Name: activated cross-linked agarose for the rapid development of affinity chromatography resins - antibody capture as a case study
Uploaded: 2019-08-16T13:30:00
Duration: 7 min 53 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Activated Cross-linked Agarose for the Rapid Development of Affinity Chromatography Resins - Antibody Capture as a Case Study at JoVE.com

हम ट्रांसजेनिक तंबाकू पौधों की खेती के लिए इब्राहिम अल Amedi और डॉ थॉमस Rademacher तंबाकू अभिव्यक्ति वेक्टर प्रदान करने के लिए स्वीकार करना चाहते हैं. लेखकों को संपादकीय सहायता और Markus Sack DFE आत्मीयता ligand संरचना के बारे में उपयोगी विचार विमर्श के लिए डॉ रिचर्ड एम Twyman धन्यवाद देना चाहता हूँ. इस काम के हिस्से में अनुदान नहीं के तहत Fraunhofer-Gesellschaft आंतरिक कार्यक्रम द्वारा वित्त पोषित किया गया था. 125-600164 को आकर्षित और Leistungszentrum अनुदान संख्या 423 "नेटवर्क, अनुकूली उत्पादन" के तहत उत्तर-रिन-वेस्टफेलिया की स्थिति। इस काम को अनुसंधान प्रशिक्षण समूह "ट्यूमर-लक्षित ड्रग डिलिवरी" अनुदान 331065168 के ढांचे में ड्यूश Forschungsgemeinschaft (DFG) द्वारा समर्थित किया गया था। जीई स्वास्थ्य सेवा इस लेख के खुले उपयोग प्रकाशन का समर्थन किया.

लेखकों के हित का कोई संघर्ष नहीं है खुलासा करने के लिए.

