Name: performing human skeletal muscle xenografts in immunodeficient mice
Uploaded: 2019-09-16T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Performing Human Skeletal Muscle Xenografts in Immunodeficient Mice at JoVE.com

यह काम Myositis एसोसिएशन और पीटर बक फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया गया था. हम डॉ युआनफान झांग को उसकी विशेषज्ञता और जेनोग्रैफ्ट सर्जिकल तकनीक में प्रशिक्षण साझा करने के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं।

मानव विषयों से अनुसंधान नमूनों के सभी उपयोग जॉन्स हॉपकिंस संस्थागत समीक्षा बोर्ड (आईआरबी) द्वारा प्रतिभागियों के अधिकारों और कल्याण की रक्षा के लिए अनुमोदित किया गया था। सभी पशु प्रयोगों जॉन्स हॉपकि...

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	<li>Wong, C. H., Siah, K. W., Lo, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+clinical+trial+success+rates+and+related+parameters.">Estimation of clinical trial success rates and related parameters.</a> Biostatistics. , 1-14 (2018).</li><li>Hay, M., Thomas, D. W., Craighead, J. L., Economides, C., Rosenthal, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+development+success+rates+for+investigational+drugs.">Clinical development success rates for investigational drugs.</a> Nature Biotechnology. 32, 40-51 (2014).</li><li>Perel, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+treatment+effects+between+animal+experiments+and+clinical+trials:+systematic+review.">Comparison of treatment effects between animal experiments and clinical trials: systematic review.</a> BMJ. 334, 1-6 (2007).</li><li>Rubio-Viqueira, B., Hidalgo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+in+vivo+xenograft+tumor+model+for+predicting+chemotherapeutic+drug+response+in+cancer+patients.">Direct in vivo xenograft tumor model for predicting chemotherapeutic drug response in cancer patients.</a> Clinical Pharmacology Therapeutics. 85, 217-221 (2009).</li><li>Roberts, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targetable+Kinase-Activating+Lesions+in+Ph-like+Acute+Lymphoblastic+Leukemia.">Targetable Kinase-Activating Lesions in Ph-like Acute Lymphoblastic Leukemia.</a> New England Journal of Medicine. 371, 1005-1015 (2014).</li><li>Kim, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GDF11+Controls+the+Timing+of+Progenitor+Cell+Competence+in+Developing+Retina.">GDF11 Controls the Timing of Progenitor Cell Competence in Developing Retina.</a> Science. 308, 1927-1930 (2005).</li><li>Sako, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+ligand+binding+functionality+of+the+extracellular+domain+of+activin+receptor+type+IIB.">Characterization of the ligand binding functionality of the extracellular domain of activin receptor type IIB.</a> Journal of Biological Chemisty. 285, 21037-21048 (2010).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+skeletal+muscle+xenograft+as+a+new+preclinical+model+for+muscle+disorders.">Human skeletal muscle xenograft as a new preclinical model for muscle disorders.</a> Human Molecular Genetics. 23, 3180-3188 (2014).</li><li>Gabellini, D., Green, M. R., Tupler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inappropriate+Gene+Activation+in+FSHD+:+A+Repressor+Complex+Binds+a+Chromosomal+Repeat+Deleted+in+Dystrophic+Muscle.">Inappropriate Gene Activation in FSHD : A Repressor Complex Binds a Chromosomal Repeat Deleted in Dystrophic Muscle.</a> Cell. 110, 339-348 (2002).</li><li>Lemmers, R. J. L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Unifying+Genetic+Model+for+Facioscapulohumeral+Muscular+Dystrophy.">A Unifying Genetic Model for Facioscapulohumeral Muscular Dystrophy.</a> Science. 329, 1650-1654 (2010).</li><li>Chen, J. C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morpholino-mediated+Knockdown+of+DUX4+Toward+Facioscapulohumeral+Muscular+Dystrophy+Therapeutics.">Morpholino-mediated Knockdown of DUX4 Toward Facioscapulohumeral Muscular Dystrophy Therapeutics.</a> Molecular Therapy. 24, 1405-1411 (2016).</li><li>Medical Research Council. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Aids to the investigation of the peripheral nervous system. , (1943).</li><li>Jones, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+Molecular+Anatomy+of+the+Human+Neuromuscular+Junction.">Cellular and Molecular Anatomy of the Human Neuromuscular Junction.</a> Cell Reports. 21, 2348-2356 (2017).</li></ol>

