Name: identifying mutations by high resolution melting in a tilling population of rice
Uploaded: 2019-09-02T13:00:00
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Ces travaux ont été soutenus par le National Key Research and Development Program of China (No. 2016YFD0102103) et la National Natural Science Foundation of China (No.31701394).

1. Préparations
<ol><li>
Développement de populations mutagénaires
	<ol>
<li>Traiter environ 20 000 graines de riz séchées (avec une teneur en humidité d'environ 14 %) d'une ligne de riz japonica (p. ex. DS552) avec 137rayons gamma Cà à 100 Gy (1 Gy/min) dans une installation d'irradiation (p. ex. cellule gamma). REMARQUE: Les graines utilisées pour le traitement devraient avoir une viabilité élevée (p. ex., avec un taux de germination à 85 %). La dose d'irra...

<ol>
	<li>McCallum, C. M., Comai, L., Green, E. A., Henikoff, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+induced+local+lesions+IN+genomes+(TILLING)+for+plant+functional+genomics.">Targeting induced local lesions IN genomes (TILLING) for plant functional genomics.</a> Plant Physiology. 123, 439-442 (2000).</li><li>Taheri, S., Abdullah, T. L., Jain, S. M., Sahebi, M., Azizi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TILLING,+high-resolution+melting+(HRM),+and+next-generation+sequencing+(NGS)+techniques+in+plant+mutation+breeding.">TILLING, high-resolution melting (HRM), and next-generation sequencing (NGS) techniques in plant mutation breeding.</a> Molecular Breeding. 37 (3), 40 (2017).</li><li>Till, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+discovery+of+induced+point+mutations+with+high+throughput+TILLING.">Large-scale discovery of induced point mutations with high throughput TILLING.</a> Genome Research. 13 (3), 524-530 (2003).</li><li>Comai, L., Henikoff, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TILLING:+practical+single+nucleotide+mutation+discovery.">TILLING: practical single nucleotide mutation discovery.</a> The Plant Journal. 45 (4), 684-694 (2006).</li><li>Comai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+discovery+of+DNA+polymorphisms+in+natural+populations+by+Ecotilling.">Efficient discovery of DNA polymorphisms in natural populations by Ecotilling.</a> The Plant Journal. 37, 778-786 (2004).</li><li>Rogers, C., Wen, J., Chen, R., Oldroyd, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletion-based+reverse+genetics+in+Medicagotruncatula.">Deletion-based reverse genetics in Medicagotruncatula.</a> Plant Physiology. 151 (3), 1077 (2009).</li><li>Bush, S. M., Krysan, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ITILLING:+a+personalized+approach+to+the+identification+of+induced+mutations+in+arabidopsis.">ITILLING: a personalized approach to the identification of induced mutations in arabidopsis.</a> Physiology. 154 (1), 25-35 (2010).</li><li>Colasuonno, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DHPLC+technology+for+high-throughput+detection+of+mutations+in+a+durum+wheat+TILLING+population.">DHPLC technology for high-throughput detection of mutations in a durum wheat TILLING population.</a> BMC Genetics. 17 (1), 43 (2016).</li><li>Tsai, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery+of+rare+mutations+in+populations:+TILLING+by+sequencing.">Discovery of rare mutations in populations: TILLING by sequencing.</a> Plant Physiology. 156, 1257-1268 (2011).</li><li>Kumar, A. P. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TILLING+by+Sequencing+(TbyS)+for+targeted+genome+mutagenesis+in+crops.">TILLING by Sequencing (TbyS) for targeted genome mutagenesis in crops.</a> Molecular Breeding. 37, 14 (2017).</li><li>Dong, C., Vincent, K., Sharp, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+mutation+detection+of+three+homoeologous+genes+in+wheat+by+High+Resolution+Melting+analysis+and+Mutation+Surveyor.">Simultaneous mutation detection of three homoeologous genes in wheat by High Resolution Melting analysis and Mutation Surveyor.</a> BMC Plant Biology. 9, 143 (2009).</li><li>Gady, A. L., Herman, F. W., Wal, M. H. V. D., Loo, E. N. V., Visser, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implementation+of+two+high+through-put+techniques+in+a+novel+application:+detecting+point+mutations+in+large+EMS+mutated+plant+populations.">Implementation of two high through-put techniques in a novel application: detecting point mutations in large EMS mutated plant populations.