Name: monitoring gpcr-&#946;-arrestin1/2 interactions in real time living systems to accelerate drug discovery
Uploaded: 2019-06-28T14:15:00
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本研究は、科学・ICT・未来計画省が出資する韓国国立研究財団(NRF)の研究プログラム(NRF-2015M3A9A7029172)の助成金によって支援されました。

1. プライマー設計戦略
<ol><li>pBiT1.1-C [TK/LgBiT]、pBiT2.1-C[TK/SmBiT]、pBiT1.1-N[TK/LgBiT]、pBiT2.N[TK/LgBiT]ベクターに対象遺伝子を導入する設計プライマー。</li>
	<li>図 111に示すように、マルチクローニング 部位を分割するフレーム内停止コドンの存在に起因する方向クローニングに必要な 2 つの固有の制限酵素の 1 つとして、これらの 3 つのサイトのうちの少な?...

<ol>
	<li>Sriram, K., Insel, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GPCRs+as+targets+for+approved+drugs:+How+many+targets+and+how+many+drugs?.">GPCRs as targets for approved drugs: How many targets and how many drugs?.</a> Molecular Pharmacology. 93 (4), 251-258 (2018).</li><li>Hauser, A. S., Attwood, M. M., Rask-Andersen, M., Schi&#246;th, H. B., Gloriam, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trends+in+GPCR+drug+discovery:+new+agents,+targets+and+indications.">Trends in GPCR drug discovery: new agents, targets and indications.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 16 (12), 829-842 (2017).</li><li>Langmead, C. J., Summers, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+pharmacology+of+GPCRs.">Molecular pharmacology of GPCRs.</a> British Journal of Pharmacology. 175 (21), 1754005-1754008 (2018).</li><li>Lohse, M. J., Hoffmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arrestin+Interactions+with+G+Protein-Coupled+Receptors.">Arrestin Interactions with G Protein-Coupled Receptors.</a> Handbook of Experimental Pharmacology. 219, 15-56 (2014).</li><li>Kang, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+of+an+arrestin2-clathrin+complex+reveals+a+novel+clathrin+binding+domain+that+modulates+receptor+trafficking.">Structure of an arrestin2-clathrin complex reveals a novel clathrin binding domain that modulates receptor trafficking.</a> Journal of Biological Chemistry. 284, 29860-29872 (2009).</li><li>Park, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+&#946;-Arrestin-Biased+Dopamine+D2+Receptor+Ligands+on+Schizophrenia-Like+Behavior+in+Hypoglutamatergic+Mice.">Effects of &#946;-Arrestin-Biased Dopamine D2 Receptor Ligands on Schizophrenia-Like Behavior in Hypoglutamatergic Mice.</a> Neuropsychopharmacology. 41 (3), 704-715 (2016).</li><li>Zhu, L., Cui, Z., Zhu, Q., Zha, X., Xu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Opioid+Receptor+Agonists+with+Reduced+Morphine-like+Side+Effects.">Novel Opioid Receptor Agonists with Reduced Morphine-like Side Effects.</a> Mini-Reviews in Medicinal Chemistry. 18 (19), 1603-1610 (2018).</li><li>Smith, J. S., Lefkowitz, R. J., Rajagopal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biased+signalling:+from+simple+switches+to+allosteric+microprocessors.">Biased signalling: from simple switches to allosteric microprocessors.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 17 (4), 243-260 (2018).</li><li>Dixon, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NanoLuc+Complementation+Reporter+Optimized+for+Accurate+Measurement+of+Protein+Interactions+in+Cells.">NanoLuc Complementation Reporter Optimized for Accurate Measurement of Protein Interactions in Cells.</a> ACS Chemical Biology. 11 (2), 400-408 (2016).</li><li>Reyes-Alcaraz, A., Lee, Y. N., Yun, S., Hwang, J. I., Seong, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conformational+signatures+in+&#946;-arrestin2+reveal+natural+biased+agonism+at+a+G-protein-coupled+receptor.">Conformational signatures in &#946;-arrestin2 reveal natural biased agonism at a G-protein-coupled receptor.</a> Communications Biology. 3, 1-128 (2018).</li><li>Promega. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Nanobit Protein Protein Interaction System Protocol. , (2019).</li><li>Life Biomedical. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> HiYield Gel/PCR Fragments Extraction Kit. , (2019).</li><li>New England BioLabs. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Ligation Calculator. , (2019).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cosmo Genetech. , (2019).</li><li>Baggio, L. L., Drucker, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+of+incretins:+GLP-1+and+GIP.">Biology of incretins: GLP-1 and GIP.</a> Gastroenterology. 132, 2131-2157 (2007).</li><li>ProMega. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> NanoGLO Endurazine and Vivazine Live Cell Substrates Technical Manual. , (2019).</li><li>Ali, R., Ramadurai, S., Barry, F., Nasheuer, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+fluorescent+protein+expression+for+quantitative+fluorescence+microscopy+and+spectroscopy+using+herpes+simplex+thymidine+kinase+promoter+sequences.">Optimizing fluorescent protein expression for quantitative fluorescence microscopy and spectroscopy using herpes simplex thymidine kinase promoter sequences.</a> FEBS Open Bio. 8 (6), 1043-1060 (2018).</li></ol>