रोगी व्युत्पन्न xenografts मांसपेशियों की बीमारी मॉडल और पूर्व नैदानिक अध्ययन बाहर ले जाने के लिए एक अभिनव तरीका है। कंकाल की मांसपेशी xenografts बनाने के लिए यहाँ वर्णित विधि तेजी से, सीधा, और reproduible है. एकपक्षीय सर्?...

यह सूचित किया गया है कि नैदानिक परीक्षणों से गुजरने वाले सभी औषध विकास कार्यक्रमों में से केवल 13.8% ही सफल रहे हैं और अनुमोदित चिकित्सा1के लिए नेतृत्व कर रहे हैं . हालांकि इस सफलता की दर 10.4% पहले2की सूचना से अधिक है, वहाँ अभी भी सुधार के लिए महत्वपूर्ण जगह है. नैदानिक परीक्षणों की सफलता दर को बढ़ाने के लिए एक दृष्टिकोण पूर्व नैदानिक अनुसंधान में इस्तेमाल प्रयोगशाला मॉडल में सुधार करने के लिए है। खाद्य एवं औषधि प्रशासन (एफडीए) पशु अध्ययन उपचार प्रभावकारिता दिखाने के लिए और चरण 1 नैदानिक परीक्षणों से पहले विषाक्तता का आकलन करने की आवश्यकता है. तथापि, पशु अध्ययन और नैदानिकपरीक्षणों केबीच उपचार परिणामों में अक्सर सीमित सामंजस्य होता है 3 . इसके अलावा, पूर्व नैदानिक पशु अध्ययन के लिए की जरूरत रोगों है कि एक स्वीकार किए जाते हैं पशु मॉडल है, जो अक्सर दुर्लभ या छिटपुट रोगों के लिए मामला है की कमी में चिकित्सीय विकास के लिए एक दुर्गम बाधा हो सकता है.
मानव रोग के मॉडल के लिए एक तरीका है मानव ऊतक इम्यूनोन्यूमेंड चूहों में प्रत्यारोपण के लिए exografts उत्पन्न करने के लिए है. वहाँ xenograft मॉडल के लिए तीन प्रमुख लाभ कर रहे हैं: सबसे पहले, वे जटिल आनुवंशिक और epigenetic असामान्यताएं है कि मानव रोग है कि अन्य पशु मॉडल में reproduible कभी नहीं हो सकता है में मौजूद recapitulate कर सकते हैं. दूसरा, यदि रोगी के नमूने उपलब्ध हैं तो दुर्लभ या छिटपुट रोगों को मॉडल करने के लिए विदेशी खाद्य पदार्थों का उपयोग किया जा सकता है। तीसरा, xenografts विवो प्रणाली में एक पूर्ण भीतर रोग मॉडल. इन कारणों के लिए, हम hypothesize कि उपचार प्रभावकारिता exeograft मॉडल में परिणाम रोगियों में परीक्षण करने के लिए अनुवाद करने के लिए और अधिक होने की संभावना है. मानव ट्यूमर xenografts पहले से ही सफलतापूर्वक कई myeloma सहित आम कैंसर के लिए उपचार विकसित करने के लिए उपयोग किया गया है, साथ ही व्यक्तिगत रोगियों के लिए व्यक्तिगत चिकित्सा4,5,6, 7.
हाल ही में, xexografts मानव मांसपेशियों की बीमारी8का एक मॉडल विकसित करने के लिए इस्तेमाल किया गया है. इस मॉडल में, मानव मांसपेशी बायोप्सी नमूनों इम्यूनोडेफिडेफिकेशिंग एनआरजी चूहों के हिंदलिंम में प्रतिरोपित करने के लिए xenografts फार्म कर रहे हैं. प्रतिरोपित मानव मायोफाइबर मर जाते हैं, लेकिन विदेशी भाषा में मौजूद मानव मांसपेशी स्टेम कोशिकाओं को बाद में विस्तार और नए मानव मायोफाइबर में अंतर है जो engrafted मानव बेसल पटल repopulate. इसलिए, इन xenografts में पुनर्जीवित मायोफाइबर पूरी तरह से मानव हैं और स्वतः revascularized और माउस मेजबान द्वारा innervated हैं. महत्वपूर्ण बात यह है कि fascioscapulohumeral मांसपेशियों dystrophy (FSHD) रोगी मांसपेशियों के ऊतकों चूहों में प्रत्यारोपित मानव रोग की प्रमुख विशेषताओं recapitulates, अर्थात् DUX4 प्रतिलेखन कारक8की अभिव्यक्ति . FSHD DUX4 के overexpression के कारण होता है, जो epigenetically सामान्य मांसपेशियों के ऊतकों में मौन है9,10. FSHD xenograft मॉडल में, एक DUX4-विशिष्ट morpholino के साथ उपचार सफलतापूर्वक DUX4 अभिव्यक्ति और समारोह को दबाने के लिए दिखाया गया है, और FSHD रोगियों11के लिए एक संभावित चिकित्सीय विकल्प हो सकता है. इन परिणामों से पता चलता है कि मानव मांसपेशियों xenografts मॉडल मानव मांसपेशियों की बीमारी और चूहों में संभावित उपचार का परीक्षण करने के लिए एक नया दृष्टिकोण हैं. यहाँ, हम प्रतिरक्षा की कमी चूहों में मानव कंकाल मांसपेशी xenografts बनाने के लिए शल्य चिकित्सा विधि विस्तार से वर्णन.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>100 mm x 15 mm Petri dish</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Methylbutane</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>O3551-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 x 30 mm micro cover glass</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48393-151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal Weighing Scale</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>SCL- 1015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic Solution</td>
			<td>Corning, Cellgro</td>
			<td>30-004-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoClip System</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>12020-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo Needle Holder</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>12565-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chick embryo extract</td>
			<td>Accurate</td>
			<td>CE650TL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CM1860 UV cryostat</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>CM1860UV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coplin staining jar</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>19-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection Pins</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S13976</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry Ice - pellet</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC9584462</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryonic Myosin antibody</td>
			<td>DSHB</td>
			<td>F1.652</td>
			<td>recommended concentration 1:10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>459836</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30071.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiber-Lite MI-150</td>
