Name: an antibody feeding approach to study glutamate receptor trafficking in dissociated primary hippocampal cultures
Uploaded: 2019-08-02T15:00:00
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Wir danken dem Northwestern Center for Advanced Microscopy für den Einsatz des Nikon A1 Konfokalmikroskops und deren Unterstützung bei der Planung und Analyse der Experimente. Diese Forschung wurde von NIGMS (T32GM008061) (A. M. C.) und NIA (R00AG041225) und einem NARSAD Young Investigator Grant von der Brain & Behavior Research Foundation (#24133) (A. S. -C.) unterstützt.

Die Arbeiten im Zusammenhang mit der Vorbereitung der Primärkultur im Hippocampus wurden vom Northwestern University Animal Care and Use Committee (Protokoll #IS00001151) überprüft und genehmigt.
1. Vorbereitung vor der Etikettierung
<ol><li>
Vorbereitung und Aufrechterhaltung der primären Hippocampuskulturen
	<ol>
<li>Bereiten Sie primäre Hippocampuskulturen mit einer Dichte von 150.000 Zellen vor, die auf poly-D-Lysin-beschichteten (0,1 mg/ml) 18 mm Deckgläsern platt...

<ol>
	<li>Enns, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overview+of+protein+trafficking+in+the+secretory+and+endocytic+pathways.">Overview of protein trafficking in the secretory and endocytic pathways.</a> Current Protocols in Cell Biology. , (2001).</li><li>Bedford, F. K., Binder, M. D., Hirokawa, N., Windhorst, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Encyclopedia of Neuroscience. , 3385-3389 (2009).</li><li>Diering, G. H., Huganir, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+AMPA+Receptor+Code+of+Synaptic+Plasticity.">The AMPA Receptor Code of Synaptic Plasticity.</a> Neuron. 100 (2), 314-329 (2018).</li><li>Lussier, M. P., Sanz-Clemente, A., Roche, K. 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Die Interaktion zwischen einer Zelle und ihrer Umgebung (z. B. Kommunikation mit anderen Zellen, Reaktion auf unterschiedliche Reize usw.) beruht stark auf der korrekten Expression von Rezeptoren an der Zelloberfläche. Die schnelle und fein abgestimmte Regulierung des oberflächenausgedrückten Rezeptorinhalts ermöglicht eine angemessene zelluläre Reaktion auf eine sich ständig verändernde Umgebung. Im besonderen Fall von Neuronen, Veränderungen in der Anzahl, Lokalisierung und Untereinheit Zusammensetzung der syna...