</a> Plant Methods. 5 (41), 6974-6977 (2009).</li><li>Ririe, K. M., Rasmussen, R. P., Wittwer, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Product+differentiation+by+analysis+of+DNA+melting+curves+during+the+polymerase+chain+reaction.">Product differentiation by analysis of DNA melting curves during the polymerase chain reaction.</a> Analytical Biochemistry. 245, 154-160 (1997).</li><li>Lochlainn, S. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+resolution+melt+(HRM)+analysis+is+an+efficient+tool+to+genotype+EMS+mutants+in+complex+crop+genomes.">High resolution melt (HRM) analysis is an efficient tool to genotype EMS mutants in complex crop genomes.</a> Plant Methods. 7, 43 (2011).</li><li>Yoshida, S., Forno, D. A., Cock, J. H., Gomez, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+manual+for+physiological+rice.">Laboratory manual for physiological rice.</a> The International Rice Research Institute. , (1976).</li><li>Peng, S. T., Zhuang, J. Y., Yan, Q. C., Zheng, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SSR+markers+selection+and+purity+detection+of+major+hybrid+rice+combinations+and+their+parents+in+China.">SSR markers selection and purity detection of major hybrid rice combinations and their parents in China.</a> Chinese Journal of Rice Science. 17, 1-5 (2003).</li><li>Allen, G. C., Flores-Vergara, M. A., Krasynanski, S., Kumar, S., Thompson, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+protocol+for+rapid+DNA+isolation+from+plant+tissues+using+cetyltrimethymmonium+bromide.">A modified protocol for rapid DNA isolation from plant tissues using cetyltrimethymmonium bromide.</a> Nature. 1 (5), 2320-2325 (2006).</li><li>Fu, H. W., Li, Y. F., Shu, Q. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+revisit+of+mutation+induction+by+gamma+rays+in+rice+(Oryza+sativa+L.):+implications+of+microsatellite+markers+for+quality+control.">A revisit of mutation induction by gamma rays in rice (Oryza sativa L.): implications of microsatellite markers for quality control.</a> Molecular Breeding. 22 (2), 281-288 (2008).</li><li>Li, S., Liu, S. M., Fu, H. W., Huang, J. Z., Shu, Q. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+melting-based+tilling+of+&#947;+ray-induced+mutations+in+rice.">High-resolution melting-based tilling of &#947; ray-induced mutations in rice.</a> Journal of Zhejiang University-Science B. 19 (8), 620-629 (2018).</li><li>Acanda, Y., &#211;scar, M., Prado, M. J., Gonz&#225;lez, M. V., Rey, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EMS+mutagenesis+and+qPCR-HRM+prescreening+for+point+mutations+in+an+embryogenic+cell+suspension+of+grapevine.">EMS mutagenesis and qPCR-HRM prescreening for point mutations in an embryogenic cell suspension of grapevine.</a> Cell Reports. 33 (3), 471-481 (2014).</li><li>Si, H. J., Wang, Q., Liu, Y. Y., Huang, J. Z., Shu, Q. Y., Tan, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+application+of+an+HRM-based,+safe+and+high-throughput+genotyping+system+for+photoperiod+sensitive+genic+male+sterility+gene+in+rice.">Development and application of an HRM-based, safe and high-throughput genotyping system for photoperiod sensitive genic male sterility gene in rice.</a> Journal of Nuclear Agricultural Sciences. 31 (11), 2081-2086 (2017).</li><li>Li, S., Zheng, Y. C., Cui, H. R., Fu, H. W., Shu, Q. Y., Huang, J. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Frequency+and+type+of+inheritable+mutations+induced+by+&#947;+rays+in+rice+as+revealed+by+whole+genome+sequencing.">Frequency and type of inheritable mutations induced by &#947; rays in rice as revealed by whole genome sequencing.</a> Journal of Zhejiang University-Science B. 17 (12), 905 (2016).</li></ol>

TILLING s'est avéré être un puissant outil génétique inversé pour identifier les mutations induites pour l'analyse fonctionnelle des gènes et la sélection des cultures. Pour certains traits qui ne sont pas faciles à observer ou à déterminer, TILLING avec la détection de mutation à haut débit à base de PCR peut être une méthode utile pour obtenir des mutants pour différents gènes. La méthode HRM-TILLING a été utilisée dans les populations mutagérisées de SME de la tomate12,...