			<td>Dolan-Jenner</td>
			<td>Mi-150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>11295-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-mouse IgG1, Alexa Fluor 488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21121</td>
			<td>recommended concentration 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-mouse IgG2b, AlexaFluor 594</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21145</td>
			<td>recommended concentration 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gum tragacanth</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G1128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hams F-10 Medium</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-070-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoacryl Blue Topical Skin Adhesive</td>
			<td>Tissue seal</td>
			<td>TS1050044FP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human specific lamin A/C antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab40567</td>
			<td>recommended concentration 1:50-1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human specific spectrin antibody</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>NCLSPEC1</td>
			<td>recommended concentration 1:20-1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Induction Chamber</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>941444</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>11066-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Irradiated Global 2018 (Uniprim 4100 ppm)</td>
			<td>Envigo</td>
			<td>TD.06596</td>
			<td>Antibiotic rodent diet to protect again respiratory infections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>MWI Veterinary Supply</td>
			<td>502017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>Kimberly-Clark</td>
			<td>34155</td>
			<td>surgical wipes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mapleson E Breathing Circuit</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>921412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mobile Anesthesia Machine</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>901805</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse on Mouse Basic Kit</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>BMK-2202</td>
			<td>mouse IgG blocking reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nail Polish</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NAIR Hair remover lotion/oil</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC0132811</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD-Rag1null IL2rg null (NRG) mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>007799</td>
			<td>2 to 3 months old</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O.C.T. Compound</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>23-730-571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>OX USPEA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (phosphate buffered saline) buffer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>4870500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone Iodine Prep Solution</td>
			<td>Dynarex</td>
			<td>1415</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong&#8482; Gold Antifade Mountant</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P10144 (no DAPI); P36935 (with DAPI)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>17033-211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rimadyl (carprofen) injectable</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>10000319</td>
			<td>surgical analgesic, administered subcutaneously at a dose of 5mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blades - #11</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>10011-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle - #3</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>10003-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo Microscope</td>
			<td>Accu-scope</td>
			<td>3075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Plus Microscope Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture, Synthetic, Non-Absorbable, 30 inches long, CV-11 needle</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>VP-706-X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1ml Syringe (26 gauge, 3/8 inch needle)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>329412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimmer</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>CL9990-KIT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors, 8.0 mm cutting edge</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>15009-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VaporGaurd Activated Charcoal Filter</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>931401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wound clips, 9 mm</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>12022-09</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

