Name: cortisol extraction from sturgeon fin and jawbone matrices
Uploaded: 2019-09-10T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cortisol Extraction from Sturgeon Fin and Jawbone Matrices at JoVE.com

Bu çalışma Tarım Bilimleri ve Teknoloji Geliştirme Kooperatif Araştırma Programı desteği ile yapılmıştır (Proje başlığı: İklim değişikliği ile hayvancılık verimlilik değişikliği analizi, Proje No. PJ012771), Kırsal Kalkınma İdaresi, Kore Cumhuriyeti. Ayrıca, bu çalışma bir hibe tarafından desteklenmiştir (Hayır. PJ01344604) Hayvan Beslenme ve Fizyoloji Ekibi, Ulusal Hayvan Bilimleri Enstitüsü, RDA, Seul, Kore Cumhuriyeti. Yazarlar, bu çalışmada incelenen üç mersin balığı türünden balık sağlayan Farsça Jest CEO'su Mohammad Hassan Salmanzadeh ve ekibini minnetle kabul ediyorlar.

Aşağıdaki deneysel prosedürler ve yöntemler Kangwon Ulusal Üniversitesi, Chuncheon, Kore Cumhuriyeti Hayvan Refahı ve Etik Kurumu tarafından onaylanmıştır.
1. Fin koleksiyonu
<ol><li>Yaralanma ve stresi en aza indirmek için bir ağ kullanarak yavaşça mersin balığı yakalayın.</li>
	<li>Balığı tatlı suyla dikkatlice durulayın ve ötenaziden önce vücut yüzeyini emici bir havluyla silin.</li>
	<li>Balık sersemlemiş ya da bilincini kaybeder gibi plastik bir çekiç kul...

