Name: cortisol extraction from sturgeon fin and jawbone matrices
Uploaded: 2019-09-10T13:00:00
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이 사업은 농업과학기술개발협력연구프로그램(프로젝트제목: 기후변화에 의한 축산생산성변화분석, 프로젝트번호)의 지원으로 진행되었다. PJ012771), 한국 농촌진흥청. 또한, 이 연구는 보조금에 의해 지원되었다 (아니오. PJ01344604) 동물영양생리학과, 국립동물과학원, RDA, 서울, 대한민국. 저자는 감사페르시아 제스처 CEO 모하마드 하산 살만자데와 그의 팀을 인정, 누가이 연구에서 검사 세 철갑상어 종에서 물고기를 제공.

다음 실험 절차와 방법은 강원대학교 춘천대학교 동물복지윤리청의 승인을 받았습니다.
1. 핀 컬렉션
<ol><li>그물을 사용하여 철갑상어를 부드럽게 캡처하여 부상과 스트레스를 최소화하십시오.</li>
	<li>생선을 깨끗한 물로 조심스럽게 헹구고 안락사 전에 흡수성 수건으로 몸 표면을 닦아냅니다.</li>
	<li>물고기가 기절하거나 의식을 잃게되도록 플라스틱 망치를 사용하여 물?...

