Name: monitoring gpcr-&#946;-arrestin1/2 interactions in real time living systems to accelerate drug discovery
Uploaded: 2019-06-28T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Monitoring GPCR-ÃŽÂ²-arrestin1/2 Interactions in Real Time Living Systems to Accelerate Drug Discovery at JoVE.com

Эта работа была поддержана грантами Исследовательской программы (NRF- 2015M3A9E7029172) Национального исследовательского фонда Кореи (NRF), финансируемого Министерством науки, ИКТ и будущего планирования.

1. Стратегия дизайна Primer
<ol><li>Дизайн праймеров для внедрения генов, представляющих интерес в pBiT1.1-C (TK/LgBiT), pBiT2.1-C (TK/SmBiT), pBiT1.1-N (TK/LgBiT) и pBiT2.1-N (TK/SmBiT) Векторы.</li>
	<li>Выберите по крайней мере один из этих трех сайтов в качестве одного из двух уникальных ферментов ограничения, необходимых для клон...

<ol>
	<li>Sriram, K., Insel, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GPCRs+as+targets+for+approved+drugs:+How+many+targets+and+how+many+drugs?.">GPCRs as targets for approved drugs: How many targets and how many drugs?.</a> Molecular Pharmacology. 93 (4), 251-258 (2018).</li><li>Hauser, A. S., Attwood, M. M., Rask-Andersen, M., Schi&#246;th, H. B., Gloriam, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trends+in+GPCR+drug+discovery:+new+agents,+targets+and+indications.">Trends in GPCR drug discovery: new agents, targets and indications.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 16 (12), 829-842 (2017).</li><li>Langmead, C. J., Summers, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+pharmacology+of+GPCRs.">Molecular pharmacology of GPCRs.</a> British Journal of Pharmacology. 175 (21), 1754005-1754008 (2018).</li><li>Lohse, M. J., Hoffmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arrestin+Interactions+with+G+Protein-Coupled+Receptors.">Arrestin Interactions with G Protein-Coupled Receptors.</a> Handbook of Experimental Pharmacology. 219, 15-56 (2014).</li><li>Kang, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+of+an+arrestin2-clathrin+complex+reveals+a+novel+clathrin+binding+domain+that+modulates+receptor+trafficking.">Structure of an arrestin2-clathrin complex reveals a novel clathrin binding domain that modulates receptor trafficking.</a> Journal of Biological Chemistry. 284, 29860-29872 (2009).</li><li>Park, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+&#946;-Arrestin-Biased+Dopamine+D2+Receptor+Ligands+on+Schizophrenia-Like+Behavior+in+Hypoglutamatergic+Mice.">Effects of &#946;-Arrestin-Biased Dopamine D2 Receptor Ligands on Schizophrenia-Like Behavior in Hypoglutamatergic Mice.</a> Neuropsychopharmacology. 41 (3), 704-715 (2016).</li><li>Zhu, L., Cui, Z., Zhu, Q., Zha, X., Xu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Opioid+Receptor+Agonists+with+Reduced+Morphine-like+Side+Effects.">Novel Opioid Receptor Agonists with Reduced Morphine-like Side Effects.</a> Mini-Reviews in Medicinal Chemistry. 18 (19), 1603-1610 (2018).</li><li>Smith, J. S., Lefkowitz, R. J., Rajagopal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biased+signalling:+from+simple+switches+to+allosteric+microprocessors.">Biased signalling: from simple switches to allosteric microprocessors.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 17 (4), 243-260 (2018).</li><li>Dixon, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NanoLuc+Complementation+Reporter+Optimized+for+Accurate+Measurement+of+Protein+Interactions+in+Cells.">NanoLuc Complementation Reporter Optimized for Accurate Measurement of Protein Interactions in Cells.</a> ACS Chemical Biology. 11 (2), 400-408 (2016).</li><li>Reyes-Alcaraz, A., Lee, Y. N., Yun, S., Hwang, J. I., Seong, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conformational+signatures+in+&#946;-arrestin2+reveal+natural+biased+agonism+at+a+G-protein-coupled+receptor.">Conformational signatures in &#946;-arrestin2 reveal natural biased agonism at a G-protein-coupled receptor.</a> Communications Biology. 3, 1-128 (2018).</li><li>Promega. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Nanobit Protein Protein Interaction System Protocol. , (2019).</li><li>Life Biomedical. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> HiYield Gel/PCR Fragments Extraction Kit. , (2019).</li><li>New England BioLabs. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Ligation Calculator. , (2019).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cosmo Genetech. , (2019).</li><li>Baggio, L. L., Drucker, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+of+incretins:+GLP-1+and+GIP.">Biology of incretins: GLP-1 and GIP.</a> Gastroenterology. 132, 2131-2157 (2007).</li><li>ProMega. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> NanoGLO Endurazine and Vivazine Live Cell Substrates Technical Manual. , (2019).</li><li>Ali, R., Ramadurai, S., Barry, F., Nasheuer, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+fluorescent+protein+expression+for+quantitative+fluorescence+microscopy+and+spectroscopy+using+herpes+simplex+thymidine+kinase+promoter+sequences.">Optimizing fluorescent protein expression for quantitative fluorescence microscopy and spectroscopy using herpes simplex thymidine kinase promoter sequences.</a> FEBS Open Bio. 8 (6), 1043-1060 (2018).</li></ol>