performing human skeletal muscle xenografts in immunodeficient mice

पशु अध्ययन में मनाया उपचार प्रभाव अक्सर नैदानिक परीक्षणों में recapitulated किया जा करने के लिए असफल. हालांकि इस समस्या बहुमुखी है, इस विफलता के लिए एक कारण अपर्याप्त प्रयोगशाला मॉडल का उपयोग है. यह पारंपरिक प्रयोगशाला जीवों में जटिल मानव रोगों मॉडल के लिए चुनौतीपूर्ण है, लेकिन इस मुद्दे को मानव xenografts के अध्ययन के माध्यम से दरकिनार किया जा सकता है. शल्य चिकित्सा विधि हम यहाँ का वर्णन मानव कंकाल मांसपेशी xenografts के निर्माण के लिए अनुमति देता है, जो मॉडल मांसपेशियों की बीमारी के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और पूर्व नैदानिक चिकित्सीय परीक्षण बाहर ले जाने के लिए. एक संस्थागत समीक्षा बोर्ड (आईआरबी) अनुमोदित प्रोटोकॉल के तहत, कंकाल की मांसपेशी नमूने रोगियों से प्राप्त कर रहे हैं और फिर NOD-Rag1नलआईएल2आरजेडनल (एनआरजी) मेजबान चूहों में प्रत्यारोपित. इन चूहों परिपक्व लिम्फोसाइटों बनाने के लिए अपनी असमर्थता के कारण प्रत्यारोपण अध्ययन के लिए आदर्श मेजबान हैं और इस प्रकार सेल मध्यस्थता और हास्य अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को विकसित करने में असमर्थ हैं. मेजबान चूहों आइसोफ्लुरेन के साथ anaesthetized कर रहे हैं, और माउस tibialis पूर्वकाल और एक्स्टेंजर digitorum longus मांसपेशियों को हटा रहे हैं. मानव मांसपेशियों का एक टुकड़ा तो खाली tibial डिब्बे में रखा जाता है और peroneus longus मांसपेशियों के निकट और दूर tendons के लिए सीवन. xenografted मांसपेशी स्वतः संवहनी और माउस मेजबान द्वारा innervated है, मजबूत पुनर्जीवित मानव मांसपेशियों है कि पूर्व नैदानिक अध्ययन के लिए एक मॉडल के रूप में सेवा कर सकते हैं में जिसके परिणामस्वरूप.