ここで提示される方法を用いて、任意のGPCRとβ-アレストリン1/2との相互作用は、このGPCR-β-アレストリン構造補体アッセイを用いてリアルタイムの生体系で監視することができる。この点に関して、GLP-1r(原型BGPCR)による2つのβ-アレスチンアイソフォーム間の微分β-アレスチン募集を観察することができ、最大値に達してから数分後に受容体β-アレスチン複合体の解離も観察した。発光信号?...

GPPCは、市場における現在の薬剤の約35%の目標を表し、2、その薬理学の明確な理解は、新規治療薬3の開発において重要である。GPCR創薬における重要な側面の1つは、特に偏ったアゴニストの開発中に、受容体β-アレスチン相互作用4およびβ-アレチン相互作用に対する新規リガンドの特徴付けである。クラトリン5として.
β-アレスチン依存シグナル伝達は、双極性障害、大うつ病、統合失調症6などの神経障害において重要な役割を果たし、モルヒネ7などの一部の薬物においても重篤な副作用を有すると報告されている。
これらの相互作用を監視するために使用される現在の方法は、通常、研究におけるタンパク質の実際の内因性レベルを表すものではなく、場合によっては弱いシグナル、光漂白、およびGPCRに応じて8を設定することは技術的に困難である可能性があります。この新しい構造補体アッセイは、内因性の生理学的レベルを模倣するために低発現プロモーターベクターベクターを使用し、現在の方法9と比較して高い感度を提供する。このアプローチを用いて、ガラニン受容体β-アレスチン1/2およびβ-アレスチン2-クラトリン相互作用10を容易に特徴付けさせられた。この方法論は、β-アレスチンが主要な生理学的機能を果たすか、またはそのシグナル伝達がいくつかの疾患に関連する特定の関心のあるGPCRに広く使用することができる。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antibiotics penicillin streptomycin</td>
			<td>Welgene</td>
			<td>LS202-02</td>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacterial Incubator</td>
			<td>JEIO Tech</td>
			<td>IB-05G</td>
			<td>Incubator (Air-Jacket), Basic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture medium</td>
			<td>Welgene</td>
			<td>LM 001-05</td>
			<td>DMEM Cell culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture transfection medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31985-070</td>
			<td>Optimem 1X cell culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Incubator</td>
			<td>NUAIRE</td>
			<td>NU5720</td>
			<td>Direct Heat CO2 Incubator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital water bath</td>
			<td>Lab Tech</td>
			<td>LWB-122D</td>
			<td>Digital water bath lab tech</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA Polymerase proof reading</td>
			<td>ELPIS Biotech</td>
			<td>EBT-1011</td>
			<td>PfU DNA polymerase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA purification kit</td>
			<td>Cosmogenetech</td>
			<td>CMP0112</td>
			<td>miniprepLaboPass Purificartion Kit Plasmid Mini</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA Taq Polymerase</td>
			<td>Enzynomics</td>
			<td>P750</td>
			<td>nTaq DNA polymerase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme restriction BglII</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R0144L</td>
			<td>BglII</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme restriction buffer</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>B72045</td>
			<td>CutSmart 10X Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme restriction EcoRI</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R3101L</td>
			<td>EcoRI-HF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme restriction NheI</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R01315</td>
			<td>NheI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme restriction XhoI</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R0146L</td>
			<td>XhoI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco Canada</td>
			<td>12483020</td>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel/PCR DNA MiniKit</td>
			<td>Real Biotech Corporation</td>
			<td>KH23108</td>
			<td>HiYield Gel/PCR DNA MiniKit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ligase</td>
			<td>ELPIS Biotech</td>
			<td>EBT-1025</td>
			<td>T4 DNA Ligase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>CKX53SF</td>
			<td>CKX53 Microscope Olympus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lipid transfection reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11668-019</td>
			<td>Lipofectamine 2000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luminometer</td>
			<td>Biotek/Fisher Scientific</td>
			<td>12504386</td>
			<td>Synergy 2 Multi-Mode Microplate Readers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoBiT System</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N2014</td>
			<td>NanoBiT PPI MCS Starter System</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanoluciferase substrate</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N2012</td>
			<td>Nano-Glo Live Cell assay system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR Thermal cycler</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>6336000015</td>
			<td>Master cycler Nexus SX1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-lysine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P4707-50ML</td>
			<td>Poly-L-lysine solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin EDTA</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200-056</td>
			<td>Trysin EDTA 10X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>White Cell culture 96 well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3917</td>
			<td>Assay Plate 96 well plate</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring gpcr-&#946;-arrestin1/2 interactions in real time living systems to accelerate drug discovery