Les mutants sont d'importantes ressources génétiques pour la recherche en génomique fonctionnelle des plantes et l'élevage de nouvelles variétés. Une approche génétique avancée (c.-à-d. de la sélection mutante au clonage génétique ou au développement de variétés) était la principale et la seule méthode pour l'utilisation des mutations induites il y a environ 20 ans. Le développement d'une nouvelle méthode de génétique inversée, TILLING (Targeting Induced Local Lesions In Genomes) par McCallum et coll.1 a ouvert un nouveau paradigme et il a depuis été appliqué dans un grand nombre d'espèces animales et végétales2. TILLING est particulièrement utile pour les caractères de reproduction qui sont techniquement difficiles ou coûteux à déterminer (p. ex., résistance aux maladies, teneur en minéraux).
TILLING a été initialement développé pour les mutations de points de dépistage induites par les mutagènes chimiques (p. ex., SME1,3). Il comprend les étapes suivantes : l'établissement d'une population DE TILLING(s); Préparation de l'ADN et mise en commun de plantes individuelles; Amplification pcR du fragment d'ADN cible; formation d'hétéroduplexes par dénaturation et annealing des amplicons de PCR et du clivage par la nucléase de CEL I ; et l'identification des individus mutants et de leurs lésions moléculaires spécifiques3,4. Cependant, cette méthode est encore relativement complexe, longue et faible débit. Pour le rendre plus efficace et avec un débit plus élevé, de nombreuses méthodes DE TILLING modifiées ont été développées, telles que la suppression DETILLING (De-TILLING) (Tableau 1)1,3,5,6, 7,8,9,10,11,12.
L'analyse de la courbe de la MRH, qui est basée sur les changements de fluorescence lors de la fusion du duplex d'ADN, est une méthode simple, rentable et à haut débit pour le dépistage des mutations et le génotypage13. La MRH a déjà été largement utilisée dans la recherche sur les plantes, y compris la MRH TILLING (HRM-TILLING) pour le dépistage des mutations SBS induites par la mutagénèse du SME14. Ici, nous avons présenté des protocoles détaillés HRM-TILLING pour le criblage des mutations (Indel et SBS) induites par les rayons gamma () dans le riz.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>2&#215; Taq plus PCR Master Mix</td>
			<td>Tiangen, China</td>
			<td>KT201</td>
			<td>PCR buffer, dNTP and polymerase for PCR amplification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well plate</td>
			<td>Bio-rad, America</td>
			<td>MSP-9651</td>
			<td>Specific plate for PCR in HRM analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mastercycler nexus</td>
			<td>Eppendorf, German</td>
			<td>6333000073</td>
			<td>PCR amplification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LightScanner</td>
			<td>Idaho Technology, USA</td>
			<td>LCSN-ASY-0011</td>
			<td>For fluorescence sampling and processing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CALL-IT 2.0</td>
			<td>Idaho Technology, USA</td>
			<td></td>
			<td>For analysis of the fluorescence change</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EvaGreen</td>
			<td>Biotium, USA</td>
			<td>31000-T</td>
			<td>Fluorescence dye of HRM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop 2000</td>
			<td>Thermo Scientific, USA</td>
			<td>ND2000</td>
			<td>For DNA quantification</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identifying mutations by high resolution melting in a tilling population of rice