Yuanfan झांग एट अल द्वारा प्रदर्शन के रूप में, इस शल्य प्रोटोकॉल मानव कंकाल मांसपेशी xenografts8का उत्पादन करने के लिए एक सीधा तरीका है. पुनरुज्जीवित xenografts स्वतः innervated हो जाते हैं और कार्यात्मक संकुचन प्रदर?...

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Performing Human Skeletal Muscle Xenografts in Immunodeficient Mice

जटिल मानव रोगों पारंपरिक प्रयोगशाला मॉडल प्रणालियों में मॉडल के लिए चुनौतीपूर्ण हो सकता है. यहाँ, हम प्रतिरक्षा की कमी चूहों में मानव कंकाल मांसपेशी बायोप्सी के प्रत्यारोपण के माध्यम से मानव मांसपेशियों की बीमारी मॉडल के लिए एक शल्य चिकित्सा दृष्टिकोण का वर्णन.

प्रतिरक्षा कमी चूहे में मानव कंकाल मांसपेशी Xenografts प्रदर्शन

Treatment effects observed in animal studies often fail to be recapitulated in clinical trials. While this problem is multifaceted, one reason for this ...

यह प्रोटोकॉल महत्वपूर्ण है क्योंकि इसका उपयोग मानव कंकाल मांसपेशी ज़ेनोग्राफ्ट बनाने के लिए किया जा सकता है, जिसका उपयोग मांसपेशियों की बीमारी को मॉडल करने और प्रीक्लीनिकल चिकित्सीय परीक्षण करने के लिए किया जा सकता है। यह xenograft मॉडल शोधकर्ताओं को मानव मांसपेशी कोशिका जीव विज्ञान को बेहतर ढंग से समझने और दुर्लभ या अधिग्रहीत मांसपेशियों की बीमारियों के लिए उपन्यास मॉडल विकसित करने के लिए वीवो में मानव मांसपेशियों का अध्ययन करने की अनुमति देता है। एक मानव मांसपेशी बायोप्सी प्राप्त करने के बाद, नमूना एक 100-by-15 मिलीमीटर पेट्री डिश मांसपेशियों के माध्यम से जगह है, और किसी भी शेष प्रावरणी या फैटी ऊतक को दूर करने के लिए एक स्टीरियो माइक्रोस्कोप और सर्जिकल कैंची का उपयोग करें ।मांसपेशियों की बायोप्सी को लगभग सात-बाय-तीन-तीन मिलीमीटर के टुकड़ों में विच्छेदन करें, इस बात का ध्यान रखते हुए कि फाइबर नमूने के भीतर देशांतर की व्यवस्था कर रहे हैं। इसके बाद, बर्फ पर विच्छेदित मांसपेशी युक्त पेट्री डिश को स्थानांतरित करें, और 70% इथेनॉल के 100-बाय-15 मिलीमीटर पेट्री डिश में सिंथेटिक, गैर-अवशोषित टांके रखें। आठ से 12 सप्ताह की उम्र में अंगुली चुटकी के जवाब की कमी की पुष्टि करने के बाद, एनेस्थेटाइज्ड एनेस्थेटाइज्ड एनीकट-रग-गामा माउस, इम्यूनोडिफिशिएंसी जानवर की आंखों में मरहम लगाएं, और टखने से घुटने तक टिबिलिस पूर्ववर्ती के बालों को हटाने के लिए एक ट्रिमर का उपयोग करें।