Name: generation of a liver orthotopic human uveal melanoma xenograft platform in immunodeficient mice
Uploaded: 2019-11-06T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of a Liver Orthotopic Human Uveal Melanoma Xenograft Platform in Immunodeficient Mice Video at JoVE.com

We zijn M. Ohara, K. Saito en M. Terai dankbaar voor het reviseren van het manuscript. De auteurs erkennen kritische recensie voor redactionele en Engelse assistentie van dit manuscript door Dr. R. Sato bij Fox Chase Cancer Center. Het hierin beschreven werk werd ondersteund door het Bonnie Kroll Research Fund, het Mark Weinzierl Research Fund, het Eye melanoma Research Fund aan de Thomas Jefferson University, de Osaka Community Foundation en JSPS KAKENHI Grant nummer JP 18K15596 in Osaka City Universiteit. Studies in Dr. A. Aplin's laboratorium werden ondersteund door NIH Grant R01 GM067893. Dit project werd ook gefinancierd door een Decan's Transformative Science Award, een Thomas Jefferson University programmatische Initiative Award.

Patiënten die deelnamen aan de studie dienen schriftelijke toestemming te geven voor het gebruik van afgedankte chirurgische monsters voor onderzoeksdoeleinden en genetische studies, volgens een goedgekeurd Protocol van een institutioneel herzienings Comité. Dit protocol werd uitgevoerd in strikte overeenstemming met de aanbevelingen in de gids voor de verzorging en het gebruik van laboratoriumdieren van de National Institutes of Health en goedgekeurd door het institutioneel Dierenzorg-en gebruiks Comité (IACUC).
...