Zellen nutzen den aktiven Prozess des Menschenhandels, um Proteine zu bestimmten subzellulären Lokalisationen zu mobilisieren und eine strenge raumzeitliche Regulierung über ihre Funktion auszuüben1. Dieser Prozess ist besonders wichtig für Transmembran-Rezeptoren, da zelluläre Reaktionen auf verschiedene Umweltreize auf intrazellulären Kaskaden beruhen, die durch Dieoraktivierung ausgelöst werden. Zellen sind in der Lage, diese Reaktionen zu ändern, indem sie die Dichte, Lokalisierung und Zusammensetzung der Untereinheiten von Rezeptoren ändern, die an der Zelloberfläche über die subzelluläre HandelsverordnungdesRezeptors 2 ausgedrückt werden. Das Einsetzen von neu synthetisierten Rezeptoren in die Plasmamembran, zusammen mit Endozytose und Recycling bestehender Rezeptoren sind Beispiele für Menschenhandelsprozesse, die den Netzpool von oberflächenausgedrückten Rezeptoren bestimmen2. Viele molekulare Mechanismen arbeiten zusammen, um den Proteinhandel zu regulieren, einschließlich Protein-Protein-Wechselwirkungen und posttranslationalen Modifikationen wie Phosphorylierung, Ubiquitination oder Palmitoylierung2.
Die Regulierung des Rezeptorhandels ist insbesondere in stark polarisierten Zellen mit hochspezialisierten Strukturen erforderlich. Das paradigmatische Beispiel ist die Kontrolle der neuronalen Funktion durch regulierten Handel mit Glutamatrezeptoren (GluRs)3,4. Glutamat, der wichtigste exzitatorische Neurotransmitter, bindet und aktiviert oberflächenexprimierte GluRs, um grundlegende physiologische neuronale Funktionen wie synaptische Neurotransmission und synaptische Plastizität zu steuern. Die Tatsache, dass veränderter GluR-Handel in einem breiten Spektrum von Neuropathien beobachtet wurde, von neuroentwicklungsbedingten Störungen bis hin zu neurodegenerativen Erkrankungen, unterstreicht die Bedeutung dieses Prozesses5. Daher ist das Verständnis der molekularen Ereignisse, die den GluR-Handel kontrollieren, in vielen Forschungsbereichen von Interesse.
In diesem Protokoll wird eine Antikörper-Fütterungsmethode verwendet, um den Gehalt an oberflächenausgedrückten GluRs in primären Hippocampus-Neuronen zu quantifizieren und zu bewerten, wie Veränderungen der Internalisierung und des Recyclings zur beobachteten Nettooberflächenexpression führen. Die Verwendung von Pharmakologie und/oder Überexpression von exogenen Rezeptoren mit spezifischen Mutationen macht dieses Protokoll zu einem besonders leistungsfähigen Ansatz für die Untersuchung molekularer Mechanismen, die der neuronalen Anpassung an verschiedene Umweltreize zugrunde liegen. Ein letztes Beispiel für den Nutzen dieses Protokolls ist die Untersuchung, wie sich multifaktorielle Veränderungen in der Umwelt (z. B. bei Krankheitsmodellen) durch die Untersuchung der Oberflächenexpression in solchen Modellen auf den GluR-Handel auswirkt.
Anhand spezifischer Beispiele wird zunächst demonstriert, wie eine pharmakologische Manipulation, die physiologische synaptische Stimulation imitiert [chemische LTP (cLTP)] die Oberflächenexpression der endogenen GluA1-Untereinheit des AMPA-Typs von GluRs (AMPARs) erhöht. 6. Der Handel mit einer überexprimierten phospho-mimetischen Form der GluN2B-Untereinheit von GluRs (NMDARs) vom Typ NMDA wird ebenfalls analysiert, um zu veranschaulichen, wie dieses Protokoll verwendet werden kann, um die Regulierung des GluR-Handels durch spezifische posttranslationale Änderungen. Obwohl diese spezifischen Beispiele verwendet werden, kann dieses Protokoll leicht auf andere GluRs und andere Rezeptoren und Proteine angewendet werden, die antigene extrazelluläre Domänen besitzen. Für den Fall, dass keine Antikörper für extrazelluläre Domänen verfügbar sind, können Überexpression von extrazellulären Epitop-Tags (z. B. Flag-, Myc-, GFP-taggt, etc.) Proteine bei der Proteinkennzeichnung helfen.
Das aktuelle Protokoll enthält Anweisungen zur Quantifizierung der spezifischen GluR-Subtypdichte und des Menschenhandels mit spezifischen Antikörpern. Dieses Protokoll kann verwendet werden, um 1) die gesamte GluR-Oberflächenexpression, 2) GluR-Internalisierung und 3) GluR-Recycling zu untersuchen. Um jeden Prozess einzeln zu studieren, wird empfohlen, mit den Abschnitten 1 und 2 zu beginnen und entweder mit Abschnitt 3, 4 oder 5 fortzufahren. In allen Fällen mit den Abschnitten 6 und 8 beenden (Abbildung 1).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>18 mm dia. #1.5 thick coverglasses</td>
			<td>Neuvitro</td>
			<td>GG181.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 555-conjugated goat anti-mouse secondary</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A21424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 555-conjugated goat anti-rabbit secondary</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A21429</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 647-conjugated goat anti-mouse secondary</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A21236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 647-conjugated goat anti-rabbit secondary</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A21245</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C7902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Costar Flat Bottom Cell Culture Plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynasore</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>2897</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>0219</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit Fab fragments</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>SAB3700970</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H7006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P9541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G7513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 2000</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11668019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-GluA1 antibody</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB2263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6546</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal Media</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21103049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NGS</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>Ab7481</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>PM999</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pelco BioWave</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>36500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PFA</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>43368</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picrotoxin</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>1128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-D-lysine hydrobromide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7280</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold Antifade Mountant</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>P36934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-GFP antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-PSD-95 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>2507</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Strychnine</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>2785</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S0389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost plus microscope slides</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>X100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TTX</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>1078</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an antibody feeding approach to study glutamate receptor trafficking in dissociated primary hippocampal cultures

