Name: cortisol extraction from sturgeon fin and jawbone matrices
Uploaded: 2019-09-10T13:00:00
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这项工作是在农业科学和技术发展合作研究方案的支持下进行的（项目标题：牲畜生产力变化与气候变化分析，项目No.PJ012771），农村发展管理局，大韩民国。此外，这项研究也得到了赠款的支持（第1号。PJ01344604）来自韩国首尔国立动物科学研究所动物营养与生理学团队。作者感激地感谢波斯手势首席执行官穆罕默德·哈桑·萨勒曼扎德和他的团队，他们提供了在这项研究中所检查的三种鱼种的鱼。

以下实验程序和方法经大韩民国春川市康原国立大学动物福利与伦理管理局批准。
1. 鳍收集
<ol><li>用网轻轻捕捉鱼苗，以尽量减少伤害和压力。</li>
	<li>在安乐死前，用清水仔细冲洗鱼，然后用吸水毛巾擦拭身体表面。</li>
	<li>用塑料锤打鱼头，使鱼惊呆了或失去知觉。用刀取下头部。</li>
	<li>测量体重 （g） 和长度 （cm）。</li>
	<li>安乐死后，使用消毒手术剪刀尽可能接近?...

<ol>
	<li>Meyer, J. S., Novak, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+cortisol:+a+novel+biomarker+of+hypothalamic-pituitary-+adrenocortical+activity.">Hair cortisol: a novel biomarker of hypothalamic-pituitary- adrenocortical activity.</a> Endocrinology. 153, 4120-4127 (2012).</li><li>Ghassemi Nejad, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cortisol+study:+facial+hair+and+nails.">A cortisol study: facial hair and nails.</a> Journal of Steroids Hormonal Sciences. 7, 1-5 (2016).</li><li>Meyer, J. S., Novak, M. A., Hamel, A., Rosenberg, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+and+analysis+of+cortisol+from+human+and+monkey+hair.">Extraction and analysis of cortisol from human and monkey hair.</a> Journal of Visualized Experiments. (83), e50882 (2014).</li><li>Davenport, M. D., Tiefenbacher, S., Lutz, C. K., Novak, M. A., Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+endogenous+cortisol+concentrations+in+the+hair+of+rhesus+macaques.">Analysis of endogenous cortisol concentrations in the hair of rhesus macaques.</a> General and Comparative Endocrinology. 147, 255-261 (2006).</li><li>Ghassemi Nejad, J., Ataallahi, M., Park, H. 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C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cortisol in skin mucus and scales as a measure of fish stress and habitat quality. Ph.D. dissertation. , (2018).</li><li>Carbajal, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortisol+detection+in+fish+scales+by+enzyme+immunoassay:+biochemical+and+methodological+validation.">Cortisol detection in fish scales by enzyme immunoassay: biochemical and methodological validation.</a> Journal of Applied Ichthyology. 34, 1-4 (2018).</li><li>Bertotto, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+matrices+for+cortisol+measurement+in+fish.">Alternative matrices for cortisol measurement in fish.</a> Aquaculture Research. 41, 1261-1267 (2010).</li><li>Ghassemi Nejad, J., Jeong, C., Shahsavarani, H., Sung, I. K., Lee, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embedded+dental+cortisol+content:+a+pilot+study.">Embedded dental cortisol content: a pilot study.</a> Endocrinology &amp; Metabolic Syndrome. 5, 240 (2016).</li><li>Pankhurst, N. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+endocrinology+of+stress+in+fish:+an+environmental+perspective.">The endocrinology of stress in fish: an environmental perspective.</a> General and Comparative Endocrinology. 170, 265-275 (2011).</li><li>Ghassemi Nejad, J., Kim, W. B., Lee, B. H., Sung, K. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coat+and+hair+color:+hair+cortisol+and+serotonin+levels+in+lactating+Holstein+cows+under+heat+stress+conditions.">Coat and hair color: hair cortisol and serotonin levels in lactating Holstein cows under heat stress conditions.</a> Animal Science Journal. 88, 190-194 (2017).</li><li>Baker, M. R., Gobush, K. S., Vynne, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+factors+influencing+stress+hormones+in+fish+and+wildlife.">Review of factors influencing stress hormones in fish and wildlife.</a> Journal of Nature Conservation. 21, 309-318 (2013).</li><li>Aerts, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scales+tell+a+story+on+the+stress+history+of+fish.">Scales tell a story on the stress history of fish.</a> PLoS One. 10, e0123411 (2015).</li><li>Heimb&#252;rge, S., Kanitz, E., Otten, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+hair+cortisol+for+the+assessment+of+stress+in+animals.">The use of hair cortisol for the assessment of stress in animals.</a> General and Comparative Endocrinology. , 10-17 (2019).</li><li>Ghassemi Nejad, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparing+hair+cortisol+concentrations+from+various+body+sites+and+serum+cortisol+in+Holstein+lactating+cows+and+heifers+during+thermal+comfort+zone.">Comparing hair cortisol concentrations from various body sites and serum cortisol in Holstein lactating cows and heifers during thermal comfort zone.</a> Journal of Veterinary Behavior: Clinical and Application Research. 30, 92-95 (2019).</li><li>Bussy, U., Wassink, L., Scribner, K. T., Li, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+cortisol+in+lake+sturgeon+(Acipenser+fulvescens)+eggs+by+liquid+chromatography+tandem+mass+spectrometry.">Determination of cortisol in lake sturgeon (Acipenser fulvescens) eggs by liquid chromatography tandem mass spectrometry.</a> Journal of Chromatography B. 1040, 162-168 (2017).</li><li>SAS. 1999. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> SAS. User's Guide (Version 8.01 Edition). , (1999).</li><li>Barton, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+in+fishes:+a+diversity+of+responses+with+particular+reference+to+changes+in+circulating+corticosteroids.">Stress in fishes: a diversity of responses with particular reference to changes in circulating corticosteroids.</a> Integrative and Comparative Biology. 42, 517-525 (2002).</li><li>Ghassemi Nejad, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+hair+and+blood+cortisol+in+sheep+and+dairy+cattle+using+RIA+and+ELISA+assay:+a+comparison.">Measuring hair and blood cortisol in sheep and dairy cattle using RIA and ELISA assay: a comparison.</a> Biological Rhythm Research. Accepted. , (2019).</li></ol>