<ol>
	<li>Aronow, M. E., Topham, A. K., Singh, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uveal+Melanoma:+5-Year+Update+on+Incidence,+Treatment,+and+Survival+(SEER+1973-2013).">Uveal Melanoma: 5-Year Update on Incidence, Treatment, and Survival (SEER 1973-2013).</a> Ocular Oncology and Pathology. 4 (3), 145-151 (2018).</li><li>Krantz, B. A., Dave, N., Komatsubara, K. M., Marr, B. P., Carvajal, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uveal+melanoma:+epidemiology,+etiology,+and+treatment+of+primary+disease.">Uveal melanoma: epidemiology, etiology, and treatment of primary disease.</a> Clinical Ophthalmology. 11, 279-289 (2017).</li><li>Gragoudas, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+of+patients+with+metastases+from+uveal+melanoma.">Survival of patients with metastases from uveal melanoma.</a> Ophthalmology. 98 (3), 383-389 (1991).</li><li>Diener-West, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+metastatic+disease+after+enrollment+in+the+COMS+trials+for+treatment+of+choroidal+melanoma:+Collaborative+Ocular+Melanoma+Study+Group+Report+No.+26.">Development of metastatic disease after enrollment in the COMS trials for treatment of choroidal melanoma: Collaborative Ocular Melanoma Study Group Report No. 26.</a> Archives of Ophthalmology. 123 (12), 1639-1643 (2005).</li><li>Collaborative Ocular Melanoma Study Group. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+metastatic+disease+status+at+death+in+435+patients+with+large+choroidal+melanoma+in+the+Collaborative+Ocular+Melanoma+Study+(COMS):+COMS+report+no.+15.">Assessment of metastatic disease status at death in 435 patients with large choroidal melanoma in the Collaborative Ocular Melanoma Study (COMS): COMS report no. 15.</a> Archives of Ophthalmology. 119 (5), 670-676 (2001).</li><li>Hidalgo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+xenograft+models:+an+emerging+platform+for+translational+cancer+research.">Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research.</a> Cancer Discovery. 4 (9), 998-1013 (2014).</li><li>Kim, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+orthotopic+and+heterotopic+human+pancreatic+cancer+xenografts+in+immunodeficient+mice.">Generation of orthotopic and heterotopic human pancreatic cancer xenografts in immunodeficient mice.</a> Nature Protocols. 4 (11), 1670-1680 (2009).</li><li>N&#233;mati, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+a+panel+of+human+uveal+melanoma+xenografts+derived+from+primary+and/or+metastatic+tumors.">Establishment and characterization of a panel of human uveal melanoma xenografts derived from primary and/or metastatic tumors.</a> Clinical Cancer Research. 16 (8), 2352-2362 (2010).</li><li>Wilmanns, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+Doxorubicin+sensitivity+and+level+of+p-glycoprotein+expression+in+human+colon-carcinoma+cells+by+ectopic+and+orthotopic+environments+in+nude-mice.">Modulation of Doxorubicin sensitivity and level of p-glycoprotein expression in human colon-carcinoma cells by ectopic and orthotopic environments in nude-mice.</a> International Journal of Oncology. 3 (3), 413-422 (1993).</li><li>Kang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation+of+human+lung+cancer+in+an+orthotopic+transplantation+mouse+model.">Proliferation of human lung cancer in an orthotopic transplantation mouse model.</a> Experimental and Therapeutic. 1 (3), 471-475 (2010).</li><li>Fichtner, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+patient-derived+non-small+cell+lung+cancer+xenografts+as+models+for+the+identification+of+predictive+biomarkers.">Establishment of patient-derived non-small cell lung cancer xenografts as models for the identification of predictive biomarkers.</a> Clinical Cancer Research. 14 (20), 6456-6468 (2008).</li><li>Marangoni, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+model+of+patient+tumor-derived+breast+cancer+xenografts+for+preclinical+assays.">A new model of patient tumor-derived breast cancer xenografts for preclinical assays.</a> Clinical Cancer Research. 13 (13), 3989-3998 (2007).</li><li>Bergamaschi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+profiling+and+characterization+of+luminal-like+and+basal-like+in+vivo+breast+cancer+xenograft+models.">Molecular profiling and characterization of luminal-like and basal-like in vivo breast cancer xenograft models.</a> Molecular Oncology. 3 (5-6), 469-482 (2009).</li><li>Ho, K. S., Poon, P. C., Owen, S. C., Shoichet, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+vessel+hyperpermeability+and+pathophysiology+in+human+tumour+xenograft+models+of+breast+cancer:+a+comparison+of+ectopic+and+orthotopic+tumours.">Blood vessel hyperpermeability and pathophysiology in human tumour xenograft models of breast cancer: a comparison of ectopic and orthotopic tumours.</a> BMC Cancer. 12, 579 (2012).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+orthotopic+xenografts:+better+mimic+of+metastasis+than+subcutaneous+xenografts.">Patient-derived orthotopic xenografts: better mimic of metastasis than subcutaneous xenografts.</a> Nature Reviews Cancer. 15 (8), 451-452 (2015).