Zelluläre Reaktionen auf äußere Reize hängen stark von der Reihe von Rezeptoren ab, die zu einem bestimmten Zeitpunkt an der Zelloberfläche ausgedrückt werden. Dementsprechend passt sich die Population der oberflächenausgedrückten Rezeptoren ständig an und unterliegt strengen Regulationsmechanismen. Das paradigmatische Beispiel und eines der am meisten untersuchten Handelsereignisse in der Biologie ist die regulierte Kontrolle der synaptischen Expression von Glutamatrezeptoren (GluRs). GluRs vermitteln die überwiegende Mehrheit der exzitatorischen Neurotransmission im zentralen Nervensystem und steuern physiologische aktivitätsabhängige funktionelle und strukturelle Veränderungen auf synaptischer und neuronaler Ebene (z. B. synaptische Plastizität). Veränderungen in der Anzahl, Lage und UntereinheitZusammensetzung der Oberfläche ausgedrückt GluRs tief beeinflussen neuronale Funktion und in der Tat, Veränderungen in diesen Faktoren sind mit verschiedenen Neuropathien verbunden. Präsentiert hier ist eine Methode zur Untersuchung des GluR-Handels mit dissoziierten Hippocampus-Primärneuronen. Ein "Antikörper-Feeding"-Ansatz wird verwendet, um GluR-Populationen, die an der Oberfläche und den inneren Membranen ausgedrückt werden, differenziell zu visualisieren. Durch die Kennzeichnung von Oberflächenrezeptoren auf lebenden Zellen und deren Fixierung zu unterschiedlichen Zeitpunkten, um Rezeptoren-Endozytose und/oder Recycling zu ermöglichen, können diese Handelsprozesse evaluiert und selektiv untersucht werden. Dies ist ein vielseitiges Protokoll, das in Kombination mit pharmakologischen Ansätzen oder Überexpression veränderter Rezeptoren verwendet werden kann, um wertvolle Informationen über Reize und molekulare Mechanismen zu gewinnen, die den GluR-Handel beeinflussen. In ähnlicher Weise kann es leicht angepasst werden, um andere Rezeptoren oder oberflächenausgedrückte Proteine zu untersuchen.

Dieses Protokoll zur Untersuchung des Schmieramrezeptorhandels basiert auf der Differentialkennzeichnung von Rezeptoren, die an der Zelloberfläche ausgedrückt werden, und solchen, die in internen Membranen ausgedrückt werden. Die Segregation wird durch die Kennzeichnung der Rezeptoren vor und nach der Membranpermeabilisierung unter Verwendung desselben primären Antikörpers, aber eines sekundären Antikörpers, der mit einem anderen Fluorophor konjugiert ist, erreicht. Wie in den opti...

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An Antibody Feeding Approach to Study Glutamate Receptor Trafficking in Dissociated Primary Hippocampal Cultures

Dieser Artikel stellt eine Methode zur Untersuchung des Schleimatrezeptorhandels (GluR) in dissoziierten primären Hippocampuskulturen vor. Mit einem Antikörper-Fütterungsansatz zur Kennzeichnung endogenes oder überexprimierter Rezeptoren in Kombination mit pharmakologischen Ansätzen ermöglicht diese Methode die Identifizierung molekularer Mechanismen zur Regulierung der GluR-Oberflächenexpression durch Modulation Internalisierungs- oder Recyclingprozesse.

Ein Antikörper-Fütterungsansatz zur Untersuchung des Schleimatrezeptorhandels in dissoziierten primären Hippocampuskulturen

Cellular responses to external stimuli heavily rely on the set of receptors expressed at the cell surface at a given moment. Accordingly, the population ...

