Name: an antibody feeding approach to study glutamate receptor trafficking in dissociated primary hippocampal cultures
Uploaded: 2019-08-02T15:00:00
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我们感谢西北高级显微镜中心使用尼康A1共聚焦显微镜,并协助规划和分析实验。这项研究得到了NIGMS(T32GM008061)和NIA(R00AG041225)以及脑与行为研究基金会(#24133)的NARSAD青年调查员资助。

西北大学动物护理和使用委员会(协议#IS00001151)审查并批准了与海马原文化制备有关的工作。
1. 标签前的准备
<ol><li>
原始海马培养物的准备与维持
	<ol>
<li>在聚D-Lysin--lysin涂层(0.1 mg/mL)18mm盖眼镜上镀有150,000个细胞的密度下制备原发海马培养物。用于分离神经元培养准备的优秀指南有7、8。 注:如果需要,可...

<ol>
	<li>Enns, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overview+of+protein+trafficking+in+the+secretory+and+endocytic+pathways.">Overview of protein trafficking in the secretory and endocytic pathways.</a> Current Protocols in Cell Biology. , (2001).</li><li>Bedford, F. K., Binder, M. D., Hirokawa, N., Windhorst, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Encyclopedia of Neuroscience. , 3385-3389 (2009).</li><li>Diering, G. H., Huganir, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+AMPA+Receptor+Code+of+Synaptic+Plasticity.">The AMPA Receptor Code of Synaptic Plasticity.</a> Neuron. 100 (2), 314-329 (2018).</li><li>Lussier, M. P., Sanz-Clemente, A., Roche, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+Regulation+of+N-Methyl-d-aspartate+(NMDA)+and+alpha-Amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic+Acid+(AMPA)+Receptors+by+Posttranslational+Modifications.">Dynamic Regulation of N-Methyl-d-aspartate (NMDA) and alpha-Amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic Acid (AMPA) Receptors by Posttranslational Modifications.</a> The Journal of Biological Chemistry. 290 (48), 28596-28603 (2015).</li><li>Traynelis, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutamate+receptor+ion+channels:+structure,+regulation,+and+function.">Glutamate receptor ion channels: structure, regulation, and function.</a> Pharmacological Reviews. 62 (3), 405-496 (2010).</li><li>Molnar, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+potentiation+in+cultured+hippocampal+neurons.">Long-term potentiation in cultured hippocampal neurons.</a> Seminars in Cell &amp; Developmental Biology. 22 (5), 506-513 (2011).</li><li>Seibenhener, M. L., Wooten, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+hippocampal+neurons+from+prenatal+mice.">Isolation and culture of hippocampal neurons from prenatal mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), (2012).</li><li>Nunez, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+Culture+of+Hippocampal+Neurons+from+P0+Newborn+Rats.">Primary Culture of Hippocampal Neurons from P0 Newborn Rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (19), (2008).</li><li>Lu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+synaptic+NMDA+receptors+induces+membrane+insertion+of+new+AMPA+receptors+and+LTP+in+cultured+hippocampal+neurons.">Activation of synaptic NMDA receptors induces membrane insertion of new AMPA receptors and LTP in cultured hippocampal neurons.</a> Neuron. 29 (1), 243-254 (2001).</li><li>Sanz-Clemente, A., Nicoll, R. A., Roche, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity+in+NMDA+Receptor+Composition:+Many+Regulators,+Many+Consequences.">Diversity in NMDA Receptor Composition: Many Regulators, Many Consequences.</a> The Neuroscientist: A Review Journal Bringing Neurobiology, Neurology and Psychiatry. 19 (1), 62-75 (2013).</li><li>Tham, D. K. L., Moukhles, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determining+Cell-surface+Expression+and+Endocytic+Rate+of+Proteins+in+Primary+Astrocyte+Cultures+Using+Biotinylation.">Determining Cell-surface Expression and Endocytic Rate of Proteins in Primary Astrocyte Cultures Using Biotinylation.</a> Journal of Visualized Experiments. (125), (2017).</li><li>Bermejo, M. K., Milenkovic, M., Salahpour, A., Ramsey, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+Synaptic+Plasma+Membrane+and+Postsynaptic+Density+Proteins+Using+a+Discontinuous+Sucrose+Gradient.">Preparation of Synaptic Plasma Membrane and Postsynaptic Density Proteins Using a Discontinuous Sucrose Gradient.</a> Journal of Visualized Experiments. (91), e51896 (2014).</li><li>Makino, H., Malinow, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AMPA+receptor+incorporation+into+synapses+during+LTP:+the+role+of+lateral+movement+and+exocytosis.">AMPA receptor incorporation into synapses during LTP: the role of lateral movement and exocytosis.</a> Neuron. 64 (3), 381-390 (2009).</li><li>Bailey, D. M., Kovtun, O., Rosenthal, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody-Conjugated+Single+Quantum+Dot+Tracking+of+Membrane+Neurotransmitter+Transporters+in+Primary+Neuronal+Cultures.">Antibody-Conjugated Single Quantum Dot Tracking of Membrane Neurotransmitter Transporters in Primary Neuronal Cultures.</a> Methods in Molecular Biology. 1570, 165-177 (2017).</li><li>Trussell, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recording+and+analyzing+synaptic+currents+and+synaptic+potentials.">Recording and analyzing synaptic currents and synaptic potentials.</a> Current Protocols in Neuroscience. Chapter 6, Unit. , (2001).</li><li>Barreto-Chang, O. L., Dolmetsch, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+Imaging+of+Cortical+Neurons+using+Fura-2+AM.">Calcium Imaging of Cortical Neurons using Fura-2 AM.</a> Journal of Visualized Experiments. (23), e1067 (2009).</li></ol>