Используя представленный здесь метод, взаимодействие между любым GPCR и q-arrestin1/2 можно контролировать в системах жизни в реальном времени, используя этот анализ структурного дополнения GPCR-я-arrestin. В этой связи, мы смогли наблюдать дифференциальный набор и арестин между двумя изообразами gl...

GPCRs представляют собой цель почти 35% текущих препаратов на рынке1,2 и четкое понимание их фармакологии имеет решающее значение в разработке новых терапевтических препаратов3. Одним из ключевых аспектов в GPCR открытие наркотиков, особенно во время развития предвзятых агонистов является характеристика новых лиганд оврецепторов к рецептору-и-арестин взаимодействий4 и -арестин взаимодействия с другими цитосолильных белков, таких как как клатрин5.
Было документально подтверждено, что зависимые сигнализации з-арестин играет ключевую роль в неврологических расстройств, таких как биполярное расстройство, тяжелая депрессия, и шизофрения6, а также тяжелые побочные эффекты в некоторых лекарствах, таких как морфин7.
Текущие методы, используемые для мониторинга этих взаимодействий, как правило, не представляют фактические эндогенные уровни белков в исследовании, в некоторых случаях они показывают слабый сигнал, фотоотбеление и в зависимости от GPCR это может быть технически сложно й создать8. Этот новый структурный анализ дополнения использует низкий экспрессионист векторов для того, чтобы имитировать эндогенных физиологических уровней и обеспечивает высокую чувствительность по сравнению с нынешними методами9. Используя этот подход, можно было легко охарактеризовать Галанин рецептор-я-arrestin1'2, а также -arrestin2-клатрин взаимодействий10. Эта методология может быть широко использована для любого GPCR, представляющих особый интерес, где q-arrestins играют ключевую физиологическую функцию или их сигнализация имеет отношение к некоторым заболеваниям.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antibiotics penicillin streptomycin</td>
			<td>Welgene</td>
			<td>LS202-02</td>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacterial Incubator</td>
			<td>JEIO Tech</td>
			<td>IB-05G</td>
			<td>Incubator (Air-Jacket), Basic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture medium</td>
			<td>Welgene</td>
			<td>LM 001-05</td>
			<td>DMEM Cell culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture transfection medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31985-070</td>
			<td>Optimem 1X cell culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Incubator</td>
			<td>NUAIRE</td>
			<td>NU5720</td>
			<td>Direct Heat CO2 Incubator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital water bath</td>
			<td>Lab Tech</td>
			<td>LWB-122D</td>
			<td>Digital water bath lab tech</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA Polymerase proof reading</td>
			<td>ELPIS Biotech</td>
			<td>EBT-1011</td>
			<td>PfU DNA polymerase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA purification kit</td>
			<td>Cosmogenetech</td>
			<td>CMP0112</td>
			<td>miniprepLaboPass Purificartion Kit Plasmid Mini</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA Taq Polymerase</td>
			<td>Enzynomics</td>
			<td>P750</td>
			<td>nTaq DNA polymerase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme restriction BglII</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R0144L</td>
			<td>BglII</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme restriction buffer</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>B72045</td>
			<td>CutSmart 10X Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme restriction EcoRI</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R3101L</td>
			<td>EcoRI-HF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme restriction NheI</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R01315</td>
			<td>NheI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme restriction XhoI</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R0146L</td>
			<td>XhoI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco Canada</td>
			<td>12483020</td>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel/PCR DNA MiniKit</td>
			<td>Real Biotech Corporation</td>
			<td>KH23108</td>
			<td>HiYield Gel/PCR DNA MiniKit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ligase</td>
			<td>ELPIS Biotech</td>
			<td>EBT-1025</td>
			<td>T4 DNA Ligase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>CKX53SF</td>
			<td>CKX53 Microscope Olympus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lipid transfection reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11668-019</td>
			<td>Lipofectamine 2000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luminometer</td>
			<td>Biotek/Fisher Scientific</td>
			<td>12504386</td>
			<td>Synergy 2 Multi-Mode Microplate Readers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoBiT System</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N2014</td>
			<td>NanoBiT PPI MCS Starter System</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanoluciferase substrate</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N2012</td>
			<td>Nano-Glo Live Cell assay system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR Thermal cycler</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>6336000015</td>
			<td>Master cycler Nexus SX1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-lysine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P4707-50ML</td>
			<td>Poly-L-lysine solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin EDTA</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200-056</td>
			<td>Trysin EDTA 10X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>White Cell culture 96 well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3917</td>
			<td>Assay Plate 96 well plate</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring gpcr-&#946;-arrestin1/2 interactions in real time living systems to accelerate drug discovery