दवाकी लगभग हर शाखा में रोगों के व्यापक स्पेक्ट्रम के उपचार के लिए जैव-औषधि उत्पाद महत्वपूर्ण हैं . मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (mAbs) biopharmaceutical बाजार पर हावी है, दुनिया भर में बिक्री के साथ 20202में लगभग 110 अरब डॉलर तक पहुँचने की उम्मीद है. mAbs के लिए इष्ट अभिव्यक्ति मंच चीनी हम्सटर अंडाशय सेल लाइनों, जो आम तौर पर संस्कृति supernatant3,4में 10 जी $एल-1 तक की उच्च mAb titers का उत्पादन कर रहे हैं. तथापि, स्तनधारी कोशिका संस्कृतियों में mAbs का उत्पादन मध्यम की उच्च लागत और बाँझ किण्वन5की आवश्यकता के कारण महंगा है। वैकल्पिक अभिव्यक्ति प्लेटफार्मों जैसे पौधों संभावित औद्योगिक विनिर्माण के लिए एक तेज, सरल, कम महंगा और अधिक स्केलेबल दृष्टिकोण प्रदान करतेहैं 6,7.
स्तनधारी सेल संस्कृतियों के साथ जुड़े लागत के अलावा, उत्पाद पर कब्जा करने के लिए प्रोटीन एक आत्मीयता क्रोमैटोग्राफी का व्यापक उपयोग mAbs के औद्योगिक उत्पादन के लिए एक प्रमुख लागत ड्राइवर है। प्रोटीन ए स्वाभाविक रूप से स्टेफिलोकोकस ऑरियस कोशिकाओं की सतह पर पाया जाता है और यह कुछ मौरीन और मानव एंटीबॉडी के टुकड़े क्रिस्टलीय (एफसी) क्षेत्र को बांधता है, जिससे हास्य प्रतिरक्षा प्रणाली से बचने के लिए एक रक्षा तंत्र के रूप में कार्यकरताहै 8। प्रोटीन ए सेल संस्कृति supernatants से mAbs के कब्जा करने के लिए उद्योग सोने के मानक बन गया है और यह भी व्यापक रूप से अनुसंधान समुदाय द्वारा प्रयोग किया जाता है क्योंकि यह अत्यधिक चयनात्मक है, आम तौर पर एक ही कदम8में 95% की mAb शुद्धता को प्राप्त करने . आश्चर्य की बात है कि पिछले दो दशकों में प्रोटीन ए की बिक्री ने mAbs8की बिक्री को बारीकी से प्रतिबिंबित किया है। उत्पादन पैमाने पर निर्भर करता है, प्रोटीन ए की लागत कुल प्रक्रिया लागत का 25% से अधिक के अनुरूप है और इस तरह चिकित्सीय mAbs, जो 2,000 जी-15,9तक हो सकता है के बाजार मूल्य को प्रभावित कर सकते हैं. इसलिए, एक समान शुद्धि प्रदर्शन के साथ वैकल्पिक क्रोमैटोग्राफी रेजिन के लिए काफी हद तक उत्पादन लागत को कम करने की क्षमता है, एंटीबॉडी आधारित चिकित्सा रोगियों की एक बड़ी संख्या के लिए सुलभ बनाने10,11 ,12. इस तरह के विकल्प भी प्रोटीन एक क्रोमैटोग्राफी के नुकसान को दरकिनार कर सकते हैं, कम पीएच पर कठोर elution शर्तों सहित (आमतौर पर;lt;3.5) कि संभावित रूप से conformational परिवर्तन है कि एकत्रीकरण को बढ़ावा देने से गुजरना करने के लिए mAbs पैदा कर सकता है13 . महत्वपूर्ण बात, प्रोटीन ए केवल कुछ आईजीजी उपवर्गों के एफसी क्षेत्र के लिए चयनात्मक है, इसलिए काट दिया बाध्यकारी डोमेन के साथ गैर कार्यात्मक अणुओं को बरकरार उत्पाद5के साथ सह शुद्ध कर सकते हैं, जबकि mAb derivaties जैसे एकल श्रृंखला चर टुकड़े प्रोटीन ए के लिए बिल्कुल भी बाध्य नहीं है।
यहाँ, हम एचआईवी-neutralizing mAb 2F5 अपने रैखिक epitope ELDKWA (एक पत्र एमिनो एसिड कोड)5,14का उपयोग कर कब्जा करने के लिए एक वैकल्पिक संबंध क्रोमैटोग्राफी राल का वर्णन. हम आनुवंशिक रूप से फ्लोरोसेंट प्रोटीन DsRed के सी-टर्मिनस के लिए 2F5 epitope जुड़े, जो एक वाहक और रिपोर्टर अणु के रूप में कार्य किया, और जिसके परिणामस्वरूप प्रोटीन डीsRed-2एफ5-ईpitope (DFE) ट्रांसजेनिक तंबाकू में उत्पादन () निकोटिआना टैबाकम) पौधे। DFE एकल कदम स्थिर धातु आयन आत्मीयता क्रोमैटोग्राफी (IMAC) द्वारा शुद्ध किया गया था. शुद्ध DFE आत्मीयता ligand के एक पार से जुड़े agarose राल पर स्थिरीकरण एन hydroxysuccinimide (एनएचएस) सक्रिय पार से जुड़े agarose कॉलम का उपयोग रासायनिक युग्मन द्वारा प्राप्त किया गया था. सांख्यिकीय प्रायोगिक डिजाइनों का उपयोग तब स्थिरीकरण प्रक्रिया और युग्मन दक्षता15को अनुकूलित करने के लिए किया गया था . mAb 2F5 के लिए शोधन रणनीति एंटीबॉडी शुद्धता, उपज और लिगंड स्थिरता के संदर्भ में मूल्यांकन किया गया था. प्रोटीन ए के विपरीत, जो एफसी क्षेत्र को बांधता है, DFE 2F5 के पूरक-निर्धारण क्षेत्र से बाध्य है, जो एक बरकरार पैराटोप के साथ अणुओं की शुद्धि सुनिश्चित करता है। हमारी अवधारणा को आसानी से किसी भी mAb के लिए अनुकूलित किया जा सकता है एक रैखिक epitope के साथ या अन्य पेप्टाइड आधारित आत्मीयता ligands जो आसानी से microarray अध्ययन16द्वारा पहचाना जा सकता है.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59933/59933fig01.jpg"> चित्र 1: epitope आत्मीयता रेजिन कि कच्चे संयंत्र के अर्क या सेल संस्कृति supernatants से mAbs के कब्जा करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है की तैयारी के लिए प्रक्रिया प्रवाह योजना. (क) ट्रांसजेनिक तम्बाकू पादपों में आत्मीयता लिगन्ड डीएफई व्यक्त की गई थी। काटे गए पत्तों को समरूपित (ग) से पहले एक ऊष्मा वर्षण चरण (बी) शामिल किया गया था . (छ) कच्चे पौधे के अर्क को बैग निस्पंदन, गहराई निस्पंदन और 0.2 डिग्री ग्राम बाँझ निस्पंदन द्वारा स्पष्ट किया गया था। (ई) DFE तो IMAC द्वारा शुद्ध किया गया था. (एफ , जी) शुद्ध DFE आत्मीयता ligand EDC/NHS सक्रिय पार से जुड़े agarose कॉलम पर स्थिर किया गया था. (ज) टी-डीएनए एन्कोडिंग एंटीबॉडी 2F5 को ले जाने वाले जीवाणु संस्कृतियों का उपयोग फाइटोट्रॉन में उगाए गए एन बेंटमैयाना पौधों (मैं) में क्षणिक अभिव्यक्ति के लिए किया गया था । (जे) एन तुलामैयाना के पत्तों को काटा गया और संसाधित किया गया जैसा कि डी (K) mAb 2F5 में वर्णित किया गया था , डीएफई एफ़िनिटी कॉलम (एल) का उपयोग करते हुए स्पष्ट उद्धरण से शुद्ध किया गया था . <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59933/59933fig01large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10L/20L Bucket</td>
			<td>n/a</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Blanching equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2100P Portable Turbidimeter</td>
			<td>Hach</td>
			<td>4650000</td>
			<td>Turbidimeter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#196;KTApure</td>
			<td>GE Helthcare</td>
			<td>29018226</td>
			<td>Chromatography system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Allegra 25R</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>369434</td>
			<td>Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amine Coupling Kit</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>BR100050</td>
			<td>SPR chip coupling kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amine Coupling Kit</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>BR100050</td>
			<td>SPR chip coupling kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibody 2G12</td>
			<td>Fraunhofer IME</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Standard for SPR quantification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blender</td>
			<td>Waring</td>
			<td>800EG</td>
			<td>Blender</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BP-410</td>
			<td>Fuhr</td>
			<td>2632410001</td>
			<td>Bag filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CanoScan 5600F</td>
			<td>Canon</td>
			<td>2925B009</td>
			<td>Scanner</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tube 50 mL self-standing</td>
			<td>Labomedic</td>
			<td>1110504</td>
			<td>Reaction tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chelating Sepharose FF</td>
			<td>GE Helthcare</td>
			<td>17-0575-01</td>
			<td>Chromatography resin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cond 3320</td>
			<td>WTW</td>
			<td>EKA 3338</td>
			<td>Conductometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Design-Expert(R) 8</td>
			<td>Stat-Ease, Inc.</td>
			<td>n/a</td>
			<td>DoE software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Discovery Compfort</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F81029</td>
			<td>Multichannel pipette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disodium phosphate</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>4984.3</td>
			<td>Media component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diverse bottles</td>
			<td>Schott Duran</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Glas bottles</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dri Block DB8</td>
			<td>Techne</td>
			<td>Z381373</td>
			<td>Heat block</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DsRed</td>