Gタンパク質結合受容体(GPCR)とβ-アレスチンとの相互作用は、非常に重要な生理学的意味を持つ重要なプロセスである。現在、β-アレスチンおよび他のサイトソールタンパク質との相互作用に対する新薬の特性評価は、特にGPCRバイアスアゴニズムの研究においてGPCR創薬の分野において非常に貴重である。ここでは、リアルタイムの生体系における受容体β-アレスチン相互作用を正確に監視する新規な構造補体アッセイの応用を示す。この方法は、単純で正確であり、目的の任意のGPCRに容易に拡張することができ、また、各ベクター系に存在する低発現プロモーターの存在による非特異的相互作用を克服するという利点を有する。この構造補体アッセイは、受容体β-アレスチン相互作用の正確かつ正確なモニタリングを可能にする重要な特徴を提供し、GPCR系の偏ったアゴニズムとGPCR c-terminus'リン酸化の研究に適しています。異なるGPCR-キナーゼ(GRK)と受容体β-アレスチン複合体を安定または不安定化させるアレチンの翻訳後修飾によって書かれたコード。

ここで提示される手順を用いて、原型GPCRと2つのβ-アレスチンアイソフォームとの相互作用をモニターした。グルカゴン様ペプチド受容体(GLP-1r)の構築物は、NheIおよびEcoRI酵素制限部位を含むプライマーを用いて作製し、ベクターpBiT1.1-C[TK/LgBiT]およびpBiT2.1-C[TK/SmBiT]にクローニングしたが、β-ア逮捕状の場合は2つの追加ベクターが挙げられた。β-アレストイン2およびNheIおよびXhoIの場合は、β-...

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Monitoring GPCR-ÃƒÅ½Ã‚Â²-arrestin1/2 Interactions in Real Time Living Systems to Accelerate Drug Discovery

GPCR-β-アレスチン相互作用は、GPCR創薬における新興分野である。このような生きたシステムの相互作用を監視するには、正確で正確で簡単に設定する方法が必要です。我々は、リアルタイム生細胞におけるGPCR-β-アレスチン相互作用を監視する構造補体アッセイを示し、あらゆるGPCRに拡張することができる。

GPCR-β-アレストリン1/2リアルタイムリビングシステムにおける相互作用をモニタリングし、創薬を加速

Interactions between G-protein coupled receptors (GPCRs) and &#946;-arrestins are vital processes with physiological implications of great importance. ...

