Name: performing human skeletal muscle xenografts in immunodeficient mice
Uploaded: 2019-09-16T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Performing Human Skeletal Muscle Xenografts in Immunodeficient Mice at JoVE.com

이 작품은 근염 협회와 피터 벅 재단에 의해 지원되었다. 우리는 이종이식 외과 기술에 있는 그녀의 전문지식을 공유하고 훈련을 공유해 준 Yuanfan 장 박사에게 감사드립니다.

인간 과목에서 연구 표본의 모든 사용은 참가자의 권리와 복지를 보호하기 위해 존스 홉킨스 기관 검토 위원회 (IRB)에 의해 승인되었다. 모든 동물 실험은 존스 홉킨스 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인 되었다 건강의 국가 학회에 따라 (NIH) 실험실 동물의 관리 및 사용에 대 한 가이드. 수레NOD-Rag1nullIL2rγnull(NRG) 숙주 마우스(8-12주 령)...

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	<li>Wong, C. H., Siah, K. W., Lo, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+clinical+trial+success+rates+and+related+parameters.">Estimation of clinical trial success rates and related parameters.</a> Biostatistics. , 1-14 (2018).</li><li>Hay, M., Thomas, D. W., Craighead, J. L., Economides, C., Rosenthal, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+development+success+rates+for+investigational+drugs.">Clinical development success rates for investigational drugs.</a> Nature Biotechnology. 32, 40-51 (2014).</li><li>Perel, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+treatment+effects+between+animal+experiments+and+clinical+trials:+systematic+review.">Comparison of treatment effects between animal experiments and clinical trials: systematic review.</a> BMJ. 334, 1-6 (2007).</li><li>Rubio-Viqueira, B., Hidalgo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+in+vivo+xenograft+tumor+model+for+predicting+chemotherapeutic+drug+response+in+cancer+patients.">Direct in vivo xenograft tumor model for predicting chemotherapeutic drug response in cancer patients.</a> Clinical Pharmacology Therapeutics. 85, 217-221 (2009).</li><li>Roberts, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targetable+Kinase-Activating+Lesions+in+Ph-like+Acute+Lymphoblastic+Leukemia.">Targetable Kinase-Activating Lesions in Ph-like Acute Lymphoblastic Leukemia.</a> New England Journal of Medicine. 371, 1005-1015 (2014).</li><li>Kim, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GDF11+Controls+the+Timing+of+Progenitor+Cell+Competence+in+Developing+Retina.">GDF11 Controls the Timing of Progenitor Cell Competence in Developing Retina.</a> Science. 308, 1927-1930 (2005).</li><li>Sako, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+ligand+binding+functionality+of+the+extracellular+domain+of+activin+receptor+type+IIB.">Characterization of the ligand binding functionality of the extracellular domain of activin receptor type IIB.</a> Journal of Biological Chemisty. 285, 21037-21048 (2010).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+skeletal+muscle+xenograft+as+a+new+preclinical+model+for+muscle+disorders.">Human skeletal muscle xenograft as a new preclinical model for muscle disorders.</a> Human Molecular Genetics. 23, 3180-3188 (2014).</li><li>Gabellini, D., Green, M. R., Tupler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inappropriate+Gene+Activation+in+FSHD+:+A+Repressor+Complex+Binds+a+Chromosomal+Repeat+Deleted+in+Dystrophic+Muscle.">Inappropriate Gene Activation in FSHD : A Repressor Complex Binds a Chromosomal Repeat Deleted in Dystrophic Muscle.</a> Cell. 110, 339-348 (2002).</li><li>Lemmers, R. J. L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Unifying+Genetic+Model+for+Facioscapulohumeral+Muscular+Dystrophy.">A Unifying Genetic Model for Facioscapulohumeral Muscular Dystrophy.</a> Science. 329, 1650-1654 (2010).</li><li>Chen, J. C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morpholino-mediated+Knockdown+of+DUX4+Toward+Facioscapulohumeral+Muscular+Dystrophy+Therapeutics.">Morpholino-mediated Knockdown of DUX4 Toward Facioscapulohumeral Muscular Dystrophy Therapeutics.</a> Molecular Therapy. 24, 1405-1411 (2016).</li><li>Medical Research Council. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Aids to the investigation of the peripheral nervous system. , (1943).</li><li>Jones, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+Molecular+Anatomy+of+the+Human+Neuromuscular+Junction.">Cellular and Molecular Anatomy of the Human Neuromuscular Junction.</a> Cell Reports. 21, 2348-2356 (2017).</li></ol>

