Name: use of an influenza antigen microarray to measure the breadth of serum antibodies across virus subtypes
Uploaded: 2019-07-26T14:45:00
Duration: 8 min 52 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Use of an Influenza Antigen Microarray to Measure the Breadth of Serum Antibodies Across Virus Subtypes at JoVE.com

लेखकों को प्रो डॉन मिल्टन स्वीकार करना चाहते हैं (एप्लाइड सार्वजनिक स्वास्थ्य संस्थान, मैरीलैंड विश्वविद्यालय, कॉलेज पार्क, एमडी, संयुक्त राज्य अमेरिका) मैरीलैंड आईआरबी प्रोटोकॉल के विश्वविद्यालय के तहत मानव सीरा इकट्ठा करने के लिए #313842 DARPA N66001-18-2-4015 P00001 द्वारा वित्त पोषित. लेखकों को भी प्रो फ्लोरियन Krammer स्वीकार करना चाहते हैं (Icahn स्कूल ऑफ मेडिसिन, माउंट Sinai, NY, संयुक्त राज्य अमेरिका) TRIMerized हा और NA एंटीजन ODNI IARPA DJF-15-1200-K-0001725 द्वारा वित्त पोषित प्रदान करने के लिए. एस खान आंशिक रूप से अनुदान KL2 TR001416 के माध्यम से राष्ट्रीय अनुसंधान संसाधन के लिए राष्ट्रीय केंद्र और राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान, स्वास्थ्य के लिए राष्ट्रीय केंद्र द्वारा समर्थित है। सामग्री पूरी तरह से लेखकों की जिम्मेदारी है और जरूरी NIH के आधिकारिक विचारों का प्रतिनिधित्व नहीं करता है.

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लेखकों कोई खुलासे नहीं है.

इन्फ्लूएंजा प्रतिजन microarray प्रोटोकॉल यहाँ वर्णित किसी भी परियोजना है कि कई प्रतिजनों के लिए एंटीबॉडी प्रतिक्रियाओं का विश्लेषण करने की आवश्यकता के लिए अनुकूलनीय है. माइक्रोरेरे प्लेटफार्म का उपयोग किसी भी प्रणाली में व्यक्त प्रोटीन प्रतिजनों के किसी भी वांछित सेट के साथ किया जा सकता है जो 0.1 मिलीग्राम/एमएल या अधिक उपज को प्राप्त कर सकता है जो पहले वर्णित12के रूप में शुद्धि के साथ या बिना अधिक उपज प्राप्त कर सकता है। यदि गैर-शुद्ध प्रोटीन प्रतिजन (उदाहरण के लिए, इन विट्रो प्रतिलेखन और अनुवाद प्रणाली में व्यक्त) सीधे microarrays मुद्रित करने के लिए उपयोग किया जाता है, प्रोटीन अभिव्यक्ति प्रणाली के घटकों (जैसे, ई. कोलाई lysate) के लिए इस्तेमाल बफर अवरुद्ध करने के लिए जोड़ा जाना चाहिए 1:10 इन घटकों के खिलाफ निर्देशित किसी भी एंटीबॉडी को ब्लॉक करने के लिए सीरा और गुणवत्ता नियंत्रण एंटीबॉडी का कमजोर पड़ने। स्लाइड विन्यास सरणी प्रति प्रति प्रति प्रति प्रति जनन की एक उच्च संख्या को समायोजित करने के लिए प्रत्येक स्लाइड पर बड़े पैड की एक कम संख्या के साथ उपलब्ध हैं. इस अध्ययन के लिए, हम एक GeneMachines OmniGrid 100 microarray प्रिंटर है कि पिन है कि सीधे नाइट्रोसेलुलोस सतह से संपर्क करने के लिए सरणी पर धब्बे जमा का इस्तेमाल किया. हालांकि इस microarray प्रिंटर अब व्यावसायिक रूप से उपलब्ध नहीं है, अन्य व्यावसायिक रूप से उपलब्ध microarray प्रिंटर इस प्रोटोकॉल में इस्तेमाल किया जा सकता है, लेकिन कस्टम पिन की आवश्यकता हो सकती है (या तो संपर्क या गैर संपर्क) और सॉफ्टवेयर और पर्याप्त स्थान संकल्प होना चाहिए और स्लाइड और इमेजर के साथ संगतता। सीरा की सक्रियता के आधार पर, 1:50 से 1:400 तक कमजोर पड़ने का उपयोग किया जा सकता है। सीरम मुक्त बफर एक नकारात्मक नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है, जबकि एंटीजन के लिए बाध्य करने के लिए जाना जाता मोनोक्लोनल एंटीबॉडी एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है।
उपयोगकर्ताओं को कुछ समस्या निवारण समस्याओं के बारे में पता होना चाहिए। अपने टैग के लिए एंटीबॉडी का उपयोग कर गुणवत्ता नियंत्रण की जांच का उद्देश्य किसी भी प्रतिजनों जिसके लिए मुद्रण सफल नहीं था के लिए जाँच करने के लिए है। किसी भी स्थान है कि लगातार कई सरणियों की गुणवत्ता नियंत्रण की जांच में कम संकेत देने की संभावना अपर्याप्त प्रतिजन मुद्रित प्रतिनिधित्व करते हैं. संभावित कारणों में एकत्रीकरण या वर्षण या स्रोत प्लेट में प्रतिजन या नाइट्रोसेलुलोस पैड की चर मोटाई के कारण प्रिंटिंग पिन और माइक्रोरे स्लाइड के बीच खराब संपर्क शामिल हैं। इस बिंदु पर, हम गुणवत्ता नियंत्रण की जांच के मात्रात्मक परिणामों के आधार पर परख सामान्यीकरण नहीं करते हैं, यह देखते हुए कि एंटी-हिस एंटीबॉडी का पता लगाया गया बाइंडिंग इस टैग की उपलब्धता से प्रभावित हो सकता है, जो 3-आयामी अनुरूपता पर निर्भर करता है प्रत्येक प्रतिजन के लिए विशिष्ट.
इन्फ्लूएंजा प्रतिजन microarray ऐसे एलिसा के रूप में पारंपरिक तरीकों पर कई लाभ प्रदान करता है और ऐसे HAI और MN के रूप में कार्यात्मक परख के लिए पूरक है. 16-पैड प्रोटीन microarray एक नमूना-sparing प्रौद्योगिकी के साथ कई आइसोटाइप के एंटीबॉडी को मापने के लिए क्षमता के साथ एक साथ लगभग 300 प्रतिजनों से 1 $L सीरम के. प्रति स्लाइड पैड की संख्या कम करके प्रति एंटीजन की संख्या हजारों करने के लिए बढ़ाया जा सकता है. बहुसंकेतित परख भी कर्मियों के समय और उपभोग्य संसाधनों को छोड़ देता है, यह देखते हुए कि सीरा के सैकड़ों 2 दिनों में एंटीबॉडी के लिए जांच की जा सकती है, और स्लाइड और अभिकर्मकों के अलावा अन्य सभी सामग्री फिर से उपयोगी हैं तो प्लास्टिक कचरे की बड़ी मात्रा उत्पन्न नहीं करते हैं।
जबकि microarray प्रिंटर व्यापक रूप से वितरित नहीं किया जा सकता है, microarray स्लाइड एक केंद्रीकृत स्थान पर मुद्रित किया जा सकता है और फिर जांच के लिए अंत उपयोगकर्ता के लिए ले जाया. केवल जांच के लिए आवश्यक उपकरण कम लागत और पोर्टेबल imager है. इस प्रोटोकॉल के प्रसार का लक्ष्य इस तकनीक का अधिक व्यापक उपयोग करना है।
इन्फ्लूएंजा प्रतिजन microarray की मुख्य सीमाओं का पता चला एंटीबॉडी के समारोह और गतिजता की विशेषता करने में असमर्थता कर रहे हैं. microarray प्रत्येक प्रतिजन के लिए बाध्यकारी एंटीबॉडी के एक polyclonal सेट का पता लगाने है. ये एंटीबॉडी हो सकता है या HAI और MN assays में वायरस को निष्क्रिय करने में कार्यात्मक नहीं हो सकता है. हालांकि, HAI और MN परख ोंलुएंजा के एवियन उपप्रकारों के खिलाफ एंटीबॉडी के लिए परीक्षण करने के लिए उच्च स्तरीय जैव सुरक्षा अलमारियाँ के साथ विशेष सुविधाओं के लिए संबद्ध की जरूरत के साथ लाइव वायरस संस्कृति की आवश्यकता है, जबकि प्रोटीन microarray लाइव वायरस शामिल नहीं है घटक तो किसी भी बुनियादी प्रयोगशाला में उपयोग किया जा सकता है. बाध्यकारी गतिकी के संबंध में, प्रत्येक प्रतिजन की एक एकल एकाग्रता युक्त एक सरणी के साथ जांच सीरम का एक कमजोर पड़ने एक एकल डेटा बिंदु पैदावार, जो मात्रा और आत्मीयता का एक समग्र सभी एंटीबॉडी है कि प्रतिजन के लिए बाध्य पर summated का प्रतिनिधित्व करता है . पूरी तरह से एंटीजन-एंटीबॉडी बंधन गतिकी को हल करने के लिए, कई एंटीजन सांद्रता और /
इन सीमाओं के बावजूद, इन्फ्लूएंजा प्रतिजन microarray एक उपयोगी उपकरण के लिए एंटीजेनिक परिदृश्य है कि कार्यात्मक परख है कि अधिक थ्रूपुट और उपलब्धता में सीमित हैं पूरक कर सकते हैं भर इन्फ्लूएंजा एंटीबॉडी की चौड़ाई की विशेषता है.

