Name: measuring proliferation of vascular smooth muscle cells using click chemistry
Uploaded: 2019-10-30T13:00:00
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Wir danken Katie Carroll für die technische Unterstützung. Wir danken auch Dr. David Cool und dem Proteomics Analysis Laboratory für die Anleitung und Bereitstellung des Cytation Imaging Plate Readers. Diese Arbeit wurde durch ein Stipendium der Wright State Foundation (an L.E.W.) unterstützt.

1. Nachweis von EdU mit Fluoreszenzetikett
<ol><li>Aktienlösungen<ol>
<li>Bereiten Sie eine 5 mM EdU-Lagerlösung vor, indem Sie 12,5 mg EdU auf 10 ml doppelt destilliertesH2 Ohinzufügen.</li>
		<li>Bereiten Sie die Etikettierlösungskomponenten vor: 200 mM tris(3-hydroxypropyltriazolylmethyl)amin (THPTA) (100 mg in 1,15 mL H2O), 100 mM CuSO4 (15,95 mg in 1 mLH2O; frisch machen), 10 mM Cy3 Picolyl-Azid (1 mg in 95,3 ml H2O , gelagert in 5 L Aliquots bei -20 °C) ...

<ol>
	<li>Fuster, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+cell+proliferation+in+atherosclerosis:+Insights+from+animal+models+and+human+studies.">Control of cell proliferation in atherosclerosis: Insights from animal models and human studies.</a> Cardiovascular Research. 86 (2), 254-264 (2010).</li><li>Zhu, J., Thompson, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+regulation+of+cell+growth+and+proliferation.">Metabolic regulation of cell growth and proliferation.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. , (2019).</li><li>Cizek, S. 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Chemie International Edition. 50 (35), 8051-8056 (2011).</li><li>Diermeier-Daucher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+type+specific+applicability+of+5-ethynyl-2&#8242;-deoxyuridine+(EDU)+for+dynamic+proliferation+assessment+in+flow+cytometry.">Cell type specific applicability of 5-ethynyl-2&#8242;-deoxyuridine (EDU) for dynamic proliferation assessment in flow cytometry.</a> Cytometry Part A. 75 (6), 535-546 (2009).</li><li>Cie&#347;lar-Pobuda, A., Los, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospects+and+limitations+of+&#8220;Click-Chemistry&#8221;-based+DNA+labeling+technique+employing+5-ethynyl-2&#8242;deoxyuridine+(EdU).">Prospects and limitations of &#8220;Click-Chemistry&#8221;-based DNA labeling technique employing 5-ethynyl-2&#8242;deoxyuridine (EdU).</a> Cytometry Part A. 83 (11), 977-978 (2013).</li></ol>

Die Einbeziehung von EdU ist eine einfache, einfache Möglichkeit, die Zellproliferation zu messen; es ist besonders nützlich für anhängliche Zellen13. Unser Protokoll verwendet glatte Muskelzellen, aber es ist anwendbar auf jede anhängliche Zelle (epitheliale, endotheliale, etc.). Obwohl das Protokoll nicht kompliziert ist, ist der einzige entscheidende Schritt die Herstellung der Etikettierungslösung – die Zutaten müssen in der angegebenen Reihenfolge hinzugefügt werden. Darüber hinaus...