鱼儿有时被称为"活化石"，因为它在过去几千年里很少表现出适应。鱼子酱属含有27种鱼子酱;然而，三个物种（贝卢加、贝里和塞夫鲁加）生产了全球大部分鱼子酱。鱼种容易受到过度捕捞和自然栖息地的干扰，因此比其他任何物种群体都更加濒危。鱼是现存最古老的脊椎动物，已有1.5亿年的历史。物种成熟，生长缓慢;一些（例如，H.huso）可以活100年，体重超过2000公斤。鱼是...

皮质醇是动物压力的可靠指标。皮质醇提取为研究人员提供了一个有效的框架，以监测压力水平和压力源的一般模式。例如，以前的研究已经进行了方法验证头发皮质醇测量使用各种方法在人类1，2，猴子3，4，牛5，绵羊6，和金鱼7，8。在鱼类物种中，基质（如鳞片、皮肤粘液、粪便和血液）中的皮质醇测量显示，可以提供有关鱼类健康的信息。当血液取样有问题或缺乏鳞片时，需要替代皮质醇提取基质。在鱼类中，替代基质可以包括下颌骨，一种类似于人类牙齿10的硬组织。
开发新的基质和经过验证的技术来确定鱼子酱的应力水平是特别感兴趣的鱼子酱行业，在那里鱼子酱可能经历长期暴露于环境压力因素11。在2岁之前不能确定鱼群的性别，而且鱼没有鳞片。由于皮质醇在生长阶段2、7、12期间逐渐积累在固体基质中，因此来自硬质质质质质基（如鳍和颌骨）的长期皮质醇积累数据可以提供对应力的洞察处于不同生长阶段的水平。相比之下，血液皮质醇水平提供死亡时压力水平的快照，不能准确表示长期饲养条件下的压力13，14。随着鱼子酱市场竞争的日益激烈，在长期饲养（8-12年或更长时间）期间改善鱼苗品种生产更健康鸡蛋的压力条件的新方法日益成为一个日益重要的研究领域。由于鱼的昂贵成本，收获的样品非常昂贵（根据物种和生长阶段，每条成熟鱼8，000-15，000美元），这是研究项目的一个限制因素。然而，从鱼翅和颌骨中提取皮质醇的适当技术可以应用于养鱼系统和野生鱼类，以提高食用和食用的鱼卵的质量和收获保护。
除了提供可靠的结果6之外，选择适当的皮质醇提取技术对于确保样品制备过程中基质中存在的其他化合物不会混淆输出至关重要，这可能导致结果不一致。同样重要的是，确定鳍和颌骨皮质醇水平是否受周围水中的激素水平影响。Heimbürge等人15日提出，许多因素可能影响皮质醇水平，包括年龄、性别、怀孕、季节、颜色12和提取皮质醇的人体区域。然而，关于洗涤溶剂对鱼体基质8中皮质醇提取的影响，除了鱼卵17外，对鱼类的这些影响没有一点。
虽然分析来自鱼鳍和下颌骨的基线皮质醇水平需要对鱼进行安乐死，但这种方法并不涉及活鱼的血液取样所需的侵入性技术。鱼翅和颌骨样本很容易收集，并且可以从这些组织快速提取。同样，激素提取和分析是直接的，需要很少的专用设备。
在这项研究中，我们提出了一种新的、易于应用的技术，用于从鱼翅和颌骨中提取、洗涤和测定皮质醇，目的是确定从这些基质中测量的皮质醇水平是否可以可靠地用作应力指标。该技术的优点包括简单无创的8方法，更少的数据变异，和可靠的输出1，6，8，17;该技术适用于没有鳞片的鱼种，如鱼鳞。该技术需要屠宰鱼，选择适当的洗涤溶剂2，4，适当研磨样品3，5，专业酶链接免疫吸附测定（ELISA）应用5，7，并广泛了解皮质醇源纳入固体基质6。
我们应用了两种不同的洗涤溶剂（超纯水和异丙醇），从三种鱼翅中获得基底皮质醇水平：贝卢加（胡索胡索）、西伯利亚（阿西彭塞·贝尔里）和塞夫鲁加（A.斯特拉图斯）），在每个物种的标准环境条件下。H. huso的骨骼也被用来评估在鱼的应力。这是首次测量鱼尾骨皮质醇水平的研究。这项研究的结果将为在性别测定前的早期生长阶段（+1年）的鱼种提供比较皮质醇数据。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:654px;" width="653">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Disposal latex surgical gloves</td>
			<td style="width:222px;">Ansell</td>
			<td style="width:137px;">63754090</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Platform scale-electronic weighing 100kg</td>
			<td>Baskoolnikoo</td>
			<td>101 EM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Serological pipette to deliver up to 24 mL</td>
			<td style="width:222px;">Becton Dickinson Falcon</td>
			<td style="width:137px;">35-7550</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:295px;">Micro plate reader with 450 nm and 490 to 492 nm reference filters</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>8041000</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Reagent reservoirs</td>
			<td>BrandTech</td>
			<td>703459</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Zipper storage plastic bag&#160;</td>
			<td>Cleanwrap</td>
			<td>30cm x100m</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isopropyl alcohol</td>
			<td style="width:222px;">Daejung chemicals &#38; Metals&#160;</td>
			<td style="width:137px;">5035-4400</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Methyl alcohol</td>
			<td style="width:222px;">Daejung chemicals &#38; Metals&#160;</td>
			<td style="width:137px;">5558-4100</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tube rotator- MX-RL-Pro</td>
			<td>DLAB Scientific&#160;</td>
