Name: murine cervical aortic transplantation model using a modified non-suture cuff technique
Uploaded: 2019-11-02T13:00:00
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Todos os experimentos foram realizados de acordo com as diretrizes do ato alemão de bem-estar animal (TierSchG). (AZ: 55.2-1-54-2532.Vet_02-80-2015).
1. Habitação animal
<ol><li>Para experimentos, use camundongos C57BL/6 masculinos e BALB/c pesando 20-25 g com camundongos C57BL/6 como animais receptores e camundongos BALB/c como animais doadores.</li>
	<li>Compre os animais e a casa em uma instalação livre de patógenos de barreira, de acordo com as diretrizes felasa para monitoramento ...

<ol>
	<li>Rana, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+benefit+of+solid-organ+transplant+in+the+United+States.">Survival benefit of solid-organ transplant in the United States.</a> JAMA Surgery. 150 (3), 252-259 (2015).</li><li>Rana, A., Godfrey, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Outcomes+in+Solid-Organ+Transplantation:+Success+and+Stagnation.">Outcomes in Solid-Organ Transplantation: Success and Stagnation.</a> Texas Heart Institute Journal. 46 (1), 75-76 (2019).</li><li>Meier-Kriesche, H. U., Schold, J. D., Srinivas, T. R., Kaplan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lack+of+improvement+in+renal+allograft+survival+despite+a+marked+decrease+in+acute+rejection+rates+over+the+most+recent+era.">Lack of improvement in renal allograft survival despite a marked decrease in acute rejection rates over the most recent era.</a> American Journal of Transplantation. 4 (3), 378-383 (2004).</li><li>Bagnasco, S. M., Kraus, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intimal+arteritis+in+renal+allografts:+new+takes+on+an+old+lesion.">Intimal arteritis in renal allografts: new takes on an old lesion.</a> Current Opinion in Organ Transplantation. 20 (3), 343-347 (2015).</li><li>Hollis, I. B., Reed, B. N., Moranville, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medication+management+of+cardiac+allograft+vasculopathy+after+heart+transplantation.">Medication management of cardiac allograft vasculopathy after heart transplantation.</a> Pharmacotherapy. 35 (5), 489-501 (2015).</li><li>Verleden, G. M., Raghu, G., Meyer, K. C., Glanville, A. R., Corris, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+classification+system+for+chronic+lung+allograft+dysfunction.">A new classification system for chronic lung allograft dysfunction.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 33 (2), 127-133 (2014).</li><li>Ramzy, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+allograft+vasculopathy:+a+review.">Cardiac allograft vasculopathy: a review.</a> Canadian Journal of Surgery. 48 (4), 319-327 (2005).</li><li>Skoric, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+allograft+vasculopathy:+diagnosis,+therapy,+and+prognosis.">Cardiac allograft vasculopathy: diagnosis, therapy, and prognosis.</a> Croatian Medical Journal. 55 (6), 562-576 (2014).</li><li>Koulack, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+mouse+aortic+transplant+model+of+chronic+rejection.">Development of a mouse aortic transplant model of chronic rejection.</a> Microsurgery. 16 (2), 110-113 (1995).</li><li>Rowinska, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+the+Sleeve+Technique+in+a+Mouse+Model+of+Aortic+Transplantation+-+An+Instructional+Video.">Using the Sleeve Technique in a Mouse Model of Aortic Transplantation - An Instructional Video.</a> Journal of Visualized Experiments. (128), (2017).</li><li>Dietrich, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+transplant+arteriosclerosis:+role+of+intercellular+adhesion+molecule-1.">Mouse model of transplant arteriosclerosis: role of intercellular adhesion molecule-1.