cirka 10%var positiva för både PI och DCFDA vid denna dos, och därigenom indikerar låg mängd ROS generation och celldöd. Nu går vi vidare till en ytterligare högre dos av UVC strålningsexponering, det vill säga 1, 000 joule per meter kvadrat som anges i den fjärde raden av den sammansatta bilden.Här var cirka 70%av cellerna positiva för PI och DCFDA. Slutligen går vi vidare till högsta dosen av UVC-exponering, det är 10, 000 joule per meter kvadrat som representeras i den femte raden av den sammansatta bilden. Här var finna att nästan 100%av cellerna var positiva för både PI och DCFDA, och därigenom indikerar en 100%celldöd och ROS generation vid just denna UVC dos.Överför bilderna till bildhanteringsprogrammet. Först öppna den blå bilden som anger Hoescht färgade kärnor, det är det totala antalet celler. Öppna inventeringsverktyget och klicka på var och en av cellerna en i taget för att få numret.Nu öppnar bilden fångas under den röda kanalen som anger PI positiva döda celler. Öppna räkneverktyget och klicka på var och en av de röda fläckarna som anger antalet för de PI-positiva döda cellerna. När räkning av de döda cellerna är över, klicka på den gröna kanalen fångade celler och öppna räkneverktyget och klicka på var och en av de gröna fläckar som anger cellerna som visar ROS-generationen.Slutföra räkning av de gröna cellerna fångas under den gröna kanalen, och sedan använda formeln räkna upp andelen celldöd genom UVC-skador och procent av ROS produktion av UVC-skador. Detta beräknas med hjälp av det enkla formeln antalet PI positiva celler, det vill säga de röda fluorescing cellerna, dividerat med antal Hoechst positiva celler multiplicerat med 100. Procent av ROS-produktionen genom UV-skada beräknas med formeln, antalet DCFDA-positiva eller gröna fluorescerande celler, dividerat med antal Hoechst-positiva celler multiplicerat med 100.När du har både procentsatser, det är procent av celldöd och andelen ROS produktion, använda dessa värden för att rita en stapel graf. X-axeln anger doseringen av UV, medan y-axeln anger andelen celler. De gröna staplarna anger andelen ROS-generering, medan den röda stapeln anger procentandelen celldöd.Vid analys, Det är uppenbart att vid UVC dos 100 joule finns 10%ROS generera cell samt en 10%celldöd. Medan vid UVC dosen 10 upp till tre joule per meter kvadrat, 70%celler uppvisade ROS generation samt celldöd. Medan den högsta dosen av UVC, det är 10 upp till fyra joule per meter kvadrat, om 100%celler uppvisade celldöd samt ROS produktion.Därav kan man dra slutsatsen att det finns en stark positiv korrelation mellan ROS-generationen och celldöd. Sammanfattningsvis är denna teknik mycket praktiskt för samtidig bedömning av reaktiva syrearter, levande och döda celler i levande, normal händelse kultur. Denna teknik är också användbar för begränsad bedömning av reaktiva syrearter, levande och döda celler, i långsiktiga kulturer som har utsatts för olika cell skadliga medel sådan ultraviolett strålning, eller kemiska agens.Och denna teknik kan också vägleda en forskare för att bestämma den optimala tiden för skörd av cellerna så vid 50%ROS, 75%ROS, så och så vidare som det kan finnas för många nedströms applikationer, såsom QR till PCR och västra blotting.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

Produktion och användning av Lentivirus att selektivt omvandla Primär Oligodendrocyte prekursorceller för<em&gt; In Vitro</em&gt; myeline Analyser

Myelination is a complex process that involves both neurons and the myelin forming glial cells, oligodendrocytes in the central nervous system (CNS) and ...

Optimization of the Wound Scratch Assay to Detect Changes in Murine Mesenchymal Stromal Cell Migration After Damage by Soluble Cigarette Smoke Extract

Optimering av sår Scratch analys för att upptäcka förändringar i Murine Mesenkymala Stromal Cell Migration Efter Skador av lösliga cigarett rökextrakt

Cell migration is vital to many physiological and pathological processes including tissue development, repair, and regeneration, cancer metastasis, and ...

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

Teknik till Target mikroinjektion till utvecklings<em&gt; Xenopus</em&gt; Njure

The embryonic kidney of Xenopus&#160;laevis (frog), the pronephros, consists of a single nephron, and can be used as a model for kidney disease. Xenopus ...

In Vitro Growth of Mouse Preantral Follicles Under Simulated Microgravity

In Vitro Growth of Mouse Preantral Follicles Under Simulated Microgravity

In Vitro Tillväxt av mus Preantral folliklar Under simulerade tyngdlöshet

14 day-old mouse ovarian tissue and preantral follicles isolated from same-aged mice were incubated in a simulated microgravity culture system. We ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissektion och Immunofluorescerande färgning av svamp kropp och ljusmätare nervceller i vuxen Drosophila melanogaster hjärnor

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Tillämpningen av RNAi och värme-chock-inducerad transkription faktorn uttryck att omprogrammera könsceller att nervceller i C. elegans

Studying the cell biological processes during converting the identities of specific cell types provides important insights into mechanism that maintain ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational analys av den Caenorhabditis elegans könsceller att studera fördelningen av atomkärnor, proteiner och cytoskelettet

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

Induction and Validation of Cellular Senescence in Primary Human Cells

Induktion och validering av cellulära åldras i primära mänskliga celler

Cellular senescence is a state of permanent cell cycle arrest activated in response to different damaging stimuli. Activation of cellular senescence is a ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Visualisera den noden och Notochordal plattan i Gastrulating musembryon som använder Scanning Electron Microscopy och hela Mount immunofluorescens

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

Monocular Visual Deprivation and Ocular Dominance Plasticity Measurement in the Mouse Primary Visual Cortex

Monokulär visuell deprivation och okulär dominans plasticitet mätning i musen primära visuella cortex

Monocular visual deprivation is an excellent experimental paradigm to induce primary visual cortical response plasticity. In general, the response of the ...