<ol>
	<li>Meyer, J. S., Novak, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+cortisol:+a+novel+biomarker+of+hypothalamic-pituitary-+adrenocortical+activity.">Hair cortisol: a novel biomarker of hypothalamic-pituitary- adrenocortical activity.</a> Endocrinology. 153, 4120-4127 (2012).</li><li>Ghassemi Nejad, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cortisol+study:+facial+hair+and+nails.">A cortisol study: facial hair and nails.</a> Journal of Steroids Hormonal Sciences. 7, 1-5 (2016).</li><li>Meyer, J. S., Novak, M. A., Hamel, A., Rosenberg, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+and+analysis+of+cortisol+from+human+and+monkey+hair.">Extraction and analysis of cortisol from human and monkey hair.</a> Journal of Visualized Experiments. (83), e50882 (2014).</li><li>Davenport, M. D., Tiefenbacher, S., Lutz, C. K., Novak, M. A., Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+endogenous+cortisol+concentrations+in+the+hair+of+rhesus+macaques.">Analysis of endogenous cortisol concentrations in the hair of rhesus macaques.</a> General and Comparative Endocrinology. 147, 255-261 (2006).</li><li>Ghassemi Nejad, J., Ataallahi, M., Park, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methodological+validation+of+measuring+Hanwoo+hair+cortisol+concentration+using+bead+beater+and+surgical+scissors.">Methodological validation of measuring Hanwoo hair cortisol concentration using bead beater and surgical scissors.</a> Journal of Animal Science and Technology. 61, 41-46 (2019).</li><li>Ghassemi Nejad, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wool+cortisol+is+a+better+indicator+of+stress+than+blood+cortisol+in+ewes+exposed+to+heat+stress+and+water+restriction.">Wool cortisol is a better indicator of stress than blood cortisol in ewes exposed to heat stress and water restriction.</a> Animal. 8, 128-132 (2014).</li><li>Brossa, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cortisol in skin mucus and scales as a measure of fish stress and habitat quality. Ph.D. dissertation. , (2018).</li><li>Carbajal, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortisol+detection+in+fish+scales+by+enzyme+immunoassay:+biochemical+and+methodological+validation.">Cortisol detection in fish scales by enzyme immunoassay: biochemical and methodological validation.</a> Journal of Applied Ichthyology. 34, 1-4 (2018).</li><li>Bertotto, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+matrices+for+cortisol+measurement+in+fish.">Alternative matrices for cortisol measurement in fish.</a> Aquaculture Research. 41, 1261-1267 (2010).</li><li>Ghassemi Nejad, J., Jeong, C., Shahsavarani, H., Sung, I. K., Lee, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embedded+dental+cortisol+content:+a+pilot+study.">Embedded dental cortisol content: a pilot study.</a> Endocrinology &amp; Metabolic Syndrome. 5, 240 (2016).</li><li>Pankhurst, N. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+endocrinology+of+stress+in+fish:+an+environmental+perspective.">The endocrinology of stress in fish: an environmental perspective.</a> General and Comparative Endocrinology. 170, 265-275 (2011).</li><li>Ghassemi Nejad, J., Kim, W. B., Lee, B. H., Sung, K. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coat+and+hair+color:+hair+cortisol+and+serotonin+levels+in+lactating+Holstein+cows+under+heat+stress+conditions.">Coat and hair color: hair cortisol and serotonin levels in lactating Holstein cows under heat stress conditions.</a> Animal Science Journal. 88, 190-194 (2017).</li><li>Baker, M. R., Gobush, K. S., Vynne, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+factors+influencing+stress+hormones+in+fish+and+wildlife.">Review of factors influencing stress hormones in fish and wildlife.</a> Journal of Nature Conservation. 21, 309-318 (2013).</li><li>Aerts, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scales+tell+a+story+on+the+stress+history+of+fish.">Scales tell a story on the stress history of fish.</a> PLoS One. 10, e0123411 (2015).</li><li>Heimb&#252;rge, S., Kanitz, E., Otten, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+hair+cortisol+for+the+assessment+of+stress+in+animals.">The use of hair cortisol for the assessment of stress in animals.</a> General and Comparative Endocrinology. , 10-17 (2019).</li><li>Ghassemi Nejad, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparing+hair+cortisol+concentrations+from+various+body+sites+and+serum+cortisol+in+Holstein+lactating+cows+and+heifers+during+thermal+comfort+zone.">Comparing hair cortisol concentrations from various body sites and serum cortisol in Holstein lactating cows and heifers during thermal comfort zone.</a> Journal of Veterinary Behavior: Clinical and Application Research. 30, 92-95 (2019).</li><li>Bussy, U., Wassink, L., Scribner, K. T., Li, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+cortisol+in+lake+sturgeon+(Acipenser+fulvescens)+eggs+by+liquid+chromatography+tandem+mass+spectrometry.">Determination of cortisol in lake sturgeon (Acipenser fulvescens) eggs by liquid chromatography tandem mass spectrometry.</a> Journal of Chromatography B. 1040, 162-168 (2017).</li><li>SAS. 1999. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> SAS. User's Guide (Version 8.01 Edition). , (1999).</li><li>Barton, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+in+fishes:+a+diversity+of+responses+with+particular+reference+to+changes+in+circulating+corticosteroids.">Stress in fishes: a diversity of responses with particular reference to changes in circulating corticosteroids.</a> Integrative and Comparative Biology. 42, 517-525 (2002).</li><li>Ghassemi Nejad, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+hair+and+blood+cortisol+in+sheep+and+dairy+cattle+using+RIA+and+ELISA+assay:+a+comparison.">Measuring hair and blood cortisol in sheep and dairy cattle using RIA and ELISA assay: a comparison.</a> Biological Rhythm Research. Accepted. , (2019).</li></ol>

철갑상어는 지난 천년 동안 몇 가지 적응을 전시했기 때문에 때때로 "살아있는 화석"이라고합니다. 철갑상어 속 Acipenser는 캐비어를 생산하는 27 종을 포함; 그러나, 세 종 (벨루가, baerii, 세브루가) 글로벌 캐비어 공급의 대부분을 생산하고 있습니다. 철갑상어는 자연 서식지에서 의 외낚시와 간섭에 취약하기 때문에 다른 어떤 종보다도 더 심각한 멸종 위기에 처해 있습니다. 철갑상어는 1억...