</li><li>Rubio-Viqueira, B., Hidalgo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+in+vivo+xenograft+tumor+model+for+predicting+chemotherapeutic+drug+response+in+cancer+patients.">Direct in vivo xenograft tumor model for predicting chemotherapeutic drug response in cancer patients.</a> Clinical Pharmacology &amp; Therapeutics. 85 (2), 217-221 (2009).</li><li>Ozaki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+Characterization+of+Orthotopic+Mouse+Models+for+Human+Uveal+MelanomaHepatic+Colonization.">Establishment and Characterization of Orthotopic Mouse Models for Human Uveal MelanomaHepatic Colonization.</a> American Journal of Pathology. 186 (1), 43-56 (2016).</li><li>Kageyama, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+an+orthotopic+patient-derived+xenograft+mouse+model+using+uveal+melanomahepatic+metastasis.">Establishment of an orthotopic patient-derived xenograft mouse model using uveal melanomahepatic metastasis.</a> Journal of Translational Medicine. 15 (1), 145 (2017).</li><li>Fu, X. Y., Besterman, J. M., Monosov, A., Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+human+metastatic+colon+cancer+in+nude+mice+orthotopically+constructed+by+using+histologically+intact+patient+specimens.">Models of human metastatic colon cancer in nude mice orthotopically constructed by using histologically intact patient specimens.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 88 (20), 9345-9349 (1991).</li><li>Rashidi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+mouse+model+of+remetastasis+of+human+colon+cancer+liver+metastasis.">An orthotopic mouse model of remetastasis of human colon cancer liver metastasis.</a> Clinical Cancer Research. 6 (6), 2556-2561 (2000).</li><li>Fan, Z. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+monitoring+of+rare+circulating+hepatocellular+carcinoma+cells+in+an+orthotopic+model+by+in+vivo+flow+cytometry+assesses+resection+on+metastasis.">Real-time monitoring of rare circulating hepatocellular carcinoma cells in an orthotopic model by in vivo flow cytometry assesses resection on metastasis.</a> Cancer Research. 72 (10), 2683-2691 (2012).</li><li>Jacob, D., Davis, J., Fang, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenograftictumor+modelsinmiceforcancer+research,+atechnical+review.">Xenograftictumor modelsinmiceforcancer research, atechnical review.</a> Gene Therapy and Molecular Biology. 8, 213-219 (2004).</li><li>Ahmed, S. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+subcutaneous+and+intrahepatic+human+hepatocellular+carcinoma+xenografts+in+immunodeficient+mice.">Generation of subcutaneous and intrahepatic human hepatocellular carcinoma xenografts in immunodeficient mice.</a> Journal of Visualized Experiments. 25 (79), e50544 (2013).</li><li>Kim, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+humanized+liver+mouse+model+by+transplant+of+patient-derived+fresh+human+hepatocytes.">Generation of humanized liver mouse model by transplant of patient-derived fresh human hepatocytes.</a> Transplantation Proceedings. 46 (4), 1186-1190 (2014).</li><li>Lavender, K. J., Messer, R. J., Race, B., Hasenkrug, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+bone+marrow,+liver,+thymus+(BLT)+humanized+mice+on+the+C57BL/6+Rag2(-/-)&#947;c(-/-)CD47(-/-)+background.">Production of bone marrow, liver, thymus (BLT) humanized mice on the C57BL/6 Rag2(-/-)&#947;c(-/-)CD47(-/-) background.</a> Journal of Immunological Methods. 407, 127-134 (2014).</li><li>Boll, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micro-CT+based+experimental+liver+imaging+using+a+nanoparticulate+contrast+agent:+a+longitudinal+study+in+mice.">Micro-CT based experimental liver imaging using a nanoparticulate contrast agent: a longitudinal study in mice.</a> PLoS One. 6 (9), e25692 (2011).</li><li>Zhao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+gene+expression+profiling+confirms+the+molecular+fidelity+of+primary+tumor-based+orthotopic+xenograft+mouse+models+of+medulloblastoma.">Global gene expression profiling confirms the molecular fidelity of primary tumor-based orthotopic xenograft mouse models of medulloblastoma.</a> Neuro-Oncology. 14 (5), 574-583 (2012).</li><li>Rubio-Viqueira, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vivo+platform+for+translational+drug+development+in+pancreatic+cancer.Clinical.">An in vivo platform for translational drug development in pancreatic cancer.Clinical.</a> Cancer Research. 12 (15), 4652-4661 (2006).</li><li>Siolas, D., Hannon, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+tumor+xenografts:+transforming+clinical+samples+into+mouse+models.">Patient-derived tumor xenografts: transforming clinical samples into mouse models.</a> Cancer Research. 73 (17), 5315-5319 (2013).</li><li>Alkema, N. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biobanking+of+patient+and+patient-derived+xenograft+ovarian+tumour+tissue:+efficient+preservation+with+low+and+high+fetal+calf+serum+based+methods.">Biobanking of patient and patient-derived xenograft ovarian tumour tissue: efficient preservation with low and high fetal calf serum based methods.</a> Scientific Reports. 6 (5), 14495 (2015).</li></ol>