Взаимодействие между G-белковыми рецепторами (GPCRs) и з-арестинами являются жизненно важными процессами с физиологическими последствиями большой важности. В настоящее время характеристика новых препаратов к их взаимодействию с з-арестинов и других цитосолильных белков является чрезвычайно ценным в области GPCR открытие наркотиков особенно во время изучения GPCR предвзятого агонизма. Здесь мы показываем применение нового структурного анализа комплемента для точного мониторинга взаимодействия рецепторов и-арестина в живых системах реального времени. Этот метод прост, точен и может быть легко распространен на любой GPCR интересов, а также он имеет то преимущество, что он преодолевает неспецифические взаимодействия из-за присутствия низкой промоутер выражения присутствует в каждой векторной системе. Это структурное дополнение обзор обеспечивает ключевые особенности, которые позволяют точного и точного мониторинга рецепторов-я-арестина взаимодействий, что делает его пригодным в изучении предвзятого агонизма любой системы GPCR, а также GPCR c-терминус 'фосфорилирования коды, написанные различными GPCR-киназы (GRKs) и пост-трансляционные изменения арестинов, которые стабилизируют или дестабилизируют рецептор-я-арестин комплекса.

Используя представленную здесь процедуру, отслеживались взаимодействия между прототипом GPCR и двумя изоформами з-арестина. Глюкагон, как пептидный рецептор (GLP-1r) конструкции были сделаны с использованием грунтовки, содержащие NheI и EcoRI фермента ограничения сайтов и клонированы в вектор...

Watch this Scientific Journal Video about Monitoring GPCR-ÃŽÂ²-arrestin1/2 Interactions in Real Time Living Systems to Accelerate Drug Discovery at JoVE.com

Monitoring GPCR-ÃƒÅ½Ã‚Â²-arrestin1/2 Interactions in Real Time Living Systems to Accelerate Drug Discovery

Взаимодействия GPCR-и-arrestin являются новой областью в открытии наркотиков GPCR. Для мониторинга таких взаимодействий в живых системах необходимы точные, точные и простые в настройке методы. Мы показываем структурный контроль комплемента для мониторинга взаимодействия GPCR-я-arrestin в реальном времени живых клеток, и он может быть распространен на любой GPCR.

Мониторинг GPCR-я-arrestin1/2 Взаимодействия в режиме реального времени живых систем для ускорения обнаружения наркотиков

Interactions between G-protein coupled receptors (GPCRs) and &#946;-arrestins are vital processes with physiological implications of great importance. ...