코티솔은 동물의 스트레스를 신뢰할 수 있는 지표입니다. 코 티 솔 추출 스트레스 수준에 스트레스 수준 및 일반적인 패턴을 모니터링 하는 연구원에 대 한 유효한 프레임 워크를 제공 합니다. 예를 들어, 이전 연구는 인간1,2,원숭이3,4,가축5,양6,및 다양한 방법을 사용하여 모발 코티솔 측정의 방법론적 검증을 수행하였다. 금붕어7,8. 물고기 종에서, 비늘 등 매트릭스에서 코 티 솔 측정, 피부 점액, 대변, 그리고 혈액9 물고기 건강에 대 한 정보를 제공 하기 위해 표시 되었습니다. 혈액 샘플링이 문제가 있거나 비늘이 부족할 때, 코티솔 추출을 위한 대체 매트릭스가 필요합니다. 물고기에서, 대체 행렬은 턱뼈, 인간의 치아와 유사한 단단한 조직을 포함할 수있다(10).
생선 스트레스 수준을 결정하는 새로운 행렬 및 검증 된 기술의 개발은 외과 의사가 환경 스트레스 요인에 장기간 노출을 경험할 수있는 캐비어 산업에 특히 관심이 있습니다11. 철갑상어의 성별은 2 세 이전에 결정 될 수 없으며 외과 의사는 비늘이 없습니다. 코티솔은 성장단계2, 7,12동안 고체 행렬에 점차 적으로 축적하기 때문에 지느러미와 턱뼈와 같은 단단한 매트릭스의 장기 코티솔 축적 데이터는 스트레스에 대한 통찰력을 제공 할 수 있습니다. 다른 성장 단계에서 수준. 대조적으로, 혈액 코티솔 수준은 죽음의 시간에 긴장 수준의 스냅 샷을 제공하고 정확하게 장기 양육 조건 동안 스트레스를 나타낼 수 없습니다13,14. 캐비어 시장에서 경쟁이 치열해짐에 따라 장기 사육 기간(8-12년 이상)동안 철갑상어 종중 건강한 계란 생산을 위한 스트레스 조건을 개선하기 위한 새로운 접근법이 점점 더 중요한 연구 분야입니다. 철갑상어의 높은 비용으로 인해, 수확 된 샘플은 매우 비용이 많이 듭니다 (종과 성장 단계에 따라 성숙한 물고기 당 $ 8,000-15,000), 연구 프로젝트의 제한 요소. 그러나, 철갑상어 지느러미와 턱뼈에서 코티솔 추출을 위한 적절한 기술의 개발은 양식과 소비를 위한 철갑상어 계란의 수확을 향상시키기 위하여 어류 양식 시스템 및 야생 물고기에 둘 다 유용하게 적용될 수 있었습니다 보존.
신뢰할 수있는 결과6을제공 할뿐만 아니라 적절한 코티솔 추출 기술을 선택하는 것은 시료 준비 중에 매트릭스에 존재하는 다른 화합물이 출력을 혼동하지 않도록하는 것이 매우 중요합니다. 일치하지 않는 결과. 지느러미와 턱뼈 코티솔 수치가 주변 물의 호르몬 수치에 영향을 받는지 여부를 결정하는 것이 똑같이 중요합니다. Heimbürge 외15 요인의 숫자는 나이 포함 하 여 코 티 솔 수준에 영향을 미칠 수 있습니다 제안, 성별, 임신, 시즌, 색상12,그리고 코 티 솔 추출 되는 신체 영역16. 그러나, 생선 체내에서 코티솔 추출에 대한 용매 세척의 효과에 대한 정보는 거의없으며,철갑상어 계란17을제외하고는 철갑상어에서 이러한 효과에 대해서는 전혀 알 수 없다.
철갑상어의 지느러미와 턱뼈에서 기준선 코티솔 수준을 분석하는 것은 물고기를 안락사시켜야 하지만, 이 접근법은 살아있는 외과 의사에서 혈액 샘플링에 필요한 침습적 기술을 수반하지 않습니다. 지느러미 및 턱뼈 샘플은 쉽게 수집되며 이러한 조직에서 추출하면 신속하게 수행 할 수 있습니다. 마찬가지로, 호르몬 추출 및 분석간단 하 고 거의 전문된 장비를 필요로.
이 연구에서는, 우리는 이 행렬에서 측정된 코티솔 수준이 응력으로 안정적으로 사용될 수 있는지 여부를 결정하는 것을 목표로, 물고기 지느러미및 턱뼈에서 코티솔의 추출, 세척 및 측정을 위한 새롭고 쉽게 적용된 기술을 제시합니다. 지표. 이 기술의 장점은 쉽고 비 침습적인 8 접근 법, 적은 데이터 변화 및 신뢰할 수있는 출력1,6,8,17을포함한다; 이 기술은 철갑상어와 같은 비늘이없는 물고기 종에 적용 할 수 있습니다. 이 기술은 물고기의 도살, 적절한 세척용매의 선택2,4,샘플3, 5,전문 효소 연결 면역 흡착 분석 (ELISA)의 적절한 연삭을 필요로한다. 응용 프로그램5,7, 고체 행렬에 코티솔 소스의 통합의 광범위한 지식6.
두 개의 다른 세척 용매 (초순수 및 이소 프로판올)를 적용하여 세 가지 철갑상어 종에서 지느러미의 기저 코티솔 수준을 얻었습니다 : 벨루가(후소 후소),시베리아(Acipenser baerii),그리고 세브루가(A. stellatus) ), 각 종에 대한 표준 환경 조건하에서. H. huso의 턱뼈는 또한 외과 의사에 있는 응력 평가하기 위하여 이용되었습니다. 이것은 철갑상어 턱뼈에 있는 코티솔 수준을 측정하는 첫번째 연구 결과입니다. 이 연구의 결과는 초기 성장 단계에서 철갑상어 종에 대한 비교 코티솔 데이터를 제공 할 것입니다 (~ 1 년) 섹스 결정 하기 전에.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:654px;" width="653">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Disposal latex surgical gloves</td>
			<td style="width:222px;">Ansell</td>
			<td style="width:137px;">63754090</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Platform scale-electronic weighing 100kg</td>
			<td>Baskoolnikoo</td>
			<td>101 EM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Serological pipette to deliver up to 24 mL</td>
			<td style="width:222px;">Becton Dickinson Falcon</td>
			<td style="width:137px;">35-7550</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:295px;">Micro plate reader with 450 nm and 490 to 492 nm reference filters</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>8041000</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Reagent reservoirs</td>
			<td>BrandTech</td>
			<td>703459</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Zipper storage plastic bag&#160;</td>
			<td>Cleanwrap</td>
			<td>30cm x100m</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isopropyl alcohol</td>
