Name: focused ion beam lithography to etch nano-architectures into microelectrodes
Uploaded: 2020-01-19T12:00:00
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Este estudio fue apoyado por los premios del Servicio de Investigación y Desarrollo de Rehabilitación de Asuntos de Veteranos de los Estados Unidos (EE.UU.): #RX001664-01A1 (CDA-1, Ereifej) y #RX002628-01A1 (CDA-2, Ereifej). El contenido no representa las opiniones del Departamento de Asuntos de Veteranos de los Estados Unidos ni del Gobierno de los Estados Unidos. Los autores desean agradecer a FEI Co. (Ahora parte de Thermofisher Scientific) por la asistencia del personal y el uso de la instrumentación, que ayudó en el desarrollo de los guiones utilizados en esta investigación.

NOTA: Realice los siguientes pasos mientras usa el equipo de protección personal adecuado, como una capa de laboratorio y guantes.
1. Montaje de la sonda de silicio no funcional para la litografía del haz de iones focalizado (FIB)
NOTA: Para el procedimiento completo que describe la fabricación de la oblea SOI con las 1.000 sondas, consulte Ereifej et al.39.
<ol><li>Aísle una tira de 2-3 sondas de silicio del silicio en la oblea aislant...

El protocolo de fabricación descrito aquí utiliza litografía de haz iónico focalizado para grabar de manera efectiva y reproducible nanoarquitecturas en la superficie de microelectrodos de silicio de un solo vástago no funcionales y funcionales. La litografía de haz iónico focalizado (FIB) permite la ablación selectiva de la superficie del sustrato mediante el uso de un haz de iones finamente enfocado50,51. FIB es una técnica de escritura directa que pue...