<ol>
	<li>Meyer, J. S., Novak, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+cortisol:+a+novel+biomarker+of+hypothalamic-pituitary-+adrenocortical+activity.">Hair cortisol: a novel biomarker of hypothalamic-pituitary- adrenocortical activity.</a> Endocrinology. 153, 4120-4127 (2012).</li><li>Ghassemi Nejad, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cortisol+study:+facial+hair+and+nails.">A cortisol study: facial hair and nails.</a> Journal of Steroids Hormonal Sciences. 7, 1-5 (2016).</li><li>Meyer, J. S., Novak, M. A., Hamel, A., Rosenberg, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+and+analysis+of+cortisol+from+human+and+monkey+hair.">Extraction and analysis of cortisol from human and monkey hair.</a> Journal of Visualized Experiments. (83), e50882 (2014).</li><li>Davenport, M. D., Tiefenbacher, S., Lutz, C. K., Novak, M. A., Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+endogenous+cortisol+concentrations+in+the+hair+of+rhesus+macaques.">Analysis of endogenous cortisol concentrations in the hair of rhesus macaques.</a> General and Comparative Endocrinology. 147, 255-261 (2006).</li><li>Ghassemi Nejad, J., Ataallahi, M., Park, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methodological+validation+of+measuring+Hanwoo+hair+cortisol+concentration+using+bead+beater+and+surgical+scissors.">Methodological validation of measuring Hanwoo hair cortisol concentration using bead beater and surgical scissors.</a> Journal of Animal Science and Technology. 61, 41-46 (2019).</li><li>Ghassemi Nejad, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wool+cortisol+is+a+better+indicator+of+stress+than+blood+cortisol+in+ewes+exposed+to+heat+stress+and+water+restriction.">Wool cortisol is a better indicator of stress than blood cortisol in ewes exposed to heat stress and water restriction.</a> Animal. 8, 128-132 (2014).</li><li>Brossa, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cortisol in skin mucus and scales as a measure of fish stress and habitat quality. Ph.D. dissertation. , (2018).</li><li>Carbajal, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortisol+detection+in+fish+scales+by+enzyme+immunoassay:+biochemical+and+methodological+validation.">Cortisol detection in fish scales by enzyme immunoassay: biochemical and methodological validation.</a> Journal of Applied Ichthyology. 34, 1-4 (2018).</li><li>Bertotto, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+matrices+for+cortisol+measurement+in+fish.">Alternative matrices for cortisol measurement in fish.</a> Aquaculture Research. 41, 1261-1267 (2010).</li><li>Ghassemi Nejad, J., Jeong, C., Shahsavarani, H., Sung, I. K., Lee, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embedded+dental+cortisol+content:+a+pilot+study.">Embedded dental cortisol content: a pilot study.</a> Endocrinology &amp; Metabolic Syndrome. 5, 240 (2016).</li><li>Pankhurst, N. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+endocrinology+of+stress+in+fish:+an+environmental+perspective.">The endocrinology of stress in fish: an environmental perspective.</a> General and Comparative Endocrinology. 170, 265-275 (2011).</li><li>Ghassemi Nejad, J., Kim, W. B., Lee, B. H., Sung, K. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coat+and+hair+color:+hair+cortisol+and+serotonin+levels+in+lactating+Holstein+cows+under+heat+stress+conditions.">Coat and hair color: hair cortisol and serotonin levels in lactating Holstein cows under heat stress conditions.</a> Animal Science Journal. 88, 190-194 (2017).</li><li>Baker, M. R., Gobush, K. S., Vynne, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+factors+influencing+stress+hormones+in+fish+and+wildlife.">Review of factors influencing stress hormones in fish and wildlife.</a> Journal of Nature Conservation. 21, 309-318 (2013).</li><li>Aerts, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scales+tell+a+story+on+the+stress+history+of+fish.">Scales tell a story on the stress history of fish.</a> PLoS One. 10, e0123411 (2015).</li><li>Heimb&#252;rge, S., Kanitz, E., Otten, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+hair+cortisol+for+the+assessment+of+stress+in+animals.">The use of hair cortisol for the assessment of stress in animals.</a> General and Comparative Endocrinology. , 10-17 (2019).</li><li>Ghassemi Nejad, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparing+hair+cortisol+concentrations+from+various+body+sites+and+serum+cortisol+in+Holstein+lactating+cows+and+heifers+during+thermal+comfort+zone.">Comparing hair cortisol concentrations from various body sites and serum cortisol in Holstein lactating cows and heifers during thermal comfort zone.</a> Journal of Veterinary Behavior: Clinical and Application Research. 30, 92-95 (2019).</li><li>Bussy, U., Wassink, L., Scribner, K. T., Li, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+cortisol+in+lake+sturgeon+(Acipenser+fulvescens)+eggs+by+liquid+chromatography+tandem+mass+spectrometry.">Determination of cortisol in lake sturgeon (Acipenser fulvescens) eggs by liquid chromatography tandem mass spectrometry.</a> Journal of Chromatography B. 1040, 162-168 (2017).</li><li>SAS. 1999. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> SAS. User's Guide (Version 8.01 Edition). , (1999).</li><li>Barton, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+in+fishes:+a+diversity+of+responses+with+particular+reference+to+changes+in+circulating+corticosteroids.">Stress in fishes: a diversity of responses with particular reference to changes in circulating corticosteroids.</a> Integrative and Comparative Biology. 42, 517-525 (2002).</li><li>Ghassemi Nejad, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+hair+and+blood+cortisol+in+sheep+and+dairy+cattle+using+RIA+and+ELISA+assay:+a+comparison.">Measuring hair and blood cortisol in sheep and dairy cattle using RIA and ELISA assay: a comparison.</a> Biological Rhythm Research. Accepted. , (2019).</li></ol>

Mersin balığı bazen "yaşayan fosil" olarak adlandırılır, çünkü geçmiş bin yıl boyunca birkaç adaptasyon sergilemiştir. Mersin balığı cinsi Acipenser havyar üreten 27 tür içerir; ancak, üç tür (beluga, baerii ve sevruga) küresel havyar kaynağının çoğunu üretir. Mersin balığı aşırı avlanmaya ve doğal yaşam alanlarına müdahaleye karşı savunmasızdır ve bu nedenle diğer türlere göre daha kritik tehlike altındadır. Mersin balığı, 150 milyon yıldır var olan en eski...