इन्फ्लूएंजा वायरस मौत या विकलांगता से सालाना 20 लाख जीवन वर्ष के नुकसान के लिए जिम्मेदार है, दुनिया भर में हर साल सभी मौतों का 1% सहित, उष्णकटिबंधीय और विकासशील दुनिया में बुजुर्गों और आबादी पर आय से अधिक प्रभावों के साथ1, 2,3. मौसमी महामारियों के रोग के बोझ के अलावा, आनुवंशिक फिर से वर्गीकरण के माध्यम से उपन्यास इन्फ्लूएंजा उपभेदों के उद्भव या तो स्वाभाविक रूप से आम मेजबानों में या कृत्रिम रूप से जैव आतंकवाद के लिए तेजी से प्रसार और उच्च घातकता के साथ दुनिया भर में महामारी के लिए नेतृत्व कर सकते हैं 4 , 5.जबकि कई इन्फ्लूएंजा टीके वर्तमान में उपलब्ध हैं, उनकी प्रभावशीलता उपप्रकार विशिष्टता6द्वारा सीमित है , सार्वभौमिक इन्फ्लूएंजा टीके है कि कई वायरस के खिलाफ लंबे समय से स्थायी प्रतिरक्षा प्रदान विकसित करने की आवश्यकता पैदा तनाव7|
सार्वभौमिक इन्फ्लूएंजा टीकों के विकास के लिए एक प्रमुख चुनौती उपभेदों भर में उच्च antigenic विविधता है. घूम वायरस के एंटीजेनिक भिन्नता के साथ संयुक्त वर्तमान टीकों की एंटीजेनिक विशिष्टता वैक्सीन उपभेदों और घूम उपभेदों के बीच एक बेमेल बनाता है। यह एक महामारी के दौरान वैक्सीन के उपभेदों से आगे आनुवंशिक बहाव के पक्ष में एक विकासवादी लाभ प्रदान करता है , जो अक्सर 50%8,9से कम तक सीमित होता है . एंटीजेनिक बेमेल का एक अतिरिक्त स्रोत अंडे के अनुकूली वायरल उत्परिवर्तनों टीके के निर्माण के दौरान उत्पन्न होता है, जो एंटीबॉडी के लिए नेतृत्व करता है जो खराब वायरस को घूम करने के लिए बाध्यकरता है 10,11.
उच्च एंटीजेनिक विविधता की इस चुनौती पर काबू पाने के लिए पहले से मौजूद की चौड़ाई की विशेषता के लिए उपन्यास अनुसंधान उपकरणों की आवश्यकता होगी और सीरम और म्यूकोसल नमूनों में नैदानिक रूप से प्रासंगिक एंटीजेनिक वेरिएंट में प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को प्रकाश में लाया जाएगा। वर्तमान में उपलब्ध तरीकों, hemaglutination निषेध (HAI), microneutralization (MN), और पारंपरिक ELISA सहित, एक समय में एक एकल वायरस तनाव के खिलाफ एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए सीमित हैं, तो कई एंटीबॉडी आइसोटाइप का पता लगाने के लिए उनके उपयोग कई वायरस उपभेदों के खिलाफ जल्दी से उपलब्ध नैदानिक नमूना और प्रयोगशाला संसाधनों exhausts. इसके अलावा, HAI और MN लाइव वायरस संस्कृति है कि केवल विशेष प्रयोगशालाओं में उपलब्ध है की आवश्यकता है.
प्रोटीन माइक्रोरेरे, संभावित रूप से हजारों एंटीजनों से मिलकर, जो चित्र 1में दर्शाए अनुसार नाइट्रोसेलुलोस-कोट्ड स्लाइडों पर मुद्रित होते हैं, इस आवश्यकताको 12भर सकते हैं। इन microarrays का उत्पादन किया जा सकता है और एक उच्च थ्रूपुट तरीके से जांच की, जबकि नैदानिक नमूना की छोटी मात्रा लेने के लिए मात्रात्मक एंटीबॉडी आइसोटाइप / एंटीजन खोज के लिए यह दृष्टिकोण कई संक्रामक रोगजनकों के खिलाफ नैदानिक और टीका के विकास के लिए लागू किया गयाहै 13. आज तक, हमने 35 से अधिक रोगजनकों के लिए प्रोटीन माइक्रोरेरेसिस का उत्पादन किया है, जिसमें 60,000 से अधिक कुल व्यक्त प्रोटीन शामिल हैं और संक्रमित और नियंत्रण व्यक्तियों से 30,000 से अधिक मानव सीरा की जांच करने के लिए उनका उपयोग किया गया है। माइक्रोरे स्लाइड के लिए हाल ही में विकसित पोर्टेबल इमेजिंग प्लेटफॉर्म ने इस पद्धति को अंतिम उपयोगकर्ता14के लिए अधिक सुलभ बना दिया है.
क्षेत्र में कई योगदानकर्ताओं द्वारा व्यापक पिछले काम पर बिल्डिंग15,16,17,18,19, एक इन्फ्लूएंजा प्रोटीन microarray हाल ही में विकसित किया गया था कि अधिक शामिल 250 शुद्ध हेमाग्लूटिनिन (एचए) सभी 18 उपप्रकारों12,20के प्रतिनिधित्व के साथ एंटीजेनिक वेरिएंट . इस पद्धति का उपयोग करते हुए, एक प्राकृतिक इन्फ्लूएंजा संक्रमण को मोटे तौर पर प्रतिक्रियाशील आईजीजी और आईजीए एंटीबॉडी को जातिवृत् तीय रूप से संबंधित हा उपप्रकारों के खिलाफ उत्पन्न करने के लिए प्रदर्शित किया गया था, जबकि एक इंट्रामस्क्युलर इन्फ्लूएंजा टीकाकरण केवल उप-प्रकार-विशिष्ट आईजीजी उत्पन्न करता था एंटीबॉडी21| हालांकि, एक सहायक है कि इन्फ्लूएंजा टीकों के लिए टोल की तरह रिसेप्टर्स को सक्रिय जोड़ने के लिए पशु अध्ययन22में हा उपप्रकारों भर में प्राप्त आईजीजी एंटीबॉडी प्रतिक्रिया को व्यापक करने के लिए दिखाया गया था.
इस microarray वर्तमान में कॉलेज के छात्रों को जो इन्फ्लूएंजा संक्रमण के लिए पीछा किया गया के एक संभावित सहगण अध्ययन से एकत्र सीरा की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा रहा है. यहाँ, इस अध्ययन से नमूनों के एक सबसेट में उपप्रकार-विशिष्ट और पार प्रतिक्रियाशील एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए परख reproducibility के प्रदर्शन के साथ इन्फ्लूएंजा प्रतिजन microarray की पद्धति की सूचना दी है.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>16-pad nitrocellulose-coated glass slides</td>
			<td>Grace Bio Labs</td>
			<td>305016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x GVS FAST blocking buffer</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>10485356</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ArrayCam portable imager</td>
			<td>Grace Bio Labs</td>
			<td>400S</td>
			<td>Other imaging devices can be used to visualize slides if capable of achieving the resolution of the microarray spots and the excitation and emission wavelengths of the quantum dots.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin-conjugated goat anti-mouse-IgG antibody</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>31800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HiBase 384-well plate</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>T-3037-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microarray pins</td>
			<td>ArrayIt</td>
			<td>GMP2</td>
			<td>Each different microarray printer may require its own custom microarray pins.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse monoclonal poly-His antibody</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H1029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OmniGrid 100 microarray printer</td>
			<td>GeneMachines</td>
			<td></td>
			<td>The version of the microarray printer used in this work is no longer commercially available, but the updated similar equipment is the OmniGrid Accent microarray printer from Digilab (Hopkinton, MA), and the same protocol can be carried out with most commercially available microarray printers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProPlate slide chambers</td>
			<td>Grace Bio Labs</td>
			<td>246890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProPlate slide clips</td>
			<td>Grace Bio Labs</td>
			<td>204838</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProPlate slide frames</td>
			<td>Grace Bio Labs</td>
			<td>246879</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quantum dot 585 nm conjugated goat anti-human-IgA antibody</td>
			<td>Grace Bio Labs</td>
			<td>110620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quantum dot 585 nm streptavidin conjugate</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>Q10111MP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quantum dot 800 nm conjugated goat anti-human-IgG antibody</td>
			<td>Grace Bio Labs</td>
			<td>110610</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of an influenza antigen microarray to measure the breadth of serum antibodies across virus subtypes