			<td style="width:222px;">Daejung chemicals &#38; Metals&#160;</td>
			<td style="width:137px;">5035-4400</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Methyl alcohol</td>
			<td style="width:222px;">Daejung chemicals &#38; Metals&#160;</td>
			<td style="width:137px;">5558-4100</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tube rotator- MX-RL-Pro</td>
			<td>DLAB Scientific&#160;</td>
			<td>824-222217777</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Precision pipette to deliver 1.5 and 10 mL</td>
			<td>Eppendorf Research Plus</td>
			<td>M21518D</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160; Precision pipette to deliver 15 and 25 &#956;L</td>
			<td>Eppendorf Research Plus</td>
			<td>R25623C</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:20px;">Weighing paper (107 x 210 mm)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>09-898-12B</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Bead beater, 50/60 Hz 2A</td>
			<td style="width:222px;">GeneReach Biotechnology Corp</td>
			<td style="width:137px;">tp0088</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:295px;">Plate rotator with orbit capable of 500 rpm</td>
			<td style="width:222px;">Hangzhou Miu Instrument&#160;</td>
			<td style="width:137px;">MU-E30-1044</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:295px;">Disposable polypropylene tubes to hold at least 24 mL</td>
			<td style="width:222px;">Hyundai Micro&#160;</td>
			<td style="width:137px;">H20050</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fume hood</td>
			<td>Kwang Dong Industrial</td>
			<td>KD 901-22128175</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro-centrifuge capable of 1500 x g</td>
			<td style="width:222px;">Labo Gene</td>
			<td style="width:137px;">&#160;9.900.900.729</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mini vortex mixer</td>
			<td>LMS</td>
			<td>VTX-3000L&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Lotte aluminum foil roll&#160;</td>
			<td>Lotte Aluminum</td>
			<td>B0722X5FK5</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Digital scale</td>
			<td style="width:222px;">Mettler Toledo&#160;</td>
			<td style="width:137px;">&#160;ME204</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ultrapure water</td>
			<td style="width:222px;">MDM</td>
			<td style="width:137px;">MDM-0110</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pipette tips</td>
			<td>Neptune Scientific</td>
			<td>REF 2100.N</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Large fish net</td>
			<td>Pond H2O</td>
			<td>Hoz135&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Salivary cortisol kit</td>
			<td>Salimetrics</td>
			<td>1-3002-4</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:20px;">Bone cutting forceps</td>
			<td>Sankyo</td>
			<td>26-188A</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:295px;">Precision multichannel pipette to deliver 50 &#956;L and 200 &#956;L</td>
			<td>VITLAB</td>
			<td>18A68756</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Towel</td>
			<td style="width:222px;">Yuhan Kimberly</td>
			<td style="width:137px;">1707921546</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:20px;">Tissue paper (107 &#215; 210)</td>
			<td style="width:222px;">Yuhan Kimberly</td>
			<td style="width:137px;">41117</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cortisol extraction from sturgeon fin and jawbone matrices

