Name: performing human skeletal muscle xenografts in immunodeficient mice
Uploaded: 2019-09-16T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Performing Human Skeletal Muscle Xenografts in Immunodeficient Mice at JoVE.com

Bu çalışma Myositis Derneği ve Peter Buck Vakfı tarafından desteklendi. Dr. Yuanfan Zhang'a ksenogreft cerrahi tekniğindeki uzmanlığını ve eğitimini paylaştığı için teşekkür ederiz.

Katılımcıların haklarını ve refahını korumak için insan deneklerden elde edilen tüm araştırma örneklerinin kullanımı Johns Hopkins Kurumsal İnceleme Kurulu (IRB) tarafından onaylanmıştır. Tüm hayvan deneyleri Johns Hopkins Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu uyarınca onaylanmıştır. Erkek NOD-Rag1nullIL2rγnull</e...

<ol>
	<li>Wong, C. H., Siah, K. W., Lo, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+clinical+trial+success+rates+and+related+parameters.">Estimation of clinical trial success rates and related parameters.</a> Biostatistics. , 1-14 (2018).</li><li>Hay, M., Thomas, D. W., Craighead, J. L., Economides, C., Rosenthal, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+development+success+rates+for+investigational+drugs.">Clinical development success rates for investigational drugs.</a> Nature Biotechnology. 32, 40-51 (2014).</li><li>Perel, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+treatment+effects+between+animal+experiments+and+clinical+trials:+systematic+review.">Comparison of treatment effects between animal experiments and clinical trials: systematic review.</a> BMJ. 334, 1-6 (2007).</li><li>Rubio-Viqueira, B., Hidalgo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+in+vivo+xenograft+tumor+model+for+predicting+chemotherapeutic+drug+response+in+cancer+patients.">Direct in vivo xenograft tumor model for predicting chemotherapeutic drug response in cancer patients.</a> Clinical Pharmacology Therapeutics. 85, 217-221 (2009).</li><li>Roberts, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targetable+Kinase-Activating+Lesions+in+Ph-like+Acute+Lymphoblastic+Leukemia.">Targetable Kinase-Activating Lesions in Ph-like Acute Lymphoblastic Leukemia.</a> New England Journal of Medicine. 371, 1005-1015 (2014).</li><li>Kim, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GDF11+Controls+the+Timing+of+Progenitor+Cell+Competence+in+Developing+Retina.">GDF11 Controls the Timing of Progenitor Cell Competence in Developing Retina.</a> Science. 308, 1927-1930 (2005).</li><li>Sako, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+ligand+binding+functionality+of+the+extracellular+domain+of+activin+receptor+type+IIB.">Characterization of the ligand binding functionality of the extracellular domain of activin receptor type IIB.</a> Journal of Biological Chemisty. 285, 21037-21048 (2010).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+skeletal+muscle+xenograft+as+a+new+preclinical+model+for+muscle+disorders.">Human skeletal muscle xenograft as a new preclinical model for muscle disorders.</a> Human Molecular Genetics. 23, 3180-3188 (2014).</li><li>Gabellini, D., Green, M. R., Tupler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inappropriate+Gene+Activation+in+FSHD+:+A+Repressor+Complex+Binds+a+Chromosomal+Repeat+Deleted+in+Dystrophic+Muscle.">Inappropriate Gene Activation in FSHD : A Repressor Complex Binds a Chromosomal Repeat Deleted in Dystrophic Muscle.</a> Cell. 110, 339-348 (2002).</li><li>Lemmers, R. J. L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Unifying+Genetic+Model+for+Facioscapulohumeral+Muscular+Dystrophy.">A Unifying Genetic Model for Facioscapulohumeral Muscular Dystrophy.</a> Science. 329, 1650-1654 (2010).</li><li>Chen, J. C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morpholino-mediated+Knockdown+of+DUX4+Toward+Facioscapulohumeral+Muscular+Dystrophy+Therapeutics.">Morpholino-mediated Knockdown of DUX4 Toward Facioscapulohumeral Muscular Dystrophy Therapeutics.</a> Molecular Therapy. 24, 1405-1411 (2016).</li><li>Medical Research Council. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Aids to the investigation of the peripheral nervous system. , (1943).</li><li>Jones, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+Molecular+Anatomy+of+the+Human+Neuromuscular+Junction.">Cellular and Molecular Anatomy of the Human Neuromuscular Junction.</a> Cell Reports. 21, 2348-2356 (2017).</li></ol>