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 20 (2), 343-352 (2000).</li><li>M&#228;hler Convenor, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FELASA+recommendations+for+the+health+monitoring+of+mouse,+rat,+hamster,+guinea+pig+and+rabbit+colonies+in+breeding+and+experimental+units.">FELASA recommendations for the health monitoring of mouse, rat, hamster, guinea pig and rabbit colonies in breeding and experimental units.</a> Laboratory Animals. 48 (3), 178-192 (2014).</li><li>Ollinger, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blockade+of+p38+MAPK+inhibits+chronic+allograft+vasculopathy.">Blockade of p38 MAPK inhibits chronic allograft vasculopathy.</a> Transplantation. 85 (2), 293-297 (2008).</li><li>Thomas, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SDF-1/CXCR4/CXCR7+is+pivotal+for+vascular+smooth+muscle+cell+proliferation+and+chronic+allograft+vasculopathy.">SDF-1/CXCR4/CXCR7 is pivotal for vascular smooth muscle cell proliferation and chronic allograft vasculopathy.</a> Transplant International. 28 (12), 1426-1435 (2015).</li><li>Ollinger, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bilirubin:+a+natural+inhibitor+of+vascular+smooth+muscle+cell+proliferation.">Bilirubin: a natural inhibitor of vascular smooth muscle cell proliferation.</a> Circulation. 112 (7), 1030-1039 (2005).</li><li>Segura, A. M., Buja, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+allograft+vasculopathy:+a+complex+multifactorial+sequela+of+heart+transplantation.">Cardiac allograft vasculopathy: a complex multifactorial sequela of heart transplantation.</a> Texas Heart Institute Journal. 40 (4), 400-402 (2013).</li><li>McDaid, J., Scott, C. J., Kissenpfennig, A., Chen, H., Martins, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+utility+of+animal+models+in+developing+immunosuppressive+agents.">The utility of animal models in developing immunosuppressive agents.</a> European Journal of Pharmacology. 759, 295-302 (2015).</li><li>Shi, C., Russell, M. E., Bianchi, C., Newell, J. B., Haber, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+model+of+accelerated+transplant+arteriosclerosis.">Murine model of accelerated transplant arteriosclerosis.</a> Circulation Research. 75 (2), 199-207 (1994).</li><li>Koulack, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Importance+of+minor+histocompatibility+antigens+in+the+development+of+allograft+arteriosclerosis.">Importance of minor histocompatibility antigens in the development of allograft arteriosclerosis.</a> Clinical Immunology and Immunopathology. 80 (3 Pt 1), 273-277 (1996).</li><li>Maglione, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+technique+for+heterotopic+vascularized+pancreas+transplantation+in+mice+to+assess+ischemia+reperfusion+injury+and+graft+pancreatitis.">A novel technique for heterotopic vascularized pancreas transplantation in mice to assess ischemia reperfusion injury and graft pancreatitis.</a> Surgery. 141 (5), 682-689 (2007).</li><li>Oberhuber, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+cervical+heart+transplantation+model+using+a+modified+cuff+technique.">Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique.</a> Journal of Visualized Experiments. (92), e50753 (2014).</li><li>Nakao, A., Ogino, Y., Tahara, K., Uchida, H., Kobayashi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+intestinal+transplantation+using+the+cuff+method+in+rats:+a+histopathological+evaluation+of+the+anastomosis.">Orthotopic intestinal transplantation using the cuff method in rats: a histopathological evaluation of the anastomosis.</a> Microsurgery. 21 (1), 12-15 (2001).</li></ol>