Les lésions locales induites par la cible dans les génomes (TILLING) est une stratégie de génétique inversée pour le criblage à haut débit des mutations induites. Cependant, le système TILLING a moins d'applicabilité pour l'insertion / suppression (Indel) détection et traditionnelle TILLING a besoin d'étapes plus complexes, comme CEL I la digestion nucléase et l'électrophorèse gel. Afin d'améliorer l'efficacité du débit et de la sélection, et de rendre possible le dépistage des indels et des sous-stits de base unique (SBS), un nouveau système TILLING à haute résolution est mis au point. Ici, nous présentons un protocole détaillé HRM-TILLING et montrons son application dans le criblage de mutation. Cette méthode permet d'analyser les mutations des amplicons PCR en mesurant la dénaturation de l'ADN à double brin à des températures élevées. L'analyse de la MRH est effectuée directement après la PRC sans traitement supplémentaire. De plus, une méthode d'extraction d'ADN simple, sûre et rapide (SSF) est intégrée à HRM-TILLING pour identifier les Indels et les SBS. Sa simplicité, sa robustesse et son débit élevé le rendent potentiellement utile pour la numérisation des mutations dans le riz et d'autres cultures.

Numérisation et analyse de la MRH
Au total, 1 140 échantillons d'ADN mis en commun provenant de 4 560 semis M2 ont été produits et soumis à l'amplification du PCR. Deux fragments de la taille de 195 bp et 259 bp ont été amplifiés pour OsLCT1 et SPDT, respectivement (tableau 2). La plupart des échantillons présentaient des courbes de fusion qui n'étaient pas significativement différentes de la WT (F 'lt; 0,05). Les courb...

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Identifying Mutations by High Resolution Melting in a TILLING Population of Rice

Dans cet article, nous présentons le protocole qui est décrit comme l'analyse de fusion à haute résolution (HRM)-basée Sur les lésions locales induites par la cible dans les génomes (TILLING). Cette méthode utilise des changements de fluorescence lors de la fusion du duplex d'ADN et convient au dépistage à haut débit de l'insertion/suppression (Indel) et de la sous-stition de base unique (SBS).

Identifier les mutations par fusion à haute résolution dans une population de riz de TILLING

Target Induced Local Lesions In Genomes (TILLING) is a strategy of reverse genetics for the high-throughput screening of induced mutations. However, the ...