Hasta kaynaklı ksenogreftler kas hastalığını modellemek ve klinik öncesi çalışmalar yapmak için yenilikçi bir yoldur. Burada iskelet kası ksenogreftleri oluşturmak için açıklanan yöntem hızlı, basit ve tekrarlanabilir. Tek taraflı ameliyatlar 15-25 dakika, bilateral ameliyatlar 30-40 dakikada yapılabilir. Bilateral ksenogreftler ek deneysel esneklik sağlayabilir. Örneğin, araştırmacılar bir ksenogreft lokalize tedavi gerçekleştirebilirsiniz, diğer bir kontrol olarak sol. NRG fareler, patojen...

Klinik çalışmalardan geçirilen tüm ilaç geliştirme programlarının sadece %13.8'inin başarılı olduğu ve onaylı tedavilere yol açıldığı bildirilmiştir1. Bu başarı oranı daha öncebildirilen%10.4 daha yüksek iken 2 , iyileştirme için hala önemli bir oda var. Klinik çalışmaların başarı oranını artırmak için bir yaklaşım preklinik araştırmalarda kullanılan laboratuvar modellerini geliştirmektir. Gıda ve İlaç İdaresi (FDA) tedavi etkinliğini göstermek ve Faz 1 klinik çalışmalar dan önce toksisite değerlendirmek için hayvan çalışmaları gerektirir. Ancak, genellikle hayvan çalışmaları ve klinik çalışmalar arasında tedavi sonuçlarında sınırlı uyum vardır3. Buna ek olarak, preklinik hayvan çalışmaları için ihtiyaç kabul edilen bir hayvan modeli eksikliği hastalıklarda terapötik gelişim için aşılmaz bir engel olabilir, genellikle nadir veya sporadik hastalıklar için durumdur.
İnsan hastalığını modellemenin bir yolu, insan dokusunu immünoffik farelere naklederek ksenogreft ler üretmektir. Ksenogreft modellerinin üç temel avantajı vardır: Birincisi, diğer hayvan modellerinde asla tekrarlanabilir olmayan insan hastalığında var olan karmaşık genetik ve epigenetik anormallikleri yeniden özetleyebilirler. İkinci olarak, hasta örnekleri mevcutsa nadir veya sporadik hastalıkların modelini yapmak için ksenogreftler kullanılabilir. Üçüncü olarak, ksenogreftler tam bir in vivo sistem içinde hastalığı modeller. Bu nedenlerden dolayı, ksenogreft modellerinde tedavi etkinliği sonuçlarının hastalardaki deneylere daha fazla çevrilme olasılığının daha yüksek olduğunu varsabiliyoruz. İnsan tümör ksenogreftler zaten başarıyla multipl miyelom da dahil olmak üzere ortak kanserler için tedavi geliştirmek için kullanılmıştır, yanı sıra bireysel hastalar için kişiselleştirilmiş tedaviler4,5,6, 7 .
Son zamanlarda, ksenogreftler insan kas hastalığı bir model geliştirmek için kullanılmıştır8. Bu modelde insan kas biyopsisi örnekleri immünopsiyoksun NRG farelerin arka eklerine naklederek ksenogreftler oluşturur. Nakledilen insan miyofiberleri ölür, ancak ksenogreftte bulunan insan kas kök hücreleri daha sonra genişleyen ve engreftlenmiş insan bazal laminasını yeniden dolduran yeni insan miyofiberlerine ayrılır. Bu nedenle, bu ksenogreftlerde rejenere miyolifler tamamen insandır ve fare konakları tarafından kendiliğinden revaskülarve innerve edilir. Önemli olarak, fascioscapulohumeral kas distrofisi (FSHD) hasta kas dokusu fareler içine nakledilen insan hastalığının temel özellikleri özetler, yani DUX4 transkripsiyon faktörüifade 8. FSHD dux4 aşırı ekspresyonu neden olur, hangi epigenetik normal kasdokusundasusturuldu 9,10. FSHD ksenogreft modelinde, DUX4 spesifik morfolino ile tedavi başarıyla DUX4 ifade ve fonksiyonu bastırmak için gösterilmiştir, ve FSHD hastalar için potansiyel bir tedavi seçeneği olabilir11. Bu sonuçlar insan kas ksenogreftlerinin insan kas hastalığını modellemek ve farelerde potansiyel tedavileri test etmek için yeni bir yaklaşım olduğunu göstermektedir. Burada, immünyonfik farelerde insan iskelet kası ksenogreftleri oluşturmak için cerrahi yöntemi ayrıntılı olarak açıklıyoruz.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>100 mm x 15 mm Petri dish</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Methylbutane</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>O3551-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 x 30 mm micro cover glass</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48393-151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal Weighing Scale</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>SCL- 1015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic Solution</td>
			<td>Corning, Cellgro</td>
			<td>30-004-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoClip System</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>12020-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo Needle Holder</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>12565-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chick embryo extract</td>
			<td>Accurate</td>
			<td>CE650TL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CM1860 UV cryostat</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>CM1860UV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coplin staining jar</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>19-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection Pins</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S13976</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry Ice - pellet</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC9584462</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryonic Myosin antibody</td>
			<td>DSHB</td>