			<td>Fraunhofe IME</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Standart</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>8043.2</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EnSpire</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>2390-0000</td>
			<td>Plate reader</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ETHG-912</td>
			<td>Oregon Scientific</td>
			<td>086L001499-230</td>
			<td>Thermometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F9-C</td>
			<td>GE Helthcare</td>
			<td>29027743</td>
			<td>Fraction collector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ferty 2 Mega</td>
			<td>Kammlott</td>
			<td>5.220072</td>
			<td>Fertilizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forma -86C ULT freezer</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>88400</td>
			<td>Freezer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>9105.3</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hettich Centrifuge Mikro 200</td>
			<td>Hettich</td>
			<td>2400</td>
			<td>Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HiPrep 26/10</td>
			<td>GE Helthcare</td>
			<td>GE17-5087-01</td>
			<td>Chromtography column</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HiTrap NHS-activated Sepharose HP, 1 mL</td>
			<td>GE Helthcare</td>
			<td>17-0716-01</td>
			<td>Chromatography columns</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>4625.1</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imidazole</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>3899.2</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K700</td>
			<td>Pall</td>
			<td>5302305</td>
			<td>Depth filter layer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KM02 basic</td>
			<td>IKA</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Magnetic stirrer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KS50P 60D</td>
			<td>Pall</td>
			<td>B12486</td>
			<td>Depth filter layer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L/S 24</td>
			<td>Masterflex</td>
			<td>SN-06508-24</td>
			<td>Tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lauda E300</td>
			<td>Lauda Dr Wobser GmbH</td>
			<td>Z90010</td>
			<td>Immersion circulator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>KK36.2</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masterflex L/S</td>
			<td>Masterflex</td>
			<td>HV-77921-75</td>
			<td>Peristaltic pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minisart 0.2 &#181;m</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>16534K</td>
			<td>Filter unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene Rapid-Flow PES bottle top filter</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>595-4520</td>
			<td>Vacuum filtration of SPR buffers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nickel sulphate</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>T111.1</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novex NuPAGE 4-12% BisTris LDS gels</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>NP0336BOX</td>
			<td>LDS-PAA gels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novex X-cell Mini Cell</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>EI0001</td>
			<td>PAGE chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NuPAGE 20x running buffer</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>NP0002</td>
			<td>Buffer concentrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NuPAGE antioxidant</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>NP0005</td>
			<td>Antioxidant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PageRuler protein ladder (10-180 kDa)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>26616</td>
			<td>Protein standart</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perforated bucked</td>
			<td>n/a</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Blanching</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PH 3110</td>
			<td>WTW</td>
			<td>2AA110</td>
			<td>PH meter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerPac HC</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>1645052</td>
			<td>Electrophoresis module</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein A from Staphylococcus aureus</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7837-5MG</td>
			<td>Coating of SPR chips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sephadex G-25 fine, cross linked dextran</td>
			<td>GE Helthcare</td>
			<td>17003301</td>
			<td>Chromatography resin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone spoon</td>
			<td>n/a</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Spoon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Simply Blue SafeStain</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>LC6060</td>
			<td>Gel staining solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>6773.1</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>X891.1</td>
			<td>Media component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S2002-100G</td>
			<td>Media component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>P029.2</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium citrate</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>HN13.2</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bisulfite</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>243973-100G</td>
			<td>Media component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosophate</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>T877.2</td>
			<td>Media component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPR Affinity Sensor - High Capacity Amine</td>
			<td>Sierra Sensors GmbH/Bruker Daltonics</td>
			<td>SPR-AS-HCA</td>
			<td>SPR chip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPR-2/4 Surface Plasmon Resonance Analyzer</td>
			<td>Sierra Sensors GmbH/Bruker Daltonics</td>
			<td>n/a</td>
			<td>SPR device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SSM3</td>
			<td>Stuart</td>
			<td>10034264</td>
			<td>Mini Gyro-rocker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heated vessel, 20 L</td>
			<td>Clatronic</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Blanching chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile syringes, 2 mL</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>4606027V</td>
			<td>Syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe adpter (Union Luer F)</td>
			<td>GE Helthcare</td>
			<td>181112-51</td>
			<td>Syringe adapter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TE6101</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>TE6101</td>
			<td>Precision scale</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20 (Polysorbate)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>8170721000</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unicorn 6.4</td>
			<td>GE Helthcare</td>
			<td>29056102</td>
			<td>Chromatography software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum bags</td>
			<td>Ikea</td>
			<td>203.392.84</td>
			<td>Plant storge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VelaPad 60</td>
			<td>Pall</td>
			<td>VP60G03KNH4</td>
			<td>Filter housing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex-Genie 2</td>
			<td>Scientific industries</td>
			<td>SI-0236</td>
			<td>Vortex</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XK-26/20 column housing</td>
			<td>GE Helthcare</td>
			<td>28-9889-48</td>
			<td>Chromtography column</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

