Name: cortisol extraction from sturgeon fin and jawbone matrices
Uploaded: 2019-09-10T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cortisol Extraction from Sturgeon Fin and Jawbone Matrices at JoVE.com

עבודה זו נערכה בתמיכת תוכנית המחקר השיתופי למדעי החקלאות & פיתוח טכנולוגיה (כותרת פרוייקט: שינוי פרודוקטיביות במשק החי עם שינויי האקלים, Project No. PJ012771), המינהל הכפרי לפיתוח, הרפובליקה של קוריאה. כמו כן, מחקר זה היה נתמך על ידי מענק (לא. PJ01344604) מצוות התזונה של בעלי חיים & פיזיולוגיה, המכון הלאומי למדעי החי, RDA, סאול, הרפובליקה של קוריאה. המחברים מכירים בהכרת התנועה הפרסית המנכ ל מוחמד חסן סלמנדה וצוותו, שסיפק דגים משלושת המינים המנוקניים שנבחנו במחקר זה.

ההליכים הניסיוניים והשיטות הבאות אושרו על ידי הרשות לרווחת בעלי חיים והאתיקה של האוניברסיטה הלאומית של קנגוון, צ'אנצ'צ, הרפובליקה של קוריאה.
1. אוסף פין
<ol><li>ללכוד את החדקן בעדינות באמצעות רשת כדי למזער את הפציעה והלחץ.</li>
	<li>שטפו בזהירות את הדג במים מתוקים ולאחר מכן נגבו את ?...