A vasculopatia aloenxerto crônica é a principal causa de perda tardia do enxerto após o transplante de órgãos sólidos do coração e provável renal e pulmão aloenxertos8. Até agora, nenhum regime terapêutico causal poderia ser desenvolvido a fim impedir a formação de CAV.
A fisiopatologia da CAV é multifatorial e envolve aspectos imunológicos e não imunológicos16. O uso de modelos de roedores no transplante tem sido essencial para...

Ao longo das últimas seis décadas, o transplante de órgãos sólidos evoluiu de um procedimento experimental para um padrão de atendimento para o tratamento da falência de órgãos em estágio final1. Devido à melhoria dos agentes antimicrobianos, técnicas cirúrgicas e avanço em regimentos imunossupressores, a taxa de sucesso precoce do transplante de órgãos sólidos aumentou significativamente nas últimas décadas2.
No entanto, as taxas de sobrevivência a longo prazo do enxerto não melhoraram significativamente da mesma forma3. O desenvolvimento da CAV é o principal fator que limita a sobrevivência a longo prazo4,5,6. Esta patologia é caracterizada pela formação de uma camada neointimal concêntrica composta por células musculares lisas, levando ao estreitamento progressivo do vaso e à malperfusão consecutiva do órgão sólido transplantado. Em receptores de transplante cardíaco, lesões CAV podem ser diagnosticadas em até 75% dos pacientes 3 anos após o transplante7.
A fisiopatologia da CAV ainda não é totalmente compreendida. Parece estar relacionado a inúmeros fatores imunológicos e não imunológicos, levando a danos endotélios com posterior ativação endotelial e disfunção8. Até agora, não existe opção de tratamento causal para a prevenção da CAV, enfatizando a necessidade de um modelo animal pequeno reproduzível, a fim de estudar a formação e potencial terapia da CAV.
Com o uso de modelos de transplante de aorta murine, CAV como lesões podem ser vistos 4 semanas após o transplante. Essas lesões consistem principalmente de células musculares lisas vasculares, assim, assemelhando-se à patologia humana. Devido a uma grande variedade de camundongos transgênicos e nocauteados, o uso de modelos de camundongos em patologias associadas ao transplante oferece uma oportunidade única para identificar novas opções terapêuticas e entender seu desenvolvimento. Devido ao pequeno diâmetro dos vasos transplantados no entanto, o uso de modelos de camundongos é comumente associado a curvas de aprendizagem longas e uma alta taxa de complicação inicial9. Com a introdução da técnica de manguito não sutura, esta parte mais desafiadora da operação pode ser facilitada e o diâmetro da anastomose é mantido constante10,11.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Balb-c Mice (H2-d)</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>Strain# 028</td>
			<td>Donor animal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bipolar cautery system</td>
			<td>ERBE</td>
			<td>ICC 50 / 20195-023</td>
			<td>Bipolar cautery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J (H-2b)</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>Strain# 027</td>
			<td>Recipient animal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halsey Needle Holders</td>
			<td>FST</td>
			<td>12501-12</td>
			<td>Needle Holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halsted-Mosquito Forceps</td>
			<td>AESCULAP</td>
			<td>BH111R</td>
			<td>Curved Clamp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Polyimide Tubing</td>
			<td>Nordson MEDICAL</td>
			<td>141-0031</td>
			<td>Cuff-Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Serrefines</td>
			<td>FST</td>
			<td>18055-04</td>
			<td>Micro Vessel Clip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-Adson Forceps (serrated)</td>
			<td>FST</td>
			<td>11018-12</td>
			<td>Standard Forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-Serrefine Clamp Applying Forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>18057-14</td>
			<td>Clipapplicator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S&#38;T Forceps - SuperGrip Tips (Angled 45&#176;)</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>00649-11</td>
			<td>Fine Forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S&#38;T Vessel Dilating Forceps - Angled 10&#176; (Tip diameter 0.2 mm)</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>00125-11</td>
			<td>Vesseldilatator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schott VisiLED Set</td>
			<td>Schott</td>
			<td>MC 1500 / S80-55</td>
			<td>Light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereoscopic microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>SteREO Discovery.V8</td>
			<td>Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Student Fine Scissors / Surgical Scissors - Sharp-Blunt</td>
			<td>FST</td>
			<td>91460-11 / 14001-12</td>
			<td>Standard Sissors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas-T&#252;bingen Spring Scissors (curved, 8.5 cm)</td>
			<td>FST</td>
			<td>15004-08</td>
			<td>Microsissors (curved)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas-T&#252;bingen Spring Scissors (straight, 8.5 cm)</td>
			<td>FST</td>
			<td>15003-08</td>
			<td>Microsissors (straight)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine cervical aortic transplantation model using a modified non-suture cuff technique

Com a introdução de poderosos protocolos imunossupressores, avanços distintos são possíveis na prevenção e terapia de episódios de rejeição aguda. No entanto, apenas pequenas melhorias nos resultados a longo prazo de órgãos sólidos transplantados puderam ser observadas nas últimas décadas. Nesse contexto, a vasculopatia crônica do aloenxerto (CAV) ainda representa a principal causa de insuficiência de órgãos tardia em transplante cardíaco, renal e pulmonar.
Até agora, a patogênese subjacente do desenvolvimento da CAV permanece obscura, explicando por que as estratégias de tratamento eficazes estão atualmente ausentes e enfatizando a necessidade de modelos experimentais relevantes, a fim de estudar a fisiopatologia subjacente Formação CAV. O seguinte protocolo descreve um modelo heterotópico da transplantação do aortic do heterotópico do murine usando uma técnica modificada do punho da não-sutura. Nesta técnica, um segmento da aorta torácica é interposicionado na artéria carótida comum direita. Com o uso da técnica de manguito não sutura, um modelo fácil de aprender e reproduzível pode ser estabelecido, minimizando a possível heterogeneidade do micro anastomoses vascular suturado.