फिर, पोविडोन-आयोडीन समाधान और 70% इथेनॉल के साथ सर्जिकल साइट को कीटाणुरहित करने से पहले एक मिनट के लिए उजागर त्वचा पर डिपिलेटरी क्रीम लागू करें। मानव ऊतक को भ्रष्टाचार करने के लिए, पहले माउस पैर के नीचे टेप करें, और डिस्टल टेंडन में उत्पन्न होने वाले टिबिलिस पूर्वकाल पर सीधे चीरा लगाते हैं और घुटने के नीचे समाप्त होते हैं। मांसपेशियों के ऊतकों से त्वचा को अलग करने के लिए कुंद विच्छेदन का उपयोग करें, और टिबियालिस पूर्वकाल की मांसपेशियों के एपिमायसियम के माध्यम से कम-0.5 मिलीमीटर चीरा बनाने के लिए कैंची का उपयोग करें, टेंडन से शुरू होकर घुटने पर समाप्त होते हैं।टिबिलिस पूर्ववर्ती के डिस्टल टेंडन को काटने के बाद, टिरिस संदंश के साथ कण्डरा को समझें, और मांसपेशियों को घुटने की ओर खींचें। इसके बाद, एक्सटेंसर डिजोरम लॉन्गस के डिस्टल टेंडन को काटें, और एक्सटेंसर डिजोरम को घुटने की ओर खींचें। एक बार पेरोनस लॉन्गस मांसपेशी का समीपस्थ टेंडन दिखाई दे, तो एक्सटेंसर डिजोरम लॉन्गस और टिबिलिस पूर्वकाल को कैंची से हटा दें।जब तक हेमोसेसिस प्राप्त न हो जाए तब तक थोड़ा दबाव लागू करने के लिए पीबीएस के साथ एक सर्जिकल वाइप गीले का उपयोग करें, और समीपस्थ पेरोनियस लॉन्गस टेंडन के माध्यम से एक सीवन को थ्रेड करें, जिससे टेंडन के दोनों तरफ लगभग 1.5 इंच के धागे का टुकड़ा निकल जाए। एक सर्कल बनाने के लिए कस के बिना एक दो हाथ सर्जिकल वर्ग गाँठ की पहली छमाही बनाओ, और सर्कल में एक xenograft जगह है, लूप कस भ्रष्टाचार ऊतक सुरक्षित करने के लिए । पेरोनस लॉन्गस के समीपस्थ टेंडन को ज़ेनोबेड़ा को सीवन करने के लिए वर्ग गाँठ के दूसरे आधे हिस्से को पूरा करें, और डिस्टल टेंडन में वर्ग गाँठ तकनीक को दोहराने के लिए डिस्टल पेरोनस लॉन्गस टेंडन के माध्यम से सीवन को थ्रेड करें।जब भ्रष्टाचार के दोनों सिरों को सुरक्षित कर लिया गया है, तो त्वचा को ज़ेनोबेड़ा मांसपेशी पर खींचें, सर्जिकल गोंद के साथ चीरा सील करें, और गोंद पर दो से तीन सर्जिकल स्टेपल रखें। फिर, माउस को पूर्ण भार शक्ति तक निगरानी के साथ एक गर्म पैड पर एक साफ पिंजरे में रखें। सर्जरी के चार से छह महीने बाद, एक कवर बीकर रखें जिसमें 2-मिथाइलबुटेन के 200 मिलीलीटर को ज़ेनोबेड़ा फसल से पहले कम से कम 30 मिनट के लिए सूखी बर्फ के एक बॉक्स में रखें।जब 2-मिथाइलबुटेन ठंडा हो जाता है, तो अंगुली चुटकी के जवाब की कमी की पुष्टि करें, और एक ट्रिमर और डिपिलेटरी क्रीम के साथ टखने से घुटने तक टिबिलिस पूर्ववर्ती को ओवरलीटिंग करने वाले बालों को हटा दें। जगह में xenograft पकड़े टांके त्वचा के माध्यम से मनाया जाना चाहिए। टेप के साथ पैर सुरक्षित है, और कैंची और आईरिस संदंश का उपयोग करने के लिए xenograft पर त्वचा खोलने के लिए जब तक दोनों टांके खुला रहे हैं ।