<ol>
	<li>Meyer, J. S., Novak, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+cortisol:+a+novel+biomarker+of+hypothalamic-pituitary-+adrenocortical+activity.">Hair cortisol: a novel biomarker of hypothalamic-pituitary- adrenocortical activity.</a> Endocrinology. 153, 4120-4127 (2012).</li><li>Ghassemi Nejad, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cortisol+study:+facial+hair+and+nails.">A cortisol study: facial hair and nails.</a> Journal of Steroids Hormonal Sciences. 7, 1-5 (2016).</li><li>Meyer, J. S., Novak, M. A., Hamel, A., Rosenberg, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+and+analysis+of+cortisol+from+human+and+monkey+hair.">Extraction and analysis of cortisol from human and monkey hair.</a> Journal of Visualized Experiments. (83), e50882 (2014).</li><li>Davenport, M. D., Tiefenbacher, S., Lutz, C. K., Novak, M. A., Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+endogenous+cortisol+concentrations+in+the+hair+of+rhesus+macaques.">Analysis of endogenous cortisol concentrations in the hair of rhesus macaques.</a> General and Comparative Endocrinology. 147, 255-261 (2006).</li><li>Ghassemi Nejad, J., Ataallahi, M., Park, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methodological+validation+of+measuring+Hanwoo+hair+cortisol+concentration+using+bead+beater+and+surgical+scissors.">Methodological validation of measuring Hanwoo hair cortisol concentration using bead beater and surgical scissors.</a> Journal of Animal Science and Technology. 61, 41-46 (2019).</li><li>Ghassemi Nejad, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wool+cortisol+is+a+better+indicator+of+stress+than+blood+cortisol+in+ewes+exposed+to+heat+stress+and+water+restriction.">Wool cortisol is a better indicator of stress than blood cortisol in ewes exposed to heat stress and water restriction.</a> Animal. 8, 128-132 (2014).</li><li>Brossa, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cortisol in skin mucus and scales as a measure of fish stress and habitat quality. Ph.D. dissertation. , (2018).</li><li>Carbajal, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortisol+detection+in+fish+scales+by+enzyme+immunoassay:+biochemical+and+methodological+validation.">Cortisol detection in fish scales by enzyme immunoassay: biochemical and methodological validation.</a> Journal of Applied Ichthyology. 34, 1-4 (2018).</li><li>Bertotto, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+matrices+for+cortisol+measurement+in+fish.">Alternative matrices for cortisol measurement in fish.</a> Aquaculture Research. 41, 1261-1267 (2010).</li><li>Ghassemi Nejad, J., Jeong, C., Shahsavarani, H., Sung, I. K., Lee, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embedded+dental+cortisol+content:+a+pilot+study.">Embedded dental cortisol content: a pilot study.</a> Endocrinology &amp; Metabolic Syndrome. 5, 240 (2016).</li><li>Pankhurst, N. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+endocrinology+of+stress+in+fish:+an+environmental+perspective.">The endocrinology of stress in fish: an environmental perspective.</a> General and Comparative Endocrinology. 170, 265-275 (2011).</li><li>Ghassemi Nejad, J., Kim, W. B., Lee, B. H., Sung, K. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coat+and+hair+color:+hair+cortisol+and+serotonin+levels+in+lactating+Holstein+cows+under+heat+stress+conditions.">Coat and hair color: hair cortisol and serotonin levels in lactating Holstein cows under heat stress conditions.</a> Animal Science Journal. 88, 190-194 (2017).</li><li>Baker, M. R., Gobush, K. S., Vynne, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+factors+influencing+stress+hormones+in+fish+and+wildlife.">Review of factors influencing stress hormones in fish and wildlife.</a> Journal of Nature Conservation. 21, 309-318 (2013).</li><li>Aerts, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scales+tell+a+story+on+the+stress+history+of+fish.">Scales tell a story on the stress history of fish.</a> PLoS One. 10, e0123411 (2015).</li><li>Heimb&#252;rge, S., Kanitz, E., Otten, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+hair+cortisol+for+the+assessment+of+stress+in+animals.">The use of hair cortisol for the assessment of stress in animals.</a> General and Comparative Endocrinology. , 10-17 (2019).</li><li>Ghassemi Nejad, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparing+hair+cortisol+concentrations+from+various+body+sites+and+serum+cortisol+in+Holstein+lactating+cows+and+heifers+during+thermal+comfort+zone.">Comparing hair cortisol concentrations from various body sites and serum cortisol in Holstein lactating cows and heifers during thermal comfort zone.</a> Journal of Veterinary Behavior: Clinical and Application Research. 30, 92-95 (2019).</li><li>Bussy, U., Wassink, L., Scribner, K. T., Li, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+cortisol+in+lake+sturgeon+(Acipenser+fulvescens)+eggs+by+liquid+chromatography+tandem+mass+spectrometry.">Determination of cortisol in lake sturgeon (Acipenser fulvescens) eggs by liquid chromatography tandem mass spectrometry.</a> Journal of Chromatography B. 1040, 162-168 (2017).</li><li>SAS. 1999. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> SAS. User's Guide (Version 8.01 Edition). , (1999).</li><li>Barton, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+in+fishes:+a+diversity+of+responses+with+particular+reference+to+changes+in+circulating+corticosteroids.">Stress in fishes: a diversity of responses with particular reference to changes in circulating corticosteroids.</a> Integrative and Comparative Biology. 42, 517-525 (2002).</li><li>Ghassemi Nejad, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+hair+and+blood+cortisol+in+sheep+and+dairy+cattle+using+RIA+and+ELISA+assay:+a+comparison.">Measuring hair and blood cortisol in sheep and dairy cattle using RIA and ELISA assay: a comparison.</a> Biological Rhythm Research. Accepted. , (2019).</li></ol>

חדקניים נקרא לפעמים "מאובן חי" כי זה הציג עיבודים מעטים במהלך אלפי שנים האחרונות. הסוג החדקן מכיל 27 מינים המייצרים קוויאר; עם זאת, שלושה מינים (בלוגה, baerii, ו סברוגה) לייצר את רוב האספקה הגלובלית של קוויאר. החדקניים חשופים לדיג יתר ולהפרעות בסביבתם הטבעית ולכן הם בסכנת הכחדה אנושות יותר מ...