이 연구의 목적은 두 개의 세척 용매 (물과 이소 프로판올)를 사용하여 철갑상어 지느러미에서 코티솔을 추출하는 기술을 개발하고 세 가지 주요 외과 의사 종 중 지느러미 코티솔 수준의 차이를 정량화하는 것입니다. 지느러미는 벨루가7개(후소후소),시베리아 7개(아시펜서바에리이),세브루가 5개(A.stellatus)등 19척의 희생된 철갑상어에서 수확되었다. 철갑상어는 이란 농장에서 2년(2017-2018년)에 자랐으며, 코티솔 추출 분석은 한국에서(2019년 1월~2월) 실시되었습니다. 5 H. 후소에서 턱뼈는 또한 코티솔 추출에 사용되었다. 데이터는 SAS 환경에서 의 일반 선형 모델(GLM) 프로시저를 사용하여 분석하였다. 변이의 인트라-및 인터-분석 계수는 각각 14.15 및 7.70이었다. 간단히, 코티솔 추출 기술은 용매 (초순수 및 이소프로판올)의 3 mL로 시료 (300 ± 10 mg)를 두 번 세척하고, 80rpm에서 2.5 분 동안 회전하고, 7 일 동안 실온 (22-28 °C)에서 세척 된 샘플을 공기 건조하고, 추가 건조를 포함했습니다. 50 Hz에서 비드 비터를 사용하여 32 분 동안 시료를 분말로 분쇄하고 건조 된 분말 (75 ± 5 mg)에 1.5 mL 메탄올을 적용하고, 연속 혼합으로 실온에서 18 시간 동안 느린 회전 (40 rpm)을 적용합니다. 추출 후, 샘플을 원심분리(10분 동안 9,500 x g)하고, 1 mL 상급제를 새로운 미세원심지 튜브(1.5 mL)로 옮겼고, 메탄올을 증발시키기 위해 38°C에서 배양하고, 효소 연계 면역흡착 분석(ELISA)을 통해 분석하였다. . 종 사이 핀 코 티 솔 수준에서 또는 세척 용매 사이 지 느 러 미와 턱뼈 코 티 솔 수준에서 차이가 관찰 되었다. 이 연구의 결과는 철갑상어 턱뼈 매트릭스가 단단한 행렬에 유망한 대체 응력 지표이다는 것을 보여줍니다.