इन्फ्लूएंजा वायरस वर्तमान में उपलब्ध टीकों की सीमित प्रभावशीलता के कारण दुनिया भर में मृत्यु का एक महत्वपूर्ण कारण बना हुआ है. सार्वभौमिक इन्फ्लूएंजा टीकों के विकास के लिए एक प्रमुख चुनौती उच्च एंटीजेनिक विविधता एंटीजेनिक बहाव से उत्पन्न है. इस चुनौती पर काबू पाने के लिए विभिन्न एंटीजेनिक उपप्रकारों में कई वायरस उपभेदों के खिलाफ निर्देशित सीरम एंटीबॉडी की चौड़ाई को मापने के लिए उपन्यास अनुसंधान उपकरण की आवश्यकता है। यहाँ, हम इन्फ्लूएंजा प्रतिजनों के एक प्रोटीन microarray का उपयोग कर विविध इन्फ्लूएंजा वायरस उपभेदों के खिलाफ सीरम एंटीबॉडी की चौड़ाई का विश्लेषण करने के लिए एक प्रोटोकॉल पेश करते हैं.
इस इन्फ्लूएंजा एंटीजन microarray एक microarray प्रिंटर का उपयोग कर एक नाइट्रोसेल्यूलोस लेपित झिल्ली पर शुद्ध hemagglutinin और neuraminidase प्रतिजन मुद्रण द्वारा निर्माण किया है. मानव सीरा इन्फ्लूएंजा एंटीजन के खिलाफ एंटीबॉडी बाध्य करने के लिए microarray पर incubated रहे हैं। क्वांटम डॉट-संयोजित माध्यमिक एंटीबॉडी का उपयोग माइक्रोरेरे पर प्रत्येक प्रतिजन के लिए बाध्यकारी आईजीजी और आईजीए एंटीबॉडी का एक साथ पता लगाने के लिए किया जाता है। मात्रात्मक एंटीबॉडी बाइंडिंग को एक पोर्टेबल इमेजर का उपयोग करके फ्लोरोसेंट तीव्रता के रूप में मापा जाता है। प्रतिनिधि परिणाम मानव सीरा में उपप्रकार-विशिष्ट और पार प्रतिक्रियाशील इन्फ्लूएंजा एंटीबॉडी को मापने में परख reproducibility प्रदर्शित करने के लिए दिखाया गया है.
इस तरह के एलिसा के रूप में पारंपरिक तरीकों की तुलना में, इन्फ्लूएंजा प्रतिजन microarray एक कम समय सीमा में प्रतिजनों के सैकड़ों के खिलाफ कई एंटीबॉडी आइसोटाइप के लिए सीरा के सैकड़ों परीक्षण करने में सक्षम एक उच्च थ्रूपुट बहुसंकेतित दृष्टिकोण प्रदान करता है, और इस तरह है सीरो-सर्वेक्षण और वैक्सीन विकास में आवेदन। एक सीमा बाध्यकारी एंटीबॉडी को एंटीबॉडी को निष्क्रिय करने से अलग करने में असमर्थता है।