קורטיזול הוא מחוון אמין של מתח בעלי חיים. מיצוי הקורטיזול מספק מסגרת תקפה לחוקרים לניטור רמות הלחץ ודפוסים כלליים של התוקפים. לדוגמה, מחקרים קודמים ניהלו אימות מתודולוגי של מדידות קורטיזול שיער באמצעות שיטות שונות בבני אדם1,2, קופים3,4, בקר5, כבשים6, ו דג זהב7,8. במינים של דגים, מדידות קורטיזול בתוך מטריצות כגון קשקשים, ריר העור, צואה, ו9 דם הוכחו לספק מידע על בריאות הדגים. כאשר דגימת דם היא בעייתית או קשקשים חסרים, מטריצות חלופיות עבור חילוץ קורטיזול נחוצים. בדגים, מטריצות חלופיות יכולות לכלול את עצם הלסת, רקמה קשה הדומה להשן האנושית10.
הפיתוח של מטריצות חדשות וטכניקות מאומת כדי לקבוע את רמות הלחץ של דגים הוא עניין מיוחד לתעשיית הקוויאר, שם חדקן יכול לחוות חשיפה ממושכת לגורמי הלחץ הסביבתי11. לא ניתן לקבוע את מין החידקן לפני גיל שנתיים, ולחדקן אין קשקשים. בגלל הקורטיזול בהדרגה מצטבר מטריצות מוצק בשלב הצמיחה2,7,12, לטווח ארוך הצטברות קורטיזול נתונים מתוך מטריצות קשות כגון סנפירים ובעצמות הלסת יכול לספק תובנה לחץ רמות בשלבי צמיחה שונים. לעומת זאת, רמות הקורטיזול של דם לספק תמונה של רמות הלחץ בזמן המוות ולא יכול במדויק לייצג לחץ במהלך הגידול לטווח ארוך13,14. עם הגוברת התחרות בשוק הקוויאר, גישות חדשות כדי לשפר את תנאי הלחץ לייצור של ביצים בריאות בין מינים חדקניים במהלך הגידול לטווח ארוך (8-12 שנים או יותר) הם אזור חשוב יותר ויותר של מחקר. בשל העלות הגבוהה של חדקן, דגימות שנקטפו יקרים מאוד ($ 8000-15000 לכל דג בוגר בהתאם למינים ולשלב הצמיחה), גורם מגביל עבור פרויקטים מחקר. עם זאת, התפתחות הטכניקה המתאימה להפקת קורטיזול מן הסנפירים החדקניים והלסת יכול להיות שימושית באופן מלא הן מערכות חקלאיות דגים בדגים בר כדי לשפר את האיכות והקציר של ביצי חדקן עבור הצריכה ו שימור.
כמו גם מתן תוצאות אמינות6, הבחירה של טכניקה מתאימה לחילוץ קורטיזול היא בעלת חשיבות קריטית כדי להבטיח כי תרכובות אחרות הקיימות במטריקס במהלך הכנת המדגם לא לבלבל את התפוקה, אשר עשוי להוביל ל תוצאות לא עקביות. זה חשוב באותה מידה לקבוע אם הפין ואת הלסת רמות קורטיזול מושפעים רמות ההורמונים במים המקיפים. היימבורה ואח '15 הציע כי מספר גורמים עשויים להשפיע על רמות קורטיזול כולל גיל, מין, הריון, העונה, צבע12, אזור הגוף שממנו הקורטיזול מחולץ16. עם זאת, מידע קטן זמין על ההשפעות של כביסה ממיסים על הפקת קורטיזול בתוך מטריצות הגוף דגים8, ואף אחד על ההשפעות האלה בחדקן, למעט ביצים חדקן17.
למרות ניתוח רמות קורטיזול בסיסית מן הסנפירים והלסת של החידקן דורש כי הדגים להיות מורדמים, גישה זו אינה כרוכה הטכניקות פולשני הדרושים לדגימת דם ב חדקן חי. הדגימות פין ואת עצם הלסת נאספים בקלות, והפקת מרקמות אלה ניתן לבצע במהירות. באופן דומה, חילוץ הורמון וניתוח הם פשוטים ודורשים ציוד מיוחד קטן.
במחקר זה, אנו מציגים טכניקה חדשה ומיושם בקלות עבור החילוץ, כביסה, ונחישות של קורטיזול מן הדגים סנפירים והלסת, במטרה לקבוע אם רמות הקורטיזול נמדד מטריצות אלה ניתן להשתמש באופן אמין כמתח אינדיקטורים. היתרונות של טכניקה זו כוללים גישה קלה ולא פולשנית8 , פחות וריאציה נתונים, פלט אמין1,6,8,17; הטכניקה מתאימה למינים של דגים ללא קשקשים כגון חדקן. הטכניקה דורשת טבח של הדג, מבחר של ממיסים כביסה המתאים2,4, שחיקה נכונה של דגימות3,5, מקצועי מקושר אנזימים מקושרים בדיקות (אליסה) יישום5,7, וידע נרחב של התאגדות של מקורות קורטיזול לתוך מטריצות מוצק6.
התחלנו שני ממיסים שונים כביסה (מים באולטרסאונד ואיזופנול) כדי להשיג רמות קורטיזול בסיס של סנפירים מ שלושה מינים חדקניים: בלוגה (huso huso), סיבירי (acipenser baerii), ו סבראגה (א. סטאטוס ), בתנאים סביבתיים סטנדרטיים לכל מין. ג'ווונז של ה. huso היו גם שימשו כדי להעריך את הלחץ בחדקן. זהו המחקר הראשון למדוד רמות קורטיזול ב חדקן ג'ווונז. תוצאות מחקר זה יספק נתונים קורטיזול השוואתי עבור מינים חדקניים בשלב הצמיחה המוקדמת (~ 1 שנה) לפני קביעת מין.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:654px;" width="653">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Disposal latex surgical gloves</td>
			<td style="width:222px;">Ansell</td>
			<td style="width:137px;">63754090</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Platform scale-electronic weighing 100kg</td>
			<td>Baskoolnikoo</td>
			<td>101 EM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Serological pipette to deliver up to 24 mL</td>
			<td style="width:222px;">Becton Dickinson Falcon</td>