Proliferation ist ein kritischer Teil der Zellfunktion1,2. Die Kontrolle der Proliferation beeinflusst normale Prozesse wie Entwicklung und pathologische Prozesse wie Krebs und Herz-Kreislauf-Erkrankungen. Hyperplastisches Wachstum von vaskulären glatten Muskelzellen, zum Beispiel, wird angenommen, dass ein Vorläufer der Arteriosklerose3. Veränderungen in der Zellproliferation werden auch verwendet, um die potenzielle Toxizität neuer Medikamente zu bewerten. Angesichts ihrer weitverbreiteten Wirkung ist die Messung der Proliferation eine tragende Säule vieler Laboratorien auf Zellbiologiebasis.
Die Zellproliferation kann durch einfaches Zählen von Zellen gemessen werden, wenn sich die Zellpopulation von Interesse ziemlich schnell teilt. Bei langsamer wachsenden Zellen ist die Zellanzahl möglicherweise weniger empfindlich. Die Proliferation wird oft durch die Einbindung von markierten Nukleosid-Analogen gemessen. Obwohl der Goldstandard 3H-Thymidin-Einbau ist, kommen viele Laboratorien angesichts der Verfügbarkeit neuerer, nicht-radioaktiver Alternativen von dieser Methode weg. Dazu gehören zytoplasmatische Fluoreszenzfarbstoffe, der Nachweis von Zellzyklus-assoziierten Proteinen und die Einbeziehung nicht-radioaktiver Nukleosid-Analoge wie 5-Brom-2'-Deoxyuridin (BrdU) und 5-Ethynyl-2-Deoxyuridin (EdU)4.
Zytoplasmatische Farbstoffe, wie Carboxyfluorescein-Diacetat-Succinimidylester (CFSE), detektieren die Proliferation, da sich die Intensität des Farbstoffs jedes Mal halbiert, wenn sich die Zelle teilt5. Diese Technik wird häufig in der Durchflusszytometrie für nicht anhaftende Zellen verwendet. Es wurde nicht viel für anhängnisende Zellen verwendet, aber mit der neuen Generation von bildgebenden Plattenlesern kann sich dies ändern. Der Nachweis von Zellzyklus-assoziierten Proteinen durch Antikörper-basierte Techniken (Durchflusszytometrie, Immunhistochemie usw.) wird häufig für Gewebe oder nicht anhaftende Zellen verwendet. Diese Zellen/Gewebe müssen vor der Färbung fixiert und permeabilisiert werden. Nukleosid-Analoga BrdU und EdU ähneln sich in der Annäherung an 3H-Thymidin, jedoch ohne die Unannehmlichkeiten der Radioaktivität. Die Aufnahme von BrdU wird durch Anti-BrdU-Antikörper nachgewiesen, und daher müssen Zellen vor der Färbung fixiert und permeabilisiert werden. Darüber hinaus müssen Zellen mit DNase behandelt werden, um das BrdU-Epitop freizulegen.
Die Einbindung von EdU wird durch Klickchemie erkannt, bei der Alkyn- und Azidgruppen in Gegenwart von katalytischem Kupfer zusammen "klicken". Beide Gruppen können als biosynthetisch eingebautes Molekül oder Detektionsmolekül4dienen. Kommerziell erhältliche Nukleosid-Analoga haben die Alkyngruppe angeschlossen. Bei Proliferationstests wird daher das alkyne-funktionalisierte Nukleosid-Analog durch ein Azid nachgewiesen, das mit einem Fluoreszenzfarbstoff oder einem anderen Marker konjugiert ist. Die Eingemeindung von EdU hat mehrere Vorteile gegenüber BrdU. Erstens, da Alkyn- und Azidgruppen nicht in Säugetierzellen gefunden werden, ist diese Wechselwirkung sehr spezifisch mit einem niedrigen Hintergrund6. Da beide Gruppen klein sind, müssen sich Zellen keiner DNA-Denaturierung unterziehen, um das Nukleosid-Analog zu belichten, wie es für BrdU7erforderlich ist. Schließlich ist Click Chemistry sehr vielseitig und kann für die metabolische Kennzeichnung von DNA, RNA, Protein, Fettsäuren und Kohlenhydraten8,9,10,11verwendet werden. Befindet sich das metabolisch beschriftete Ziel auf der Zelloberfläche, können lebende Zellen als12bezeichnet werden. Darüber hinaus können Zellen für immunfluoreszierende Färbung mit Antikörpern weiterverarbeitet werden.
Das folgende Protokoll beschreibt die Verwendung von EdU-Inkorporation und Klickchemie, um die Proliferation in menschlichen vaskulären glatten Muskelzellen zu messen (Abbildung 1). Wir zeigen drei verschiedene Möglichkeiten auf, wie die Integration von EdU gemessen werden kann, repräsentative Ergebnisse aus jeder und ihre Vor- und Nachteile. Die Messung der Proliferation mittels Klickchemie ist besonders nützlich für anhantibe, langsamer wachsende Zellen. Darüber hinaus ist die Morphologie der Zelle gut gepflegt und auch antikörperbasierte Färbungen können durchgeführt werden.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>5-Ethynyl-2&#39;-deoxyuridine</td>
			<td>Carbosynth</td>
			<td>NE08701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotin picolyl azide</td>
			<td>Click Chemistry Tools</td>
			<td>1167-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CuSO4</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C1297-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cy3 picolyl azide</td>
			<td>Click Chemistry Tools</td>
			<td>1178-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytation Plate Reader</td>
			<td>Biotek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EVOS Microscope</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen peroxide solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>216763</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na ascorbate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>11140-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NucBlue Fixed Cell Stain Ready Probes</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>R37606</td>
			<td>DAPI nuclear stain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Odyssey Blocking Buffer</td>
			<td>Li-Cor</td>
			<td>927-40000</td>
			<td>blocking buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Electron Microscopy Services</td>
			<td>15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SH3002802</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>S3014-5kg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin Horseradish Peroxidase Conjugate</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>S911</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super Signal ELISA Femto</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>PI137075</td>
			<td>ELISA substrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Synergy Plate Reader</td>
			<td>Biotek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>THPTA</td>
			<td>Click Chemistry Tools</td>
			<td>1010-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris Hydroxymethyl Aminomethane Hydrochloride (Tris-HCl)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP153-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X 100</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1610407</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP337-100</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring proliferation of vascular smooth muscle cells using click chemistry