细胞与其环境之间的相互作用(例如,与其他细胞的沟通、对不同刺激的反应等)在很大程度上依赖于细胞表面受体的正确表达。表面表达受体含量的快速和微调调节使细胞能够对不断变化的环境做出适当的反应。在神经元的特殊情况下,合成表达受体的数量、定位和亚单位组成的变化严重影响突触交流、突触可塑性、突触发生和突触修剪3, 5,<sup clas...

细胞利用贩运的活性过程来将蛋白质动员到特定的亚细胞定位中,并对其功能进行严格的时空调节1。这个过程对于跨膜受体尤其重要,因为细胞对不同环境刺激的反应依赖于受体激活触发的细胞内级联。细胞可以通过改变受体亚细胞贩运调节2在细胞表面表达的受体的密度、定位和亚单位组成来改变这些反应。将新合成的受体插入血浆膜,以及内分泌和现有受体的循环利用,是确定表面表达受体2的净池的贩运过程的例子。许多分子机制合作调节蛋白质贩运,包括蛋白质-蛋白质相互作用和翻译后修饰,如磷酸化、泛化或棕榈化2。
在结构高度专业化的强极化细胞中,特别需要调节受体贩运。典型的例子是通过调节贩运谷氨酸受体(GluRs)控制神经元功能3,4。谷氨酸,主要兴奋神经递质,结合和激活表面表达的GluRs,以控制基本的生理神经元功能,如突触神经传递和突触可塑性。从神经发育障碍到神经退行性疾病,在广泛的神经病变中观察到了改变的GluR贩运,这一事实凸显了这个过程的重要性5。因此,了解控制GluR贩运的分子事件在许多研究领域是值得关注的。
在此协议中,使用基于抗体馈送的方法量化原海马神经元表面表达的GluRs水平,并评估内化和再循环的变化如何导致观察到的净表面表达。使用药理学和/或过度表达具有特定突变的外源受体,使该协议成为研究神经元适应不同环境刺激的分子机制的一种特别有力的方法。该协议效用的最后一个例子是研究环境中的多因素变化(如疾病模型中)通过检查此类模型中的表面表达如何影响 GluR 贩运。
使用具体的例子,初步演示了模仿生理突触刺激的药理学操作[化学LTP(cLTP)]如何增加AMPA型GluRs(AMPARs)内源性GluA1亚单位的表面表达6.还分析了NMDA型GluRs(NmDARs)的GluN2B亚单位的过度表达磷-模拟形式的贩运,以说明如何利用该协议研究特定翻译后对GluR贩运的管制修改。虽然使用这些具体的例子,该协议可以很容易地应用于其他GluRs和其他受体和蛋白质,具有抗原细胞外域。如果没有可用于细胞外域的抗体,过度表达细胞外表位标记(例如,标记、Myc-、GFP 标记等)蛋白质有助于蛋白质标记。
当前协议提供了使用特定抗体量化特定 GluR 亚型密度和贩运的说明。该协议可用于研究 1) 总 GluR 表面表达,2) GluR 内化,以及 3) GluR 回收。要单独研究每个过程,建议从第 1 节和第 2 节开始,然后继续第 3、4 或 5 节。在所有情况下,以第 6 和 8 节结束 (图 1)。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>18 mm dia. #1.5 thick coverglasses</td>
			<td>Neuvitro</td>
			<td>GG181.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 555-conjugated goat anti-mouse secondary</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A21424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 555-conjugated goat anti-rabbit secondary</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A21429</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 647-conjugated goat anti-mouse secondary</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A21236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 647-conjugated goat anti-rabbit secondary</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A21245</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C7902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Costar Flat Bottom Cell Culture Plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynasore</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>2897</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>0219</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit Fab fragments</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>SAB3700970</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H7006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P9541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G7513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 2000</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11668019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-GluA1 