Kortizol hayvan stresinin güvenilir bir göstergesidir. Kortizol ekstraksiyon stres düzeyleri ve stres genel desenleri izlemek için araştırmacılar için geçerli bir çerçeve sağlar. Örneğin, önceki çalışmalarda insanlarda çeşitli yöntemler kullanarak saç kortizol ölçümleri metodolojik doğrulama yaptık1,2, maymunlar3,4, sığır5, koyun6, ve japon balığı7,8. Balık türlerinde pul, deri mukusu, dışkı ve kan9 gibi matrislerde kortizol ölçümlerinin balık sağlığı hakkında bilgi sağladığı gösterilmiştir. Kan örneklemesi sorunlu olduğunda veya pullar eksik olduğunda kortizol ekstraksiyonu için alternatif matrislere ihtiyaç vardır. Balıklarda, alternatif matrisler çene kemiği içerebilir, insan diş benzer sert bir doku10.
Balık stres düzeylerini belirlemek için yeni matrislerin ve doğrulanmış tekniklerin geliştirilmesi, mersin balığının çevresel stres faktörlerine uzun süre maruz kalarak karşılaşabileceği havyar endüstrisinin özellikle ilgisini çekiyor11. Mersin balığının cinsiyeti 2 yaşından önce belirlenemez ve mersin balığının pulu yoktur. Kortizol yavaş yavaş büyüme aşamasında katı matrisler birikir çünkü2,7,12, yüzgeçleri ve çene kemikleri gibi sert matrisler uzun vadeli kortizol birikimi verileri stres içine anlayış sağlayabilir farklı büyüme aşamalarında düzeyleri. Buna karşılık, kan kortizol düzeyleri ölüm sırasında stres düzeylerinin bir anlık sağlamak ve doğru uzun vadeli yetiştirme koşulları sırasında stres temsil edemez13,14. Havyar pazarında artan rekabet ile, uzun vadeli yetiştirme sırasında mersin balığı türleri arasında sağlıklı yumurta üretimi için stres koşullarını iyileştirmek için yeni yaklaşımlar (8-12 yıl veya daha uzun) araştırma giderek daha önemli bir alandır. Mersin balığının yüksek maliyeti nedeniyle, hasat edilen numuneler son derece pahalıdır (türlere ve büyüme aşamasına bağlı olarak olgun balık başına 8.000-15.000 $), araştırma projeleri için sınırlayıcı bir faktördür. Ancak, mersin balığı yüzgeçleri ve çene kemiklerinden kortizol ekstraksiyonu için uygun bir tekniğin geliştirilmesi, hem balık yetiştiriciliği sistemlerine hem de yabani balıklarda hem tüketim hem de tüketim için mersin balığı yumurtalarının kalitesini ve hasatını iyileştirmek için yararlı bir şekilde uygulanabilir. Koruma.
Güvenilir sonuçlar sağlamanın yanı sıra6,uygun bir kortizol ekstraksiyon tekniğinin seçilmesi, numune hazırlama sırasında matriste bulunan diğer bileşiklerin çıktıyı şaşırtmamasını sağlamak için kritik öneme sahiptir, bu da tutarsız sonuçlar. Yüzgeç ve çene kemiği kortizol düzeylerinin çevredeki sudaki hormon seviyelerinden etkilenip etkilenmediğini belirlemek de aynı derecede önemlidir. Heimbürge ve ark.15, yaş, cinsiyet, gebelik, mevsim, renk12ve kortizol16ayıklanır vücut bölgesi de dahil olmak üzere bir dizi faktör kortizol düzeylerini etkileyebilir önerdi . Ancak, balık vücut matris8 kortizol ekstraksiyon solventler yıkama etkileri hakkında çok az bilgi mevcuttur,ve mersin balığı bu etkileri üzerinde hiçbir, mersin balığı yumurta ları hariç17.
Mersin balığının yüzgeçlerinden ve çene kemiklerinden bazal kortizol düzeylerinin analiz edilmesi balıkların ötenaziye geçirilmelerini gerektirse de, bu yaklaşım canlı mersin balığında kan örneklemesi için gerekli invaziv teknikleri gerektirmez. Yüzgeç ve çene kemiği örnekleri kolayca toplanır ve bu dokulardan çıkarma işlemi hızla yapılabilir. Benzer şekilde, hormon ekstraksiyon ve analiz basit ve biraz özel ekipman gerektirir.
Bu çalışmada, balık yüzgeçlerinden ve çene kemiklerinden kortizol çıkarılması, yıkanması ve tayini için yeni ve kolay uygulanan bir teknik sunmaktayız, bu matrislerden ölçülen kortizol düzeylerinin stres olarak güvenilir bir şekilde kullanılıp kullanılamayacağı saptanmak amacıyla Gösterge. Bu tekniğin avantajları kolay ve non-invaziv8 yaklaşım, daha az veri varyasyonu ve güvenilir çıkış1,6,8,17; bu teknik mersin balığı gibi pulsuz balık türleri için geçerlidir. Bu teknik, balığın kesilmesini, uygun yıkama çözücülerinin seçimi2,4, numunelerin uygun şekilde öğütülmesi3,5, profesyonel enzime bağlı immünosorbent test (ELISA) gerektirir. uygulama5,7, ve katı matrisler içine kortizol kaynaklarının dahil geniş bilgi6.
Beluga (Huso huso), Sibirya (Acipenser baerii), ve sevruga (A. stellatus ), her tür için standart çevre koşulları altında. H. huso çene kemikleri de mersin balığı stresdeğerlendirmek için kullanılmıştır. Bu, mersin balığı çene kemiklerindeki kortizol düzeylerini ölçen ilk çalışmadır. Bu çalışmanın sonuçları, cinsiyet belirlemeden önce erken büyüme aşamasında (~1 yıl) mersin balığı türleri için karşılaştırmalı kortizol verileri sağlayacaktır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:654px;" width="653">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Disposal latex surgical gloves</td>