환자 유래 이종이식은 근육 질환을 모델링하고 전임상 연구를 수행하는 혁신적인 방법입니다. 골격 근 이종이식을 만들기 위해 여기에 설명된 방법은 빠르고 간단하며 재현 가능합니다. 일방적 인 수술은 15 ~ 25 분 또는 30 ~ 40 분 에서 양자 간 으로 수행 할 수 있습니다. 양측 이종이식은 추가적인 실험 적 유연성을 제공할 수 있습니다. 예를 들어, 연구원은 하나의 이종이식의 국부적 인 치료를 수?...

임상 시험을 진행중인 모든 약물 개발 프로그램의 13.8 %만이 성공하고 승인 된 치료법으로 이어진다고보고되었습니다1. 이 성공률은 이전에 보고된 10.4%보다 높지만2.여전히 개선의 여지가 있습니다. 임상 시험의 성공률을 높이기 위한 한 가지 접근법은 전임상 연구에 사용되는 실험실 모델을 개선하는 것입니다. 미국 식품의약국(FDA)은 1상 임상 시험 전에 치료 효능을 보여주고 독성을 평가하기 위한 동물 연구를 요구합니다. 그러나, 종종 동물 연구와 임상 시험 사이 치료 결과제한 된일치가 있다 3. 또한, 전임상 동물 연구의 필요성은 허용된 동물 모델이 없는 질병에서 치료 개발을 위한 극복할 수 없는 장벽이 될 수 있으며, 이는 종종 희귀 또는 산발성 질환의 경우이다.
인간 질병을 모델링하는 한 가지 방법은 인간 조직을 면역 결핍 마우스로 이식하여 이종이식을 생성하는 것입니다. 이종이식 모델에는 세 가지 주요 장점이 있습니다: 첫째, 다른 동물 모델에서는 결코 재현할 수 없는 인간 질병에 존재하는 복잡한 유전적 및 후생유전학적 이상을 재현할 수 있습니다. 둘째, 이종이식은 환자 샘플이 제공되는 경우 희귀하거나 산발적인 질병을 모델링하는 데 사용할 수 있습니다. 셋째, 이종이식은 완전한 생체 내 시스템 내에서 질병을 모델링합니다. 이러한 이유로, 우리는 이종이식 모델의 치료 효능 결과가 환자에서 시험으로 번역 될 가능성이 더 높다는 가설을 세워. 인간 종양 이종이식은 이미 다발성 골수종을 포함한 일반적인 암 에 대한 치료법을 개발하는 데 성공적으로 활용되었으며, 개별 환자를 위한 맞춤형치료법4,5,6, 7.
최근, 이종이식은 인간 근육 질환의 모델을 개발하는 데 사용되어왔다 8. 이 모형에서는, 인간 적인 근육 생검 견본은 이종이식을 형성하기 위하여 면역 결핍 NRG 마우스의 뒷다리로 이식됩니다. 이식된 인간 근섬유는 죽지만, 이종이식에 존재하는 인간 근육 줄기 세포는 이후에 이식된 인간 기저 라미나를 다시 채우는 새로운 인간 근섬유로 확장및 분화한다. 따라서, 이러한 이종이식에서 재생된 근섬유는 전적으로 인간이며 마우스 숙성에 의해 자발적으로 재혈관화되고 내심이 생겨납니다. 중요한 것은, 마우스로 이식된 근이영양증(FSHD) 환자 근육 조직은 인간 질환의 주요 특징, 즉 DUX4 전사 인자의발현8을재구성한다. FSHD는 DUX4의 과발현에 의해 발생, 이는 후성 유전학적으로 정상적인 근육 조직에서 침묵9,10. FSHD 이종이식 모델에서, DUX4 특이적 모르폴리노를 함유한 치료는 성공적으로 DUX4 발현 및 기능을 억압하는 것으로 나타났으며, FSHD 환자11에대한 잠재적치료 옵션이 될 수 있다. 이러한 결과는 인간의 근육 이종이식은 인간 근육 질환을 모델링하고 마우스에서 잠재적 인 치료를 테스트하는 새로운 접근 방식임을 보여줍니다. 여기서, 우리는 면역 결핍 마우스에서 인간 골격 근 이종이식을 만들기위한 수술 방법을 자세히 설명합니다.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>100 mm x 15 mm Petri dish</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Methylbutane</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>O3551-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 x 30 mm micro cover glass</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48393-151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal Weighing Scale</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>SCL- 1015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic Solution</td>
			<td>Corning, Cellgro</td>
			<td>30-004-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoClip System</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>12020-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo Needle Holder</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>12565-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chick embryo extract</td>
			<td>Accurate</td>
			<td>CE650TL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CM1860 UV cryostat</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>CM1860UV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coplin staining jar</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>19-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection Pins</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S13976</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry Ice - pellet</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC9584462</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryonic Myosin antibody</td>
			<td>DSHB</td>
			<td>F1.652</td>
			<td>recommended concentration 1:10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>459836</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30071.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiber-Lite MI-150</td>
			<td>Dolan-Jenner</td>
			<td>Mi-150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>11295-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-mouse IgG1, Alexa Fluor 488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21121</td>
			<td>recommended concentration 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-mouse IgG2b, AlexaFluor 594</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21145</td>
			<td>recommended concentration 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gum tragacanth</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G1128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hams F-10 Medium</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-070-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoacryl Blue Topical Skin Adhesive</td>