antibody</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB2263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6546</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal Media</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21103049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NGS</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>Ab7481</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>PM999</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pelco BioWave</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>36500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PFA</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>43368</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picrotoxin</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>1128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-D-lysine hydrobromide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7280</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold Antifade Mountant</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>P36934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-GFP antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-PSD-95 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>2507</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Strychnine</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>2785</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S0389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost plus microscope slides</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>X100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TTX</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>1078</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an antibody feeding approach to study glutamate receptor trafficking in dissociated primary hippocampal cultures

细胞对外部刺激的反应严重依赖在给定时刻在细胞表面表达的受体组。因此,表面表达受体的种群不断适应,并受到严格的调节机制的制约。生物学中研究最多的贩运事件是谷氨酸受体(GluRs)突触表达的调节控制。GluRs调解中枢神经系统的绝大多数兴奋性神经传递,并控制突触和神经元水平(例如,突触可塑性)的生理活动依赖性功能和结构变化。表面表达的GluRs的数量、位置和亚单位成分的修改深刻地影响神经元功能,事实上,这些因素的变化与不同的神经病变有关。这里介绍的是一个研究分离海马原神经元的GluR贩运的方法。"抗体喂养"方法用于对表面和内膜表示的 GluR 群体进行差异可视化。通过在活细胞上标记表面受体并在不同时间固定它们,以便受体内分泌和/或循环利用,可以评估并选择性地研究这些贩运过程。这是一个多功能的协议,可以结合药理学方法或过度表达改变的受体,以获得有关影响GluR贩运的刺激和分子机制的宝贵信息。同样,它可以很容易地适应研究其他受体或表面表达的蛋白质。

研究谷氨酸受体贩运的这个方案基于细胞表面表达的受体和内部膜表达的受体的差分标记。分离是通过在膜渗透之前和之后标记受体,使用相同的原抗体,但二级抗体与不同的荧光团结合。正如包括协议在内的可选步骤所概述的,这是一种非常通用的方法,用于询问不同的受体贩运过程,如内部化和回收化,并可轻松适应调查人员的需求(图1).
<p class="jove_c...

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An Antibody Feeding Approach to Study Glutamate Receptor Trafficking in Dissociated Primary Hippocampal Cultures

本文提出了一种研究分离原发海马培养物的谷氨酸受体(GluR)贩运的方法。使用抗体喂养方法将内源性或过度表达的受体与药理学方法相结合,该方法允许通过调节来识别调节GluR表面表达的分子机制内部化或回收过程。

抗体喂养方法研究分离原发性希马培养物中的谷氨酸受体贩运

Cellular responses to external stimuli heavily rely on the set of receptors expressed at the cell surface at a given moment. Accordingly, the population ...