このプロトコルは、創薬と開発の分野、特に副作用が最小限の新規、クラス初の薬剤の開発に大きな影響を与えます。この技術の主な利点は、それが任意のGPCRシステムに適用することができ、リアルタイムの生活システムにおける受容体薬理学に関する正確な情報を得るために使用することができるということです。この技術の意味は、特にβ-アレストリンが関連する新しい治療法と密接に関連しています。これらは、統合失調症の痛みやドーパミン受容体のオピオド受容体が含まれます.この方法は、神経学から心肺疾患まで、多くの医学科学的研究分野で有用である可能性があります。この方法の PCR デモンストレーションは、プロトコルの重要なステップを詳細に表示できるため、従来の公開では不可能であるため、重要です。まず、pBiT ベクターに関心のある遺伝子を導入するプライマーを設計します。マルチクローニング部位を分割するインフレームストップコドンにより、方向クローニングに必要な2つのユニークな制限酵素の1つとして、3つのサイトのうち少なくとも1つを選択します。リンカー残基をコードし、プライマーに組み込むヌクレオチド配列の原稿を参照してください。pBiT1.1-CおよびpBiT2.1-Cの場合、フォワードプライマーにATGコドンと強力なコザックコンセンサスシーケンスが含まれていることを確認します。pBiT1.1-N および pBiT2.1-N の場合、逆プライマーにストップ コドンが含まれていることを確認します。設計されたプライマーを使用して、目的の遺伝子のDNAを挿入します。原稿の方向に従ってPCR試薬を組み合わせ、高忠実度のDNAポリメラーゼを使用して突然変異を最小限に抑えます。サーモサイクラーをプログラムし、反応を開始します。PCRを完了した後、50マイクロリットルの消化反応で製品を消化します。1.5ミリリットルのチューブに、12マイクロリットルの蒸留水、適切な10X制限消化バッファーの5マイクロリットル、およびPCR産物の30マイクロリットルを組み合わせます。次に、各制限酵素を1.5マイクロリットル加えます。反応混合物を渦液。そして、摂氏37.5度で一晩インキュベート。レシピエントプラスミドを消化する第二の反応を準備します。1.5ミリリットルのチューブで、23マイクロリットルの水、適切な10X制限消化バッファーの5マイクロリットル、レシピエントプラスミドの15マイクロリットル、および各制限酵素の1.5マイクロリットルを組み合わせます。チューブを簡単に混ぜます。そして、摂氏37.5度で一晩インキュベート。クローニングと変換の翌日に、3〜10個の細菌コロニーを選び、アンピシリンで1ミリリットルのLB培地に移します。細胞を6時間インキュベートします。そして、アンピシリンと新鮮なLB培地の5ミリリットルに細菌懸濁液の200マイクロリットルを転送します。一晩で200rpmで振って37.5°Cで培養します。翌日、プラスミドをミニプレップDNA精製キットで分離します。精製されたプラスミドをスクリーニングし、PCRでライゲーションを成功させます。トランスフェクションの1日前に、10%の胎児ウシ血清、ペニシリンGのミリリットル当たり100単位、ストレプトマイシン1ミリリットル当たり100マイクロリットルを添加したダルベッコの改変イーグル培地を使用して、ポリL-リジンコーティング96ウェルプレートに細胞を播種する。プレート全体の熱勾配の可能性を最小限に抑えるために、60の内側のウェルに細胞を追加するだけで、蒸発によるエッジ効果が生じる可能性があります。36個の外側の井戸に200マイクロリットルの無菌蒸留水を加え、井戸間のスペースに150マイクロリットルを加えます。その後、摂氏37.5度と5%の二酸化炭素で一晩プレートをインキュベートします。翌日、合計100ナノグラムのDNAを用いてトランスフェクションを行う。原稿の指示に従って4つの異なるプラスミドの組み合わせを設定します。HEPESで緩衝された変更されたイーグルの最低必須培地の20マイクロリットルを使用し、そして、ウェルあたり脂質トランスフェクション試薬の0.3マイクロリットルを使用する。各ウェルに20マイクロリットルの脂質トランスフェクション試薬とDNA混合物を加え、プレートを円で10秒間混ぜます。プレートを摂氏37.5度、炭酸ガス5%で6時間インキュベートします。メディアを更新します。さらに24時間インキュベートします。インキュベーション後、培地を吸引し、HEPESで緩衝した変更されたイーグルの最小必須培地を100マイクロリットルずつ各ウェルに加えます。プレートを室温で10分間安定させます。一方、100X基質の1体積をLCS希釈バッファーの19容量と組み合わせて、5Xストックを作成して細胞培養液と混合して、フリマジン基質を調製する。細胞の準備ができたら、ストックの25マイクロリットルを各ウェルに加え、プレートを10秒間静かに混ぜます。次に、信号安定化のために室温で10分間発光を測定します。リガンド添加の実験では、13.5Xリガンド溶液をHEPESで緩衝した変更Eagleの最小必須培地に調製し、マルチチャネルピペットを使用して1ウェルあたり10マイクロリットルを添加します。その後、手で、または軌道シェーカーでプレートを混合します。このプロトコルは、原型GPCRと2つのβ-アスタミンアイソフォーム間の相互作用を研究するためにうまく使用されています。4つの異なるプラスミドの組み合わせをスクリーニングし、さらに実験のために最も高い発光信号を有する1つを選択した。各β-アレスチンアイソフォームのEC50値は、用量応答曲線を用いて決定した。PCR プライマーを設計する際には、特に注意を払う必要があります。これらのアッセイの成功には、正しい構造の開発が不可欠です。この方法論に従って、受容体-β-アレプチン相互作用、ならびに他の細胞質タンパク質との受容体相互作用を監視することができます。この方法論は、GPCR-β-アレストイン相互作用がリガンド構造の修飾によってどのように変調できるかを研究することによって、GPCR薬理学の分野における基本的な質問に答えるのに役立ちます。