			<td>Tissue seal</td>
			<td>TS1050044FP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human specific lamin A/C antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab40567</td>
			<td>recommended concentration 1:50-1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human specific spectrin antibody</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>NCLSPEC1</td>
			<td>recommended concentration 1:20-1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Induction Chamber</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>941444</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>11066-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Irradiated Global 2018 (Uniprim 4100 ppm)</td>
			<td>Envigo</td>
			<td>TD.06596</td>
			<td>Antibiotic rodent diet to protect again respiratory infections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>MWI Veterinary Supply</td>
			<td>502017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>Kimberly-Clark</td>
			<td>34155</td>
			<td>surgical wipes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mapleson E Breathing Circuit</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>921412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mobile Anesthesia Machine</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>901805</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse on Mouse Basic Kit</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>BMK-2202</td>
			<td>mouse IgG blocking reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nail Polish</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NAIR Hair remover lotion/oil</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC0132811</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD-Rag1null IL2rg null (NRG) mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>007799</td>
			<td>2 to 3 months old</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O.C.T. Compound</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>23-730-571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>OX USPEA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (phosphate buffered saline) buffer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>4870500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone Iodine Prep Solution</td>
			<td>Dynarex</td>
			<td>1415</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong&#8482; Gold Antifade Mountant</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P10144 (no DAPI); P36935 (with DAPI)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>17033-211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rimadyl (carprofen) injectable</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>10000319</td>
			<td>surgical analgesic, administered subcutaneously at a dose of 5mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blades - #11</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>10011-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle - #3</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>10003-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo Microscope</td>
			<td>Accu-scope</td>
			<td>3075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Plus Microscope Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture, Synthetic, Non-Absorbable, 30 inches long, CV-11 needle</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>VP-706-X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1ml Syringe (26 gauge, 3/8 inch needle)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>329412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimmer</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>CL9990-KIT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors, 8.0 mm cutting edge</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>15009-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VaporGaurd Activated Charcoal Filter</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>931401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wound clips, 9 mm</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>12022-09</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