细胞对外部刺激的反应严重依赖在给定时刻在细胞表面表达的一组蛋白质。因此，这些蛋白质的数量、亚细胞定位和亚单位组成是动态控制的。在这里，我们将使用抗体喂养方法量化细胞培养物中表面表达受体的水平，只要内化和回收恢复。这是一个非常通用的协议，提供表面表达蛋白质的调节的机械信息。在我们的示例中，我们将研究初级海马神经元中的谷氨酰胺受体。该协议可以适应任何蛋白质拥有一个原基因细胞外表位，如果没有抗体，转出标记结构可以有用的标记和研究特定的突变。在我们的示例中，我们使用抗体对抗内源性 GluA1，并标记 Glu12 B.To 开始此过程，将盖滑细胞侧转移到石蜡膜覆盖的托盘上，以保存试剂，并促进操作。保存和维护37摄氏度的有条件介质，用于孵化和清洗步骤。在室温下用在条件介质中稀释的原抗体孵育细胞15分钟。在此之后，使用真空移液器小心吸出含有介质的抗体，并使用条件介质清洗细胞三次。如果研究表面与细胞内受体表达，则在此步骤之后修复具有半蛋白醛的细胞，如文本协议中所述。保持在条件介质中的细胞没有抗体，并在37摄氏度下将它们返回到培养箱，以便进行内化。如果研究内化过程，在此步骤后修复具有甲状醛的细胞，如文本协议中所述。要阻断附着在表面表达受体上未内化的原抗体上的表位，用未结合的 Fab 抗 IgG 抗体片段孵育细胞，在室温下稀释 20 分钟。在此之后，用条件介质清洗细胞三次。在37摄氏度下用含有80微摩尔Dynasore的调节介质孵育洗净的井，以便回收内化受体。完成活细胞的修改后，用PBS加洗一次细胞。在PBS中加入4%的甲醛和4%蔗糖的溶液，并在室温下在烟罩中孵育7至8分钟，以修复细胞。然后用常规PBS清洗细胞三次。在PBS中加入10%正常山羊血清溶液，并在室温下孵育30分钟，以阻止非特异性结合位点。接下来，在室温下用荧光标记二次抗体在PBS中稀释3%NGS的细胞孵育一小时，以标记初级抗体标签受体。在此之后，用PBS清洗细胞三次。要开始标记细胞内受体，在PBS中加入0.25%TritonX溶液，并在室温下孵育5至10分钟，使细胞渗透。然后在室温下用10%NGS进行30分钟的阻滞。如果研究表面与总，孵育细胞与以前使用的相同原抗体，稀释与3%NGS在PBS，在室温一小时，标签细胞内受体。接下来，用PBS清洗细胞三次。标签与第二荧光标记的二次抗体，稀释在3%NGS在PBS，在室温下一小时。在此用 PBS 洗三次细胞后。首先轻轻地将盖滑，细胞侧向下，在12至15微升的适当安装介质上安装细胞。然后在适当的共合显微镜上成像细胞，并分析文本协议中概述的细胞。此研究谷氨酸受体贩运的协议基于在细胞表面和在内部膜中表达的受体的鉴别标记。获得共体图像后，荧光信号可以很容易地量化，以显示表面表达的增加，相对于细胞内人口，遵循化学LTP。在非渗透细胞中无法获得PSD-95信号，这证明了等离子膜的完整性。这表明表面GluA1获得的信号确实对应于表面表示受体。重要的是，在非渗透条件下，可以观察到内化GluA1的最小信号，表明所有表面表位都被初始抗体标签所占据。然后识别内化的受体。这个例子突出了S1480的GluN2B磷酸化促进受体内化。与野生型受体相比，磷化突变体S1480E的内化率要高得多。正如预期的那样，在控制中，内化受体不会获得任何信号。接下来，确定回收受体和内化受体。产生的回收率表明GluN2B S1480E对NMDAR回收没有影响。在控制中，在没有 Fab 阻塞的情况下，可以观察到表面表示 GluN2B 的强烈信号。该信号在 Fab 处理的培养文化中消失，表明阻断协议足以完全阻断表面表达的表位，并且回收后观察到的表面信号确实与贩运回等离子膜的受体相对应。目前的协议只是可用于研究表面表达蛋白调控的方法之一。也可以采取其他方法来扩展或验证此处获得的数据。这些方法包括生化方法，如生物基化、生命成像技术或功能方法，如电生理学或钙成像。我们使用PFA冻结受体的定位，但是PFA是已知的致癌物质，因此在戴合适的PPE时，在烟罩下使用PFA执行步骤至关重要。