De huidige orthotopic xenotransplantaatmodellen is modellen zijn arbeidsintensief, tijdrovend en duur om te creëren. Orthotopic tumor xenotransplantaatmodellen is Muismodellen voor leverkanker werden opgericht meer dan twee decennia geleden19,20,21. Deze techniek is echter ingewikkeld en vereist gebruik van speciale apparatuur, zoals een micro-naald houder en 6-0 tot 8-0 fijne hechtingen onder een microscoop. Tumor en normale l...

Ukalfs melanoom is de meest voorkomende intraoculaire maligne tumor onder volwassenen in de westerse wereld. Gedurende de afgelopen 50 jaar is de incidentie van ukalfs melanoom (5,1 gevallen per miljoen) in de Verenigde Staten1,2stabiel gebleven. Ukalfs melanoom ontstaat uit melanocyten in de Iris, Ciliaire lichaam, of choroïde, en het is een extreem dodelijke ziekte bij het ontwikkelen van metastasen. Het sterftecijfer van patiënten met uveale melanoom metastasen was 80% na 1 jaar en 92% na 2 jaar na de initiële diagnose van de uitzaaiingen. De tijd tussen de diagnose van metastasen en de dood is meestal kort, minder dan 6 maanden, zonder betrekking tot therapie3,4. De kanker verspreidt zich door het bloed en neigt naar een dominante metastaseren naar de lever (89-93%)4,5. Een effectief muismodel is dringend nodig voor verder onderzoek van levermetastatische ukalfs melanoom. Voor translationeel onderzoek is er een duidelijke vraag om een in de lever gelokaliseerd gemetastaseerd ukalfs melanoom muismodel te genereren.
Patiënten afgeleide tumor xenotransplantaatmodellen is (PDX) Muismodellen worden verwacht om geïndividualiseerde geneeskunde strategieën te bieden. Deze modellen kunnen voorspellend zijn voor klinische uitkomsten, bruikbaar zijn voor de evaluatie van preklinische geneesmiddelen en worden gebruikt voor biologische studies van tumoren6. Representatieve PDX-modellen zijn ectopisch tumor-geïmplanteerde xenotransplantaatmodellen is-muizen, die tumor hebben op subcutane plaatsen. De meeste onderzoekers kunnen een operatie doen voor subcutane implantatie zonder speciale praktijk7,8. Ze kunnen ook subcutane tumoren gemakkelijk bewaken. Hoewel subcutane PDX-modellen populair werden in de onderzoeksfase, hebben ze een aantal hindernissen in het praktisch gebruik. Subcutane implantatie dwingt patiënten afgeleide tumoren om te graveren in een andere micro-omgeving van de tumor oorsprong, zodat het leidt tot engraftment falen en langzame tumorgroei 9,10,11, 12,13,14. Orthotopic engraftment kan een meer ideale en rationele benadering zijn voor een PDX-model omdat het hetzelfde orgel gebruikt als de oorspronkelijke tumor15,16.
Onlangs ontwikkelden we protocollen voor chirurgische orthotopic implantatie technieken van patiënten afgeleide lever-gemetastaseerde ukalfs melanoom tumoren en naald injectietechnieken met een gekweekte humane lever-gemetastaseerde ukalfs melanoom cellijn in NOD. CG-prkdcscidIl2rgtm1Wjl/szj (NSG) muizen17,18. De protocollen resulteren in consistent hoge technische succespercentages. We hebben ook CT-scantechnieken vastgesteld die nuttig zijn om inwendige lever tumoren te detecteren, en we ontwikkelden opnieuw implantatie van cryopreserved tumoren in het PDX-platform. We vonden dat ukalfs vlees melanoom tumor xenotransplantaatmodellen is modellen de kenmerken van de oorspronkelijke patiënt lever tumor behouden, met inbegrip van hun histopathologische en moleculaire kenmerken. Samen bieden deze technieken een beter platform voor lever orthotopic tumor modellen voor ukalfs melanoom in translationeel onderzoek.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Materials, tissues and animals</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 tank</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryomedium</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Exitron nano 12000 (Alkaline earth metal-based nanoparticle contrast agent)</td>
			<td>Miltenyl Biotec</td>
			<td>130-095-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS 1X, with calcium &#38; magnesium</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-020-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human liver metastatic uveal melanoma cell line</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human uveal melanoma tissue in the liver</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>All tissue handling should be done in a Biosafety Level 2 hood. Be careful when working with human tissue; always use gloves and avoid direct skin contact. Assume patients may have been infected with HIV or other highly transmissible organisms. Do not process samples known to carry infections.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Purdue Products</td>
			<td>67618-150-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>A416-1</td>
			<td>Avoid direct contact to skin and eye and inhalation of anesthetic agent.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid nitrogen</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel HC</td>
			<td>BD</td>
			<td>354248</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) mice</td>
			<td>Jackson Lab</td>
			<td>5557</td>
			<td>4 to 8 weeks old</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS 1X, without calcium and magnesium</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-031-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile alcohol prep pad (70% isopropyl alcohol)</td>
			<td>Nice-Pak products</td>
			<td>B603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% paraformaldehyde phosphate buffer solution</td>
			<td>Wako</td>
			<td>163-20145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Ethyl alcohol solution</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>04-355-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbable hemostat</td>
			<td>Johnson and Johnson</td>
			<td>63713-0019-61</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Body weight measure</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cautery</td>
			<td>Bovie Medical</td>
			<td>MC-23009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counter</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuzer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swab</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryo freezing container</td>
			<td>NALGENE</td>
			<td>5100-0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryotube</td>
			<td>SARSTEDT</td>
			<td>72.379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved scissors</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>503247</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved ultrafine forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fabric sheet</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F/AIR Filter Canister</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>600979</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane vaporizer</td>
			<td>Artisan Scientific</td>
			<td>66317-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid nitrogen</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid nitrogen jar</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>2123</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-CT scan</td>
			<td>Siemens</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875713</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spray bottle</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile hood</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Biosafety level 2 cabinet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile No.11 scalpel</td>
			<td>AD Surgical</td>
			<td>A300-11-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>14226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tail vein restrainer</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>TV-150-STD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml TB syringe with 27-gauge needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>309623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.7 ml tube</td>
			<td>Bioexpress</td>
			<td>C-3260-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-0 PDO Suture</td>
			<td>AD Surgical</td>
			<td>S-D518R13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL conical tubes</td>
			<td>AZER SCIENTIFIC</td>
			<td>ES-9152N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27-gauge needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>780301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27-gauge needle</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7803-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL conical tubes</td>
			<td>AZER SCIENTIFIC</td>
			<td>ES-9502N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 &#181;l micro syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>80630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 &#181;l micro syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7655-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mL container</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12594997</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200&#956;l tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of a liver orthotopic human uveal melanoma xenograft platform in immunodeficient mice