Los microelectrodos intracorticales (IME) son electrodos invasivos que proporcionan un medio de interconexión directa entre los dispositivos externos y las poblaciones neuronales dentro de la corteza cerebral1,2. Esta tecnología es una herramienta invaluable para registrar potenciales de acción neuronal para mejorar la capacidad de los científicos para explorar la función neuronal, avanzar en la comprensión de las enfermedades neurológicas y desarrollar terapias potenciales. El microelectrodo intracortical, utilizado como parte de los sistemas de interfaz de máquina cerebral (IMC), permite registrar potenciales de acción de un individuo o pequeños grupos de neuronas para detectar intenciones motoras que se pueden utilizar para producir salidas funcionales3. De hecho, los sistemas de IMC se han utilizado con éxito con fines protésicos y terapéuticos, como el control del ritmo sensorimotor adquirido para operar un cursor informático en pacientes con esclerosis lateral amiotrófica (ELA)4 y lesiones de la médula espinal5 y restaurar el movimiento en personas que sufren de tetraplejia crónica6.
Desafortunadamente, los IME a menudo no graban consistentemente con el tiempo debido a varios modos de falla que incluyen factores mecánicos, biológicos y materiales7,8. La respuesta neuroinflamatoria que se produce después de la implantación del electrodo se cree que es un reto considerable que contribuye a la falla del electrodo9,10,11,12,13,14. La respuesta neuroinflamatoria se inicia durante la inserción inicial del IME que corta la barrera hematoencefálica, daña el parénquima cerebral local y interrumpe las redes gliales y neuronales15,16. Esta respuesta aguda se caracteriza por la activación de células gliales (microglia/macrofagos y astrocitos), que liberan moléculas proinflamatorias y neurotóxicas alrededor del sitio del implante17,18,19,20. La activación crónica de las células gliales da lugar a una reacción del cuerpo extraño caracterizada por la formación de una cicatriz glial aislando el electrodo del tejido cerebral sano7,9,12,13,17,21,22. En última instancia, dificultando la capacidad del electrodo para registrar potenciales de acción neuronal, debido a la barrera física entre el electrodo y las neuronas y la degeneración y muerte de las neuronas23,24,25.
El fracaso temprano de los microelectrodos intracorticales ha llevado a cabo una considerable investigación en el desarrollo de electrodos de próxima generación, con énfasis en las estrategias biomiméticas26,27,28,29,30. De particular interés para el protocolo descrito aquí, es el uso de la nanoarquitectura como una clase de alteraciones biomiméticas de la superficie paraiME 31. Se ha establecido que las superficies que imitan la arquitectura del entorno natural in vivo tienen una respuesta biocompatible mejorada32,33,34,35,36. Por lo tanto, la hipótesis que obliga a este protocolo es que la discontinuidad entre la arquitectura áspera del tejido cerebral y la arquitectura lisa de los microelectrodos intracorticales puede contribuir a la respuesta neuroinflamatoria y crónica del cuerpo extraño a las IME implantadas (para una revisión completa se refieren a Kim et al.31). Hemos demostrado anteriormente que la utilización de características de nanoarquitectura similares a la arquitectura de matriz extracelular del cerebro reduce los marcadores inflamatorios de astrocitos de células cultivadas en sustratos nano-arquitecturados, en comparación con las superficies de control planas en modelos in vitro y ex vivo de neuroinflamación37,38. Además, hemos demostrado la aplicación de litografía de haz iónico focalizado (FIB) a nanoarquitecturas de grabado directamente en sondas de silicio dio lugar a un aumento significativo de la viabilidad neuronal y una menor expresión de genes proinflamatorios de animales implantados con las sondas de nanoarquitectura en comparación con el grupo de control suave26. Por lo tanto, el propósito del protocolo presentado aquí es describir el uso de la litografía FIB para grabar nanoarquitecturas en dispositivos de microelectrodos intracorticales fabricados. Este protocolo fue diseñado para grabar características de tamaño nano-arquitectura en superficies de silicio de vástagos de microelectrodos intracorticales utilizando procesos automatizados y manuales. Estos métodos son sencillos, reproducibles y, sin duda, se pueden optimizar para diversos materiales de dispositivos y tamaños de características deseados.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>16-Channel ZIF-Clip Headstage</td>
			<td>Tucker Davis Technologies</td>
			<td>ZC16</td>
			<td>The headstage and headstage holder may need to be changed, depending on the electrode used. <a href="https://www.tdt.com/zif-clip-digital-headstages.html" target="_blank">https://www.tdt.com/zif-clip-digital-headstages.html</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-meter cable, ALL spring wrapped</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td>1213F04</td>
			<td>Any non treated petri dish will suffice. <a href="https://www.thomassci.com/Laboratory-Supplies/Cell-Culture-Dishes/_/Non-Treated-Petri-Dishes?q=petri%20dish%20cell%20culture" target="_blank">https://www.thomassci.com/Laboratory-Supplies/Cell-Culture-Dishes/_/Non-Treated-Petri-Dishes?q=petri%20dish%20cell%20culture</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>32-Channel ZIF-Clip Headstage Holder</td>
			<td>Tucker Davis Technologies</td>
			<td>Z-ROD32</td>
			<td>The headstage and headstage holder may need to be changed, depending on the electrode used. <a href="https://www.tdt.com/zif-clip-digital-headstages.html" target="_blank">https://www.tdt.com/zif-clip-digital-headstages.html</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone, Thinner/Extender/Cleaner, 30ml</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>16023</td>
			<td><a href="https://www.tedpella.com/SEMmisc_html/SEMpaint.htm#anchor16062" target="_blank">https://www.tedpella.com/SEMmisc_html/SEMpaint.htm#anchor16062</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Baby-Mixter Hemostat</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>13013-14</td>
			<td>Any curved hemostat will suffice. <a href="https://www.finescience.com/en-US/Products/Forceps-Hemostats/Hemostats/Baby-Mixter-Hemostat" target="_blank">https://www.finescience.com/en-US/Products/Forceps-Hemostats/Hemostats/Baby-Mixter-Hemostat</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon Conductive Tape, Double Coated</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>16084-7</td>