제시된 지느러미 코티솔 추출 기술은 3개의 철갑상어 종을 사용하여 이 연구에서 개발되고 확인되었습니다. 세척 용매로서 초순수 및 이소프로판올을 사용하여 얻은 코티솔 수준을 비교하였다(도2). H. huso 턱뼈에서 코티솔은 철갑상어 턱뼈가 지느러미에 대한 대체 매트릭스로 사용될 수 있는지 여부를 결정하기 위해 검사되었습니다. 세척 용?...

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이 연구에서는, 우리는 철갑상어 종의 지느러미와 턱뼈에서 코티솔 추출을 위한 프로토콜을 제시합니다. 지느러미와 턱뼈 코티솔 수준은 ELISA 검소에 선행된 2개의 세척 용매를 비교하여 더 조사되었습니다. 이 연구는 새로운 스트레스 지표로 턱뼈 코티솔의 타당성을 시험.

철갑상어 지느러미와 턱뼈 매트릭스에서 코티솔 추출

The aims of this study were to develop a technique for the extraction of cortisol from sturgeon fins using two washing solvents (water and isopropanol) ...

우리의 방법은 새로운 비 플롯 및 머리 행렬에서 코티솔을 측정하기위한 수많은 미래 연구를위한 플랫폼이 될 수있는 새로운 대체 스트레스 지표를 소개합니다. 이 기술의 장점은 단순함과 도살 된 동물에서도 스트레스 수준을 평가하는 데 사용할 수있는 능력입니다. 이 기술을 사용하여 높은 코티솔 수준과 건강한 동물 또는 인간 사이의 관계를 확립하는 것은 일부 질병의 진단에 도움이 될 수 있습니다.이 방법은 또한 견본 수명 내의 응력 수준을 평가하기 위하여 이 오래된 화석과 같은 수백 년 오래된 생물학 견본을 연구하기 위하여 이용될 수 있습니다. 코티솔 추출의 경우, 개별 15 밀리리터 원모 튜브에 샘플을 배치하기 전에 0.0001 정확도로 디지털 분석 척도에서 각 샘플의 300 플러스 또는 마이너스 10 밀리그램을 무게. 각 샘플 튜브에 3 밀리리터의 이소프로판올을 추가하고 코티솔을 씻어 내고 잠재적인 외부 오염을 제거하기 위해 분당 80 회전에서 튜브를 회전시 2.5 분 동안 회전합니다.마지막 세척 후, 공기는 각 세척에 대한 신선한 초순수수를 사용하여 입증된 바와 같이 샘플을 세번 더 세척하기 전에 7일 동안 실온에서 샘플을 건조시합니다. 75 플러스 또는 마이너스 5 밀리그램의 말린 지느러미 또는 턱뼈 샘플을 계량하고 비드 비터를 사용하여 32 분 동안 50 hertz에서 샘플을 갈아 드셔 보십니다. 그런 다음, 가루 지느러미 또는 턱뼈의 각 튜브에 메탄올1.5 밀리리터를 전달하고 실온에서 18 시간 동안 분당 40 회전에서 튜브 회전기에 샘플을 배치합니다.코티솔 추출 후, 원심분리에 의한 샘플 조직을 퇴적시한다. 그리고 각 샘플에서 층을 포함하는 황색, 유기 코티솔의 상단 1 밀리리터를 개별 1.5 밀리리터 미세 원심 분리 튜브로 옮킨다. 코티솔 샘플을 밤새 연기 후드에서 섭씨 38도에서 건조하여 메탄올을 증발시다.