In de afgelopen decennia, subcutaan geïmplanteerde patiënt-afgeleide xenotransplantaat tumoren of gekweekte menselijke cellijnen zijn steeds meer representatieve modellen te bestuderen van menselijke kankers in immunodeficiënte muizen dan de traditionele gevestigde menselijke cel lijnen in vitro. Onlangs, orthotopisch geïmplanteerd patiënt-afgeleide tumor xenotransplantaatmodellen is (PDX) modellen in muizen zijn ontwikkeld om beter te repliceren kenmerken van patiënt tumoren. Een lever orthotopic xenotransplantaatmodellen is muismodel wordt verwacht dat een nuttig kankeronderzoek platform, het verstrekken van inzichten in de tumor biologie en medicamenteuze therapie. Echter, lever orthotopic tumor implantatie is over het algemeen ingewikkeld. Hier beschrijven we onze protocollen voor de orthotopic implantatie van patiënten afgeleide lever-gemetastaseerde ukalfs melanoom tumoren. We gekweekte menselijke lever gemetastaseerde ukalfs melanoom cellijnen in immunodeficiënte muizen. De protocollen kunnen resulteren in consistent hoge technische succespercentages met behulp van ofwel een chirurgische orthotopic implantatie techniek met stukjes van patiënt afgeleide ukalfs melanoom tumor of een naald injectietechniek met gekweekte menselijke cellijn. We beschrijven ook protocollen voor CT-scanning om inwendige lever tumoren te detecteren en voor re-implantatie technieken met behulp van cryopreserved tumoren om re-engraftment te bereiken. Samen bieden deze protocollen een beter platform voor lever orthotopic tumor Muismodellen van lever gemetastaseerd ukalfs melanoom in translationeel onderzoek.