प्रोटोकॉल के एक प्रदर्शन के रूप में, आधारभूत सेरा कॉलेज के छात्रों के एक संभावित सहगण अध्ययन के भीतर 16 व्यक्तियों से परख रहे थे इन्फ्लूएंजा प्रतिजन microarray पर इन्फ्लूएंजा संक्रमण के लिए पीछा किया. परख पुन: उत्पादन ीयता प्रदर्शित करने के लिए, इन नमूनों की दो बार जांच की गई, विभिन्न स्लाइडों और विभिन्न दिनों पर।
इस अध्ययन के लिए, शुद्ध इन्फ्लूएंजा एंटीजन अपने10 टैग युक्त वाणिज्यिक विक्रेता से प्राप्त किए गए थे (सामग्री की तालिकादेखें) और सहयोगियों. इन एंटीजन में शामिल हैं 251 कुल हा एंटीजन, 63 गोलाकार सिर डोमेन के साथ (HA1) और 186 पूर्ण लंबाई प्रोटीन (HA0), सहित 96 monomeric HA0 प्रोटीन और 90 trimerized HA0 प्रोटीन जुड़े trimerization युक्त ("foldon") डोमेन23. इस अध्ययन में प्रयुक्त प्रतिजनों और नियंत्रणों की एक पूरी सूची अनुपूरक फाइलके रूप में शामिल की जाती है . इस अध्ययन के लिए, इस्तेमाल किया माध्यमिक एंटीबॉडी थे बकरी विरोधी मानव IgG 800 एनएम पर क्वांटम डॉट उत्सर्जन करने के लिए संयुग्मी (GAH-IgG-Q800) और बकरी विरोधी मानव IgA कंजूस के रूप में 585 एनएम (GAH-IgA-Q585) पर उत्सर्जन क्वांटम डॉट उत्सर्जन के लिए IGG और IgA एंटीबॉडी के रूप में चित्र 3में दिखाया गया है। आईजीजी और आईजीए एंटीबॉडी विभिन्न उपप्रकारों और इन्फ्लूएंजा हा एंटीजन के आणविक रूपों के लिए बाध्यकारी सीरा ऊपर वर्णित नैदानिक सहगण से प्राप्त के लिए तुलना की गई.
परिणामस्वरूप ऊष्मा मानचित्र चित्र 4 में चित्र 5में आलेखीय निरूपण के साथ दर्शाया गया है। इन आंकड़ों में, केवल सरणी पर उच्च प्रतिनिधित्व के साथ नैदानिक रूप से प्रासंगिक उपप्रकारों को स्थान बचाने के लिए लेबल किया जाता है, साथ "+" उच्च संख्या के सभी शेष उपप्रकारों को दर्शाता है, और आदेश के रूप में शामिल छोटे या कम अच्छी तरह से प्रतिनिधित्व किए गए उपप्रकार (जैसे, H1 के बीच में H2 और H3). सरणी पर उपभेदों और उपप्रकारों की पूरी सूची अनुपूरक फ़ाइलके रूप में शामिल की जाती है. इन आंकड़ों से पता चलता है कि एचए के प्रमुख समूह के एंटीबॉडी नैदानिक रूप से प्रचलित उपभेदों (H1N1, H3N2, और बी) और अन्य उपभेदों के लिए एंटीबॉडी की कम मात्रा के लिए एंटीबॉडी की अपेक्षित उच्च मात्रा के साथ उप-विशिष्ट हैं। हालांकि, पूरे HA, जो डंठल डोमेन भी शामिल है करने के लिए एंटीबॉडी, उपप्रकारों में अधिक पार प्रतिक्रियाशील हैं, और इस प्रभाव को संवर्धित किया जा करने के लिए प्रकट होता है जब पूरे HA trimerized है. यह परिणाम अप्रत्याशित नहीं है, के रूप में पूरे HA स्टेम क्षेत्र है, जो अत्यधिक subtypes भर में संरक्षित है शामिल हैं. इसलिए, गैर-नैदानिक उपप्रकारों (जैसे, H5 और H7) से पूरे HA अणुओं के लिए एंटीबॉडी की संभावना मूल रूप से नैदानिक उपप्रकारों के खिलाफ प्राप्त विरोधी स्टेम एंटीबॉडी का प्रतिनिधित्व करते हैं (जैसे, H1 और H3) जो अन्य HA उपप्रकारों के स्टेम क्षेत्रों के साथ क्रॉस-प्रतिक्रिया कर रहे हैं सरणी पर. इस बिंदु दोनों सिर हा और पूरे अणु हा सहित के महत्व को दिखाता है सरणी पर सिर और स्टेम क्षेत्रों जो विभिन्न प्रतिक्रिया प्रोफाइल दिखाने के लिए एंटीबॉडी के बीच अंतर.
परख रन की जांच भर में अच्छा reproducibility दर्शाता है. दूसरे रन सभी उपभेदों भर में थोड़ा कम आईजीजी एंटीबॉडी दिखाता है, हालांकि उपभेदों के बीच पैटर्न अनुरूप है. यह बोर्ड भर में मामूली कमी माध्यमिक एंटीबॉडी में बैच-टू-बैच परिवर्तनशीलता के कारण होने की संभावना है, जो आईजीजी के लिए रन के बीच बदल गया था लेकिन आईजीए के लिए नहीं। इस प्रकार, जैसा कि प्रोटोकॉल में उल्लेख किया गया है, किसी भी प्रयोग के लिए प्रत्येक द्वितीयक एंटीबॉडी के एक ही बैच का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है जिसके बीच मात्रात्मक तुलना की योजना बनाई गई है। एंटीबॉडी के विभिन्न बैचों परीक्षण किया जा करने के लिए नमूनों की एक उच्च संख्या के कारण आवश्यक हैं, तो हम सुधार के साथ मात्रात्मक तुलना के लिए अनुमति देने के लिए विभिन्न एंटीबॉडी बैचों के साथ प्रयोगात्मक रन के बीच साझा नमूने सहित सिफारिश की।