			<td>F1.652</td>
			<td>recommended concentration 1:10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>459836</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30071.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiber-Lite MI-150</td>
			<td>Dolan-Jenner</td>
			<td>Mi-150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>11295-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-mouse IgG1, Alexa Fluor 488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21121</td>
			<td>recommended concentration 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-mouse IgG2b, AlexaFluor 594</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21145</td>
			<td>recommended concentration 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gum tragacanth</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G1128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hams F-10 Medium</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-070-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoacryl Blue Topical Skin Adhesive</td>
			<td>Tissue seal</td>
			<td>TS1050044FP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human specific lamin A/C antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab40567</td>
			<td>recommended concentration 1:50-1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human specific spectrin antibody</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>NCLSPEC1</td>
			<td>recommended concentration 1:20-1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Induction Chamber</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>941444</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>11066-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Irradiated Global 2018 (Uniprim 4100 ppm)</td>
			<td>Envigo</td>
			<td>TD.06596</td>
			<td>Antibiotic rodent diet to protect again respiratory infections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>MWI Veterinary Supply</td>
			<td>502017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>Kimberly-Clark</td>
			<td>34155</td>
			<td>surgical wipes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mapleson E Breathing Circuit</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>921412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mobile Anesthesia Machine</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>901805</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse on Mouse Basic Kit</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>BMK-2202</td>
			<td>mouse IgG blocking reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nail Polish</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NAIR Hair remover lotion/oil</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC0132811</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD-Rag1null IL2rg null (NRG) mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>007799</td>
			<td>2 to 3 months old</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O.C.T. Compound</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>23-730-571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>OX USPEA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (phosphate buffered saline) buffer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>4870500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone Iodine Prep Solution</td>
			<td>Dynarex</td>
			<td>1415</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong&#8482; Gold Antifade Mountant</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P10144 (no DAPI); P36935 (with DAPI)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>17033-211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rimadyl (carprofen) injectable</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>10000319</td>
			<td>surgical analgesic, administered subcutaneously at a dose of 5mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blades - #11</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>10011-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle - #3</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>10003-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo Microscope</td>
			<td>Accu-scope</td>
			<td>3075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Plus Microscope Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture, Synthetic, Non-Absorbable, 30 inches long, CV-11 needle</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>VP-706-X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1ml Syringe (26 gauge, 3/8 inch needle)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>329412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimmer</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>CL9990-KIT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors, 8.0 mm cutting edge</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>15009-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VaporGaurd Activated Charcoal Filter</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>931401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wound clips, 9 mm</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>12022-09</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