No modelo de transplante totalmente incompatível com O MHC, uma camada neoinsinual concêntrica pode ser vista 4 semanas após o transplante (Figura 2). Esta camada consiste primeiramente em pilhas lisas vasculares do músculo como a coloração imunohistological para SM22 (um marcador seletivo para pilhas suaves maduras do músculo) revelada. Como dito antes, estas pilhas lisas vasculares do músculo são pathognomonic para as lesões consideradas na vasculopatia crônica do allograft. Par...

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Murine Cervical Aortic Transplantation Model using a Modified Non-Suture Cuff Technique

Aqui, apresentamos um protocolo de transplante heterotópico da aorta em camundongos usando a técnica de manguito não sutura em um modelo de urina cervical. Este modelo pode ser usado para estudar a patologia subjacente da vasculopatia aloenxerto crônica (CAV) e pode ajudar a avaliar novos agentes terapêuticos, a fim de evitar a sua formação.

Murine Modelo de Transplante de Aorta Cervical usando uma técnica de manguito não sutura modificada

With the introduction of powerful immunosuppressive protocols, distinct advances are possible in the prevention and therapy of acute rejection episodes. ...

Sou Martin Ryll, dos laboratórios de pesquisa do Departamento de Cirurgia Geral, Visceral e transplantada da LMU em Munique. Hoje vamos mostrar um modelo de transplante aórtico heterotópico murine usando uma técnica modificada de manguito não sutura. Primeiro, anestesiar o animal receptor com uma injeção intraperitoneal de midazolam, medetomidina e fentanil.Corte todos os cabelos da região lateral cervical com um cortador de cabelo elétrico para animais pequenos e aplique pomada oftalmica com cotonetes de algodão para evitar que os olhos sequem durante o procedimento. Coloque o animal na posição supina em uma almofada de aquecimento sob o microscópio e grave suavemente as pernas na mesa de operação com tiras de gesso sensíveis à pele. Incline a cabeça para trás e esfregue o campo operacional várias vezes com álcool.Faça uma incisão de pele da incisão jugular para a mandíbula inferior direita com uma tesoura pequena. Remova o lobo inferior direito da glândula submandibular através de cautery bipolar do pediculo do vaso e excisão subsequente com micro tesoura. Remova o músculo estenicleidomastoide direito através do cautery bipolar da porção superior e inferior e excisão subsequente com micro tesoura para ter acesso à artéria carótida comum.Mobilize a artéria carótida comum o mais longe possível, puxando o tecido conjuntivo circundante com fórceps finos. Amarre duas ligaduras de seda 7-0 com distância mínima entre si ao redor do meio da artéria carótida comum e transecte a artéria carótida comum com micro tesoura fina entre as ligaduras. Passe a extremidade ligada proximal através da braçadeira e fixe-a com um pequeno grampo de artéria.Remova a ligadura com uma micro tesoura fina o mais próximo possível da ligadura e lave o lúmen com soro fisiológico heparinizado com uma agulha calibre 30, tomando cuidado para não danificar as paredes do vaso. Distende o lúmen aberto usando dilatadores vasculares finos e inverta o toco carótida sobre o manguito puxando-o suavemente sobre o tubo de poliamida. Fixar imediatamente a carótida invertida com um laço de seda 7-0 vagamente pré-amarrado.Realize o mesmo procedimento na outra extremidade da artéria carótida com a outra braçadeira. Passe a extremidade distal ligada através da braçadeira e fixe-a com um grampo de artéria pequeno. Remova a ligadura com uma micro tesoura fina o mais próximo possível da ligadura e lave o lúmen com soro fisiológico heparinizado com uma agulha calibre 30, tomando cuidado para não danificar as paredes do vaso.Distende o lúmen aberto usando dilatadores vasculares finos e inverta o toco carótida sobre o manguito puxando-o suavemente sobre o tubo de poliamida. Fixar imediatamente a carótida invertida com um laço de seda 7-0 vagamente pré-amarrado. Desista o animal receptor e hidrate o dois terço superior com soro fisiológico até que o segmento aórtico seja explantado.Anestesiar o rato doador da mesma forma que o animal receptor. Corte todos os