			<td>824-222217777</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Precision pipette to deliver 1.5 and 10 mL</td>
			<td>Eppendorf Research Plus</td>
			<td>M21518D</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160; Precision pipette to deliver 15 and 25 &#956;L</td>
			<td>Eppendorf Research Plus</td>
			<td>R25623C</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:20px;">Weighing paper (107 x 210 mm)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>09-898-12B</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Bead beater, 50/60 Hz 2A</td>
			<td style="width:222px;">GeneReach Biotechnology Corp</td>
			<td style="width:137px;">tp0088</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:295px;">Plate rotator with orbit capable of 500 rpm</td>
			<td style="width:222px;">Hangzhou Miu Instrument&#160;</td>
			<td style="width:137px;">MU-E30-1044</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:295px;">Disposable polypropylene tubes to hold at least 24 mL</td>
			<td style="width:222px;">Hyundai Micro&#160;</td>
			<td style="width:137px;">H20050</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fume hood</td>
			<td>Kwang Dong Industrial</td>
			<td>KD 901-22128175</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro-centrifuge capable of 1500 x g</td>
			<td style="width:222px;">Labo Gene</td>
			<td style="width:137px;">&#160;9.900.900.729</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mini vortex mixer</td>
			<td>LMS</td>
			<td>VTX-3000L&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Lotte aluminum foil roll&#160;</td>
			<td>Lotte Aluminum</td>
			<td>B0722X5FK5</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Digital scale</td>
			<td style="width:222px;">Mettler Toledo&#160;</td>
			<td style="width:137px;">&#160;ME204</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ultrapure water</td>
			<td style="width:222px;">MDM</td>
			<td style="width:137px;">MDM-0110</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pipette tips</td>
			<td>Neptune Scientific</td>
			<td>REF 2100.N</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Large fish net</td>
			<td>Pond H2O</td>
			<td>Hoz135&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Salivary cortisol kit</td>
			<td>Salimetrics</td>
			<td>1-3002-4</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:20px;">Bone cutting forceps</td>
			<td>Sankyo</td>
			<td>26-188A</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:295px;">Precision multichannel pipette to deliver 50 &#956;L and 200 &#956;L</td>
			<td>VITLAB</td>
			<td>18A68756</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Towel</td>
			<td style="width:222px;">Yuhan Kimberly</td>
			<td style="width:137px;">1707921546</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:20px;">Tissue paper (107 &#215; 210)</td>
			<td style="width:222px;">Yuhan Kimberly</td>
			<td style="width:137px;">41117</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cortisol extraction from sturgeon fin and jawbone matrices