			<td style="width:222px;">Ansell</td>
			<td style="width:137px;">63754090</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Platform scale-electronic weighing 100kg</td>
			<td>Baskoolnikoo</td>
			<td>101 EM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Serological pipette to deliver up to 24 mL</td>
			<td style="width:222px;">Becton Dickinson Falcon</td>
			<td style="width:137px;">35-7550</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:295px;">Micro plate reader with 450 nm and 490 to 492 nm reference filters</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>8041000</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Reagent reservoirs</td>
			<td>BrandTech</td>
			<td>703459</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Zipper storage plastic bag&#160;</td>
			<td>Cleanwrap</td>
			<td>30cm x100m</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isopropyl alcohol</td>
			<td style="width:222px;">Daejung chemicals &#38; Metals&#160;</td>
			<td style="width:137px;">5035-4400</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Methyl alcohol</td>
			<td style="width:222px;">Daejung chemicals &#38; Metals&#160;</td>
			<td style="width:137px;">5558-4100</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tube rotator- MX-RL-Pro</td>
			<td>DLAB Scientific&#160;</td>
			<td>824-222217777</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Precision pipette to deliver 1.5 and 10 mL</td>
			<td>Eppendorf Research Plus</td>
			<td>M21518D</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160; Precision pipette to deliver 15 and 25 &#956;L</td>
			<td>Eppendorf Research Plus</td>
			<td>R25623C</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:20px;">Weighing paper (107 x 210 mm)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>09-898-12B</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Bead beater, 50/60 Hz 2A</td>
			<td style="width:222px;">GeneReach Biotechnology Corp</td>
			<td style="width:137px;">tp0088</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:295px;">Plate rotator with orbit capable of 500 rpm</td>
			<td style="width:222px;">Hangzhou Miu Instrument&#160;</td>
			<td style="width:137px;">MU-E30-1044</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:295px;">Disposable polypropylene tubes to hold at least 24 mL</td>
			<td style="width:222px;">Hyundai Micro&#160;</td>
			<td style="width:137px;">H20050</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fume hood</td>
			<td>Kwang Dong Industrial</td>
			<td>KD 901-22128175</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro-centrifuge capable of 1500 x g</td>
			<td style="width:222px;">Labo Gene</td>
			<td style="width:137px;">&#160;9.900.900.729</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mini vortex mixer</td>
			<td>LMS</td>
			<td>VTX-3000L&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Lotte aluminum foil roll&#160;</td>
			<td>Lotte Aluminum</td>
			<td>B0722X5FK5</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Digital scale</td>
			<td style="width:222px;">Mettler Toledo&#160;</td>
			<td style="width:137px;">&#160;ME204</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ultrapure water</td>
			<td style="width:222px;">MDM</td>
			<td style="width:137px;">MDM-0110</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pipette tips</td>
			<td>Neptune Scientific</td>
			<td>REF 2100.N</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Large fish net</td>
			<td>Pond H2O</td>
			<td>Hoz135&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Salivary cortisol kit</td>
			<td>Salimetrics</td>
			<td>1-3002-4</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:20px;">Bone cutting forceps</td>
			<td>Sankyo</td>
			<td>26-188A</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:295px;">Precision multichannel pipette to deliver 50 &#956;L and 200 &#956;L</td>
			<td>VITLAB</td>
			<td>18A68756</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Towel</td>
			<td style="width:222px;">Yuhan Kimberly</td>
			<td style="width:137px;">1707921546</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:20px;">Tissue paper (107 &#215; 210)</td>
			<td style="width:222px;">Yuhan Kimberly</td>
			<td style="width:137px;">41117</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cortisol extraction from sturgeon fin and jawbone matrices