Этот протокол имеет большое влияние в области обнаружения и разработки лекарственных средств, особенно в разработке новых, первоклассных препаратов с минимальными побочными эффектами. Основным преимуществом этого метода является то, что он может быть применен к любой системе GPCR, и используется для получения точной информации о рецепторной фармакологии в режиме реального времени живых систем. Последствия этого метода тесно связаны с новыми методами лечения, особенно там, где бета-арестины актуальны.К ним относятся опиодные рецепторы при болях и рецепторы допамина при шизофрении. Этот метод может быть полезен во многих областях медицинских научных исследований от неврологии до сердечно-легочных заболеваний. ПЦР демонстрация нашего метода важна, так как позволяет детально иззнать критические шаги в протоколе, что было бы невозможно при обычной публикации.Начните с проектирования праймеров, чтобы ввести гены, представляющие интерес для векторов pBiT. Из-за кодона остановки inframe, разделяя место мульти клонирования, выберите по крайней мере один из трех участков в качестве одного из двух уникальных ферментов ограничения, необходимых для направленного клонирования. Обратитесь к рукописи для нуклеотидных последовательностей, чтобы кодировать остатки связующего звена и включать их в грунтовки.Для pBiT1.1-C и pBiT2.1-C убедитесь, что форвард праймер содержит кодон ATG и мощный козак консенсуса последовательности. Для pBiT1.1-N и pBiT2.1-N убедитесь, что обратная грунтовка содержит стоп-кодон. Используйте разработанные грунтовки для усиления вставки ДНК гена, представляющий интерес.Объедините реагенты ПЦР в соответствии с рукописными указаниями, убедившись, что использовать полимеразу ДНК высокой точности, чтобы свести к минимуму мутации. Запрограммировать термоциклер и начать реакцию. После завершения ПЦР, переварить продукт в 50-микролитровой реакции пищеварения.В 1,5-миллилитровой трубке смешайте 12 микролитров дистиллированной воды, пять микролитров соответствующего буфера пищеварения ограничения 10X и 30 микролитров продукта ПЦР. Затем добавьте 1,5 микролитров каждого фермента ограничения. Вихрь реакционной смеси.И инкубировать на ночь при 37,5 градусах по Цельсию. Подготовь вторую реакцию, чтобы переварить плазмиду реципиента. В 1,5-миллилитровой трубке смешайте 23 микролитров воды, пять микролитров соответствующего буфера пищеварения ограничения 10X, 15 микролитров плазмиды реципиента и 1,5 микролитров каждого фермента ограничения.Кратко перемешайте трубку. И инкубировать на ночь при 37,5 градусах по Цельсию. На следующий день после клонирования и преобразования, выбрать от трех до 10 отдельных бактериальных колоний и передать их в один миллилитр LB среды с ампициллином.Инкубировать клетки в течение шести часов. А затем перенесите 200 микролитров бактериальной суспензии на пять миллилитров свежей среды LB с ампициллином. Инкубировать культуру на 37,5 градусов по Цельсию с встряхивания на 200 об / мин в одночасье.На следующий день изолируйте плазмиду с помощью мини-подготовки комплекта для очистки ДНК. Экран очищенной плазмиды для успешной перевязки с ПЦР. За день до трансфекции, семена клеток на поли-L-лизин покрытием 96-хорошо пластины с использованием Dulbecco модифицированных Eagle среды дополняется 10%fetal бычьей сыворотки, 100 единиц на миллилитр пенициллина G, и 100 микролитров на миллилитр стрептомицина.Только добавить клетки в 60 внутренних скважин, чтобы свести к минимуму потенциал для тепловых градиентов по всей пластине и края эффекты от испарения. Добавьте 200 микролитров стерильной дистиллированной воды в 36 внешних скважин и 150 микролитров в пространства между скважинами. Затем инкубировать пластину на ночь при 37,5 градусах по Цельсию и 5%углекислом газе.На следующий день выполните трансфекцию, используя в общей сложности 100 нанограмм ДНК. Настройка четырех различных плазмидных комбинаций в соответствии с рукописными направлениями. Использование 20 микролитров модифицированных орлиных минимальных необходимых средств массовой информации буферизированы с HEPES, и 0,3 микролитров липидных реагентов трансфекции на колодец.Добавьте по 20 микролитров липидного трансфектического реагента и смеси ДНК в каждую колодец и смешайте пластину по кругу в течение 10 секунд. Инкубировать пластину при 37,5 градусах по Цельсию и 5%углекислом газе в течение шести часов. Освежите среду.И инкубировать еще 24 часа. После инкубации, аспирировать среды и добавить 100 микролитров модифицированных Eagle минимально необходимых средств массовой информации буфера с HEPES для каждой хорошо. Дайте пластине стабилизироваться при комнатной температуре в течение 10 минут.Между тем, подготовить фуримазин субстрат путем объединения одного тома 100X субстрата с 19 томами буфера разбавления LCS, создавая 5X запас смешиваться со средой клеточной культуры. Когда клетки будут готовы, добавьте 25 микролитров бульона к каждой хорошо, и аккуратно смешайте пластину в течение 10 секунд. Затем измерьте люминесценцию в течение 10 минут при комнатной температуре для стабилизации сигнала.Для экспериментов с добавлением лиганда подготовьте 13,5X лигандовое решение в модифицированных необходимых средствах массовой информации Eagle, буферизированных с HEPES, и добавьте 10 микролитров на колодец с помощью многоканальной пипетки. Затем смешайте пластину вручную или с орбитальным шейкером. Этот протокол был успешно использован для изучения взаимодействий между прототипом GPCR и двумя бета-арестин изоформами.Для дальнейших экспериментов были проверены четыре различные плазмидные комбинации, а также одна с самым высоким люминесцентным сигналом. Значения EC50 для каждого бета-арестина изоформы были определены с использованием кривых реакции дозы, которые были получены из максимальной реакции каждой концентрации от кинетических исследований. Очень важно уделять особое внимание при проектировании праймеров PCR.Развитие правильных конструкций имеет важное значение для успеха этих анализов. Следуя этой методологии, вы сможете контролировать рецептор-бета-арестин взаимодействия, а также взаимодействия рецепторов с другими цитозолями белками. Эта методология поможет ответить на фундаментальные вопросы в области фармакологии GPCR, изучая, как взаимодействия GPCR-бета-аресттина могут модулироваться изменениями в структуре лиганда.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Monitoring GPCR-&#946;-arrestin1/2 Interactions in Real Time Living Systems to Accelerate Drug Discovery