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59973/59973fig1.jpg"> चित्र 1: प्रोटीन microarray के Schematic. प्रत्येक स्लाइड में एक एकल सरणी के साथ प्रत्येक कई पैड होते हैं, जिसमें सैकड़ों एंटीजन होते हैं जो ग्रिड में व्यवस्थित स्पॉट पर मुद्रित होते हैं, प्रत्येक स्थान के साथ एक एंटीजन को नाइट्रोसेलुलोस सतह के 3-आयामी स्थलाकृति पर adsorbed होता है जिसके लिए सीरम से एंटीबॉडी बाध्य कर रहे हैं. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59973/59973fig1large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59973/59973fig2.jpg"> चित्र 2: इन्फ्लूएंजा प्रतिजन microarray मुद्रण और जांच प्रोटोकॉल के Schematic. बाएं से दाएं, माइक्रोरे को नाइट्रोसेल्यूलोस-कोटेड स्लाइड्स पर उपयोग करके मुद्रित किया जाता है, जिसका उपयोग आईजीजी और आईजीए एंटीबॉडी के लिए सीरा की जांच करने के लिए किया जाता है, क्वांटम-डॉट-कंजुगेट्ड सेकेंडरी एंटीबॉडी का उपयोग करके, एक पोर्टेबल इमेजर का उपयोग करके छवि वाली स्लाइडों के साथ, और परिणामों का विश्लेषण किया जाता है एक गर्मी नक्शा उत्पन्न करते हैं. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59973/59973fig2large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59973/59973fig3.jpg"> चित्र 3: माइक्रोरेस्लाइड स्लाइड की जांच कक्ष को संलग्न करने की प्रक्रिया। ए से एफतक, जांच कक्ष को सही अभिविन्यास में स्लाइड के शीर्ष पर रखा गया है, जो पक्षों पर क्षैतिज क्लिप का उपयोग करके स्लाइड से जुड़ा हुआ है, और जांच ट्रे में रखा गया है। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59973/59973fig3large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59973/59973fig4.jpg"> चित्र 4: इन्फ्लूएंजा प्रतिजन microarray के प्रतिनिधि परिणाम. हीट नक्शे प्रतिजन-विशिष्ट एंटीबॉडी प्रतिक्रियाओं का प्रतिनिधित्व करते हैं, प्रत्येक पंक्ति के साथ एक एकल प्रतिजन का प्रतिनिधित्व अणु द्वारा व्यवस्था की, उपप्रकार, और तनाव, और प्रत्येक स्तंभ एक एकल नमूना की एक जांच रन का प्रतिनिधित्व, एंटीबॉडी isotype और रन द्वारा व्यवस्था की (ए, सफेद ] 0, काले ] 20000, लाल $ 40000 फ्लोरोसेंट तीव्रता). 1 से 18 तक के सभी हेमग्लूटिनिन उपप्रकारों सहित प्रतिजन उपप्रकार और 1 से 10 तक सभी न्यूरेमिनिडेस उपप्रकारों को खड़ी और बाईं ओर लेबल किया जाता है। दो रनों के बीच फ्लोरोसेंट तीव्रता की तुलना आईजीए (बी) और आईजीजी (सी) के लिए रैखिक प्रतिगमन द्वारा अच्छी परख पुनरुत्पादन को दर्शाती है . <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59973/59973fig4large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59973/59973fig5.jpg"> चित्र 5: इन्फ्लूएंजा प्रतिजन microarray पर मापा सीरम एंटीबॉडी की Breadth. सीरम आईजीए (ए) और आईजीजी (बी) को हा और एनए आणविक रूपों और उपप्रकारों द्वारा समूहीकृत किया जाता है ताकि नैदानिक उपप्रकारों के लिए हा हेड ग्रुप एंटीबॉडी की उच्च विशिष्टता को प्रदर्शित किया जा सके और पूरे हा के उच्च पार-प्रतिक्रिया और पूरे हा ए के उच्च पार-प्रतिक्रिया को कम किया जा सके . डंठल क्षेत्र का समावेश. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59973/59973fig5large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
अनुपूरक फाइल: इन्फ्लूएंजा प्रतिजन माइक्रोरेरे पर एंटीजन की सूची। सामग्री रिक्त स्थान, fiducials, नियंत्रण (मानव आईजीजी और IgA और विरोधी मानव IgG और IGA पर 0.1 mg/mL और 0.3 mg/mL) सहित सरणी पर सभी 324 स्थानों के लिए दिखाया गया है, और स्रोत पर जानकारी के साथ एंटीजन, आणविक रूप, उपप्रकार, और तनाव. संक्षिप्त नाम इस प्रकार हैं: स्रोत के लिए, चीन - चीन जैविक इंक, FKL - फ्लोरियन Krammer प्रयोगशाला; आण्विक रूप के लिए, एचए1 सिर हा, ह0 ] संपूर्ण हा, एचए2 डंठल हा, एनपी - न्यूक्लिओप्रोटीन। चीन जैविक इंक से स्रोत प्रतिजनों के लिए, सूची संख्या दिखाए जाते हैं; Krammer प्रयोगशाला से स्रोत एंटीजन के लिए, प्रतिजन आईडी सूचीबद्ध हैं. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59973/Supplementary_File.xlsm">इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए कृपया यहाँ क्लिक करें.</a>