activated cross-linked agarose for the rapid development of affinity chromatography resins - antibody capture as a case study

मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (mAbs) की शुद्धि आमतौर पर प्रोटीन एक आत्मीयता क्रोमैटोग्राफी द्वारा हासिल की जाती है, जो समग्र प्रक्रिया लागत के 25% तक के लिए जिम्मेदार हो सकती है। वैकल्पिक, लागत प्रभावी कब्जा कदम इसलिए औद्योगिक पैमाने पर विनिर्माण, जहां एक एकल mAb की बड़ी मात्रा में उत्पादन कर रहे हैं के लिए मूल्यवान हैं. यहाँ हम एक DsRed आधारित epitope ligand के स्थिरीकरण के लिए एक विधि प्रस्तुत करने के लिए एक पार से जुड़े agarose राल प्रोटीन ए का उपयोग किए बिना कच्चे संयंत्र के अर्क से एचआईवी-neutralizing एंटीबॉडी 2F5 के चयनात्मक कब्जा करने की अनुमति. रैखिक epitope ELDKWA पहले आनुवंशिक रूप से फ्लोरोसेंट प्रोटीन DsRed करने के लिए जुड़े थे और संलयन प्रोटीन ट्रांसजेनिक तंबाकू में व्यक्त किया गया था (Nicotiana Tabacum) पौधों स्थिर धातु आयन आत्मीयता क्रोमैटोग्राफी द्वारा शुद्ध करने से पहले. इसके अलावा, सक्रिय पार से जुड़े agarose पर आधारित एक विधि उच्च लिगंड घनत्व, कुशल युग्मन और कम लागत के लिए अनुकूलित किया गया था। पीएच और बफर संरचना और घुलनशील लिगंड एकाग्रता युग्मन प्रक्रिया के दौरान सबसे महत्वपूर्ण पैरामीटर थे, जो एक डिजाइन के प्रयोग में सुधार किया गया था-प्रयोग दृष्टिकोण. जिसके परिणामस्वरूप आत्मीयता राल चुनिंदा एक कच्चे संयंत्र निकालने में लक्ष्य माब बाँध करने की क्षमता के लिए परीक्षण किया गया था और elution बफर उच्च माब वसूली, उत्पाद गतिविधि और आत्मीयता राल स्थिरता के लिए अनुकूलित किया गया था. विधि आसानी से रैखिक प्रतीक के साथ अन्य एंटीबॉडी के लिए अनुकूलित किया जा सकता है. नई रेजिन प्रोटीन ए की तुलना में कोमल elution शर्तों की अनुमति देते हैं और भी mAb उत्पादन के लिए एक प्रारंभिक कब्जा कदम की लागत को कम कर सकता है.