performing human skeletal muscle xenografts in immunodeficient mice

동물 연구에서 관찰 하는 치료 효과 종종 임상 시험에서 되풀이 실패. 이 문제는 다각적인 것이지만, 이 실패의 한 가지 이유는 부적절한 실험실 모델을 사용하기 때문입니다. 전통적인 실험실 유기체에서 복잡한 인간 질병을 모델링하는 것은 어렵지만,이 문제는 인간 이종이식의 연구를 통해 회피 될 수 있습니다. 우리가 여기에서 설명하는 외과 방법은 근육 질병을 모델링하고 전임상 치료 시험을 실행하기 위하여 이용될 수 있는 인간 골격 근 이종이식의 창조를 허용합니다. 기관 검토 위원회 (IRB) 승인 된 프로토콜에 따라, 골격 근육 표본은 환자로부터 획득 한 다음 NOD-Rag1nullIL2rγnull (NRG) 숙주 마우스로 이식됩니다. 이 마우스는 성숙한 림프톨을 만드는 그들의 무능력 때문에 이식 연구 결과를 위한 이상적인 호스트이고 이렇게 세포 중재되고 체액 적응성 면역 반응을 개발할 수 없습니다. 숙주 마우스는 이소플루란으로 마취되고, 마우스 경질전방 및 경전지성 경골 근육이 제거된다. 인간의 근육의 조각은 다음 빈 경골 구획에 배치하고 peroneus longus 근육의 근위 및 원위 힘줄에 봉합된다. 이종이식 근육은 마우스 숙주에 의해 자발적으로 혈관화되고 내심이 생겨전 임상 연구의 모델로 사용될 수 있는 튼튼하게 재생되는 인간의 근육을 생성합니다.

Yuanfan Zhang 등에서 입증한 바와 같이, 이 외과 프로토콜은 인간 골격 근 이종이식8을생산하는 간단한 방법입니다. 재생된 이종이식은 자발적으로 내면화되고 기능적 수축성을 표시합니다. 또한, FSHD 환자로부터 이식된 근육은 FSHD환자에서관찰된 유전자 발현의 변화를 8.
우리의 경험에서, 대략 7 의 8 대조군 참을성 있는 견본에서 수행된 이?...

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Performing Human Skeletal Muscle Xenografts in Immunodeficient Mice

복잡한 인간 질병은 전통적인 실험실 모형 시스템에서 모델링하는 것이 어려울 수 있습니다. 여기에서, 우리는 면역 결핍 마우스로 인간 골격 근 생검의 이식을 통해 인간 근육 질병을 모델링하는 외과 접근을 기술합니다.

면역 결핍 마우스에서 인간 골격 근 이종이식 수행

Treatment effects observed in animal studies often fail to be recapitulated in clinical trials. While this problem is multifaceted, one reason for this ...