			<td style="width:137px;">35-7550</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:295px;">Micro plate reader with 450 nm and 490 to 492 nm reference filters</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>8041000</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Reagent reservoirs</td>
			<td>BrandTech</td>
			<td>703459</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Zipper storage plastic bag&#160;</td>
			<td>Cleanwrap</td>
			<td>30cm x100m</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isopropyl alcohol</td>
			<td style="width:222px;">Daejung chemicals &#38; Metals&#160;</td>
			<td style="width:137px;">5035-4400</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Methyl alcohol</td>
			<td style="width:222px;">Daejung chemicals &#38; Metals&#160;</td>
			<td style="width:137px;">5558-4100</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tube rotator- MX-RL-Pro</td>
			<td>DLAB Scientific&#160;</td>
			<td>824-222217777</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Precision pipette to deliver 1.5 and 10 mL</td>
			<td>Eppendorf Research Plus</td>
			<td>M21518D</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160; Precision pipette to deliver 15 and 25 &#956;L</td>
			<td>Eppendorf Research Plus</td>
			<td>R25623C</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:20px;">Weighing paper (107 x 210 mm)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>09-898-12B</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Bead beater, 50/60 Hz 2A</td>
			<td style="width:222px;">GeneReach Biotechnology Corp</td>
			<td style="width:137px;">tp0088</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:295px;">Plate rotator with orbit capable of 500 rpm</td>
			<td style="width:222px;">Hangzhou Miu Instrument&#160;</td>
			<td style="width:137px;">MU-E30-1044</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:295px;">Disposable polypropylene tubes to hold at least 24 mL</td>
			<td style="width:222px;">Hyundai Micro&#160;</td>
			<td style="width:137px;">H20050</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fume hood</td>
			<td>Kwang Dong Industrial</td>
			<td>KD 901-22128175</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro-centrifuge capable of 1500 x g</td>
			<td style="width:222px;">Labo Gene</td>
			<td style="width:137px;">&#160;9.900.900.729</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mini vortex mixer</td>
			<td>LMS</td>
			<td>VTX-3000L&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Lotte aluminum foil roll&#160;</td>
			<td>Lotte Aluminum</td>
			<td>B0722X5FK5</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Digital scale</td>
			<td style="width:222px;">Mettler Toledo&#160;</td>
			<td style="width:137px;">&#160;ME204</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ultrapure water</td>
			<td style="width:222px;">MDM</td>
			<td style="width:137px;">MDM-0110</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pipette tips</td>
			<td>Neptune Scientific</td>
			<td>REF 2100.N</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Large fish net</td>
			<td>Pond H2O</td>
			<td>Hoz135&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Salivary cortisol kit</td>
			<td>Salimetrics</td>
			<td>1-3002-4</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:20px;">Bone cutting forceps</td>
			<td>Sankyo</td>
			<td>26-188A</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:295px;">Precision multichannel pipette to deliver 50 &#956;L and 200 &#956;L</td>
			<td>VITLAB</td>
			<td>18A68756</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Towel</td>
			<td style="width:222px;">Yuhan Kimberly</td>
			<td style="width:137px;">1707921546</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:20px;">Tissue paper (107 &#215; 210)</td>
			<td style="width:222px;">Yuhan Kimberly</td>
			<td style="width:137px;">41117</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cortisol extraction from sturgeon fin and jawbone matrices