Il serait très utile pour les caractères reproducteurs qui sont techniquement difficiles ou coûteux à déterminer, tels que la résistance aux maladies, la teneur en minéraux. C’est une technique assez simple, rentable et à haut débit. Pour commencer, placez quatre disques de feuilles dans chaque puits d’une plaque PCR de 96 puits.Ajouter 50 millilitres de solution tampon A dans chaque puits. Congeler la plaque dans un congélateur de moins 80 degrés Celsius pendant 10 minutes. Ensuite, décongelez la plaque à température ambiante.Incuber à 95 degrés Celsius pendant 10 minutes. Ajouter 50 microlitres de tampon B à chaque puits, et bien mélanger par vortex. Centrifuger la plaque pendant une minute à 1500 fois g.Recueillir le supernatant comme ADN pour PCR. Tout d’abord, utilisez le supernatant d’ADN à partir d’un modèle ainsi que pcr pour optimiser la température d’annealing. Ajoutez des réaccents et un microlitre de supernatant d’ADN dans chaque puits PCR.Placez les tubes PCR dans un bloc thermique capable de gradient et ajustez le programme de chauffage selon le manuscrit pour déterminer la température d’annealage optimale pour chaque fragment cible. Effectuer l’électrophoresis pour le produit PCR sur 1% gels agarose pour examiner les amplicons. Déterminez la température d’annealage optimale qui permet l’amplification spécifique du fragment cible.Pour effectuer l’analyse de la MRH, combinez des reagents, y compris un microlitre de 10 fois le colorant fluorescence et un microlitre du supernatant d’ADN dans chaque puits de plaques compatibles avec la MRH. Dans chaque assiette, inclure un échantillon parent de type sauvage et un contrôle négatif sans ADN. Ajouter une goutte d’huile minérale à chaque puits pour éviter l’évaporation.Ensuite, sceller la plaque avec un film adhésif, et centrifugeuse à 1000 fois g pendant une minute. Exécutez le PCR à l’aide de la température d’annealage optimisée. Maintenant, retirez le film adhésif de la plaque, et insérez la plaque dans une machine de MRH.Dans le logiciel, sélectionnez New Run à partir du menu du fichier, ou appuyez sur le bouton Exécuter en haut de l’écran. Spécifiez les températures de départ et de fin de la fonte de 55 à 95 degrés Celsius. Sélectionnez des échantillons pour l’analyse de fusion à haute résolution et excluez les échantillons similaires au contrôle négatif.Normaliser les courbes de fusion pour avoir le même début et la même fin de fluorescence. Confirmez visuellement que les curseurs à température maximale minimale et inférieure inférieure se trouvent dans une région des courbes. Gardez le delta F, différence de fluorescence, niveau au réglage par défaut de 05.À partir de la liste de sélection des normes, sélectionnez la variante commune par rapport à la variante et choisissez la sensibilité normale. Sélectionnez H12 pour utiliser le type sauvage comme commande. Les échantillons d’une valeur delta F supérieure à 05 sont considérés comme contenant des plantes mutantes.Ensuite, à l’aide d’une méthode CTAB, extraire l’ADN de chacune des quatre plantes de la piscine mutante avec la courbe de fusion significativement différente du type sauvage. Après quantification à l’aide d’un spectrophotomètre, ajuster l’ADN avec le NanoDrop 2000 à une concentration finale d’environ 25 nanogrammes par microlitre. Ajoutez 0,4 microlitres d’amorces PCR dans l’échantillon d’ADN dans les tubes PCR, placez-les dans un cycleur thermique et ajustez le programme pour amplifier le fragment cible.Ensuite, envoyez les produits PCR à une entreprise pour séquençage. Après séquençage sanger, comparer la lésion moléculaire en comparant les séquences entre la plante M2 et le type sauvage. Dans cette étude, la numérisation et l’analyse des semis M2 pour les mutations dans les gènes OsLCT1 ou SPDT ont montré que la plupart des échantillons présentaient des courbes de fusion pas significativement différentes du type sauvage avec delta F inférieur à 05.Les mutants ont montré des courbes de RMH significativement différentes avec des delta F supérieurs à 05 à des températures de 90 à 92 degrés Celsius et 81,5 à 83,5 degrés Celsius, respectivement. Le type de mutation et la position sur les gènes de 4560 semis M2 ont été confirmés par les chromatogrammes de séquençage. Un emplacement hétérozygote avec une mutation de G à A à 4,304 paires de base d’OsLCT1 a été identifié.Un nucléotide unique Une insertion est apparue aux 4 240 paires de base d’OsLCT1, et une suppression trinucléotide TTC a été observée à la position de 5 948 à 5 950 paires de base de SPDT. J’optimise le PCR avant l’analyse HRM. Le colorant dans le gel est un peu nocif.N’oubliez pas de mettre des gants lors de l’exécution du gel.

Research

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Genetics

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Mesure parallèle d&#39;expression Circadian Clock génique et la sécrétion d&#39;hormones dans des cultures de cellules humaines primaires

Circadian clocks are functional in all light-sensitive organisms, allowing for an adaptation to the external world by anticipating daily environmental ...

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High-resolution Melting PCR for Complement Receptor 1 Length Polymorphism Genotyping: An Innovative Tool for Alzheimer's Disease Gene Susceptibility Assessment

PCR de fusion haute résolution pour le complément du récepteur 1 Polymorphisme de longueur Le génotypage: un outil novateur pour l&#39;évaluation de la sensibilité des gènes de la maladie d&#39;Alzheimer

Complement receptor 1 (CR1), a transmembrane glycoprotein that plays a key role in the innate immune system, is expressed on many cell types, but ...

High Resolution Fluorescent In Situ Hybridization in Drosophila Embryos and Tissues Using Tyramide Signal Amplification

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Hybridation fluorescente In Situ haute résolution dans des embryons de drosophile et tissus à l’aide d’Amplification de Signal Tyramide

In our efforts to determine the patterns of expression and subcellular localization of Drosophila RNAs on a genome-wide basis, and in a variety of ...

G2-seq: A High Throughput Sequencing-based Technique for Identifying Late Replicating Regions of the Genome

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Numerous techniques have been developed to follow the progress of DNA replication through the S phase of the cell cycle. Most of these techniques have ...

High-throughput Identification of Synergistic Drug Combinations by the Overlap2 Method

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Identification de haut débit synergique des associations de médicaments par la méthode2 de chevauchement

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Promoter Capture Hi-C: High-resolution, Genome-wide Profiling of Promoter Interactions

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