이 프로토콜은 근육 질환을 모델링하고 전임상 치료 테스트를 수행하는 데 사용할 수있는 인간 골격 근 이노 이식을 만드는 데 사용할 수 있기 때문에 중요합니다. 이 xenograft 모형은 연구원이 인간 적인 근육 세포 생물학을 더 잘 이해하고 희소하거나 취득한 근육 질병을 위한 새로운 모형을 개발하기 위하여 생체내에서 인간적인 근육을 공부할 수 있게 합니다. 인간의 근육 생검을 얻은 후, 근육 매체를 포함하는 100-15 밀리미터 페트리 접시에 표본을 배치하고 스테레오 현미경과 수술 가위를 사용하여 남은 근막 또는 지방 조직을 제거합니다.근육 생검을 약 7-3-3밀리미터 조각으로 해부하여 섬유가 시편 내에서 세로로 배열되도록 주의하십시오. 다음으로, 얼음에 해부된 근육을 함유한 페트리 접시를 옮기고, 합성, 흡수할 수 없는 봉합사를 100-15mm 페트리 접시에 70%에탄올로 놓습니다. 8-12주 된 발가락 꼬집어 에 대한 반응의 부족을 확인한 후, 마취 된 NOD-Rag-감마 마우스는 면역 결핍 동물의 눈에 연고를 바르고 트리머를 사용하여 발목에서 무릎까지 티비리얼리스 전방을 덮어 머리카락을 제거합니다.그런 다음, 포비단 요오드 용액과 70 %에탄올로 수술 부위를 소독하기 전에 노출 된 피부에 1 분 동안 디필 크림을 바르습니다. 인간 조직을 이식하려면 마우스 다리 아래로 첫 번째 테이프를 바르고, 말단 힘줄에서 유래하고 무릎 아래에서 종료되는 티비알리스 전방에 직선 절개를 합니다. 무딘 해부를 사용하여 근육을 분리하고 가위를 사용하여 티비알리스 전방 근육의 에피미슘을 통해 0.5 밀리미터 미만의 절개를 하고 힘줄에서 시작하여 무릎에서 끝납니다.티비알리스 전방의 단면 힘줄을 절단 한 후, 홍채 집게로 힘줄을 잡고 무릎을 향해 근육을 당깁니다. 다음으로, 엑스텐소 디지오룸 롱더스의 단면 힘줄을 자르고, 무릎쪽으로 장시간 엑스텐소 리시올을 당깁니다. peroneus longus 근육의 근위 힘줄이 보이면, 가위를 가진 전근 자리 수 와 티비리얼 전방을 제거하십시오.PBS와 함께 젖은 외과 닦기를 사용하여 hemostasis가 달성 될 때까지 약간의 압력을 가하고 근위 peroneus longus 힘줄을 통해 봉합사를 스레드하여 힘줄의 양쪽에 약 1.5 인치 조각을 남깁니다. 원을 형성하기 위해 조인하지 않고 두 손 수술 사각형 매듭의 전반을 확인하고, 접목 조직을 확보하기 위해 루프를 조이고, 원에 이종이 접목을 배치합니다. 사각형 매듭의 나머지 절반은 속내 롱더의 근위 힘줄에 이종이 접기를 봉합하고, 탈구 반쪽 긴 힘줄을 통해 봉합사를 스레드하여 탈모 힘줄에서 정사각형 매듭 기술을 반복한다.접목의 양쪽 끝이 고정되면, xenografted 근육 위에 피부를 당기고, 수술 접착제로 절개를 밀봉하고, 접착제 위에 2 ~ 3 개의 수술 스테이플을 놓습니다. 그런 다음 마우스를 가열 패드에 깨끗한 케이지에 넣고 전체 세척이 끝날 때까지 모니터링합니다. 수술 후 4~6개월 후, 2-메틸부탄 200밀리리터가 들어있는 덮인 비커를 식이식 수확 하기 최소 30분 전에 드라이 아이스 상자에 놓습니다.2-메틸부탄이 식으면 발가락 꼬집어 대한 반응이 부족한지 확인하고, 트리머와 디필 크림으로 발목에서 무릎까지 티비알리스 전방을 덮어 머리를 제거합니다. 제소 이식을 제자리에 두는 봉합사는 피부를 통해 관찰되어야 합니다. 테이프로 다리를 고정하고 가위와 홍채 집게를 사용하여 두 봉합사가 모두 발견 될 때까지 xenograft 위에 피부를 엽니 다.메스를 사용하여 자궁 이식과 경골 사이를 절단하여 복상 동맥 긴 근육과 위트로테네미악 근육 사이를 절단하기 전에 xenograft의 한쪽을 자유롭게하십시오. 불사조 봉합사 아래와 속의 종말 힘줄을 통해 잘라, 그리고 아이리스 집게를 사용하여 잡고 기본 근육 조직에서 멀리 제노 이식을 절단 하는 동안 무릎쪽으로 봉합사를 편향. 그런 다음 가위를 사용하여 근위 봉합사 위로 잘라 이종이 이식과 속내 롱러스를 제거하고 수확한 표본을 작은 판지에 놓습니다.근육을 부드럽게 스트레칭하면서 가능한 한 봉합사에 가까운 조직을 고정하여 스냅 동결 과정에서 섬유 방향이 유지되도록 합니다. 핀이 단단히 고정되어있을 때, 조직이 골판지 바로 위에 놓여 있도록 핀위로 근육을 밀어 내고, 영하 80도 저장을 위해 미리 냉각 된 2 메틸 부탄에서 xenograft를 고정합니다. 성공적인 이노이식은 인간 특정 항체로 확인된 인간 근섬유의 강력한 재생을 보여줍니다.양근섬유의 비율 내에서 염색하는 양성 배아 묘신은 재생 과정이 여전히 진행 중임을 나타냅니다. 대조적으로, 나쁜 외과 기술 또는 부적당한 견본은 근육 섬유의 가난한 재생으로 이끌어 낼 수 있습니다. 특발성 염증성 근병증으로 진단된 환자로부터 수행된 제노이식은 4개월 과 6개월 컬렉션에서 재생된 인간 근섬유의 적당한 수를 나타내며, 배아 근신 얼룩은 6개월에 지속된다.염증 성 세포는 또한 H와 E 염색에 의해 관찰된 바와 같이, xenograft 안에 존재합니다. 개별 근섬유 크기는 특발성 선동적인 근병증 xenografts에서 4 그리고 6 달 사이에서 유사합니다. 3, 500 마이크로미터보다 큰 단면 영역을 나타내는 희귀 섬유는 제곱된 제곱된 제곱이식 내에서 관찰되지만 특발성 염증성 근병증 생검에서는 관찰되지 않으며, 제노이트내 의 근섬유 중 일부는 건강한 근섬유와 유사한 크기로 재생될 수 있음을 나타낸다.이 절차의 가장 중요한 부분은 초기 절개가 만들어지고 성공적으로 상피를 통해 절단 한 후 발목의 모든 힘줄을 식별하는 것입니다. 제노이식의 기능적 역량은 단일 심섬유를 효소적으로 분리하고 칼슘 과도를 테스트하거나 전기 자극 에 따른 강제 측정을 수행함으로써 평가될 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Isolation and Quantitative Immunocytochemical Characterization of Primary Myogenic Cells and Fibroblasts from Human Skeletal Muscle