performing human skeletal muscle xenografts in immunodeficient mice

Hayvan çalışmalarında gözlenen tedavi etkileri genellikle klinik çalışmalarda recapitulated başarısız. Bu sorun çok yönlü olmakla birlikte, bu başarısızlığın nedenlerinden biri yetersiz laboratuvar modellerinin kullanılmasıdır. Bu geleneksel laboratuvar organizmalarında karmaşık insan hastalıkları modeli zor, ama bu konu insan ksenogreftçalışmaları ile atlatılabilir. Burada tanımladığımız cerrahi yöntem, kas hastalığını modellemek ve klinik öncesi terapötik testler yapmak için kullanılabilen insan iskelet kası ksenogreftlerinin oluşturulmasına olanak sağlamaktadır. Kurumsal İnceleme Kurulu (IRB) onaylı protokol uyarınca, iskelet kası örnekleri hastalardan alınarak NOD-Rag1nullIL2rγnull (NRG) host farelere nakledilir. Bu fareler olgun lenfositler yapmak için yetersizlik nedeniyle transplantasyon çalışmaları için ideal konakve bu nedenle hücre aracılı ve humoral adaptif bağışıklık yanıtları geliştirmek mümkün değildir. Konak fareler izofluran ile uyuşturulur ve fare tibialis anterior ve ekstansör digitorum longus kasları kaldırılır. İnsan kasının bir parçası daha sonra boş tibial bölmeye yerleştirilir ve peroneus longus kasının proksimal ve distal tendonlar için dikişli. Ksenogreftli kas spontan vaskülarize ve fare konak tarafından innerve, preklinik çalışmalar için bir model olarak hizmet verebilir sağlam rejenere insan kası ile sonuçlanan.

Yuanfan Zhang ve ark tarafından gösterildiği gibi, bu cerrahi protokol insan iskelet kası ksenogreftler üretmek için basit bir yöntemdir8. Rejenere ksenogreftler kendiliğinden innerve hale gelir ve fonksiyonel kontraktilite gösterir. Ayrıca FSHD hastalarından ksenogreftlenen kas, FSHD hastalarında gözlenen gen ekspresyonundaki değişiklikleri özetler8.
Deneyimlerimize göre, kontrol hasta örneklerinden yapılan 8 ksenogreftten yak...

Watch this Scientific Journal Video about Performing Human Skeletal Muscle Xenografts in Immunodeficient Mice at JoVE.com

Performing Human Skeletal Muscle Xenografts in Immunodeficient Mice

Karmaşık insan hastalıkları geleneksel laboratuvar modeli sistemlerinde modellemek zor olabilir. Burada, insan iskelet kası biyopsilerinin immünyonfik farelere nakli yoluyla insan kas hastalığını modellemek için cerrahi bir yaklaşım tanımlıyoruz.

İmmün eksik farelerde İnsan İskelet Kası Ksenogreftlerinin

Treatment effects observed in animal studies often fail to be recapitulated in clinical trials. While this problem is multifaceted, one reason for this ...