Die Fähigkeit einer Zelle, sich zu vermehren, ist integraler Bestandteil der normalen Funktion der meisten Zellen, und dysregulation der Proliferation ist das Herzstück vieler Krankheitsprozesse. Aus diesen Gründen ist die Messung der Proliferation ein gängiges Werkzeug zur Bewertung der Zellfunktion. Die Zellproliferation kann einfach durch Zählen gemessen werden; dies ist jedoch ein indirektes Mittel zur Messung der Proliferation. Ein gängiges Mittel zur direkten Erkennung von Zellen, die sich auf die Teilung vorbereiten, ist die Einbindung von markierten Nukleosidanalogien. Dazu gehören das radioaktive Nukleosid-Analog3 H-Thymidin plus nicht-radioaktive Nukleosid-Analoga wie 5-Brom-2'-Deoxyuridin (BrdU) und 5-Ethynyl-2-Deoxyuridin (EdU). Die Einbindung von EdU wird durch Klickchemie erkannt, die im Vergleich zu BrdU mehrere Vorteile hat. In diesem Bericht stellen wir ein Protokoll zur Messung der Proliferation durch die Einbeziehung von EdU zur Verfügung. Dieses Protokoll enthält Optionen für verschiedene Auslesungen, zusammen mit den Vor- und Nachteilen der einzelnen. Wir diskutieren auch Orte, an denen das Protokoll optimiert oder geändert werden kann, um den spezifischen Anforderungen des geplanten Experiments gerecht zu werden. Schließlich berühren wir die Möglichkeiten, wie dieses Basisprotokoll zur Messung anderer Zellmetaboliten geändert werden kann.

In Abbildung 2zeigen wir die Ergebnisse von drei verschiedenen Experimenten zur Messung der Verbreitung von VSMC als Reaktion auf PDGF. Nach dem Anbau der Zellen in Medien, die für SMCs formuliert wurden, führten wir das Experiment in serumfreiem DMEM durch, um mögliche Auswirkungen von Serum oder Wachstumsfaktoren auf die Proliferation zu eliminieren. In Abbildung 2A vergleichen wir die Ergebnisse aus demselben Experiment mit einer fluoreszierenden vs. lumin...

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Measuring Proliferation of Vascular Smooth Muscle Cells Using Click Chemistry

Proliferation ist ein kritischer Teil der zellulären Funktion, und eine gemeinsame Auslesung verwendet, um potenzielle Toxizität von neuen Medikamenten zu bewerten. Die Messung der Proliferation ist daher ein häufig verwendeter Assay in der Zellbiologie. Hier präsentieren wir eine einfache, vielseitige Methode zur Messung der Proliferation, die in haftenden und nicht haftenden Zellen eingesetzt werden kann.