Bu çalışmanın amacı, iki yıkama çözücüsi (su ve izopropanol) kullanarak mersin balığı yüzgeçlerinden kortizol çıkarılması için bir teknik geliştirmek ve üç ana mersin balığı türü arasında fin kortizol düzeylerindeki farklılıkları ölçmektir. Yüzgeçler yedi beluga(Huso huso),yedi Sibirya(Acipenser baerii)ve beş sevruga(A. stellatus)olmak üzere 19 kurban mersin balığından hasat edilmiştir. Mersin balıkları İran çiftliklerinde 2 yıl (2017-2018) yetiştirildi ve Güney Kore'de kortizol ekstraksiyon analizi yapıldı (Ocak-Şubat 2019). Beş H. huso çene kemikleri de kortizol ekstraksiyonu için kullanılmıştır. Veriler SAS ortamında genel doğrusal model (GLM) yordamı kullanılarak analiz edildi. Varyasyonun intra-ve inter-assay katsayıları sırasıyla 14.15 ve 7.70 idi. Kısaca kortizol ekstraksiyon tekniği, numunelerin (300 ± 10 mg) 3 mL çözücü (ultrasaf su ve izopropanol) ile iki kez yıkanması, 80 rpm'de 2,5 dakika boyunca döndürülmesi, yıkanmış numunelerin oda sıcaklığında (22-28 °C) 7 gün boyunca havayla kurutulması, daha fazla kuruma 32 dakika boyunca 50 Hz'de boncuk çırpıcı kullanan ve toz haline getirerek kurutulmuş totoya 1,5 mL metanol (75 ± 5 mg) ve oda sıcaklığında 18 saat boyunca yavaş döndürme (40 rpm) sürekli karıştırma ile. Ekstraksiyondan sonra numuneler santrifüj (10 dk için 9.500 x g) ve 1 mL supernatant yeni bir mikrosantrifüj tüpüne (1.5 mL) aktarıldı, metanolbuharlaştırmak için 38 °C'de inkübe edildi ve enzime bağlı immünosorbent analizi (ELISA) ile analiz edildi. . Yüzgeç kortizol düzeylerinde türler arasında veya yıkama çözücüleri arasında yüzgeç ve çene kemiği kortizol düzeylerinde fark gözlenmedi. Bu çalışmanın sonuçları mersin balığı çene kemiği matrisinin katı matrisler için umut verici bir alternatif stres göstergesi olduğunu göstermektedir.