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Use of an Influenza Antigen Microarray to Measure the Breadth of Serum Antibodies Across Virus Subtypes

हम एक साथ विभिन्न वायरस उपभेदों से 250 से अधिक प्रतिजनों के खिलाफ कई एंटीबॉडी आइसोटाइप के लिए सीरम की जांच करने के लिए नाइट्रोसेलुलोस लेपित स्लाइड पर इन्फ्लूएंजा एंटीजन मुद्रण द्वारा निर्मित एक प्रोटीन microarray का उपयोग करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं, इस प्रकार वायरस subtypes भर में सीरम एंटीबॉडी की चौड़ाई की माप की अनुमति.

वायरस उपप्रकारों के पार सीरम एंटीबॉडी की रोटी को मापने के लिए एक इन्फ्लुएंजा एंटीजन माइक्रोरेरे का उपयोग

The influenza virus remains a significant cause of mortality worldwide due to the limited effectiveness of currently available vaccines. A key challenge ...

इन्फ्लूएंजा एंटीजन माइक्रोएरे सिर्फ एक माइक्रोलीटर के एक छोटे से रक्त नमूना की मात्रा से इंफ्लूएंजा के 300 से अधिक उपभेदों के खिलाफ कई एंटीबॉडी आइसोटाइप के एक साथ माप की अनुमति देता है। माइक्रोएरे इन्फ्लूएंजा उपभेदों के एंटीजेनिक परिदृश्य में इंफ्लूएंजा एंटीबॉडी की चौड़ाई के एक उच्च थ्रूपुट माप की सुविधा प्रदान करता है। पहले से अधिक विस्तार से इन्फ्लूएंजा एंटीबॉडी की विशेषता से, यह माइक्रोएरे यह निर्धारित करने में मदद कर सकता है कि कुछ लोग इन्फ्लूएंजा संक्रमण क्यों विकसित करते हैं और अन्य ऐसा क्यों नहीं करते हैं।एंटीजन माइक्रोएरे तकनीक को हमारी प्रयोगशाला में 35 विभिन्न रोगजनकों पर लागू किया गया है, जिससे 60, 000 एंटीजन लक्ष्यों के खिलाफ एंटीबॉडी की माप और संक्रामक रोग के मामलों और दुनिया भर में स्वस्थ नियंत्रण से एकत्र 50, 000 सीरम नमूनों से अनुमति मिलती है। में व्यक्ति कार्यशालाओं के माध्यम से इस तकनीक को सिखाया है, हमने पाया है कि नेत्रहीन तकनीक प्रदर्शित करने में सक्षम होने के नाते अपनी समझ और प्रदर्शन के लिए महत्वपूर्ण है । प्रक्रिया का प्रदर्शन अल Jasinskas और राफेल डी Assis, हमारी प्रयोगशाला से परियोजना वैज्ञानिकों होगा ।माइक्रोएरे प्रिंटर का उपयोग करके एंटीजन प्रिंट करने के लिए, कम मात्रा वाले माइक्रोएरे स्पॉटिंग पिन वाले प्रिंटर का चयन करें जो एंटीजन को 384-अच्छी स्रोत प्लेट से नमूना चैनल में निलंबित कर सकता है और एंटीजन को सीधे संपर्क और केशिका कार्रवाई के माध्यम से 16 पैड नाइट्रोसेल्यूलोस लेपित ग्लास स्लाइड पर जमा कर सकता है। प्रिंटिंग सॉफ्टवेयर में, प्लेटों के नंबर टेक्स्ट बॉक्स में उपयोग की जाने वाली नमूना प्लेटों की संख्या दर्ज करें और विश्लेषण के लिए उपयोग किए जाने वाले प्लेट प्रकार का चयन करें। पिन कॉन्फ़िगरेशन चुनें और मूल ऑफसेट को स्लाइड मूल और उस स्थान के बीच की दूरी पर सेट करें जहां प्रिंटिंग पिन स्लाइड्स पर प्रिंटिंग शुरू कर देंगे।सरणी डिजाइन टैब के तहत, सरणी के आकार और आकार को परिभाषित करें और कैसे प्रिंटिंग पिन लेने और नमूनों को वितरित करेंगे के लिए मापदंडों का चयन करें। पिन सफाई और ब्लॉटिंग प्रोटोकॉल को कॉन्फ़िगर करें और उस अनुक्रम को परिभाषित करें जिसमें नमूना ब्लॉक स्लाइड पर मुद्रित किए जाते हैं। सरणी सॉफ्टवेयर प्रत्येक माइक्रोएरे के भीतर एंटीजन की व्यवस्था का वर्णन करने के लिए एक एनोटेटेड ग्रिड इंडेक्स फाइल का निर्माण करेगा।वांछित प्रोटोकॉल के साथ प्रिंटिंग सॉफ्टवेयर प्रोग्रामिंग के बाद, प्रिंट रन शुरू करें। पूरा होने पर, कमरे के तापमान पर एक डजिकेटर कैबिनेट में एक प्रकाश प्रूफ बॉक्स में अव्यवसित माइक्रोएरी स्लाइड रखें। माइक्रोएरे पर एंटीबॉडी के लिए सेरा की जांच करने के लिए, जांच कक्षों पर माइक्रोएरे स्लाइड पैड साइड संलग्न करने के लिए क्लिप का उपयोग करें और कक्षों को फ्रेम में रखें।स्लाइड्स में कोडांतरण करते समय सावधानी बरतें, क्योंकि ये आसानी से टूट जाते हैं और रिहाइड्रेशन के बाद किसी भी रिसाव की जांच करते हैं। यदि आवश्यक हो, तो लीक को ठीक करने के लिए स्लाइड को अलग और फिर से इकट्ठा करें। अच्छी तरह से फ़िल्टर अवरुद्ध बफर के 100 माइक्रोलीटर के साथ स्लाइड को फिर से हाइड्रेट करें और प्रति नमूना बफर को अवरुद्ध करने के 100 माइक्रोलीटर में एक से 100 अनुपात में सेरा को पतला करें।