מטרות מחקר זה היו לפתח טכניקה להפקת קורטיזול מתוך סנפירים חדקניים באמצעות שני ממיסים כביסה (מים איזופנול) ולכמת את כל ההבדלים רמות קורטיזול סנפיר בין שלושה המינים העיקריים חדקניים. סנפירים נקצרו מ 19 sturgeons הוקרב כולל שבעה בלוגה (huso huso), שבעה סיבירי (acipenser baerii), ו חמש סרומגה (א. stellatus). הsturgeons הועלו בחוות איראניות במשך שנתיים (2017-2018), וניתוח הוצאת קורטיזול נערך בדרום קוריאה (ינואר-פברואר 2019). ג'ווונז מ 5 ה. huso שימשו גם להפקת קורטיזול. הנתונים נותחו באמצעות הליך המודל הליניארי (GLM) הכללי בסביבת SAS. מקדמי הווריאציה הפנים והבין-שונות של וריאציה היו 14.15 ו-7.70, בהתאמה. בקצרה, שיטת החילוץ קורטיזול מעורב כביסה את הדגימות (300 ± 10 מ"ג) עם 3 מ ל של ממס (מים באולטרטהורים ו איזופנול) פעמיים, סיבוב ב 80 rpm עבור 2.5 דקות, ייבוש האוויר הדגימות שנשטפו בטמפרטורת החדר (22-28 ° c) במשך 7 ימים, ייבוש נוסף דגימות באמצעות מקצף חרוז ב 50 Hz עבור 32 דקות ושחיקה אותם אבקה, החלת 1.5 mL מתנול לאבקה מיובש (75 ± 5 מ"ג), וסיבוב איטי (40 rpm) עבור 18 h בטמפרטורת החדר עם ערבוב רציפה. בעקבות החילוץ, דגימות היו centrifuged (9,500 x g עבור 10 דקות), ו-1 mL supernatant הועבר צינור מיקרוצנטריפוגה חדש (1.5 mL), הדגירה ב 38 ° צ' כדי להתאדות את מתנול, וניתח באמצעות האנזים מקושר אנזימים מחובר בדיקות (אליסה) . הבדלים לא נצפו ברמות הקורטיזול סנפיר בין מינים או בתוך סנפיר והלסת רמות קורטיזול בין שטיפת ממיסים. התוצאות של מחקר זה להפגין כי מטריצה הלסת החדקן הוא מחוון מתח אלטרנטיבי מבטיח מטריצות מוצק.