Sunulan fin kortizol çıkarma tekniği geliştirildi ve bu çalışmada üç mersin balığı türü kullanılarak doğrulandı. Yıkama çözücüleri olarak ultrasaf su ve izopropanol kullanılarak elde edilen kortizol düzeyleri karşılaştırıldı(Şekil 2). H. huso çene kemiklerinden kortizol, mersin balığı çene kemiklerinin yüzgeçlere alternatif bir matris olarak kullanılıp kullanılamayacağı incelendi. Çözücü, mersin balığ?...

Watch this Scientific Journal Video about Cortisol Extraction from Sturgeon Fin and Jawbone Matrices at JoVE.com 

Cortisol Extraction from Sturgeon Fin and Jawbone Matrices (Video) | JoVE 

Bu çalışmada mersin balığı türlerinin yüzgeci nden ve çene kemiğinden kortizol çıkarılması için bir protokol sunmuz. Fin ve çene kemiği kortizol düzeyleri, ELISA tahlilleri ile takip eden iki yıkama çözücüsi karşılaştırılarak daha fazla incelendi. Bu çalışma, yeni bir stres göstergesi olarak çene kemiği kortizol fizibilite pilot.

Mersin Balığı Fin ve Çene Kemiği Matrislerinden Kortizol Ekstraksiyonu

The aims of this study were to develop a technique for the extraction of cortisol from sturgeon fins using two washing solvents (water and isopropanol) ...