आत्मीयता की अभिव्यक्ति और शुद्धि ligand
संलयन प्रोटीन DFE एक ग्रीनहाउस में बड़े ट्रांसजेनिक तंबाकू पौधों में व्यक्त किया गया था. प्रति पाद130 ग्राम औसत बायोमास के साथ उपज 120 मिग-1 पर्पज-1 पत्ती द्रव्यमान थी। डीएफई शुद्धता को ब्लैंचिंग से पहले कच्चे पौधे के अर्क में टीएसपी का 5% था, लेकिन 1.5 मिनट के लिए 70 डिग्री सेल्सियस पर गर्मी के उपचार के बाद $40% तक बढ़ गया, जो मेजबान सेल प्रोटीन के 97% वेग से हुआ। ब्लैंचिंग कदम आसानी से कटाई और निष्कर्षण दिनचर्या में एकीकृत किया गया था (चित्र 1) और पानी स्नान की स्थापना सहित अतिरिक्त समय के कम से कम 2 एच लिया। DFE की समग्र वसूली 23.5 मिलीग्राम किलो1 की शुद्धता के साथ था gt;90%. उत्पाद हानि के लिए जिम्मेदार कदम ब्लैंचिंग, गहराई निस्पंदन और IMAC थे, क्रमशः 40%, 27% और 45% की विशिष्ट हानि के साथ। गहराई फिल्टर क्षमता औसत 135 पर था - 36 एल मीटर-2 (जेडएसडी, n $3) और इस प्रकार साहित्य21में रिपोर्ट मूल्यों की ऊपरी श्रेणी में . पौधे की आयु के साथ DFE की उपज में वृद्धि हुई (चित्र 2)।
एन एच एस सक्रिय क्रोमैटोग्राफी कॉलम पर आत्मीयता का अचलीकरण
प्रारंभिक युग्मन परीक्षणों के दौरान, हमने पाया कि HEPES बफर (पीएच 8.3) के लिए युग्मन दक्षता में वृद्धि हुई 89 - 6% (जेडएसडी, n $3) की तुलना में 78 - 9% (जेडएसडी, n $3) निर्माता द्वारा सिफारिश की बाइकार्बोनेट बफर के लिए. इसलिए, HEPES सभी अनुवर्ती युग्मन प्रयोगों के लिए इस्तेमाल किया गया था. एक DOE दृष्टिकोण NHS सक्रिय पार से जुड़े agarose राल करने के लिए DFE के युग्मन दक्षता का अनुकूलन करने के लिए चुना गया था। DFE की निरपेक्ष राशि राल पर स्थिर DFE के द्रव्यमान के साथ वृद्धि हुई DFE स्तंभ में इंजेक्शन और [15 ग्राम] पर plateauted ल-1 जबकि युग्मन उपज में लगातार गिरावट आई क्योंकि अधिक डीएफई इंजेक्ट किया गया था (चित्र 2) । युग्मन उपज भी एक अम्लीय बफर में कम था, एक मामला-दर-मामला आधार पर प्रत्येक लिगन्ड के लिए उपयुक्त युग्मन स्थितियों के लिए स्क्रीन करने की आवश्यकता का संकेत. युग्मन उपज के मामले में आदर्श स्थितियों, स्थिर DFE और स्तंभ लागत की पूर्ण मात्रा DoE सॉफ्टवेयर के संख्यात्मक अनुकूलन उपकरण का उपयोग कर की पहचान की गई. सबसे वांछनीय शर्तों (पीएच 9.0 और 7.0 DFE के प्रति 1 एमएल पार से जुड़े agarose राल की मिलीग्राम) एक बड़े पठार पर स्थित थे और इसलिए मजबूत थे. DFE अणुओं युग्मन के बाद भी अपने लाल फ्लोरोसेंट बनाए रखा, और रंग तीव्रता स्थिर DFE की कुल राशि के अनुरूप (चित्र 2). इसलिए, स्तंभ रंग युग्मन दक्षता और स्तंभ गुणवत्ता का अनुमान लगाने के लिए एक साधारण गुणवत्ता नियंत्रण पैरामीटर के रूप में उपयोग किया जा सकता है। फ्लोरोसेंट भी पुष्टि की है कि DFE संलयन प्रोटीन देशी DsRed के टेट्रामेरिक राज्य में इकट्ठे हुए.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59933/59933fig02.jpg"> चित्र 2: एन एच एस-सक्रिय क्रॉस-लिंक्ड अगारोस राल के लिए डीएफई स्थिरीकरण का अनुकूलन। (क) एलडीएस-पीएए जेल में होमोजेनेट और एल्यूशन के नमूनों के पश्चिमी दाग ओवरले के साथ अनब्लेंकिड और ब्लेंक्ड ट्रांसजेनिक डीएफई संयंत्र के अर्क से। पौधों की कटाई 38, 45 या 52 दिनों के बाद बोई गई थी। पश्चिमी धब्बा एक विरोधी His6-एंटीबॉडी5का उपयोग कर प्रदर्शन किया गया. (ख) यदि युग्मन पीएच और शुद्ध डीएफई के समग्र द्रव्यमान को एन एच-सक्रिय क्रॉस-लिंक्ड अगारोस कॉलमों पर इंजेक्ट किया जाए तो निर्भरता में युग्मित डीएफई एफ़िनिटी लिगन्ड की कुल मात्रा। लाल बिंदु प्रतिक्रिया सतह मॉडल बनाने के लिए किए गए वास्तविक प्रयोगों को इंगित करते हैं। (C) युग्मन प्रक्रिया के बाद DFE एफ़िनिटी कॉलम. संख्या पैनल बी dps में प्रकाश डाला युग्मन शर्तों के अनुरूप ] दिन बीज बोने के बाद. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59933/59933fig02large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
DFE आत्मीयता राल का उपयोग कर 2F5 अलगाव परीक्षण
पुनः संयोजक 2 F5 एंटीबॉडी एक फाइटोट्रॉन5में उगाए गए निकोटिआना बेंटहामेना पौधों में क्षणिक रूप से उत्पादित किया गया था . कच्चे संयंत्र निकालने से 2F5 का कब्जा आत्मीयता कॉलम के साथ युग्मित का उपयोग कर परीक्षण किया गया था $7.0 मिलीग्राम शुद्ध DFE (कदम 6). प्रोटीन ए रेजिन से Elution आमतौर पर एक अम्लीय बफर शामिल है (पीएच $3.3)13. इसलिए, हम शुरू में DFE स्तंभों के लिए विभिन्न कम-pH elution बफ़र्स (pH 6.0-3.25) मूल्यांकन किया. 2F5 के elution पीएच 3.25 पर $ 35% की उच्चतम वसूली के साथ 4.5 से नीचे पीएच मूल्यों पर सफल रहा था. हालांकि, कम पीएच elution दोनों एंटीबॉडी निष्क्रिय (के रूप में एसपीआर स्पेक्ट्रोमेट्री द्वारा पुष्टि की) और DFE ligand (के रूप में रंग की हानि और कम डीबीसी, चित्रा 3द्वारा संकेत दिया). बाद में यह अनुमान लगाया गया था कि पीएच एंड एल टी ;4.022,23में देशी डी. उत्पाद और लिगन्ड विकृतीकरण से बचने के लिए, हमने मैग्नीशियम क्लोराइड को एक वैकल्पिक एल्यूशन एजेंट के रूप में परीक्षण किया क्योंकि इसका उपयोग पहले अन्य एफ़िनिटी रेजिन24से एमएबीएस को दूर करने के लिए किया गया है। 1.25 एम की एक मैग्नीशियम क्लोराइड एकाग्रता 105 की वसूली के साथ DFE आत्मीयता राल से 2F5 को पूरा करने के लिए पर्याप्त था - 11% (जेडएसडी, n $3) और 97 की शुद्धता $ 3% (जेडएसडी, n $3).। यह प्रदर्शन प्रोटीन ए रेजिन25,26के बराबर था . डफ-शुद्ध 2F5 एंटीबॉडी का संतुलन वियोजन स्थिरांक (KD) और संश्लेषी लिगंड फुज़ॉन 791 प्रम था जबकि प्रोटीन ए-शुद्ध प्रतिपक्ष का 763 चम5था । इसके अलावा, कोई पर्याप्त रंग हानि 25 बाँध और elute चक्र की कुल पर राल में मनाया गया. DFE आत्मीयता राल के DBC 10% 2F5 सफलता पर रैखिक रूप से 25 चक्र के दौरान गिर गया $15% प्रारंभिक मूल्य का (चित्र3)।
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59933/59933fig03.jpg"> चित्र3: DFE आत्मीयता रेजिन का उपयोग कर स्पष्ट संयंत्र अर्क से 2F5 के अलगाव का परीक्षण. (ए) DFE आत्मीयता रेजिन एक elution चक्र के बाद रेंज 4.0-3.0 में विभिन्न पीएच मूल्यों के साथ बफ़र्स का उपयोग कर और एक ही रेजिन pH 6.0 पर एक तटस्थ कदम के बाद. (ख) डीएफई एफ़िनिटी रेजिन 2 F5 शुद्धिकरण के एक और छह चक्रों के बाद 1ण्25 एम या 4.00 एम मैग्नीशियम क्लोराइड को एलुएंट के रूप में उपयोग करते हुए। (ग) ललाट लोडिंग प्रयोगों (ब्रेक-थ्रू वक्रों) के क्रोमैटोग्राम, डी एफ ई रेजिन की चक्र-निर्भर गतिशील बाइंडिंग क्षमता का निर्धारण करने के लिए मैग्नीशियम क्लोराइड को एलुएंट के रूप में उपयोग करते हैं। ब्रेक-थ्रू वक्रों को 4.0 एम और 1.25 एम मैग्नीशियम क्लोराइड एल्यूशन बफर्स और विभिन्न चक्र संख्याओं के लिए मापा गया था। (छ) डी एफ ई की चक्र-निर्भर गतिशील बाइंडिंग क्षमता 1ण्25 एम मैग्नीशियम क्लोराइड का उपयोग करते हुए। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59933/59933fig03large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Activated Cross-linked Agarose for the Rapid Development of Affinity Chromatography Resins - Antibody Capture as a Case Study at JoVE.com