			<td>The protocol suggested three options for mounting the functional electrode to the aluminum stub (copper or carbon conductive tape or a low profile clip. We utilized the carbon conductive tape in our study. <a href="https://www.tedpella.com/semmisc_html/semadhes.htm" target="_blank">https://www.tedpella.com/semmisc_html/semadhes.htm</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Costar Not Treated Multiple Well Plates - 6 well</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>CLS3736-100EA</td>
			<td>Any non-treated 6 well plate will suffice. <a href="https://www.sigmaaldrich.com/catalog/substance/corningcostarnottreatedmultiplewellplates1234598765" target="_blank">https://www.sigmaaldrich.com/catalog/substance/</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Fine Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-30</td>
			<td>Either this fine forceps or the vacuum pump will suffice. <a href="https://www.finescience.com/en-US/Products/Forceps-Hemostats/Dumont-Forceps/Dumont-5-Forceps/11251-30" target="_blank">https://www.finescience.com/en-US/Products/Forceps-Hemostats/Dumont-Forceps/Dumont-5-Forceps/11251-30</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, 190 proof (95%), USP, Decon Labs</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-032-600</td>
			<td>Any 95% ethanol will suffice. <a href="https://www.fishersci.com/shop/products/ethanol-190-proof-95-usp-decon-labs-10/22032600" target="_blank">https://www.fishersci.com/shop/products/ethanol-190-proof-95-usp-decon-labs-10/22032600</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Cell Strainer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-771-1</td>
			<td><a href="https://www.fishersci.com/shop/products/falcon-cell-strainers-4/087711" target="_blank">https://www.fishersci.com/shop/products/falcon-cell-strainers-4/087711</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FEI, Tescan, Zeiss (also for Philips, Leo, Cambridge, Leica, CamScan), aluminum, grooved edge, &#216;32mm</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>16148</td>
			<td>Depending on the SEM machine used, you may need a different size stub. <a href="https://www.tedpella.com/SEM_html/SEMpinmount.htm#_16180" target="_blank">https://www.tedpella.com/SEM_html/SEMpinmount.htm#_16180</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Aluminum Foil, Standard-gauge roll</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>01-213-101</td>
			<td>Any aluminum foil will suffice. <a href="https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-aluminum-foil-7/p-306250" target="_blank">https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-aluminum-foil-7/p-306250</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Low- and Tall-Form PTFE Evaporating Dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-617-149</td>
			<td>Any Teflon plate will suffice, this is used to dry the probes after washing on a surface they will not stick onto. <a href="https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-low-tall-form-ptfe-evaporating-dishes-12/p-88552" target="_blank">https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-low-tall-form-ptfe-evaporating-dishes-12/p-88552</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Michigan-style silicon functional electrode</td>
			<td>NeuroNexus</td>
			<td>A1x16-3mm-100-177</td>
			<td><a href="http://neuronexus.com/electrode-array/a1x16-3mm-100-177/" target="_blank">http://neuronexus.com/electrode-array/a1x16-3mm-100-177/</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Model 1772 Universal holder</td>
			<td>KOPF</td>
			<td>Model 1772</td>
			<td>Other stereotaxic frames and accessories will suffice. <a href="http://kopfinstruments.com/product/model-1772-universal-holder/" target="_blank">http://kopfinstruments.com/product/model-1772-universal-holder/</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Model 900-U Small Animal Stereotaxic Instrument</td>
			<td>KOPF</td>
			<td>Model 900-U</td>
			<td>Other stereotaxic frames and accessories will suffice. <a href="http://kopfinstruments.com/product/model-900-small-animal-stereotaxic-instrument1/" target="_blank">http://kopfinstruments.com/product/model-900-small-animal-stereotaxic-instrument1/</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Model 960 Electrode Manipulator with AP Slide Assembly</td>
			<td>KOPF</td>
			<td>Model 960</td>
			<td>Other stereotaxic frames and accessories will suffice. <a href="http://kopfinstruments.com/product/model-1772-universal-holder/" target="_blank">http://kopfinstruments.com/product/model-1772-universal-holder/</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M 10cm x 76.2m (4&#34; x 250&#39;)</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>807-5</td>
			<td><a href="https://www.tedpella.com/grids_html/807-2.htm" target="_blank">https://www.tedpella.com/grids_html/807-2.htm</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PELCO Vacuum Pick-Up System, 220V</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>520-1-220</td>
			<td>Either this vacuum pump or the fine forceps will suffice. <a href="http://www.tedpella.com/grids_html/Vacuum-Pick-Up-Systems.htm#anchor-520" target="_blank">http://www.tedpella.com/grids_html/Vacuum-Pick-Up-Systems.htm#anchor-520</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PELCO Conductive Silver Paint</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>16062</td>
			<td><a href="https://www.tedpella.com/SEMmisc_html/SEMpaint.htm#anchor16062" target="_blank">https://www.tedpella.com/SEMmisc_html/SEMpaint.htm#anchor16062</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SEM FIB FEI Helios 650 Nanolab</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Helios G2 650</td>
			<td>This is the specific focused ion beam and scanning electron microscope used in the protocol. The Nanobuilder software is what it comes with. If a different FIB instrument is used, it may not be completely compatible with the protocol, specifically the steps requiring the Nanobuilder software. <a href="https://www.fei.com/products/dualbeam/helios-nanolab/" target="_blank">https://www.fei.com/products/dualbeam/helios-nanolab/</a></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