Yöntemimiz yeni olmayan arsa ve saç matrisk kortizol ölçmek için çok sayıda gelecekteki çalışmalar için bir platform olabilir yeni bir alternatif stres göstergesi tanıttı. Bu tekniğin avantajları sadeliği ve kesilen hayvanlarda bile stres düzeylerini değerlendirmek için kullanılabilme yeteneğidir. Bu tekniği kullanarak yüksek kortizol düzeyleri ve sağlıklı hayvanlar veya insanlar arasında bir ilişki kurulması bazı hastalıkların tanısı ile yardımcı olabilir.Bu yöntem aynı zamanda örnek yaşam süresi içinde stres düzeylerini değerlendirmek için bu eski fosiller gibi asırlık biyolojik örnekleri incelemek için kullanılabilir. Kortizol ekstraksiyonu için, numuneleri tek tek 15 mililitrelik konik tüplere yerleştirmeden önce, her numunenin 300 artı veya eksi 10 miligramını dijital analitik ölçekte 0,0001 doğrulukla tartın. Her numune tüpüne üç mililitre izopropanol ekleyin ve kortizolü yıkamak ve olası dış kirlenmeyi gidermek için tüpleri dakikada 80 dönüşte 2,5 dakika döndürün.Son yıkamadan sonra, numuneleri her yıkama için taze ultra saf su kullanılarak gösterildiği gibi üç kez daha yıkamadan önce numuneleri oda sıcaklığında yedi gün boyunca hava kurutun. Kurutulmuş yüzgeç veya çene kemiği örnek 75 artı veya eksi beş miligram tartMak ve nihayet 32 dakika boyunca 50 hertz örnek öğütmek için bir boncuk çırpıcı kullanın. Daha sonra, toz yüzgeç veya çene kemiği her tüp metanol 1.5 mililitre teslim ve oda sıcaklığında 18 saat boyunca dakikada 40 rotasyonlar bir tüp rotator üzerinde örnekleri yerleştirin.Kortizol ekstraksiyonundan sonra, numune dokularını santrifüj ile tortulat. Ve her örnekten tabaka içeren sarımsı, organik kortizolün üst mililitresini 1,5 mililitrelik mikro santrifüjlü tüplere aktarın. Kortizol örneklerini bir gecede duman kaputunda 38 derecede kurutun ve metanol buharlaşın.Ertesi sabah, her tüp ve girdap ve kortizol toplamak için örnekleri santrifüj 400 mikrolitre PBS ekleyin. ELISA Analizi için, çıkarılan her standart kortizol numunesinin 25 mikrolitresini yükleyin ve 96 kuyulu ELISA plakasının uygun kuyularına yinelenen kontrol edin. Sıfır olarak hizmet etmek ve her spesifik olmayan bağlayıcı kuyuya hizmet etmek için 25 mikrolitre Assay diluent'i iki kuyuya yükleyin.15 mikrolitre enzimi 24 mililitre Assay dilüent ile karıştırın ve her kuyuya 200 mikrolitre eşlegen ekleyin. Dakikada 500 dönüşte plakayı beş dakika boyunca bir rotator üzerinde karıştırın. Ardından oda sıcaklığında bir saatlik kuluçka.Kuluçka sonunda, iyi başına 1x Yıkama Tampon 300 mikrolitre ile plaka dört kez yıkayın. Tampon atmak ve kağıt havlu yığını üzerinde plaka lekeleme her yıkama dan sonra hızlı bir şekilde lavabo üzerinde plaka ters. Son yıkamadan sonra, her kuyuya 200 mikrolitre TMB substrat çözeltisi ekleyin ve plakayı dakikada 500 dönüşte beş dakika rotatörüzerine yerleştirin.Karıştırdıktan sonra, ışıktan korunan oda sıcaklığında 25 dakika boyunca plakakuluçka. Kuluçka sonunda, her kuyuya 50 mikrolitre stop çözeltisi ekleyin. Ve dakikada 500 dönüşler veya tüm kuyular yeşilden sarıya dönene kadar üç dakika boyunca rotator üzerinde plaka içeriğini karıştırın.Daha sonra, örneklerin optik yoğunluğunu okuyun ve her örnekteki kortizol seviyelerini miligram başına pikograma dönüştürmek için mikro plaka yazılımını kullanın. Bu temsili analizde, izopropanol ile yıkanmış yüzgeç örneklerinde kortizol düzeyleri su ile yıkananlara göre daha yüksek olmakla birlikte, mersin türü arasında fin kortizol düzeylerinde anlamlı bir farklılık gözlenmemiştir. Yıkama çözücüleri ile mersin balığı türleri arasında anlamlı bir etkileşim yoktu.H.Huso çene kemiklerinden gelen kortizollerin incelenmesi, mersin balığı çene kemiklerinin yüzgeçlere alternatif bir matris olarak kullanılıp kullanılamayacağını belirlemek için yıkama çözücüsünün H.Huso'nun mersin balığında ölçülen kortizol seviyesi üzerinde önemli bir etkisi olmadığını ortaya koymuştur. Ayrıca, veriler test edilen üç mersin balığı türünün yüzgeçleri ile H.Huso çene kemikleri arasında yüksek bir benzerlik olduğunu ortaya koymuştur. Numuneleri ince toz haline getirmek ve başarılı bir kortizol ölçümü için uygun bir ticari ELISA Test Kiti kullanmak için boncuk çırpıcıyı kullanmak önemlidir.Kortizol seviyesi ölçümleri çevrenin hayvan biyolojisini nasıl etkilediği hakkında önemli bilgiler sağladığından, bu yöntem dişlerde ve diğer sert matrislerde kortizol saptamasında da kullanılabilir. Bu yöntem, insan süt dişlerinde ve pediatrik endokrinoloji, psiko biyoloji, davranışsal, arkeolojik ve adli çalışmalarda kortizol düzeylerinin değerlendirilmesinde yeni bir yaklaşım olarak kullanılabilir.

Research

JoVE Journal

Environment

Cortisol Extraction from Sturgeon Fin and Jawbone Matrices

Helminth Collection and Identification from Wildlife

Helminth Collection and Identification from Wildlife (Video) | JoVE 

Wild animals are commonly parasitized by a wide range of helminths. The four major types of helminths are &#34;roundworms&#34; (nematodes), ...

Sediment Core Sectioning and Extraction of Pore Waters under Anoxic Conditions

Sediment Core Sectioning and Extraction of Pore Waters under Anoxic Conditions (Video) | JoVE 

Anoksik Koşullarında Tortu Çekirdek Kesit ve Gözenek Waters Ekstraksiyon

We demonstrate a method for sectioning sediment cores and extracting pore waters while maintaining oxygen-free conditions. A simple, inexpensive system is ...