पेरोनस लॉन्गस मांसपेशी और गैस्ट्रोकनेमियस मांसपेशी के बीच काटने से पहले ज़ेनोबेड़ा के एक तरफ मुक्त करने के लिए ज़ेनोबेड़ा और टिबिया के बीच काटने के लिए एक स्केलपेल का उपयोग करें। डिस्टल सीवन के नीचे और पेरोनस लॉन्गस के डिस्टल टेंडन के माध्यम से काटें, और अंतर्निहित मांसपेशियों के ऊतकों से दूर ज़ेनोबेड़ा को काटने के लिए कैंची का उपयोग करते समय घुटने की ओर सीवन को समझने और मोड़ने के लिए आईरिस संदंश का उपयोग करें। फिर, ज़ेनोबेड़ा और पेरोनस लॉन्गस को हटाने के लिए समीपस्थ सीवन के ऊपर काटने के लिए कैंची का उपयोग करें, और काटे गए नमूने को कार्डबोर्ड के एक छोटे से टुकड़े पर रखें।ऊतक को यथासंभव टांके के करीब पिन करें, जबकि धीरे-धीरे मांसपेशियों को खींचते हुए यह सुनिश्चित करें कि स्नैप-फ्रीजिंग प्रक्रिया के दौरान फाइबर ओरिएंटेशन बनाए रखा जाएगा। जब पिन सुरक्षित रूप से जगह में हैं, तो मांसपेशियों को पिन ऊपर स्लाइड करें ताकि ऊतक कार्डबोर्ड के ठीक ऊपर टिकी हुई हो, और स्नैप एक्सनोबेड़ा को प्री-कूल्ड 2-मिथाइलबुटेन में माइनस 80-डिग्री सेल्सियस स्टोरेज के लिए फ्रीज करें। एक सफल ज़ेनोबेड़ा मानव-विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ पहचाने जाने वाले मानव माइफिबर्स के मजबूत उत्थान को दर्शाता है।मायोफिबर के अनुपात के भीतर सकारात्मक भ्रूण मायोसिन धुंधला इंगित करता है कि पुनर्जनन प्रक्रिया अभी भी चल रही है। इसके विपरीत, खराब सर्जिकल तकनीक या अपर्याप्त नमूना मांसपेशियों के तंतुओं के खराब उत्थान का कारण बन सकता है। एक इडियोपैथिक भड़काऊ मायोपैथी के साथ का निदान रोगी से प्रदर्शन Xenografts चार और छह महीने के संग्रह में पुनर्जीवित मानव myofibers की मध्यम संख्या का प्रदर्शन, और भ्रूण मायोसिन धुंधला छह महीने में बनी हुई है ।जेनोबेड़ा के भीतर भड़काऊ कोशिकाएं भी मौजूद हैं, जैसा कि एच और ई स्टेनिंग द्वारा मनाया गया है। व्यक्तिगत मायोफिबर आकार इडियोपैथिक भड़काऊ मायोपैथी ज़ेनोग्रफ्ट्स में चार से छह महीने के बीच समान होते हैं। 3 से अधिक क्रॉस-सेक्शनल क्षेत्र दिखाने वाले दुर्लभ फाइबर, 500 माइक्रोमीटर चुकता ज़ेनोग्राफ्ट के भीतर देखे जाते हैं, लेकिन इडियोपैथिक भड़काऊ मायोपैथी बायोप्सी में नहीं, यह दर्शाता है कि ज़ेनोग्राफर्स में कुछ मायोफाइबरर स्वस्थ माइफ़िबर के आकार में समान क्रॉस-सेक्शनल क्षेत्र में पुनर्जीवित हो सकते हैं।इस प्रक्रिया के सबसे महत्वपूर्ण भाग प्रारंभिक चीरा बनाने और सफलतापूर्वक एपिमिडियम के माध्यम से काटने के बाद टखने में सभी टेंडन की पहचान कर रहे हैं। ज़ेनोग्राफ्ट की कार्यात्मक योग्यता का आकलन एक माइफइबर को अलग करके और कैल्शियम यात्रियों का परीक्षण करके या विद्युत उत्तेजना के बाद पैदा किए गए मजबूर मापों का प्रदर्शन करके किया जा सकता है।