שהוצגו הציג את הטכניקה מיצוי הקורטיזול שפותחה ואושרה במחקר זה באמצעות שלושה מינים חדקניים. רמות הקורטיזול הושגו באמצעות מים באולטרטהור ו איזופנול כמו ממיסים הכביסה הושוו (איור 2). הקורטיזול משנת H. huso ג'ווונז נבדק כדי לקבוע אם הלסת החדקניים יכול לשמש ?...

Watch this Scientific Journal Video about Cortisol Extraction from Sturgeon Fin and Jawbone Matrices at JoVE.com 

Cortisol Extraction from Sturgeon Fin and Jawbone Matrices (Video) | JoVE 

במחקר זה, אנו מציגים פרוטוקול להפקת קורטיזול מן הסנפיר ואת עצם הלסת של מינים חדקניים. פין והלסת רמות קורטיזול נבדקו נוסף על ידי השוואת שני ממיסים כביסה ואחריו אליסה assays. מחקר זה מנווט את הכדאיות של עצם הלסת קורטיזול כמו אינדיקטור מתח הרומן.

מיצוי הקורטיזול של החדקן פין ואת עצם הלסת מטריצות

The aims of this study were to develop a technique for the extraction of cortisol from sturgeon fins using two washing solvents (water and isopropanol) ...