本研究的目的是开发一种利用两种洗涤溶剂（水和异丙醇）从鱼翅中提取皮质醇的技术，并量化三种主要鱼种在鳍皮质醇水平上的任何差异。鱼翅是从19只牺牲的鱼中收获的，包括7只贝卢加（胡索胡索）、7只西伯利亚（阿西彭塞·贝尔里）和5只塞夫鲁加（A.斯特拉图斯）。在伊朗农场饲养了2年（2017-2018年），在韩国进行了皮质醇提取分析（2019年1月至2月）。五个H.Huso的爪骨也被用于皮质醇提取。在SAS环境中使用一般线性模型（GLM）过程对数据进行了分析。变异的测定内系数和相互变化系数分别为14.15和7.70。简而言之，皮质醇萃取技术涉及用3mL溶剂（超纯水和异丙醇）清洗样品（300~10mg），在80rpm下旋转2.5分钟，在室温（22-28°C）下对洗涤样品进行7天的空气干燥，进一步干燥样品在50 Hz下使用珠打手32分钟，将其研磨成粉末，将1.5mL甲醇涂在干粉（75~5mg）上，在室温下缓慢旋转（40rpm），持续搅拌18小时。提取后，对样品进行离心（9，500 x g，10分钟），将1mL上清液转移到新的微离心管（1.5 mL），在38°C孵育以蒸发甲醇，并通过酶连结免疫吸油测定（ELISA）进行分析.在鱼翅皮质醇水平方面，在洗涤溶剂之间，在鳍和下颌骨皮质醇水平方面没有观察到差异。这项研究的结果表明，鱼尾骨基质是固体基质的一个有前途的替代应力指标。

在这项研究中，使用三种鱼种开发并确认了鱼翅皮质醇提取技术。比较了使用超纯水和异丙醇作为洗涤溶剂获得的皮质醇水平（图2）。检查了来自H.胡索颌骨的皮质醇，以确定下颌骨是否可被用作鳍的备用基质。洗涤溶剂、鱼种及其相互作用的影响在表1中所示。使用异丙醇洗涤的鳍样本中的皮质醇水平往往高于用水洗的鳍样本（p...