Bu protokol, kas hastalığını modellemek ve klinik öncesi terapötik testler yapmak için kullanılabilen insan iskelet kası ksenogreftlerini oluşturmak için kullanılabildiği için önemlidir. Bu ksenogreft modeli araştırmacılar daha iyi insan kas hücre biyolojisi anlamak ve nadir veya edinilmiş kas hastalıkları için yeni modeller geliştirmek için vivo insan kas çalışma sağlar. Bir insan kas biyopsisi aldıktan sonra, kas orta içeren bir 100-by-15-milimetre Petri çanak örnek yerleştirin ve kalan fasya veya yağ dokusu kaldırmak için bir stereo mikroskop ve cerrahi makas kullanın.Kas biyopsisini yaklaşık 7'ye 3'e 3 milimetrelik parçalara ayırın ve liflerin numune içinde uzunlamasına olarak düzenlenmesine dikkat edin. Daha sonra, buzun üzerinde parçalanmış kas içeren Petri kabını aktarın ve sentetik, emilemeyen dikişleri %70 etanoliçeren 100 ila 15 milimetrelik Petri kabına yerleştirin. Sekiz ila 12 haftalık bir ayak sıkışması yanıt eksikliği doğruladıktan sonra, anestezi NOD-Rag-gama fare, immüneksik hayvanın gözlerine merhem uygulamak, ve diz ayak bileği tibialis anterior örten saç kaldırmak için bir düzeltici kullanın.Daha sonra, povison-iyot solüsyonu ve%70 etanol ile cerrahi bölgeyi dezenfekte etmeden önce bir dakika boyunca maruz kalan cilde tüy dökücü krem uygulayın. İnsan dokusunu aşılamak için, ilk fare bacak aşağı bant, ve tibialis anterior üzerinde düz bir kesi yapmak distal tendon kaynaklanan ve diz altında sonlandırıcı. Kas dokusundan cildi ayırmak için künt diseksiyon kullanın, ve daha az-0.5 milimetrelik kesi tibialis anterior kas epimiyyum yoluyla yapmak için makas kullanın, tendondan başlayıp diz de biten.Tibialis anterior distal tendon kestikten sonra, iris forceps ile tendon kavramak, ve diz doğru kas çekin. Sonra, ekstansör digitorum longus distal tendon kesmek ve diz doğru ekstansör digitorum longus çekin. Peroneus longus kasının proksimal tendonu görünür olduktan sonra ekstansör digitorum longus ve makas ile tibialis anterior çıkarın.Hemostaz elde edilene kadar hafif basınç uygulamak için PBS ile ıslak bir cerrahi silme kullanın ve proksimal peroneus longus tendonundan bir dikiş geçirin, tendonun her iki tarafında yaklaşık 1,5 inçlik bir iplik parçası bırakarak. Bir daire oluşturmak için sıkma olmadan iki el cerrahi kare düğüm ilk yarısında olun ve daire içine bir ksenogreft yerleştirin, greft doku güvenliğini sağlamak için döngü sıkma. Peroneus longus proksimal tendon ksen dikmek için kare düğüm diğer yarısını tamamlamak ve distal tendon kare düğüm tekniği tekrarlamak için distal peroneus longus tendon ile dikiş iplik.Greftin her iki ucu da sabitlendiğinde, ksenogreftli kasın üzerine deriyi çekin, kesiyi cerrahi tutkalla kapatın ve yapıştırıcının üzerine 2-3 cerrahi zımba yerleştirin. Daha sonra fareyi tam yedek alana kadar izleyerek ısıtmalı bir ped üzerinde temiz bir kafese yerleştirin. Ameliyattan 4-6 ay sonra, ksenogreft hasattan önce en az 30 dakika boyunca kuru buz kutusuna 200 mililitre 2-metilbütan içeren kapalı bir kabı yerleştirin.2-metilbütan soğuduktan sonra, ayak sıkışmayanıt eksikliği onaylamak, ve bir düzeltici ve tüy dökücü krem ile ayak bileğinden diz tibialis anterior örten saç kaldırın. Ksenogrefti yerinde tutan dikişler deri de gözlenmelidir. Bacağı bantla sabitleyin ve her iki dikiş ortaya çıkana kadar ksenogreft üzerinde deriyi açmak için makas ve iris forsepskullanın.Peroneus longus kas ve gastroknemius kas arasında kesmeden önce ksenogreft bir tarafı serbest ksenogreft arasında kesmek için bir neşter kullanın. Distal sütür altında ve peroneus longus distal tendonu ile kesin ve altta yatan kas dokusuuzak ksenogreft kesmek için makas kullanırken diz doğru dikiş kavramak ve saptırmak için iris forceps kullanın. Daha sonra, ksenogreft ve peroneus longus kaldırmak için proksimal sütür üzerinde kesmek için makas kullanın ve karton küçük bir parça üzerinde hasat örnek yerleştirin.Lif oryantasyonun ani dondurma işlemi sırasında korunacağını sağlamak için kasları hafifçe gererken dokuyu mümkün olduğunca dikişlere yakın sabitle. Pimler güvenli bir şekilde yerleştirildiğinde, kasları pimleri yukarı kaydırın, böylece doku karton un hemen üzerinde durun ve eksi 80 derece santigrat depolama için önceden soğutulmuş 2-metilbütan'daki ksenogrefti tutturun. Başarılı bir ksenogreft insan ait antikorlar ile tanımlanan insan miyofiberlerinin sağlam bir rejenerasyon gösterir.Miyofenlerin bir oranı içinde pozitif embriyonik miyozin boyama rejenerasyon sürecinin hala devam ettiğini gösterir. Buna karşılık, kötü cerrahi teknik veya yetersiz bir örnek kas liflerinin kötü bir rejenerasyon yol açabilir. İdiyopatik inflamatuar miyopati tanısı alan bir hastadan yapılan ksenogreftler dört ve altı aylık koleksiyonlarda orta sayıda rejenere insan miyofiberi sergiler ve embriyonik miyozin boyama altı ayda devam eder.İnflamatuar hücreler de ksenogreft içinde mevcuttur, H ve E boyama gözlenen gibi. Bireysel miyofiber boyutları idiyopatik inflamatuar miyopati ksenogreftlerinde dört ila altı ay arasında benzerdir. Ksenogreftlerde 3, 500 mikrometre karelik kesitsel alanı gösteren nadir lifler, idiyopatik inflamatuar miyopati biyopsilerinde gözlenmez, bu da ksenogreftlerde bulunan bazı miyoliflerin sağlıklı miyofiberlere benzer boyutta kesitsel alana doğru yenilenebildiğigörülür.Bu işlemin en önemli kısımları, ilk kesi yapıldıktan sonra ayak bileğindeki tüm tendonların tanımlanması ve epimisyumu başarıyla kesmektir. Ksenogreftlerin fonksiyonel yeterliliği, tek miyoliflerin enzimatik olarak izole edilmesi ve kalsiyum geçicilerinin test edilmesi veya elektriksel stimülasyon sonrasında uyarılmış zorunlu ölçümler intibak ettirilerek değerlendirilebilir.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Isolation and Quantitative Immunocytochemical Characterization of Primary Myogenic Cells and Fibroblasts from Human Skeletal Muscle