다음 날 아침, 각 튜브와 소용돌이에 PBS 의 400 마이크로 리터를 추가하고 코티솔을 수집하기 위해 샘플을 원심 분리합니다. ELISA 분석을 위해 추출된 각 표준 코티솔 샘플25마이크로리터를 96웰 ELISA 플레이트의 적절한 우물에 복제하여 적재합니다. Assay 희석제 25마이크로리터를 두 개의 우물에 로드하여 0으로, 각 비특이적 결합에 잘 작용합니다.효소 컨쥬게이트 15마이크로리터를 분석 희석제 24밀리리터와 혼합하고 각 우물에 200마이크로리터의 공주를 추가합니다. 분당 500 회전에서 5 분간 회전기에 접시를 섞습니다. 실온에서 1시간 배양이 이어진다.인큐베이션이 끝나면 잘 1x 워시 버퍼300 마이크로리터로 접시를 네 번 씻으시다. 버퍼를 버리고 종이 타월 더미에 접시를 블롯 한 후 재빨리 접시를 싱크대 위에 반전시다. 마지막 세척 후, TMB 기판 용액 200 마이크로리터를 각 우물에 넣고 분당 500 회전시 5분 동안 접시를 회전기위에 놓습니다.혼합 후, 빛으로부터 보호실온에서 25 분 동안 접시를 배양. 인큐베이션이 끝나면 각 웰에 50 마이크로리터의 스톱 솔루션을 추가합니다. 그리고 회전기의 플레이트 내용기를 분당 500 회전에서 3분 간 또는 모든 우물이 녹색에서 노란색으로 바뀔 때까지 섞는다.그런 다음, 샘플의 광학 밀도를 읽고 마이크로 플레이트 소프트웨어를 사용하여 각 샘플의 코티솔 수준을 밀리그램당 피코그램으로 변환합니다. 본 대표적인 분석에서, 코티솔 수치는 물로 세척된 양면 샘플보다 이소프로판올로 세척된 지느러미 샘플에서 더 높은 경향이 있었지만, 유혈구 코티솔 수치에 는 유의한 차이가 철갑상어 종 사이에서 관찰되지 않았다. 세척 용매와 철갑상어 종 사이에는 상당한 상호 작용이 없었습니다.H.Huso 턱뼈에서 코티솔을 검사하여 철갑상어 턱뼈가 지느러미에 대한 대체 매트릭스로 사용될 수 있는지 여부를 판단하여 세척 용매가 H.Huso의 철갑상어에서 측정된 코티솔 수준에 큰 영향을 미치지 않았다는 것을 밝혀졌습니다. 또한, 데이터는 3개의 철갑상어 종의 지느러미 사이 및 H.Huso 턱뼈에서 높은 유사성을 밝혔습니다. 비드 비터를 사용하여 샘플을 미세 분말로 분쇄하고 코티솔 측정을 위해 적절한 상업용 ELISA 분석 키트를 사용하는 것이 중요합니다.코티솔 레벨 측정이 환경이 동물 생물학에 미치는 영향에 대한 중요한 정보를 제공하기 때문에 이 방법은 치아 및 기타 단단한 행렬에서 코티솔을 검출하는 데 사용할 수 있습니다. 이 방법은 인간의 아이 우유 치아와 소아 내분비학, 정신 생물학, 행동, 고고학 및 법의학 연구에서 코티솔 수준을 평가하는 새로운 접근법으로 사용될 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Environment

Cortisol Extraction from Sturgeon Fin and Jawbone Matrices

Helminth Collection and Identification from Wildlife

Helminth Collection and Identification from Wildlife (Video) | JoVE 

Wild animals are commonly parasitized by a wide range of helminths. The four major types of helminths are &#34;roundworms&#34; (nematodes), ...