Zelluläre Reaktionen auf äußere Reize hängen stark von der Menge an Proteinen ab, die in einem bestimmten Moment auf der Zelloberfläche exprimiert werden. Dementsprechend werden die Anzahl, die subzelluläre Lokalisierung und die Zusammensetzung dieser Proteine dynamisch gesteuert. Hier werden wir einen Antikörper-Fütterungsansatz verwenden, um den Gehalt an oberflächenausgedrückten Rezeptoren in Zellkulturen zu quantifizieren, solange die Internalisierung und das Recycling wieder aufgenommen werden.Dies ist ein sehr vielseitiges Protokoll, das mechanistische Informationen über die Regulierung von oberflächenausgedrückten Proteinen liefert. In unserem Beispiel werden wir Glutaminrezeptoren in primären Hippocampus-Neuronen untersuchen. Dieses Protokoll kann an jedes Protein angepasst werden, das ein anagenes extrazelluläres Epitop besitzt, wenn Antikörper nicht verfügbar sind, kann die Transvtion von markierten Konstrukten sowohl für die Kennzeichnung als auch für das Studium spezifischer Mutationen nützlich sein.In unseren Beispielen verwenden wir Antikörper gegen endogenes GluA1 und mit Glu12 B.To dieses Verfahren zu beginnen, die Abdeckung rutscht Zellseite bis zu einem Paraffinfilm bedeckt Tablett, reagenzien zu speichern, und Manipulation zu erleichtern. Speichern und pflegen Sie konditionierte Medien bei 37 Grad Celsius für Inkubations- und Waschschritte. Inkubieren Sie die Zellen mit primären Antikörpern, die in konditionierten Medien bei Raumtemperatur 15 Minuten verdünnt werden.Danach verwenden Sie eine Vakuumpipette, um den medienhaltigen Antikörper sorgfältig abzusaugen und die Zellen dreimal mit konditionierten Medien zu waschen. Wenn die Untersuchung der Oberflächen- und intrazellulären Rezeptorexpression die Zellen nach diesem Schritt mit Paraformaldehyd fixieren, wie im Textprotokoll beschrieben. Pflegen Sie die Zellen in konditionierten Medien ohne Antikörper, und geben Sie sie bei 37 Grad Celsius an den Inkubator zurück, um eine Internalisierung zu ermöglichen.Wenn Sie den Internalisierungsprozess untersuchen, fixieren Sie die Zellen nach diesem Schritt mit Paraformaldehyd, wie im Textprotokoll beschrieben. Um die Epitope auf dem primären Antikörper zu blockieren, der an der Oberfläche exprimierte Rezeptoren, die nicht internalisiert wurden, inkubieren Zellen mit unkonjugierten Fab Anti-IgG Antikörperfragmente in konditionierten Medien verdünnt, für 20 Minuten bei Raumtemperatur. Danach die Zellen dreimal mit konditionierten Medien waschen.Inkubieren Sie die gewaschenen Brunnen mit konditionierten Medien, die 80 Mikromolar Dynasore enthalten, bei 37 Grad Celsius, um das Recycling von internalisierten Rezeptoren zu ermöglichen. Nach Abschluss der Modifikationen an lebenden Zellen, waschen Sie die Zellen einmal mit PBS plus. Fügen Sie den Zellen eine Lösung von 4% Paraformaldehyd und 4%Saccharose in PBS hinzu und in einer Dunstabzugshaube bei Raumtemperatur sieben bis acht Minuten zu brüten, um die Zellen zu fixieren.Dann waschen Sie die Zellen dreimal mit regelmäßigen PBS. Fügen Sie den Zellen eine Lösung von 10% Normal Goat Serum in PBS hinzu und inkubieren Sie 30 Minuten lang bei Raumtemperatur, um unspezifische Bindungsstellen zu blockieren. Als nächstes inkubieren Sie die Zellen mit fluoreszierend markiertem sekundären Antikörper, der in 3%NGS in PBS bei Raumtemperatur für eine Stunde verdünnt wird, um primäre Antikörper-Label-Rezeptoren zu kennzeichnen.Danach die Zellen dreimal mit PBS waschen. Um mit der Etikettierung der intrazellulären Rezeptoren zu beginnen, fügen Sie eine Lösung von 0,25%TritonX in PBS hinzu und inkubieren Sie bei Raumtemperatur für fünf bis zehn Minuten, um die Zellen zu permeabilisieren. Dann mit 10%NGS bei Raumtemperatur für 30 Minuten blockieren.Wenn Sie Oberfläche im Vergleich zur Gesamtmenge untersuchen, inkubieren Sie die Zellen mit dem gleichen primären Antikörper, der zuvor verwendet wurde, verdünnt mit 3%NGS in PBS, bei Raumtemperatur für eine Stunde, um die intrazellulären Rezeptoren zu kennzeichnen. Als nächstes waschen Sie die Zellen dreimal mit PBS. Etikett mit zweitem fluoreszierend markiertem Sekundärantikörper, verdünnt in 3%NGS in PBS, bei Raumtemperatur für eine Stunde.Danach waschen Sie die Zellen dreimal mit PBS. Legen Sie zunächst die Abdeckungsrutschen, Zellseite nach unten, auf 12 bis 15 Mikroliter des entsprechenden Montagemediums, um die Zellen zu montieren. Dann stellen Sie die Zellen auf dem entsprechenden konfokalen Mikroskop ab, und analysieren Sie die Zellen, wie im Textprotokoll beschrieben.Dieses Protokoll zur Untersuchung des Schmieramatrezeptorhandels basiert auf der Differenzkennzeichnung von Rezeptoren, die an der Zelloberfläche ausgedrückt werden, und solchen, die in internen Membranen ausgedrückt werden. Nach dem Erfassen konfokaler Bilder kann das fluoreszierende Signal leicht quantifiziert werden, um eine Zunahme der Oberflächenexpression im Verhältnis zur intrazellulären Population nach chemischer LTP zu zeigen. In nicht permeabilisierten Zellen kann kein Signal für PSD-95 empfangen werden, was die Integrität der Plasmamembran demonstriert.Dies deutet darauf hin, dass das für die Oberfläche GluA1 erhaltene Signal tatsächlich oberflächenausgedrückten Rezeptoren entspricht. Wichtig ist, dass ein minimales Signal für internalisiertegluA1 unter Nicht-Permeabilisierungsbedingungen beobachtet werden kann, was zeigt, dass alle Oberflächenepitope durch die anfängliche Runde der Antikörperkennzeichnung belegt sind. Rezeptoren, die verinnerlicht wurden, werden dann identifiziert.Dieses Beispiel zeigt, dass GluN2B-Phosphorylierung bei S1480 die Verinnerlichen von Rezeptoren fördert. Da die phosphomimetische Mutante S1480E ein viel höheres Internalisierungsverhältnis im Vergleich zu Wildtyp-Rezeptoren zeigte. Wie erwartet, wird kein Signal für internalisierte Rezeptoren in der Steuerung erhalten.Als nächstes werden recycelte Rezeptoren und internalisierte Rezeptoren identifiziert. Das erzeugte Recyclingverhältnis zeigt, dass GluN2B S1480E keinen Einfluss auf das NMDAR-Recycling hat. Bei der Steuerung kann bei der Oberfläche, die GluN2B in Abwesenheit einer Fab-Blockierung ausdrückt, ein starkes Signal beobachtet werden.Dieses Signal verschwindet in Fab-behandelten Kulturen, was zeigt, dass das Blockierungsprotokoll ausreicht, um die oberflächenausgedrückten Epitope vollständig zu blockieren, und dass die nach dem Recycling beobachteten Oberflächensignale tatsächlich Rezeptoren entsprechen, die an die Plasmamembran zurückgeführt werden. Das aktuelle Protokoll ist nur eine der Methoden, die zur Untersuchung der Regulierung von oberflächenausgedrückten Proteinen zur Verfügung stehen. Es können andere Ansätze zur Erweiterung oder Überprüfung der hier erhaltenen Daten ergriffen werden.Dazu gehören biochemische Methoden, wie Biotinylierung, Lebensbildgebungstechniken oder funktionelle Ansätze wie Elektrophysiologie oder Kalziumbildgebung. Wir verwenden PFA, um die Lokalisation von Rezeptoren einzufrieren, aber PFA ist ein bekanntes Karzinogen, daher ist es wichtig, Schritte mit PFA unter einer Dunstabzugshaube durchzuführen, während entsprechende PSA getragen wird.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