인간의 골격근에서 기본 근육 조직 세포와 섬유 아 세포의 분리 및 정량 면역 세포 화학 특성

The repair and regeneration of skeletal muscle requires the action of satellite cells, which are the resident muscle stem cells. These can be isolated ...

연구

발생학

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

에반스 블루 염료와 Zebrafish의 애벌레 골격 근육 무결성 분석

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Using Isolated Mitochondria from Minimal Quantities of Mouse Skeletal Muscle for High throughput Microplate Respiratory Measurements

높은 처리량 마이크로 호흡 측정을위한 마우스 골격근의 최소 수량에서 미토콘드리아 격리 사용

Skeletal muscle mitochondria play a specific role in many disease pathologies. As such, the measurement of oxygen consumption as an indicator of ...

Induction of Acute Skeletal Muscle Regeneration by Cardiotoxin Injection

Cardiotoxin 주입에 의한 급성 골격 근육 재생 유도

Skeletal muscle regeneration is a physiological process that occurs in adult skeletal muscles in response to injury or disease. Acute injury-induced ...

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

부상-유도 노화 및 골격 근육에서 프로그래밍을 Vivo에서 의 평가

Cellular senescence is a stress response that is characterized by a stable cellular growth arrest, which is important for many physiological and ...

Application of Chronic Stimulation to Study Contractile Activity-induced Rat Skeletal Muscle Phenotypic Adaptations

수축 성 활동 유도 된 쥐 골격 근육 Phenotypic 적응 연구 만성 자극에의 응용

Skeletal muscle is a highly adaptable tissue, as its biochemical and physiological properties are greatly altered in response to chronic exercise. To ...

Identification of Skeletal Muscle Satellite Cells by Immunofluorescence with Pax7 and Laminin Antibodies

Pax7 Laminin 항 체와 면역 형광에 의해 골격 근육 인공위성 세포의 식별

Immunofluorescence is an effective method that helps to identify different cell types on tissue sections. In order to study the desired cell population, ...

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

Vivo에서 근육-힘 줄 Morphogenesis 초파리 번데기에의 이미징

Muscles together with tendons and the skeleton enable animals including humans to move their body parts. Muscle morphogenesis is highly conserved from ...

Isolation, Culture, Characterization, and Differentiation of Human Muscle Progenitor Cells from the Skeletal Muscle Biopsy Procedure

골격 근 생검 절차에서 인간 근육 선조 세포의 격리, 배양, 특성화 및 분화

The use of primary human tissue and cells is ideal for the investigation of biological and physiological processes such as the skeletal muscle ...

Isolation and Differentiation of Primary Myoblasts from Mouse Skeletal Muscle Explants

마우스 골격 근 이식에서 기본 근구의 격리 및 분화

Primary myoblasts are undifferentiated proliferating precursors of skeletal muscle. They can be cultured and studied as muscle precursors or induced to ...