השיטה שלנו מציגה מחוון מתח אלטרנטיבי חדשני שיכול להיות פלטפורמה למחקרים עתידיים רבים למדידת קורטיזול במטריסות חדשות שאינן עלילה ושיער. היתרונות של טכניקה זו הם הפשטות שלה ואת היכולת שלה לשמש כדי להעריך את רמות הלחץ אפילו בבעלי חיים שנשחטו. יצירת קשר בין רמות קורטיזול גבוהות ובעלי חיים בריאים או בני אדם באמצעות טכניקה זו יכולה לעזור עם האבחנה של מחלות מסוימות.שיטה זו יכולה לשמש גם כדי לחקור דגימות ביולוגיות בן מאות שנים כגון מאובנים ישנים אלה כדי להעריך את רמות הלחץ בתוך תוחלת החיים מדגם. עבור מיצוי קורטיזול, לשקול 300 פלוס או מינוס 10 מיליגרם של כל מדגם בסולם אנליטי דיגיטלי עם דיוק 0.0001 לפני הצבת הדגימות לתוך צינורות חרוט בודדים 15 מיליליטר. הוסף שלושה מיליליטר של isopropanol לכל צינור מדגם ולסובב את הצינורות ב 80 סיבובים לדקה במשך 2.5 דקות כדי לשטוף את הקורטיזול ולהסיר כל זיהום חיצוני פוטנציאלי.לאחר הכביסה האחרונה, האוויר מייבש את הדגימות בטמפרטורת החדר במשך שבעה ימים לפני שטיפת הדגימות שלוש פעמים נוספות כפי שהוכח באמצעות מים טהורים במיוחד טריים לכל שטיפה. לשקול 75 פלוס או מינוס חמישה מיליגרם של סנפיר מיובש או דגימת עצם הלסת ולהשתמש מקצף חרוזים סוף סוף לטחון את המדגם ב 50 הרץ במשך 32 דקות. לאחר מכן, לספק 1.5 מיליליטר של מתנול לכל צינור של אבקת סנפיר או עצם הלסת ולהניח את הדגימות על מסובב צינור ב 40 סיבובים לדקה במשך 18 שעות בטמפרטורת החדר.לאחר מיצוי קורטיזול, מים את רקמות המדגם על ידי צנטריפוגה. ולהעביר את המיליליטר העליון של קורטיזול צהבהב, אורגני המכיל שכבה מכל מדגם לתוך צינורות מיקרו צנטריפוגה בודדים 1.5 מיליליטר. יבש את דגימות הקורטיזול ב 38 מעלות צלזיוס ברדס אדים לילה כדי להתאדות את מתנול.למחרת בבוקר, להוסיף 400 microliters של PBS לכל צינור ומערבולת צנטריפוגה הדגימות כדי לאסוף את הקורטיזול. עבור ניתוח ELISA, לטעון 25 microliters של כל דגימת קורטיזול סטנדרטית שחולצו ולשלוט כפול לתוך בארות המתאימות של צלחת ELISA 96 היטב. לטעון 25 microliters של Assay diluent לשתי בארות לשמש אפס לתוך כל באר כריכה לא ספציפית.מערבבים 15 מיקרוליטרים של אנזים קוסם קוסם עם 24 מיליליטר של Assay diluent ומוסיפים 200 מיקרוליטרים של תותבים לכל באר. מערבבים את הצלחת על מסובב במשך חמש דקות ב 500 סיבובים לדקה. ואחריו דגירה של שעה בטמפרטורת החדר.בסוף הדגירה, לשטוף את הצלחת ארבע פעמים עם 300 microliters של 1x לשטוף Buffer לגם. היפוך מהיר של הצלחת מעל הכיור לאחר כל שטיפה כדי להשליך את החיץ ולנפח את הצלחת על ערימה של מגבות נייר. לאחר הכביסה האחרונה, מוסיפים 200 מיקרוליטרים של פתרון מצע TMB לכל באר ומציבים את הצלחת על המסובב במשך חמש דקות ב 500 סיבובים לדקה.לאחר הערבוב, הדגירה את הצלחת במשך 25 דקות בטמפרטורת החדר מוגנת מפני אור. בסוף הדגירה, מוסיפים 50 מיקרוליטרים של פתרון עצירה לכל באר. ומערבבים את תכולת הצלחת על המסובב במשך שלוש דקות ב 500 סיבובים לדקה או עד כל הבארות הפכו מירוק לצהוב.לאחר מכן, לקרוא את הצפיפות האופטית של הדגימות ולהשתמש בתוכנת לוח מיקרו כדי להמיר את רמות הקורטיזול בכל מדגם picograms למיליגרם. בניתוח מייצג זה, רמות הקורטיזול נטו להיות גבוהות יותר בדגימות סנפיר שנשטפו עם isopropanol מאשר אלה שטוף מים, אבל אין הבדלים משמעותיים ברמות הקורטיזול סנפיר נצפו בין מינים חדקן. לא הייתה אינטראקציה משמעותית בין ממיסים לשטיפה לבין מיני חידקנים.בדיקה של קורטיזול מ- H.Huso עצמות לסת כדי לקבוע אם עצמות לסת חדקן עשוי לשמש מטריצה חלופית סנפירים גילה כי ממס הכביסה לא היתה השפעה משמעותית על רמת הקורטיזול נמדד חידקן של H.Huso. יתר על כן, הנתונים חשפו דמיון גבוה בין הסנפירים של שלושה מינים חדקן נבדקו ב H.Huso עצמות לסת. חשוב להשתמש מקצף חרוזים כדי לטחון את הדגימות לתוך אבקה דקה ולהשתמש מתאים מסחרי ELISA Assay קיט למדידת קורטיזול מוצלחת.שיטה זו יכולה לשמש גם לגילוי קורטיזול בשיניים ובמטריסות קשות אחרות, כיוון שמדידות ברמת הקורטיזול מספקות מידע חשוב על האופן שבו הסביבה משפיעה על הביולוגיה של בעלי החיים. השיטה יכולה לשמש כגישה חדשה להערכת רמות הקורטיזול בשיניים של חלב ילדים אנושיים ובהנדסת אנדוקרינולוגיה של ילדים, ביולוגיה פסיכוטית, מחקרים התנהגותיים, ארכיאולוגיים ופורנזיים.

Research

JoVE Journal

Environment

Cortisol Extraction from Sturgeon Fin and Jawbone Matrices

Helminth Collection and Identification from Wildlife

Helminth Collection and Identification from Wildlife (Video) | JoVE 

Wild animals are commonly parasitized by a wide range of helminths. The four major types of helminths are &#34;roundworms&#34; (nematodes), ...