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Organotypischen hippokampalen Slice-Kulturen

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Forschung

Neurowissenschaften

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Schnelle Micro-Iontophorese von Glutamat und GABA: Ein nützliches Tool, um Synaptic Integration Untersuchen

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

Calcium Phosphate Transfection of Primary Hippocampal Neurons

Calciumphosphat-Transfektion von primären Hippocampus-Neuronen

Calcium phosphate precipitation is a convenient and economical method for transfection of cultured cells. With optimization, it is possible to use this ...

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Mit Hilfe eines α-Bungarotoxin Binding Site Tag an GABA A-Rezeptor-Membranlokalisierung und Handel Studieren

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Die Analyse der neurovaskuläre Remodeling in Entorhino-Hippocampus Organotypischen Kulturen

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Low-Density Primary Hippocampal Neuron Culture

Low-Density Primäre Hippocampus Kultur

The ability to probe the structure and physiology of individual nerve cells in culture is crucial to the study of neurobiology, and allows for flexibility ...

Organotypic Hippocampal Slice Cultures As a Model to Study Neuroprotection and Invasiveness of Tumor Cells

Organotypischen Hippocampal Slice Kulturen als Modell zur Studie Neuroprotektion und Invasivität der Tumorzellen

In organotypic hippocampal slice cultures (OHSC), the morphological and functional characteristics of both neurons and glial cells are well preserved. ...