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在这项研究中，我们提出了从鱼翅和下颌骨中提取皮质醇的规程。通过比较两种洗涤溶剂，然后进行ELISA测定，进一步检查了鳍和颌骨皮质醇水平。这项研究试验了颌骨皮质醇作为一种新的应激指标的可行性。

皮质醇从鱼翅和爪骨基质提取

The aims of this study were to develop a technique for the extraction of cortisol from sturgeon fins using two washing solvents (water and isopropanol) ...

我们的方法引入了一种新的替代应力指标，它可以成为未来许多研究的平台，用于测量新的非绘图和头发基质中的皮质醇。这种技术的优点是它的简单性，它的能力，用于评估压力水平，即使在屠宰的动物。使用这种技术建立高皮质醇水平与健康动物或人类之间的关系有助于诊断某些疾病。此方法还可用于研究数百年前的生物样本，如这些老化石，以评估样本寿命内的压力水平。对于皮质醇提取，在将样品放入单独的 15 毫升锥形管之前，在数字分析刻度上以 0.0001 的精度称出每个样品的 300 正负 10 毫克。在每个样品管中加入三毫升异丙醇，每分钟旋转管80圈2.5分钟，洗净皮质醇，消除任何潜在的外部污染。上次洗涤后，在室温下空气干燥样品七天，然后再次清洗样品三次，如每次洗涤使用新鲜的超纯水。称出 75 正负 5 毫克干鳍或下颚骨样品，并使用珠打手以 50 赫兹最后研磨样品 32 分钟。然后，将1.5毫升甲醇送到每管粉鳍或下颚骨上，并在室温下以每分钟40次旋转将样品放在管旋转器上，18小时。皮质醇提取后，通过离心沉淀样品组织。将顶部一毫升的黄色有机皮质醇从每个样品中转移到单独的1.5毫升微离心管中。将皮质醇样品在38摄氏度的烟罩中干燥过夜，以蒸发甲醇。第二天早上，在每个管和涡流中加入400微升PBS，并离心样品收集皮质醇。对于 ELISA 分析，将每个提取的标准皮质醇样品的 25 微升加载，并重复控制到 96 孔 ELISA 板的适当孔中。将25微升的测定稀释剂装入两个孔中，作为零和每个非特异性结合井。将15微升酶结合剂与24毫升的解液混合，并在每孔中加入200微升的联结剂。在旋转器上混合板五分钟，每分钟旋转 500 次。随后在室温下孵育一小时。在孵育结束时，用300微升的1x洗涤缓冲液每井洗盘四次。每次洗涤后，快速将盘子倒置在水槽上，丢弃缓冲液，将盘子印在一叠纸巾上。上次洗涤后，将 200 微升 TMB 基板溶液添加到每一个井中，然后以每分钟 500 次旋转的速度将板放在旋转器上 5 分钟。混合后，在室温下孵育板25分钟，防止光线。在孵化结束时，在每一个井中加入50微升的止动液。在旋转器上混合板内板内容物三分钟，每分钟旋转 500 次，或直到所有孔从绿色变成黄色。然后，读取样品的光学密度，并使用微板软件将每个样品中的皮质醇水平转换为每毫克的象形图。在这个具有代表性的分析中，用异丙醇洗涤的鳍样本中皮质醇水平往往高于用水洗涤的鱼翅样本，但在鱼种中未观察到鳍皮质醇水平的显著差异。洗涤溶剂和鱼种之间没有显著的相互作用。从H.Huso下颚骨检查皮质醇，以确定鱼爪骨是否可以用作鳍的替代基质，发现洗涤溶剂对H.Huso的鱼尾鱼测量的皮质醇水平没有显著影响。此外，数据表明，在三种被测试的鱼翅和H.Huso下颚骨中，鱼翅非常相似。使用珠子打手将样品研磨成细粉，并使用适当的商业 ELISA 检测试剂盒进行成功的皮质醇测量非常重要。此方法还可用于检测牙齿和其他硬基质中的皮质醇，因为皮质醇水平测量提供了有关环境如何影响动物生物学的重要信息。该方法可作为评估人类儿童乳牙和儿科内分泌学、心理生物学、行为学、考古学和法医研究皮质醇水平的新方法。

Research

JoVE Journal

Environment

Cortisol Extraction from Sturgeon Fin and Jawbone Matrices

Helminth Collection and Identification from Wildlife

Helminth Collection and Identification from Wildlife (Video) | JoVE 

Wild animals are commonly parasitized by a wide range of helminths. The four major types of helminths are &#34;roundworms&#34; (nematodes), ...