Messung der Proliferation von vaskulären glatten Muskelzellen mit Hilfe der Klickchemie

The ability of a cell to proliferate is integral to the normal function of most cells, and dysregulation of proliferation is at the heart of many disease ...

Die Proliferation ist ein wichtiges Maß für die Zellfunktion. Dieses Protokoll ermöglicht es den Ermittlern, einen empfindlichen Proliferationstest in ihren Laboren zu entwickeln, ohne die hohen Kosten für kommerziell erhältliche Kits. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass sie eine harte Behandlung von Zellen und/oder die Verwendung von Radioaktivität vermeidet.Diese Technik demonstriert Vicky Wong, die Leiterin meines Labors. Um die Proliferation zu assay, entfernen Sie vaskuläre glatte Muskelzellen aus einem Kolben mit glatten Muskelzellmedien in 2% fetalem Rinderserum und Platte bei 20.000 Zellen pro Milliliter in DMEM in einer 96-Well-Platte. Wachsen Sie die Zellen bei 37 Grad Celsius über Nacht.Fügen Sie 30 Nanogramm pro Milliliter Thrombozyten abgeleiteten Wachstumsfaktor zu drei bis sechs Brunnen als positive Kontrolle, um die Proliferation zu stimulieren. Fügen Sie dann PBS der gleichen Anzahl von Bohren als Negativkontrolle hinzu. 72 Stunden inkubieren.Verdünnen Sie zuvor vorbereitete fünf Millimolar EdU Lager auf einen Millimolar und fügen Sie zwei Mikroliter zu jedem Brunnen für die letzten 24 Stunden der 72 Stunden Kulturperiode. Bewahren Sie einen Satz von Replikationen ohne EdU auf, um die Fluoreszenz und Lumineszenz im Hintergrund zu bestimmen. 24 Stunden später, fixieren Sie die Zellen durch Entfernen von Medien, dann Hinzufügen von 150 Mikroliter pro Brunnen von 4%Paraformaldehyd und inkubieren 10 Minuten bei Raumtemperatur.Entfernen Sie das Paraformaldehyd und fügen Sie 150 Mikroliter 1%TX-100 in Wasser pro Brunnen hinzu und inkubieren Sie bei Raumtemperatur für 30 Minuten. Waschen Sie dreimal mit PBS, um den TX-100 zu entfernen. Um eingebaute EdU mittels Fluoreszenz zu erkennen, machen Sie 10 Milliliter Etikettierlösung pro 96-Well-Platte kurz vor der Verwendung durch Zugabe von Reagenzien aus Lagerlösungen in der richtigen Reihenfolge: 20 Mikroliter THPTA, 20 Mikroliter Kupfersulfat, fünf Mikroliter Fluorescein-Picolyl-Azid und 100 Mikroliter Natriumascorbat in PBS für ein Gesamtvolumen von 10 Millilitern.Der wichtigste Schritt besteht darin, die Etikettierungslösung kurz vor der Verwendung zu erstellen. ENTFERNEN Sie PBS aus Brunnen, fügen Sie 150 Mikroliter Etikettierlösung zu jedem Brunnen und inkubieren 30 Minuten bei 37 Grad Celsius. Um alle Kerne zu erkennen, fügen Sie DAPI zu jedem Brunnen hinzu und bilden Sie auf einem Fluoreszenzmikroskop oder einem Bildplattenleser.Um manuelles Zählen zu vermeiden und wenn kein bildgebender Plattenleser verfügbar ist, kann dieses Protokoll mit HRP-Azid und einem ELISA-Substrat in eine Lumineszenzauslesung geändert werden. Um EdU mit Luminscence zu erkennen, bereiten Sie zunächst tris-gepufferte Salin mit 0,1%Polysorbat 20 vor. Dann 150 Mikroliter Sperrpuffer zu jedem Brunnen hinzufügen und 90 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren.Nach dem Entfernen des Sperrpuffers die Zellen dreimal mit 200 MikroliterPBS waschen. Um eingebaute EdU zu erkennen, bereiten Sie zunächst 10 Milliliter Etikettierlösung pro 96-Well-Platte vor, indem Sie Reagenzien aus Lagerlösungen in der richtigen Reihenfolge hinzufügen. Zuerst 20 Mikroliter THPTA, dann 20 Mikroliter Kupfersulfat, fünf Mikroliter Biotin picolyl-azid, 100 Mikroliter Natriumascorbat