फिर, कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए रिहाइड्रेटेड माइक्रोएरी स्लाइड और पतला सेरा और एक कक्षीय शेखर पर प्रति मिनट १०० से २५० घूर्णन । इनक्यूबेशन के अंत में, पैड को छूने के बिना प्रत्येक कक्ष के कोने से अवरुद्ध बफर को ध्यान से छूने और पैड को सूखने की अनुमति दिए बिना पैड में पतला सेरा जोड़ने के लिए एक माध्यमिक संग्रह फ्लास्क के साथ एक वैक्यूम लाइन से जुड़े पिपेट युक्तियों का उपयोग करें। फिर, नमी बनाए रखने के लिए सील किए गए नम कागज तौलिए युक्त ट्रे में कवर किए गए फ्रेम रखें और एक कमाल के शेखर पर चार डिग्री सेल्सियस पर रात भर फ्रेम को इनक्यूबेट करें।क्वांटम डॉट संयुग्मित माध्यमिक एंटीबॉडी लेबलिंग के लिए, ध्यान से सेरा के रूप में बस का प्रदर्शन किया और ताजा TTBS बफर के १०० माइक्रोलीटर में तीन धोता के साथ स्लाइड कुल्ला एक कक्षीय शेखर पर पांच मिनट के लिए प्रत्येक के लिए । स्लाइड तो क्वांटम डॉट संयुग्मित माध्यमिक एंटीबॉडी के मिश्रण के साथ इनक्यूबेटेड और फिर प्रोटोकॉल में वर्णित के रूप में तीन बार धोया जाता है, बस का प्रदर्शन के रूप में एक ही तकनीक का उपयोग कर । आखिरी धोने के बाद, ध्यान से कोठियों से स्लाइड निकालें और धीरे-धीरे फ़िल्टर किए गए डबल आसुत पानी से स्लाइड कुल्ला करें और फिर प्रत्येक स्लाइड को 50 मिलीलीटर ट्यूब में रखें।इसके बाद स्लाइड्स को सेंट्रलाइज करके सुखा लें। माइक्रोएरी स्लाइड्स की छवियों को प्राप्त करने के लिए, सबसे पहले पोर्टेबल इमेजर चालू करें और इमेजिंग कक्ष में स्लाइड धारक में नीचे इमेज्ड होने के लिए स्लाइड को ध्यान से रखें। इमेजिंग सॉफ्टवेयर खोलें और कॉन्फ़िगर इमेजर टैब के तहत, उपयुक्त स्लाइड कॉन्फ़िगरेशन का चयन करें।छवि नियंत्रण टैब के तहत, उपयुक्त फ्लोरोसेंट चैनल का चयन करें और सीरा की प्रतिक्रियाशीलता के आधार पर एक्सपोजर और अधिग्रहण के समय को समायोजित करें। फिर, छवि अधिग्रहण शुरू करने के लिए कैप्चर पर क्लिक करें। अधिग्रहण के अंत में, सरणी स्थानों का पता लगाने के लिए प्रत्ययी मार्कर पर उन्मुख ग्रिड का उपयोग करें।स्पॉट तीव्रता को मापने के लिए, फ़ाइल जानकारी पैनल में, लड़की फ़ाइल अपलोड करें और फ़ोल्डर निर्दिष्ट करें जहां विश्लेषण विकल्प अनुभाग में विश्लेषण आउटपुट फ़ाइलों को सहेजा जाना है। इमेज कंट्रोल टैब के तहत, अधिग्रहीत छवियों में से एक को मात्रा निर्धारित करने और ऑटो का चयन करने के लिए खोलें। सरणी विश्लेषण अनुभाग में, सॉफ्टवेयर द्वारा निर्देश के रूप में एक प्रत्ययी टेम्पलेट बनाएं।फ़ोल्डर का चयन करने के लिए बैच विश्लेषण पर क्लिक करें जिसमें छवियों को मात्रा निर्धारित किया जाना है और केवल बनाए गए प्रत्ययी टेम्पलेट का चयन करें। सॉफ्टवेयर प्रत्येक छवि का विश्लेषण करेगा और स्पॉट तीव्रता की मात्रा निर्धारित करेगा। फिर, एंटीजन और सीरम नमूनों में एंटीबॉडी बाध्यकारी की तुलना करने के लिए कच्चे डेटा का विश्लेषण करें।इस प्रतिनिधि अध्ययन में, उपयोग की जाने वाली माध्यमिक एंटीबॉडी बकरी एंटी ह्यूमन आईजीजी थे जो क्रमशः आईजीजी और आईजीए एंटीबॉडी के मल्टीप्लेक्स डिटेक्शन के लिए 585 नैनोमीटर पर उत्सर्जित क्वांटम डॉट के लिए 800 नैनोमीटर और बकरी विरोधी मानव आईजीए पर उत्सर्जित क्वांटम डॉट के लिए संयुग्मित थे। परिणामस्वरूप गर्मी के नक्शे में, केवल उच्च प्रतिनिधित्व के साथ चिकित्सकीय प्रासंगिक उपप्रकार एक उच्च संख्या के शेष उपप्रकार के सभी निरूपित प्लस हस्ताक्षर के साथ अंतरिक्ष को बचाने के लिए लेबल किए गए थे । सीरम आईजीए और आईजीजी को उनके हेमाग्लुटिनिन और न्यूरामिनिडेस आणविक रूपों और उपप्रकारों द्वारा समूहीकृत किया गया था।नैदानिक उपप्रकारों के लिए हेमेग्लूटिनिन हेड ग्रुप एंटीबॉडी की उच्च विशिष्टता और स्टॉक क्षेत्र को शामिल करने के साथ पूरे हेमाग्लुटिनिन और त्रिकोणीय पूरे हेमाग्लुटिनिन एंटीबॉडी की उच्च क्रॉस-रिएक्टिविटी प्रदर्शित करने के लिए। माइक्रोएरे पर मापा इंफ्लूएंजा एंटीबॉडी प्रतिक्रियाओं की पुष्टि पारंपरिक तकनीकों द्वारा की जा सकती है, जिसमें हेमेग्लूटिनेशन अवरोध और माइक्रोन्यूट्रेलाइजेशन परख शामिल है। इस तकनीक ने इन्फ्लूएंजा हेड ग्रुप के लिए एंटीबॉडी की उपप्रकार विशिष्टता और इंफ्लूएंजा संवेदनशीलता के लिए आईजीए और आईजीजी एंटीबॉडी के सापेक्ष महत्व में अंतर्दृष्टि का उत्पादन किया है।जबकि सामग्री में से कोई भी बेहद खतरनाक हैं, सभी मानव सीरम नमूनों संस्थागत जैव बचाव प्रोटोकॉल के अनुसार संभाला जाना चाहिए ।