Chirurgische orthotopic implantatie met behulp van de lever Pocket methode kan menselijke lever metastatische ukalfs melanoom tumor in de lever van de muis met een hoog succespercentage van 80% binnen zes maanden transplantatie. De xenotransplantaatmodellen is tumor engrafts in de lever als een eenzame tumor zonder dochter knobbeltjes (Figuur 1 en Figuur 3a). De chirurgische orthotopic injectietechniek in de lever met behulp van ...

Watch this Scientific Journal Video about Generation of a Liver Orthotopic Human Uveal Melanoma Xenograft Platform in Immunodeficient Mice Video at JoVE.com

Generation of a Liver Orthotopic Human Uveal Melanoma Xenograft Platform in Immunodeficient Mice Video (Video) | JoVE

Orthotopic humane lever gemetastaseerde ukalfs melanoom xenotransplantaatmodellen is Muismodellen werden gemaakt met behulp van chirurgische orthotopic implantatie technieken met patiënt-afgeleide tumor Brok en naald injectietechnieken met gekweekte menselijke ukalfs melanoom cellijnen.

Generatie van een lever Orthotopic humaan Ukalfs melanoom xenograft platform in Immunodeficiënte muizen

In recent decades, subcutaneously implanted patient-derived xenograft tumors or cultured human cell lines have been increasingly recognized as more ...

De meeste patiënt-afgeleide tumor dier modellen zijn onderhuids geïmplanteerd, het voorkomen van de evaluatie van belangrijke kenmerken van tumoren en van de werkzaamheid van het geneesmiddel. Het huisvesten van de geïmplanteerde tumoren in de lever vergemakkelijkte deze analyse zonder het risico van te veel afwijkingen die zich in de lever voordoen. Voor aanvang van de procedure, spray alle materialen en instrumenten met 70% ethylalcohol.Bevestig een gebrek aan respons op teenknijpen in het verdoofde dier. Plaats de muis in de supine positie op een verwarmingskussen, en nat de vacht met extra 70% ethylalcohol. Verspreid de vacht om de huid onder het linker subcostal gebied te visualiseren.Verwijder het haar en breng jodium aan om in de huid te worden opgenomen. Plaats een steriele chirurgische gordijnen met een gat van twee centimeter over de muis, en gebruik gebogen ultra fijne tangen om de buikhuid op te tillen. Maak een één centimeter dwarse linker subcostal incisie in de tentvormige huid, en steek gebogen schaartips in de incisie om het buikvlies van de huid te scheiden.Trek de schaar in zonder de messen te openen en plaats de lever onder het buikvlies door zijn donkerrode kleur. Gebruik de gebogen schaar om een transversale incisie van één centimeter in het buikvlies te maken. Met behulp van de andere hand, steek de rand van een wattenstaafje onder de linker leverkwab, en rol het wattenstaafje naar beneden te duwen van de lever.Til het wattenstaafje op om de lever over te brengen op een niet-geweven, absorberende stofplaat. Houd een steriel nummer 11 scalpelblad parallel aan het oppervlak, druk het blad horizontaal in de lever om een vijf-millimeter diepe bij vijf millimeter brede incisie in de parenchyma te maken terwijl u zachtjes op de incisieplaats drukt met een wattenstaafje. Rol het wattenstaafje omhoog om de incisieplaats te openen.Gebruik gebogen ultra fijne tangen om een kubus van een millimeter tumorweefsel in de zak te implanteren. Trek de tang in terwijl u het wattenstaafje in de omgekeerde richting rolt terwijl u naar beneden drukt en verwijder het wattenstaafje. Plaats onmiddellijk een absorbeerbare hemostat op de incisieplaats en bevestig hemostase.Volgende gebruik stompe beëindigde tangen om de lever van het stofblad te pellen, en de lever aan de buikholte terug te keren. Sluit vervolgens het buikvlies met een 5-0 absorbeerbare hechting en een dubbele ligatuur, en sluit de huid met een 5-0 absorbeerbare hechting en een drievoudige ligatuur. De xenograft tumor engrafts in de lever als een eenzame tumor zonder dochter knobbeltjes.Chirurgische orthotopische injectie in de lever met behulp van microneedles kan resulteren in een succesvolle engraftment van een cluster van gekweekte menselijke lever gemetastaseerde uveale melanoomcellen in de lever. Met behulp van deze lever orthotopische patiënt afgeleide tumor model, de werkzaamheid van de geneesmiddelen direct geïnjecteerd in de lever kan worden getest met vergelijkbare verwachte resultaten die worden waargenomen bij klinische patiënten.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Generation of a Liver Orthotopic Human Uveal Melanoma Xenograft Platform in Immunodeficient Mice