Activated Cross-linked Agarose for the Rapid Development of Affinity Chromatography Resins - Antibody Capture as a Case Study

इस प्रक्रिया में, एक DsRed आधारित epitope ligand कच्चे संयंत्र के अर्क या सेल संस्कृति supernatants से monoclonal एंटीबॉडी के कब्जा करने के लिए एक अत्यधिक चयनात्मक आत्मीयता राल का उत्पादन करने के लिए स्थिर है, प्रोटीन ए के लिए एक विकल्प के रूप में.

एफ़िनिटी क्रोमैटोग्राफी रेजिन के तीव्र विकास के लिए सक्रिय क्रॉस-लिंक्ड अगारोस - एक केस स्टडी के रूप में एंटीबॉडी कैप्चर

The purification of monoclonal antibodies (mAbs) is commonly achieved by Protein A affinity chromatography, which can account for up to 25% of the overall ...

मोनोक्लोनल एंटीबॉडी बायोफार्मा बाजार पर हावी होते हैं और आमतौर पर प्रोटीन ए क्रोमेटोग्राफी द्वारा शुद्ध होते हैं। राल के अनुसार एंटीबॉडी आधारित चिकित्सा की कीमत को प्रभावित उत्पादन के दौरान एक प्रमुख लागत चालक है । यहां हम फ्लोरोसेंट प्रोटीन के आधार पर एक नई आत्मीयता लिगांड का वर्णन करते हैं जिसे एंटीबॉडी 2F5 को बेअसर एचआईवी के रैखिक एपिटोप के लिए वाहक के रूप में पढ़ा जाता है।सामान्य तौर पर हमारी विधि आत्मीयता क्रोमेटोग्राफी रेजिन की तेजी से पीढ़ी की अनुमति देती है जिसका उपयोग मोनोक्लोनल एंटीबॉडी को पकड़ने के लिए किया जा सकता है। हम कच्चे तेल संयंत्र निकालने से एंटीबॉडी 2F5 पर कब्जा करके इस क्षमता का प्रदर्शन किया । हमने गतिशील बाध्यकारी क्षमता और राल पुन: प्रयोज्य में सुधार करने के लिए कैप्चर की स्थिति और समाधान बफर को अनुकूलित किया।हमारा राल प्रोटीन ए की तुलना में आम तौर पर लूजर स्थितियों की अनुमति देता है और मोनोक्लोनल एंटीबॉडी की शुद्धिकरण लागत को कम करने की क्षमता है। इसके अलावा, राल को आसानी से अन्य एंटीबॉडी के लिए अनुकूलित किया जा सकता है जो रैखिक एपिटोप्स से बांधते हैं। इस प्रक्रिया को शुरू करने के लिए, तैयार एफ़िनिटी लिगांड समाधान की एकाग्रता को समायोजित करें ताकि प्रयोगों के डिजाइन द्वारा परिभाषित 5 से 15 ग्राम प्रति लीटर की सीमा में हो।जब तक कपलिंग प्रतिक्रिया तैयार न हो जाए तब तक इसका समाधान बर्फ पर स्टोर करें। इसके बाद, डीएफई समाधान के साथ एक दो मिलीलीटर सिरिंज भरें। और एक मिलीलीटर के बिस्तर की मात्रा के साथ एनएचएस-सक्रिय क्रॉस-लिंक एगर उठे कॉलम पर सीरिंज माउंट करने के लिए एक एडाप्टर तैयार करें।कपलिंग के लिए उपयोग किए जाने वाले प्रत्येक 10 कॉलम के लिए, 30 मिलीलीटर निष्क्रियता समाधान, 30 मिलीलीटर कम पीएच समाधान और भंडारण समाधान का एक मिलीलीटर तैयार करें। इसके बाद एक ट्यूब में एक मिलीमोलर हाइड्रोक्लोरिक एसिड के 20 मिलीलीटर तैयार करें। और इसे कम से कम 20 मिनट के लिए बर्फ पर इनक्यूबेट करें।युग्मन प्रतिक्रिया के दौरान सभी चरणों के लिए अंशों के माध्यम से प्रवाह की निगरानी करने के लिए एक सटीक पैमाने तैयार करें। इसके बाद, एक सीलबंद एनएचएस-सक्रिय क्रॉसलिंक्ड एग्राजिंग कॉलम खोलें। स्तंभ में प्रवेश करने से हवा को रोकने के लिए, एडाप्टर इनलेट पर बफर की एक बूंद लागू करें।कॉलम इनलेट पर सिरिंज एडाप्टर माउंट करें। बर्फ ठंड एक मिलीमोलर हाइड्रोक्लोरिक एसिड के छह मिलीलीटर के साथ कॉलम धोएं, एक प्रवाह दर पर कम है कि प्रति मिनट एक मिलीलीटर । दो मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग करके, तुरंत प्रति मिनट एक मिलीलीटर से कम प्रवाह दर पर 1.5 मिलीलीटर डीएफई समाधान इंजेक्ट करें।और बाद के विश्लेषण के लिए एक सटीक पैमाने पर अंश के माध्यम से प्रवाह इकट्ठा। दोनों सिरों पर कॉलम सील और 15 से ४५ मिनट के लिए इनक्यूबेट, 22 डिग्री सेल्सियस पर । इसके बाद एक्टिवेशन समाधान के छह मिलीलीटर इंजेक्ट करें, इसके बाद कम पीएच समाधान के छह मिलीलीटर, प्रति मिनट एक मिलीलीटर से कम प्रवाह दर पर, राल से गैर-सहसंबद्ध लिगामेंट्स को हटा दें।