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Isolation and Quantitative Immunocytochemical Characterization of Primary Myogenic Cells and Fibroblasts from Human Skeletal Muscle

मानव कंकाल की मांसपेशी से प्राथमिक myogenic कोशिकाओं और fibroblasts के अलगाव और मात्रात्मक Immunocytochemical विशेषता

The repair and regeneration of skeletal muscle requires the action of satellite cells, which are the resident muscle stem cells. These can be isolated ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

इवांस नीले रंग की डाई के साथ zebrafish लार्वा कंकाल की मांसपेशी वफ़ादारी का विश्लेषण

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Using Isolated Mitochondria from Minimal Quantities of Mouse Skeletal Muscle for High throughput Microplate Respiratory Measurements

उच्च throughput के Microplate श्वसन माप के लिए माउस कंकाल की मांसपेशी की कम मात्रा से माइटोकॉन्ड्रिया पृथक का उपयोग

Skeletal muscle mitochondria play a specific role in many disease pathologies. As such, the measurement of oxygen consumption as an indicator of ...

Induction of Acute Skeletal Muscle Regeneration by Cardiotoxin Injection

Cardiotoxin इंजेक्शन द्वारा तीव्र कंकाल की मांसपेशी उत्थान की प्रेरण

Skeletal muscle regeneration is a physiological process that occurs in adult skeletal muscles in response to injury or disease. Acute injury-induced ...

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

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चोट प्रेरित वार्धक्य के मूल्यांकन और कंकाल की मांसपेशी में Vivo reprogramming में

Cellular senescence is a stress response that is characterized by a stable cellular growth arrest, which is important for many physiological and ...

Application of Chronic Stimulation to Study Contractile Activity-induced Rat Skeletal Muscle Phenotypic Adaptations

सिकुड़ा गतिविधि-प्रेरित चूहे कंकाल मांसपेशी Phenotypic रूपांतरों का अध्ययन करने के लिए पुरानी उत्तेजना के आवेदन

Skeletal muscle is a highly adaptable tissue, as its biochemical and physiological properties are greatly altered in response to chronic exercise. To ...

Identification of Skeletal Muscle Satellite Cells by Immunofluorescence with Pax7 and Laminin Antibodies

Pax7 और Laminin एंटीबॉडी के साथ इम्यूनोफ्लोरेसेंस द्वारा कंकाल मांसपेशी उपग्रह कोशिकाओं की पहचान

Immunofluorescence is an effective method that helps to identify different cell types on tissue sections. In order to study the desired cell population, ...

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

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Vivo में मांसपेशी की इमेजिंग- Drosophila कोषस्थों में पट्टा Morphogenesis

Muscles together with tendons and the skeleton enable animals including humans to move their body parts. Muscle morphogenesis is highly conserved from ...

Isolation, Culture, Characterization, and Differentiation of Human Muscle Progenitor Cells from the Skeletal Muscle Biopsy Procedure

अलगाव, संस्कृति, चरित्र, और कंकाल स्नायु बायोप्सी प्रक्रिया से मानव स्नायु संतति कोशिकाओं के भेदभाव

The use of primary human tissue and cells is ideal for the investigation of biological and physiological processes such as the skeletal muscle ...

Isolation and Differentiation of Primary Myoblasts from Mouse Skeletal Muscle Explants

अलगाव और माउस कंकाल मांसपेशी एक्सप्लांट्स से प्राथमिक मायोब्लास्ट्स के भेदभाव

Primary myoblasts are undifferentiated proliferating precursors of skeletal muscle. They can be cultured and studied as muscle precursors or induced to ...