in PBS für ein Gesamtvolumen von 10 Millilitern.Waschen Sie Brunnen fünfmal drei Minuten mit 200 Mikroliter TBST mit Schütteln. Endogene Peroxidasen mit 150 Mikrolitern 0,3% Wasserstoffperoxid 20 Minuten bei Raumtemperatur ablöschen. Nach dem Entfernen von Wasserstoffperoxid fünfmal drei Minuten mit 200 Mikroliter TBST mit Schütteln waschen.50 Mikroliter verdünnter Streptavidin-Meerrettichperoxidase in TBST zu jedem Brunnen geben und bei Raumtemperatur eine Stunde lang inkubieren. Waschen Sie fünf mal drei Minuten mit 200 Mikroliter TBST mit Schütteln. Fügen Sie 50 Mikroliter chemilumineszierendes ELISA-Substrat zu jedem Brunnen hinzu und lesen Sie sofort in einem Plattenleser, der in der Lage ist, Lumineszenz zu erkennen.Obwohl fluoreszierende Kerne von einem Standard-Fluoreszenzplattenleser nachgewiesen werden können, wird der Fluoreszenzscan mit Hilfe des Lumineszenzprotokolls in eine homogene Flüssigkeitsauslesung umgewandelt, die mit Streptavidin-Meerrettich-Peroxidase und einem Standard-ELISA-Substrat nachgewiesen wird. Der Vorteil dieser Methode im Vergleich zu einer fluoreszierenden Auslesung ist eine homogenere Auslesung und die Platte kann in Sekunden abgelesen werden, wie hier zu sehen, als die Proliferation von VSMC als Reaktion auf PDGF gemessen wurde. Der Nachteil ist, dass der Hintergrund höher ist als bei fluoreszenz, daher sind Negative Kontrollen tendenziell höher.In dem Versuch, die Variabilität zu verringern, wurden die Ergebnisse auf die anfängliche Nzellenanzahl normalisiert. In einem separaten Satz von Experimenten wurde jedoch gezeigt, dass diese Methode nicht empfindlich genug ist, um kleine Unterschiede in den Zellzahlen zu erkennen. Die effizienteste und genaueste Methode zur Zählung von EdU-positiven und Gesamtzellen ist die Verwendung eines bildgebenden Plattenlesers.Wenn dieser Plattenlesertyp nicht verfügbar ist, liefert die manuelle Zählung auch genaue Ergebnisse. Beim Vergleich dieser beiden Methoden war die positive manuelle Anzahl der EdU mit der automatisierten Anzahl identisch wie die Gesamtzahl der nicht stimulierten Werte. Der Vorteil dieser beiden Methoden ist die Sichtbarkeit der zu zählenden Zellen, eine verbesserte Genauigkeit und die Vermeidung unspezifischer Flecken von Schmutz.Der Hauptnachteil bei der manuellen Zählmethode ist die Zeit. Denken Sie daran, die Etikettierlösung kurz vor der Verwendung frisch zu machen und fügen Sie die Zutaten in der Reihenfolge hinzu, die im schriftlichen Protokoll angegeben ist. Wenn die Intensität der Färbung dunkel ist, versuchen Sie, das Chelat-Zu-Kupfer-Verhältnis anzupassen.Denken Sie daran, dass Paraformaldehyd giftig ist. Es sollte in einer Dunstabzugshaube verwendet werden, während Handschuhe tragen. Das Verfahren selbst ist nicht schwierig, muss aber möglicherweise optimiert werden, indem die Chelator- an die Kupferverhältnisse in der Etikettierlösung angepasst werden.Darüber hinaus können Inkubationszeiten und Dauer der EdU-Behandlung je nach Zelltyp und der gestellten spezifischen Frage angepasst werden. Diese Technik ist mit zellulären Oberflächen- und intrazellulären Färbungen kompatibel, so dass die Eigenschaften von teilenden und nicht teilenden Zellen bestimmt werden können. Obwohl häufig verwendet, um die Proliferation zu messen, kann Klickchemie auch für die metabolische Kennzeichnung von RNA, Proteinen, Fettsäuren und Kohlenhydraten verwendet werden.Wenn sich das metabolische Ziel auf der Zelloberfläche befindet, können lebende Zellen beschriftet werden.