科研

环境科学

Sediment Core Sectioning and Extraction of Pore Waters under Anoxic Conditions

Sediment Core Sectioning and Extraction of Pore Waters under Anoxic Conditions (Video) | JoVE 

沉积物核心切片和孔隙水萃取缺氧条件下

We demonstrate a method for sectioning sediment cores and extracting pore waters while maintaining oxygen-free conditions. A simple, inexpensive system is ...

A Simple Method for Automated Solid Phase Extraction of Water Samples for Immunological Analysis of Small Pollutants

A Simple Method for Automated Solid Phase Extraction of Water Samples for Immunological Analysis of Small Pollutants (Video) | JoVE 

对水样的自动固相萃取小污染物的免疫学分析的简单方法

A new method for solid phase extraction (SPE) of environmental water samples is proposed. The developed prototype is cost-efficient and user friendly, and ...

Simultaneous DNA-RNA Extraction from Coastal Sediments and Quantification of 16S rRNA Genes and Transcripts by Real-time PCR

Simultaneous DNA-RNA Extraction from Coastal Sediments and Quantification of 16S rRNA Genes and Transcripts by Real-time PCR (Video) | JoVE 

从海岸沉积物和16S量化的rRNA基因和转录同时DNA-RNA提取采用Real-time PCR检测

Real Time Polymerase Chain Reaction also known as quantitative PCR (q-PCR) is a widely used tool in microbial ecology to quantify gene abundances of ...

Alternative Method of Removing Otoliths from Sturgeon

Alternative Method of Removing Otoliths from Sturgeon (Video) | JoVE 

从鲟鱼去除耳石替代方法

Extracting the otoliths (ear bones) from fish that have very thick skulls can be difficult and very time consuming. The common practice of making a ...

Extraction and Analysis of Microbial Phospholipid Fatty Acids in Soils

Extraction and Analysis of Microbial Phospholipid Fatty Acids in Soils (Video) | JoVE 

提取及土壤微生物磷脂脂肪酸分析

Phospholipid fatty acids (PLFAs) are key components of microbial cell membranes. The analysis of PLFAs extracted from soils can provide information about ...

Extraction of Structural Extracellular Polymeric Substances from Aerobic Granular Sludge

Extraction of Structural Extracellular Polymeric Substances from Aerobic Granular Sludge (Video) | JoVE 

从好氧颗粒污泥结构胞外聚合物的提取

To evaluate and develop methodologies for the extraction of gel-forming extracellular polymeric substances (EPS), EPS from aerobic granular sludge (AGS) ...

Use of a Filter Cartridge for Filtration of Water Samples and Extraction of Environmental DNA

Use of a Filter Cartridge for Filtration of Water Samples and Extraction of Environmental DNA (Video) | JoVE 

滤芯水过滤样品和环境DNA的提取使用

Recent studies demonstrated the use of environmental DNA (eDNA) from fishes to be appropriate as a non-invasive monitoring tool. Most of these studies ...

A Lipid Extraction and Analysis Method for Characterizing Soil Microbes in Experiments with Many Samples

A Lipid Extraction and Analysis Method for Characterizing Soil Microbes in Experiments with Many Samples (Video) | JoVE 

用于表征土壤微生物的脂质提取和分析方法在许多样品的实验中

Microbial communities are important drivers and regulators of ecosystem processes. To understand how management of ecosystems may affect microbial ...

Extraction of Organochlorine Pesticides from Plastic Pellets and Plastic Type Analysis

Extraction of Organochlorine Pesticides from Plastic Pellets and Plastic Type Analysis (Video) | JoVE 

从塑料颗粒中提取有机氯农药和塑料类型分析

Plastic resin pellets, categorized as microplastics (&#8804;5 mm in diameter), are small granules that can be unintentionally released to the environment ...