연구

환경과학

Sediment Core Sectioning and Extraction of Pore Waters under Anoxic Conditions

Sediment Core Sectioning and Extraction of Pore Waters under Anoxic Conditions (Video) | JoVE 

무산소 조건에서 퇴적물 코어 단면과 기공 워터스의 추출

We demonstrate a method for sectioning sediment cores and extracting pore waters while maintaining oxygen-free conditions. A simple, inexpensive system is ...

A Simple Method for Automated Solid Phase Extraction of Water Samples for Immunological Analysis of Small Pollutants

A Simple Method for Automated Solid Phase Extraction of Water Samples for Immunological Analysis of Small Pollutants (Video) | JoVE 

작은 오염 물질의 면역 학적 분석을위한 물 샘플의 자동화 된 고체상 추출을위한 간단한 방법

A new method for solid phase extraction (SPE) of environmental water samples is proposed. The developed prototype is cost-efficient and user friendly, and ...

Simultaneous DNA-RNA Extraction from Coastal Sediments and Quantification of 16S rRNA Genes and Transcripts by Real-time PCR

Simultaneous DNA-RNA Extraction from Coastal Sediments and Quantification of 16S rRNA Genes and Transcripts by Real-time PCR (Video) | JoVE 

실시간 PCR에 의한 연안 퇴적물 및 정량 16S의 rRNA의 유전자 및 성적 증명서에서 동시 DNA-RNA 추출

Real Time Polymerase Chain Reaction also known as quantitative PCR (q-PCR) is a widely used tool in microbial ecology to quantify gene abundances of ...

Alternative Method of Removing Otoliths from Sturgeon

Alternative Method of Removing Otoliths from Sturgeon (Video) | JoVE 

철갑 상어에서 이석 제거의 다른 방법

Extracting the otoliths (ear bones) from fish that have very thick skulls can be difficult and very time consuming. The common practice of making a ...

Extraction and Analysis of Microbial Phospholipid Fatty Acids in Soils

Extraction and Analysis of Microbial Phospholipid Fatty Acids in Soils (Video) | JoVE 

추출 및 토양의 미생물 인지질 지방산의 분석

Phospholipid fatty acids (PLFAs) are key components of microbial cell membranes. The analysis of PLFAs extracted from soils can provide information about ...

Extraction of Structural Extracellular Polymeric Substances from Aerobic Granular Sludge

Extraction of Structural Extracellular Polymeric Substances from Aerobic Granular Sludge (Video) | JoVE 

에어로빅 세분화 된 슬러지에서 구조 세포 외 고분자 물질의 추출

To evaluate and develop methodologies for the extraction of gel-forming extracellular polymeric substances (EPS), EPS from aerobic granular sludge (AGS) ...

Use of a Filter Cartridge for Filtration of Water Samples and Extraction of Environmental DNA

Use of a Filter Cartridge for Filtration of Water Samples and Extraction of Environmental DNA (Video) | JoVE 

여과 물 샘플 및 환경 DNA의 추출을위한 필터 카트리지의 사용

Recent studies demonstrated the use of environmental DNA (eDNA) from fishes to be appropriate as a non-invasive monitoring tool. Most of these studies ...

A Lipid Extraction and Analysis Method for Characterizing Soil Microbes in Experiments with Many Samples

A Lipid Extraction and Analysis Method for Characterizing Soil Microbes in Experiments with Many Samples (Video) | JoVE 

많은 샘플을 이용한 실험에서 토양 미생물을 특성화하기위한 지질 추출 및 분석 방법

Microbial communities are important drivers and regulators of ecosystem processes. To understand how management of ecosystems may affect microbial ...

Extraction of Organochlorine Pesticides from Plastic Pellets and Plastic Type Analysis

Extraction of Organochlorine Pesticides from Plastic Pellets and Plastic Type Analysis (Video) | JoVE 

플라스틱 펠렛 및 플라스틱 유형 분석에서 유기 염소 농약의 추출

Plastic resin pellets, categorized as microplastics (&#8804;5 mm in diameter), are small granules that can be unintentionally released to the environment ...