Research

JoVE Journal

Biology

Focal Ca2+ Transient Detection in Smooth Muscle

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Focal Ca 2 + Transient-Erkennung in der glatten Muskulatur

Ca2+ imaging of smooth muscle provides insight into cellular mechanisms that may not result in changes of membrane potential, such as the release of Ca2+ ...

Forschung

Biologie

Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells (HUASMC)

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Isolierung humaner Nabelschnur arteriellen glatten Muskelzellen (HUASMC)

The human umbilical cord (UC) is a biological sample that can be easily obtained just after birth. This biological sample is, most of the time, discarded ...

Imaging Glycans in Zebrafish Embryos by Metabolic Labeling and Bioorthogonal Click Chemistry

Imaging Glykane in Zebrafisch-Embryonen durch metabolische Markierung und Bioorthogonale Click-Chemie

Imaging glycans in vivo has recently been enabled using a bioorthogonal chemical reporter strategy by treating cells or organisms with azide- or ...

Exploring Arterial Smooth Muscle Kv7 Potassium Channel Function using Patch Clamp Electrophysiology and Pressure Myography

Exploring arteriellen glatten Muskelzellen KV7 Kalium Kanal Funktion mit Patch-Clamp-Elektrophysiologie und Druck Myographie

Contraction  or relaxation of smooth muscle cells within the walls of resistance arteries  determines the artery diameter and thereby controls flow of ...

Isolation of Pulmonary Artery Smooth Muscle Cells from Neonatal Mice

Isolation der Lungenarterie glatten Muskelzellen aus neugeborenen Mäusen

Pulmonary hypertension is a significant cause of morbidity and mortality in infants. Historically, there has been significant study of the signaling ...

Measurement of Smooth Muscle Function in the Isolated Tissue Bath-applications to Pharmacology Research

Die Messung der Smooth Muscle Function in den Isolated Tissue Bath-Anwendungen Pharmakologie Forschung

Isolated tissue bath assays are a classical pharmacological tool for evaluating concentration-response relationships in a myriad of contractile tissues.  ...

Two-photon Imaging of Intracellular Ca2+ Handling and Nitric Oxide Production in Endothelial and Smooth Muscle Cells of an Isolated Rat Aorta

Two-photon Imaging of Intracellular Ca2+ Handling and Nitric Oxide Production in Endothelial and Smooth Muscle Cells of an Isolated Rat Aorta

Zwei-Photonen-Imaging von intrazellulären Ca<sup&gt; 2+</sup&gt; Transport- und Stickoxid-Produktion in Endothelzellen und glatte Muskelzellen eines isolierten Rattenaorta

Calcium is a very important regulator of many physiological processes in vascular tissues. Most endothelial and smooth muscle functions highly depend on ...

Measurement of Calcium Fluctuations Within the Sarcoplasmic Reticulum of Cultured Smooth Muscle Cells Using FRET-based Confocal Imaging

Die Messung von Calcium Schwankungen innerhalb des Retikulum von kultivierten glatten Muskelzellen Mit FRET-basierten konfokale Imaging

Maintenance of steady-state calcium (Ca2+) levels in the sarcoplasmic reticulum (SR) of vascular smooth muscle cells (VSMCs) is vital to their overall ...

Isolation of Murine Coronary Vascular Smooth Muscle Cells

Die Isolierung von murinen Coronary glatten Gefäßmuskelzellen

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs ...

Murine Aortic Crush Injury: An Efficient In Vivo Model of Smooth Muscle Cell Proliferation and Endothelial Function

Murine Aortic Crush Injury: An Efficient In Vivo Model of Smooth Muscle Cell Proliferation and Endothelial Function

Murine Aortic Crush Injury: Eine effiziente<em&gt; In vivo</em&gt; Modell der glatten Muskelzellproliferation und Endothelfunktion

Arterial reconstruction, whether angioplasty or bypass surgery, involves iatrogenic trauma causing endothelial disruption and vascular smooth muscle cell ...