एक्टिवेशन समाधान के छह मिलीलीटर इंजेक्ट करें, और कॉलम को 15 मिनट तक इनक्यूबेट करें। इसके बाद, कॉलम में कम पीएच समाधान के छह मिलीलीटर इंजेक्ट करें। इसके बाद एक्टिवेशन सॉल्यूशन के छह मिलीलीटर ।फिर कॉलम में कम पीएच समाधान के एक और छह मिलीलीटर इंजेक्ट करें। कॉलम में भंडारण समाधान के दो मिलीलीटर इंजेक्ट करें, और इसे चार डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें। सबसे पहले 2F5 युक्त स्पष्ट संयंत्र निकालने के 100 मिलीलीटर तैयार करें, या पसंदीदा सेल आधारित अभिव्यक्ति प्रणाली के लिए सुपरनेट, जिसमें 2F5 भी शामिल है।अगले संतुलन बफर तैयार करते हैं, और उच्च लोहा एक्स ताकत भ्रम बफर, जैसा कि पाठ प्रोटोकॉल में उल्लिखित है। बफ़र्स के साथ क्रोमेटोग्राफी सिस्टम फ्लश करें। क्रोमेटोग्राफी सिस्टम पर एक फी एफ़िनिटी कॉलम माउंट करें।और संतुलन बफर के पांच सीवी के साथ संतुलन, प्रति मिनट एक मिलीलीटर की प्रवाह दर पर । 280 नैनोमीटर पर यूवी अवशोषण की निगरानी करें। फिर या तो स्पष्ट संयंत्र निकालने के 80 मिलीलीटर लोड करें, या प्रति मिनट 5 मिलीलीटर की प्रवाह दर पर कॉलम पर सुपरनैटर लोड करें।दो मिनट के संपर्क समय की गारंटी देना। दो मिलीलीटर अंश या सफलता वक्र पुनर्निर्माण में नमूनों के माध्यम से प्रवाह ले लीजिए। यदि तत्काल नमूना विश्लेषण संभव नहीं है तो नमूनों के माध्यम से प्रवाह को चार डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।इसके बाद 6CV के साथ कॉलम को समतुल्य बफर के साथ धोएं। धोने की शुरुआत, मध्य और अंत में एक नमूना लें। उच्च आयनिक शक्ति भ्रम बफर के पांच संस्करणों के साथ MAB2F5 पतला।280 नैनोमीटर पर यूवी सिग्नल बेसलाइन से ऊपर पांच मिली अवशोषण इकाइयों तक बढ़ गया है जब DFE अंश ले लीजिए। पाठ प्रोटोकॉल में उल्लिखित प्रत्येक एपिटोप-एंटीबॉडी जोड़ी के लिए भ्रम बफर का अनुकूलन करें। फ्यूजन प्रोटीन डफे ट्रांसजेनिक तंबाकू पौधों में व्यक्त किया जाता है, जो ग्रीनहाउस में उगाया जाता है।23.5 मिलीग्राम प्रति किलोग्राम 23.5 मिलीग्राम है। 90% से अधिक की शुद्धता के साथ राल पर स्थिर डलेक्ट्राइज्ड डफे की पूर्ण मात्रा कॉलम में इंजेक्ट किए गए डफे के द्रव्यमान के साथ बढ़ जाती है, और लगभग 15 ग्राम प्रति लीटर पर पठार, जबकि कपलिंग उपज में लगातार गिरावट आती है क्योंकि अधिक डीई इंजेक्शन लगाया जाता है। डफे अणुओं को कपलिंग के बाद भी अपनी लाल फ्लोरेसेंस को बनाए रखने के लिए देखा जाता है ।रंग की तीव्रता स्थिर डफे की कुल मात्रा से मेल खाती है। इसलिए कॉलम रंग का उपयोग युग्मन दक्षता और कॉलम गुणवत्ता का अनुमान लगाने के लिए एक सरल गुणवत्ता नियंत्रण पैरामीटर के रूप में किया जा सकता है। रिकॉम्बिनेंट 2F5 एंटीबॉडी को फाइटोट्रॉन में उगाए जाने वाले निकोटियाना बेंथामियाना पौधों में क्षणिक रूप से उत्पादित किया जाता है।कच्चे संयंत्र के निकालने से 2F5 का कब्जा, आत्मीयता स्तंभों का उपयोग करके परीक्षण किया जाता है, जिसमें शुद्ध डफे के लगभग सात मिलीग्राम होते हैं। 1.25 मोलर की मैग्नीशियम क्लोराइड एकाग्रता 100% के करीब वसूली और लगभग 97% की शुद्धता के साथ 2F5 को 2F5 को पर्याप्त है जो प्रोटीन ए रेजिन के बराबर है। 10% 2F5 सफलता पर DFE आत्मीयता राल के DBC, 25 चक्र के पाठ्यक्रम पर linearly गिरावट आती है, प्रारंभिक मूल्य के बारे में 15% के लिए ।हमने अपनी आत्मीयता लिगांड की युग्मन क्षमता को अनुकूलित करने के लिए प्रयोग दृष्टिकोण के डिजाइन का उपयोग किया। इन शर्तों को भविष्य में अन्य लिगामेंट्स के लिए ठीक ट्यून किया जा सकता है। हमारी विधि उत्पाद विशिष्ट लिगांड के लिए एक उप वाहक प्रोटीन को थ्रेड करने के लिए फ्लोरोसेंट प्रोटीन का उपयोग करती है।साथ ही बस जुटाने की प्रक्रिया के एक दृश्य गुणवत्ता संकेतक के रूप में कार्य जोड़ें, ऑपरेटर को तत्काल और सहज प्रतिक्रिया प्रदान करते हैं।