A Simple Method for Automated Solid Phase Extraction of Water Samples for Immunological Analysis of Small Pollutants

A Simple Method for Automated Solid Phase Extraction of Water Samples for Immunological Analysis of Small Pollutants (Video) | JoVE 

Küçük Kirleticilerin İmmünolojik Analizi Su Örneklerinin Otomatik Katı Faz Ekstraksiyon Basit Bir Yöntem

A new method for solid phase extraction (SPE) of environmental water samples is proposed. The developed prototype is cost-efficient and user friendly, and ...

Simultaneous DNA-RNA Extraction from Coastal Sediments and Quantification of 16S rRNA Genes and Transcripts by Real-time PCR

Simultaneous DNA-RNA Extraction from Coastal Sediments and Quantification of 16S rRNA Genes and Transcripts by Real-time PCR (Video) | JoVE 

Gerçek zamanlı PCR ile Kıyı tortulları ve Niceleme 16S rRNA Genler ve Transkriptler eşzamanlı DNA-RNA Ekstraksiyon

Real Time Polymerase Chain Reaction also known as quantitative PCR (q-PCR) is a widely used tool in microbial ecology to quantify gene abundances of ...

Alternative Method of Removing Otoliths from Sturgeon

Alternative Method of Removing Otoliths from Sturgeon (Video) | JoVE 

Sturgeon gelen otolitler Çıkarma Alternatif Yöntem

Extracting the otoliths (ear bones) from fish that have very thick skulls can be difficult and very time consuming. The common practice of making a ...

Extraction and Analysis of Microbial Phospholipid Fatty Acids in Soils

Extraction and Analysis of Microbial Phospholipid Fatty Acids in Soils (Video) | JoVE 

Ekstraksiyon ve Topraklarda Mikrobiyal Fosfolipid Yağ Asitleri Analizi

Phospholipid fatty acids (PLFAs) are key components of microbial cell membranes. The analysis of PLFAs extracted from soils can provide information about ...

Extraction of Structural Extracellular Polymeric Substances from Aerobic Granular Sludge

Extraction of Structural Extracellular Polymeric Substances from Aerobic Granular Sludge (Video) | JoVE 

Aerobik Granül Çamur dan Yapısal Ekstrasellüler polimerik maddelerin çıkarımı

To evaluate and develop methodologies for the extraction of gel-forming extracellular polymeric substances (EPS), EPS from aerobic granular sludge (AGS) ...

Use of a Filter Cartridge for Filtration of Water Samples and Extraction of Environmental DNA

Use of a Filter Cartridge for Filtration of Water Samples and Extraction of Environmental DNA (Video) | JoVE 

Filtrasyon Su Örnekleri ve Çevre DNA Ekstraksiyon için bir Filtre Kartuşu Kullanımı

Recent studies demonstrated the use of environmental DNA (eDNA) from fishes to be appropriate as a non-invasive monitoring tool. Most of these studies ...

A Lipid Extraction and Analysis Method for Characterizing Soil Microbes in Experiments with Many Samples

A Lipid Extraction and Analysis Method for Characterizing Soil Microbes in Experiments with Many Samples (Video) | JoVE 

Çok Örnekli Deneylerde Toprak Mikroplarını Karakterize Etmek İçin Bir Lipid Ekstraksiyon ve Analiz Metodu

Microbial communities are important drivers and regulators of ecosystem processes. To understand how management of ecosystems may affect microbial ...

Extraction of Organochlorine Pesticides from Plastic Pellets and Plastic Type Analysis

Extraction of Organochlorine Pesticides from Plastic Pellets and Plastic Type Analysis (Video) | JoVE 

Plastik Peletlerden Organochlorine Pestisitlerin Çıkarılması ve Plastik Tipi Analizi

Plastic resin pellets, categorized as microplastics (&#8804;5 mm in diameter), are small granules that can be unintentionally released to the environment ...