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Generation of Recombinant Influenza Virus from Plasmid DNA

पुनः संयोजक इन्फ्लुएंजा वायरस के डीएनए प्लाज्मिड से पीढ़ी

Efforts by a number of influenza research groups have been pivotal in the development and improvement of influenza A virus reverse genetics. Originally ...

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

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Bioluminescent इमेजिंग बीच योगवाहिता जांच स्ट्रैपटोकोकस निमोनिया इन्फ्लुएंजा और शिशु चूहे में एक वायरस

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

ampliPHOX Colorimetric Detection on a DNA Microarray for Influenza

ampliPHOX इन्फ्लुएंजा के लिए एक डीएनए माइक्रोएरे पर वर्णमिति जांच

DNA microarrays have emerged as a powerful tool for pathogen detection.1-5  For instance, many examples of the ability to type and subtype influenza virus ...

Rapid Diagnosis of Avian Influenza Virus in Wild Birds: Use of a Portable rRT-PCR and Freeze-dried Reagents in the Field

जंगली पक्षियों में एवियन इन्फ्लुएंजा वायरस के रैपिड निदान: एक पोर्टेबल आर आर टी - पीसीआर और फील्ड में रुक - सूखे अभिकर्मकों का उपयोग

Wild birds have been implicated in the spread of highly pathogenic avian influenza (HPAI) of the H5N1 subtype, prompting surveillance along migratory ...

High-throughput Detection Method for Influenza Virus

इन्फ्लुएंजा वायरस के लिए उच्च throughput जांच विधि

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, ...

Affinity Purification of Influenza Virus Ribonucleoprotein Complexes from the Chromatin of Infected Cells

संक्रमित कोशिकाओं की Chromatin से इन्फ्लुएंजा वायरस Ribonucleoprotein के परिसर संबंध शुद्धीकरण

Like all negative-strand RNA viruses, the genome of influenza viruses is packaged in the form of viral ribonucleoprotein complexes (vRNP), in which the ...

Influenza Virus Propagation in Embryonated Chicken Eggs

Embryonated चिकन अंडे में इन्फ्लुएंजा वायरस प्रचार

Influenza infection is associated with about 36,000 deaths and more than 200,000 hospitalizations every year in the United States. The continuous ...

Co-immunoprecipitation of the Mouse Mx1 Protein with the Influenza A Virus Nucleoprotein

इन्फ्लुएंजा ए वायरस nucleoprotein के साथ माउस MX1 प्रोटीन की सह immunoprecipitation

Studying the interaction between proteins is key in understanding their function(s). A very powerful method that is frequently used to study interactions ...

Nasal Wipes for Influenza A Virus Detection and Isolation from Swine

स्वाइन से इन्फ्लुएंजा ए वायरस का पता लगाने और अलगाव के लिए नाक पोंछे

Surveillance for influenza A viruses in swine is critical to human and animal health because influenza A virus rapidly evolves in swine populations and ...

A Miniaturized Glycan Microarray Assay for Assessing Avidity and Specificity of Influenza A Virus Hemagglutinins

उत्सुकता और इन्फ्लुएंजा एक वायरस Hemagglutinins की विशिष्टता का आकलन करने के लिए एक छोटी glycan माइक्रोएरे परख

Influenza A virus (IAV) hemagglutinins recognize sialic acids on the cell surface as functional receptors to gain entry into cells. Wild waterfowl are the ...