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Protein Complex Affinity Capture from Cryomilled Mammalian Cells

Cryomilled स्तनधारी कोशिकाओं से प्रोटीन जटिल संबंध कब्जा

Affinity capture is an effective technique for isolating endogenous protein complexes for further study. When used in conjunction with an antibody, this ...

A Facile and Efficient Approach for the Production of Reversible Disulfide Cross-linked Micelles

प्रतिवर्ती Disulfide क्रॉस से जुड़े micelles के उत्पादन के लिए एक सतही और कुशल दृष्टिकोण

Nanomedicine is an emerging form of therapy that harnesses the unique properties of particles that are nanometers in scale for biomedical application. ...

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

पाड़ Liposomes का उपयोग लिपिड-समीपस्थ प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत पुनर्गठित करने<em&gt; इन विट्रो</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

Determination of High-affinity Antibody-antigen Binding Kinetics Using Four Biosensor Platforms

उच्च आत्मीयता एंटीबॉडी प्रतिजन बाध्यकारी काइनेटिक्स का निर्धारण चार Biosensor प्लेटफार्मों का उपयोग

Label-free optical biosensors are powerful tools in drug discovery for the characterization of biomolecular interactions. In this study, we describe the ...

A Filtration-based Method of Preparing High-quality Nuclei from Cross-linked Skeletal Muscle for Chromatin Immunoprecipitation

Chromatin Immunoprecipitation के लिए क्रॉस-लिंक किए गए स्केलेटल स्नायु से उच्च-गुणवत्ता वाले नाभिक तैयार करने का एक निस्पंदन-आधारित पद्धति

Chromatin immunoprecipitation (ChIP) is a powerful method to determine protein binding to chromatin DNA. Fiber-rich skeletal muscle, however, has been a ...

Benchtop Immobilized Metal Affinity Chromatography, Reconstitution and Assay of a Polyhistidine Tagged Metalloenzyme for the Undergraduate Laboratory

Benchtop मैटीरियल मेटल संबध क्रोमैटोग्राफी, पुनर्गठन और एक Polyhistidine की परख स्नातक प्रयोगशाला के लिए Metalloenzyme टैग

Benchtop immobilized metal affinity chromatography (IMAC), of polyhistidine tagged proteins is easily mastered by undergraduate students and has become ...

Untargeted Liquid Chromatography-Mass Spectrometry-Based Metabolomics Analysis of Wheat Grain

गेहूं के अनाज का अलक्षित तरल क्रोमेटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोमेट्री-आधारित मेटापोलोमिक्स विश्लेषण

Understanding the interactions between genes, the environment and management in agricultural practice could allow more accurate prediction and management ...

Rapid Determination of Antibody-Antigen Affinity by Mass Photometry

मास फोटोमेट्री द्वारा एंटीबॉडी-एंटीजन आत्मीयता का तेजी से निर्धारण

Measurements of the specificity and affinity of antigen-antibody interactions are critically important for medical and research applications. In this ...

Cell-Free Production of Proteoliposomes for Functional Analysis and Antibody Development Targeting Membrane Proteins

झिल्ली प्रोटीन को लक्षित करने वाले कार्यात्मक विश्लेषण और एंटीबॉडी विकास के लिए प्रोटियोलिपोसोम का सेल-मुक्त उत्पादन

Membrane proteins play essential roles in a variety of cellular processes and perform vital functions. Membrane proteins are medically important in drug ...

Development of a Lateral Flow Immunochromatographic Strip for Rapid and Quantitative Detection of Small Molecule Compounds

छोटे अणु यौगिकों के त्वरित और मात्रात्मक पता लगाने के लिए पार्श्व प्रवाह इम्यूनोक्रोमेग्राफिक स्ट्रिप का विकास

Membrane-based lateral flow immunochromatographic strips (ICSs) are useful tools for low-cost self-diagnosis and have been efficiently applied to toxin, ...