İnsan İskelet Kası İlköğretim andMyogenic Hücreleri ve Fibroblast İzolasyon ve Kantitatif İmmünositokimyasal Karakterizasyonu

The repair and regeneration of skeletal muscle requires the action of satellite cells, which are the resident muscle stem cells. These can be isolated ...

Gelişim Biyolojisi

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Evans Blue Dye ile Zebra balığı Larva İskelet Kası Bütünlüğü Analizi

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Using Isolated Mitochondria from Minimal Quantities of Mouse Skeletal Muscle for High throughput Microplate Respiratory Measurements

Yüksek verim Mikroplate Solunum Ölçümler Fare İskelet Kası Minimal Miktarları gelen kondriyayı İzole kullanma

Skeletal muscle mitochondria play a specific role in many disease pathologies. As such, the measurement of oxygen consumption as an indicator of ...

Induction of Acute Skeletal Muscle Regeneration by Cardiotoxin Injection

Cardiotoxin Enjeksiyonu ile Akut İskelet Kası Regeneration indüksiyon

Skeletal muscle regeneration is a physiological process that occurs in adult skeletal muscles in response to injury or disease. Acute injury-induced ...

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Yaralanma kaynaklı yaşlanma ve In Vivo kas iskelet yeniden programlama değerlendirilmesi

Cellular senescence is a stress response that is characterized by a stable cellular growth arrest, which is important for many physiological and ...

Application of Chronic Stimulation to Study Contractile Activity-induced Rat Skeletal Muscle Phenotypic Adaptations

Contractile fare faaliyet kaynaklı kas iskelet fenotipik uyarlamalar çalışmaya kronik stimulasyon uygulanması

Skeletal muscle is a highly adaptable tissue, as its biochemical and physiological properties are greatly altered in response to chronic exercise. To ...

Identification of Skeletal Muscle Satellite Cells by Immunofluorescence with Pax7 and Laminin Antibodies

Kas iskelet uydu hücreleri tarafından Pax7 ve Laminin antikorlar ile ayirt tanımlaması

Immunofluorescence is an effective method that helps to identify different cell types on tissue sections. In order to study the desired cell population, ...

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

Vivo Kas-tendon morfogenez Drosophila pupa içinde görüntüleme

Muscles together with tendons and the skeleton enable animals including humans to move their body parts. Muscle morphogenesis is highly conserved from ...

Isolation, Culture, Characterization, and Differentiation of Human Muscle Progenitor Cells from the Skeletal Muscle Biopsy Procedure

İskelet Kas Biyopsisi Prosedüründen İnsan Kas Atası Hücrelerinin İzolasyon, Kültür, Karakterizasyonu ve Farklılaşması

The use of primary human tissue and cells is ideal for the investigation of biological and physiological processes such as the skeletal muscle ...

Isolation and Differentiation of Primary Myoblasts from Mouse Skeletal Muscle Explants

Fare İskelet Kas Ekstranında Primer Miyoblastların İzolasyon ve Farklılaşması

Primary myoblasts are undifferentiated proliferating precursors of skeletal muscle. They can be cultured and studied as muscle precursors or induced to ...