Sediment Core Sectioning and Extraction of Pore Waters under Anoxic Conditions

Sediment Core Sectioning and Extraction of Pore Waters under Anoxic Conditions (Video) | JoVE 

משקעי Core חתך וסחיטה הנקבובית ווטרס תחת תנאים אנוקסיים

We demonstrate a method for sectioning sediment cores and extracting pore waters while maintaining oxygen-free conditions. A simple, inexpensive system is ...

A Simple Method for Automated Solid Phase Extraction of Water Samples for Immunological Analysis of Small Pollutants

A Simple Method for Automated Solid Phase Extraction of Water Samples for Immunological Analysis of Small Pollutants (Video) | JoVE 

שיטה פשוטה למיצוי שלב המוצק האוטומטי של דגימות מים לניתוח החיסוני של מזהמים קטנים

A new method for solid phase extraction (SPE) of environmental water samples is proposed. The developed prototype is cost-efficient and user friendly, and ...

Simultaneous DNA-RNA Extraction from Coastal Sediments and Quantification of 16S rRNA Genes and Transcripts by Real-time PCR

Simultaneous DNA-RNA Extraction from Coastal Sediments and Quantification of 16S rRNA Genes and Transcripts by Real-time PCR (Video) | JoVE 

הפקת DNA-RNA סימולטני החוף משקעים וכימות של 16S rRNA גנים תעתיקי ידי בזמן אמת PCR

Real Time Polymerase Chain Reaction also known as quantitative PCR (q-PCR) is a widely used tool in microbial ecology to quantify gene abundances of ...

Alternative Method of Removing Otoliths from Sturgeon

Alternative Method of Removing Otoliths from Sturgeon (Video) | JoVE 

שיטה חלופית של הסרת Otoliths מ חדקן

Extracting the otoliths (ear bones) from fish that have very thick skulls can be difficult and very time consuming. The common practice of making a ...

Extraction and Analysis of Microbial Phospholipid Fatty Acids in Soils

Extraction and Analysis of Microbial Phospholipid Fatty Acids in Soils (Video) | JoVE 

הפקה וניתוח של פוספוליפידים מיקרוביאלית חומצות שומן בקרקעות

Phospholipid fatty acids (PLFAs) are key components of microbial cell membranes. The analysis of PLFAs extracted from soils can provide information about ...

Extraction of Structural Extracellular Polymeric Substances from Aerobic Granular Sludge

Extraction of Structural Extracellular Polymeric Substances from Aerobic Granular Sludge (Video) | JoVE 

הפקת חומרים פולימריים המבני התאי מ אירובי גרגירי בוצה

To evaluate and develop methodologies for the extraction of gel-forming extracellular polymeric substances (EPS), EPS from aerobic granular sludge (AGS) ...

Use of a Filter Cartridge for Filtration of Water Samples and Extraction of Environmental DNA

Use of a Filter Cartridge for Filtration of Water Samples and Extraction of Environmental DNA (Video) | JoVE 

שימוש במחסנית סינון עבור הסינון של מי דוגמאות הפקת DNA הסביבה

Recent studies demonstrated the use of environmental DNA (eDNA) from fishes to be appropriate as a non-invasive monitoring tool. Most of these studies ...

A Lipid Extraction and Analysis Method for Characterizing Soil Microbes in Experiments with Many Samples

A Lipid Extraction and Analysis Method for Characterizing Soil Microbes in Experiments with Many Samples (Video) | JoVE 

ליפיד הפקת וניתוח שיטה לאפיון קרקע חיידקים בניסויים עם דוגמאות רבות

Microbial communities are important drivers and regulators of ecosystem processes. To understand how management of ecosystems may affect microbial ...

Extraction of Organochlorine Pesticides from Plastic Pellets and Plastic Type Analysis

Extraction of Organochlorine Pesticides from Plastic Pellets and Plastic Type Analysis (Video) | JoVE 

הפקת חומרי הדברה אורגנוכלורינים מפלסטיק וגלגול סוג פלסטיק

Plastic resin pellets, categorized as microplastics (&#8804;5 mm in diameter), are small granules that can be unintentionally released to the environment ...