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Monitoring GPCR-&#946;-arrestin1/2 Interactions in Real Time Living Systems to Accelerate Drug Discovery

Preparation and In Vivo Use of an Activity-based Probe for N-acylethanolamine Acid Amidase

Preparation and In Vivo Use of an Activity-based Probe for N-acylethanolamine Acid Amidase

調製と<em&gt;インビボ</em&gt;アクティビティベースのプローブの使用のために<em&gt; N</em&gt; -acylethanolamine酸アミダーゼ

Activity-based protein profiling (ABPP) is a method for the identification of an enzyme of interest in a complex proteome through the use of a chemical ...

Time-resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen-deuterium Exchange Mass Spectrometry for Studying Protein Structure and Dynamics

時間分解エレクトロスプレーイオン化水素 - 重水素交換質量分析タンパク質の構造とダイナミクスを学ぶために

Intrinsically disordered proteins (IDPs) have long been a challenge to structural biologists due to their lack of stable secondary structure elements. ...

Real-time Tracking of DNA Fragment Separation by Smartphone

スマートフォンによるDNA断片分離のリアルタイム追跡

Slab gel electrophoresis (SGE) is the most common method for the separation of DNA fragments; thus, it is broadly applied to the field of biology and ...

Regeneration of Arrayed Gold Microelectrodes Equipped for a Real-Time Cell Analyzer

リアルタイム細胞解析搭載アレイの金電極の再生

The label-free cell-based assay is advantageous for biochemical study because of it does not require the use of experimental animals. Due to its ability ...

Extracellular Protein Microarray Technology for High Throughput Detection of Low Affinity Receptor-Ligand Interactions

低親和性受容体-リガンド相互作用のハイスループット検出の細胞外タンパク質マイクロ アレイ技術

Secreted factors, membrane-tethered receptors, and their interacting partners are main regulators of cellular communication and initiation of signaling ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

タンパク質の折り畳み、トランスポート、および放射性パルス追跡による生体細胞の劣化の解析

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Real-time Observation of the DNA Strand Exchange Reaction Mediated by Rad51

Rad51 を介した DNA 鎖交換反応のリアルタイム観察

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Native Cell Membrane Nanoparticles System for Membrane Protein-Protein Interaction Analysis

膜蛋白質相互作用解析用のネイティブ細胞膜ナノ粒子システム

Protein-protein interactions in cell membrane systems play crucial roles in a wide range of biological processes- from cell-to-cell interactions to signal ...

Measuring Nucleotide Binding to Intact, Functional Membrane Proteins in Real Time

インタクトな機能的な膜タンパク質へのヌクレオチド結合をリアルタイムで測定

We have developed a method to measure binding of adenine nucleotides to intact, functional transmembrane receptors in a cellular or membrane environment. ...

Enabling Real-Time Compensation in Fast Photochemical Oxidations of Proteins for the Determination of Protein Topography Changes

タンパク質トポグラフィ変化の測定のためのタンパク質の高速光化学酸化におけるリアルタイム補正の実現

Fast photochemical oxidation of proteins (FPOP) is a mass spectrometry-based structural biology technique that probes the solvent-accessible surface area ...