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Organotypic Hippocampal Slice Cultures

器官型海马切片培养

The hippocampus, a component of the limbic system, plays important roles in long-term memory and spatial navigation 1. Hippocampal neurons can modify the ...

科研

神经科学

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

谷氨酸和GABA快速微离子导入：一个有用​​的工具，调查突触整合

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

Calcium Phosphate Transfection of Primary Hippocampal Neurons

原代海马神经元的磷酸钙转染

Calcium phosphate precipitation is a convenient and economical method for transfection of cultured cells. With optimization, it is possible to use this ...

Membrane Potential Dye Imaging of Ventromedial Hypothalamus Neurons From Adult Mice to Study Glucose Sensing

膜下丘脑腹内侧神经元的电位染料成像从成年小鼠为研究葡萄糖传感

Studies of neuronal activity are often performed using neurons from rodents less than 2 months of age due to the technical difficulties associated with ...

Brain Slice Biotinylation: An Ex Vivo Approach to Measure Region-specific Plasma Membrane Protein Trafficking in Adult Neurons

Brain Slice Biotinylation: An Ex Vivo Approach to Measure Region-specific Plasma Membrane Protein Trafficking in Adult Neurons

大脑切片生物素化：一个<em&gt;前体内</em&gt;方法来衡量地区特有的质膜蛋白贩运成年神经元

Regulated endocytic trafficking is the central mechanism facilitating a variety of neuromodulatory events, by dynamically controlling receptor, ion ...

Using an &#945;-Bungarotoxin Binding Site Tag to Study GABA A Receptor Membrane Localization and Trafficking

Using an ÃƒÅ½Ã‚Â±-Bungarotoxin Binding Site Tag to Study GABA A Receptor Membrane Localization and Trafficking

使用α-银环蛇毒素结合位点标记来研究GABA A受体膜定位和贩运

It is increasingly evident that neurotransmitter receptors, including ionotropic GABA A receptors (GABAAR), exhibit highly dynamic trafficking and cell ...

The Analysis of Neurovascular Remodeling in Entorhino-hippocampal Organotypic Slice Cultures

神经血管重塑的分析Entorhino，海马脑切片培养

Ischemic brain injury is among the most common and devastating conditions compromising proper brain function and often leads to persisting functional ...

Stripe Assay to Study the Attractive or Repulsive Activity of a Protein Substrate Using Dissociated Hippocampal Neurons

条纹分析来研究蛋白质底物使用游离海马神经元的吸引力或令人反感的活动

Growing axons develop a highly motile structure at their tip, termed the growth cone. The growth cone contacts extracellular environmental cues to ...

Low-Density Primary Hippocampal Neuron Culture

低密度原海马神经元文化

The ability to probe the structure and physiology of individual nerve cells in culture is crucial to the study of neurobiology, and allows for flexibility ...

Organotypic Hippocampal Slice Cultures As a Model to Study Neuroprotection and Invasiveness of Tumor Cells

器官海马切片培养模型研究肿瘤细胞的神经保护和侵袭性

In organotypic hippocampal slice cultures (OHSC), the morphological and functional characteristics of both neurons and glial cells are well preserved. ...