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer Video (Video) | JoVE

Fluorescerende orthotope Muis Model van pancreaskanker

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma Video (Video) | JoVE

Engraftment van de tumor in een muismodel van Xenograft van menselijke mantel cel lymfoom

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

A 3D Organotypic Melanoma Spheroid Skin Model

A 3D Organotypic Melanoma Spheroid Skin Model Video (Video) | JoVE

Een 3D Organotypic melanoom sferoïde huidmodel

Malignant transformation of melanocytes, the pigment cells of human skin, causes formation of melanoma, a highly aggressive cancer with increased ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad Video (Video) | JoVE

Orthotopic injectie van borstkankercellen in de borstklier vet Pad muizen

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis Video (Video) | JoVE

Patiënt-afgeleide Orthotopic xenograft modellen voor humaan Urotheelcelcarcinoom en colorectale kanker tumor groei en spontane metastasen

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Patient-derived Heterogeneous Xenograft Model of Pancreatic Cancer Using Zebrafish Larvae as Hosts for Comparative Drug Assessment

Patient-derived Heterogeneous Xenograft Model of Pancreatic Cancer Using Zebrafish Larvae as Hosts for Comparative Drug Assessment Video (Video) | JoVE

Door patiënten afgeleid heterogeen xenograft-model van pancreaskanker met behulp van zebravis larven als gastheer voor vergelijkende geneesmiddelenbeoordeling

Patient-derived tumor xenograft (PDX) and cell-derived tumor xenograft (CDX) are important techniques for preclinical assessment, medication guidance and ...

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model Video (Video) | JoVE

Een melanoom patiënt-afgeleide xenograft model

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines Video (Video) | JoVE

Oprichting van maagkanker patiënten afgeleide xenograft modellen en primaire cellijnen

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity Video (Video) | JoVE

Generatie van Orthotopic alvleesklier tumoren en ex vivo karakterisering van tumor-Infiltrerende T cel cytotoxiciteit

In vivo models of pancreatic cancer provide invaluable tools for studying disease dynamics, immune infiltration and new therapeutic strategies. The ...

Spatial Profiling of Protein and RNA Expression in Tissue: An Approach to Fine-Tune Virtual Microdissection

Spatial Profiling of Protein and RNA Expression in Tissue: An Approach to Fine-Tune Virtual Microdissection Video (Video) | JoVE

Ruimtelijke profilering van eiwit- en RNA-expressie in weefsel: een benadering om virtuele microdissectie te verfijnen

Multiplexing enables the assessment of several markers on the same tissue while providing spatial context. Spatial Omics technologies allow both protein ...