cabelos da região abdominal e torácica com um cortador de cabelo elétrico para animais pequenos e aplique pomada oftalmica com cotonetes de algodão para evitar que os olhos sequem durante o procedimento. Coloque o animal na posição supina em uma almofada de aquecimento sob o microscópio e grave suavemente as pernas na mesa de operação com tiras de gesso sensíveis à pele.Esfregue o campo operacional várias vezes com álcool. Realize uma laparotomia abdominal média com uma tesoura pequena e empurre os intestinos ligeiramente para cima para expor a cava vena inferior. Injete o IVC com um cc de soro fisiológico heparinizado usando uma agulha calibre 30.Corte a aorta abdominal e o IVC abaixo das artérias renais com uma pequena tesoura para exsanguinar o animal doador. Coloque uma compressa no abdômen para absorver o sangue. Realize uma toracotomia através de desvio bilateral das costelas com tesouras e incline a parede do peito anterior cranialmente com um grampo cirúrgico para expor o mediastino.Corte o IVC e o esôfago diretamente acima do diafragma com micro tesoura. Remova o coração e os pulmões titulando-os para cima com fórceps segurando o IVC cortado e o esôfago e, em seguida, excisá-los com micro tesouras da base para ter acesso à aorta torácica e ao mediastino dorsal. Mobilize a aorta torácica de seu tecido circundante, retirando o tecido conjuntivo circundante e a gordura com fórceps finos, tomando cuidado para não danificar nenhuma artéria intercostal.Cauterize todos os ramos da aorta torácica com fórceps cautery bipolares e extirpe o segmento aórtico entre o diafragma e o arco aórtico usando micro tesoura. Lave o segmento aórtico excisado com soro fisiológico heparinizado com uma agulha calibre 30, tomando cuidado para não danificar as paredes do vaso para remover qualquer sangue ou coágulos restantes e transferir o enxerto para o animal receptor. Puxe a extremidade proximal do segmento aórtico do doador sobre o manguito proximal em cima da artéria carótida invertida com fórceps finos e fixe-o imediatamente com um laço de seda 7-0 vagamente pré-amarrado.Apare a extremidade livre distal do enxerto aórtico com micro tesoura para que o comprimento do enxerto se encaixe na distância entre as duas algemas. Puxe a extremidade distal do segmento aórtico do doador sobre o manguito distal em cima da artéria carótida invertida com fórceps finos e fixe-o imediatamente com um laço de seda 7-0 vagamente pré-amarrado. Remova primeiro o grampo distal para permitir a perfusão retrógrada.Após atingir a hemostasia, remova o grampo proximal para completar a anastomose. Por fim, feche a ferida com sutura contínua de 6-0. Após 28 dias, os animais são sacrificados e os enxertos preservados para coloração histológica.Como mostrado nestes furos de Van-Gieson de seções aórticas, as aortas alografadas totalmente mhc incompatíveis de doadores balb/c para seis receptores pretos desenvolveram uma hiperplasia neointimal significativa resultando em estreitamento luminal. Por outro lado, transplantes aórticos síngênicos de seis doadores negros para seis receptores negros desenvolveram apenas pouca hiperplasia neointimal. A coloração da imunofluorescência contra o SM22, um marcador para células musculares lisas vasculares, como mostrado neste quadro em fluorescência verde, demonstra que o neointima consiste principalmente de células musculares lisas vasculares.O transplante aórtico murina serve como modelo para vasculopatia de transplante crônico que é a causa mais comum de falha tardia do enxerto. Em comparação com o modelo abdominal ortotópico, nossa técnica de manguito modificado é menos microcirúrgica exigindo uma alta taxa de sucesso. Além disso, devido ao diâmetro constante da braçadeira, variações da anastomose vascular vistas em outros modelos de transplante microcirúrgico podem ser negligenciadas.Além disso, o tempo isquêmico quente é mantido constante em todos os grupos experimentais, à medida que o animal receptor é preparado primeiro antes do segmento aórtico ser explantado. Nosso modelo modificado deve ajudar outros laboratórios a estabelecer transplantes aórticos murinas.

Research

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