Preparation and In Vivo Use of an Activity-based Probe for N-acylethanolamine Acid Amidase

Preparation and In Vivo Use of an Activity-based Probe for N-acylethanolamine Acid Amidase

подготовки и<em&gt; В Vivo</em&gt; Использование тестовое активность на основе для<em&gt; N</em&gt; -acylethanolamine Кислота амидазные

Activity-based protein profiling (ABPP) is a method for the identification of an enzyme of interest in a complex proteome through the use of a chemical ...

Time-resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen-deuterium Exchange Mass Spectrometry for Studying Protein Structure and Dynamics

Времяразрешенная ионизацией электрораспылением водорода дейтерий Обмен масс-спектрометрии для изучения белка структуры и динамики

Intrinsically disordered proteins (IDPs) have long been a challenge to structural biologists due to their lack of stable secondary structure elements. ...

Real-time Tracking of DNA Fragment Separation by Smartphone

В режиме реального времени отслеживание разделения фрагментов ДНК с помощью смартфона

Slab gel electrophoresis (SGE) is the most common method for the separation of DNA fragments; thus, it is broadly applied to the field of biology and ...

Regeneration of Arrayed Gold Microelectrodes Equipped for a Real-Time Cell Analyzer

Регенерация выстроились золото микроэлектродов, оборудованных для анализатора в реальном времени ячейки

The label-free cell-based assay is advantageous for biochemical study because of it does not require the use of experimental animals. Due to its ability ...

Extracellular Protein Microarray Technology for High Throughput Detection of Low Affinity Receptor-Ligand Interactions

Внеклеточный протеин технология Microarray для высокой пропускной способности обнаружения низкого сродства рецептор лиганд взаимодействий

Secreted factors, membrane-tethered receptors, and their interacting partners are main regulators of cellular communication and initiation of signaling ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

Анализ сворачивание белков, транспорта и деградации в живых клетках, радиоактивных пульс Чейз

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Real-time Observation of the DNA Strand Exchange Reaction Mediated by Rad51

В реальном времени наблюдения опосредовано Rad51 реакции обмена Strand ДНК

The DNA strand exchange reaction mediated by Rad51 is a critical step of homologous recombination. In this reaction, Rad51 forms a nucleoprotein filament ...

Native Cell Membrane Nanoparticles System for Membrane Protein-Protein Interaction Analysis

Родная клеточная мембрана наночастицы системы membrane белка-белкового взаимодействия анализа

Protein-protein interactions in cell membrane systems play crucial roles in a wide range of biological processes- from cell-to-cell interactions to signal ...

Measuring Nucleotide Binding to Intact, Functional Membrane Proteins in Real Time

Измерение связывания нуклеотидов с интактными функциональными мембранными белками в режиме реального времени

We have developed a method to measure binding of adenine nucleotides to intact, functional transmembrane receptors in a cellular or membrane environment. ...

Enabling Real-Time Compensation in Fast Photochemical Oxidations of Proteins for the Determination of Protein Topography Changes

Включение компенсации в режиме реального времени в быстрых фотохимических окислениях белков для определения изменений топографии белка

Fast photochemical oxidation of proteins (FPOP) is a mass spectrometry-based structural biology technique that probes the solvent-accessible surface area ...