focused ion beam lithography to etch nano-architectures into microelectrodes

Con los avances en electrónica y tecnología de fabricación, los microelectrodos intracorticales han experimentado mejoras sustanciales que permiten la producción de sofisticados microelectrodos con mayor resolución y capacidades ampliadas. El progreso en la tecnología de fabricación ha apoyado el desarrollo de electrodos biomiméticos, que tienen como objetivo integrarse perfectamente en el parénquima cerebral, reducir la respuesta neuroinflamatoria observada después de la inserción del electrodo y mejorar la calidad y longevidad de las grabaciones electrofisiológicas. Aquí describimos un protocolo para emplear un enfoque biomimético recientemente clasificado como nano-arquitectura. El uso de litografía de haz iónico focalizado (FIB) se utilizó en este protocolo para grabar características de nanoarquitectura específicas en la superficie de microelectrodos intracorticales de vástago único no funcionales y funcionales. La entrada en nanoarquitecturas en la superficie del electrodo indicó posibles mejoras de biocompatibilidad y funcionalidad del dispositivo implantado. Uno de los beneficios de utilizar FIB es la capacidad de grabar en dispositivos fabricados, a diferencia de durante la fabricación del dispositivo, facilitando posibilidades ilimitadas para modificar numerosos dispositivos médicos post-fabricación. El protocolo presentado en este documento se puede optimizar para varios tipos de materiales, características de nanoarquitectura y tipos de dispositivos. Aumentar la superficie de los dispositivos médicos implantados puede mejorar el rendimiento del dispositivo y la integración en el tejido.

FIB Grabado Nano-arquitectura en las superficies de las sondas intracorticales de un solo vástago Utilizando los métodos descritos aquí, las sondas intracorticales fueron grabadas con nanoarquitecturas específicas siguiendo los protocolos establecidos39. Las dimensiones y la forma del diseño de nanoarquitectura descrito en estos métodos se implementaron a partir de resultados in vitro anteriores que representan una disminución en la reactividad de las células gliales cu...

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Focused Ion Beam Lithography to Etch Nano-architectures into Microelectrodes

Hemos demostrado que el grabado de nanoarquitectura en dispositivos de microelectrodos intracorticales puede reducir la respuesta inflamatoria y tiene el potencial de mejorar las grabaciones electrofisiológicas. Los métodos descritos aquí describen un enfoque de nanoarquitecturas de etch en la superficie de microelectrodos intracorticales de silicio de vástago único no funcionales y funcionales.

Litografía de haz de iones enfocado a etch nano-arquitecturas en microelectrodos

With advances in electronics and fabrication technology, intracortical microelectrodes have undergone substantial improvements enabling the production of ...

El uso de la litografía de haz iónico focalizado, o FIB, permite a los investigadores mejorar la interacción de la superficie celular mediante el diseño de superficies de materiales que han aumentado la biocompatibilidad y la integración con el tejido nativo. Con FIB, las características se pueden grabar en una variedad de materiales, como silicio, metales y polímeros. También se pueden utilizar superficies no planas y se puede realizar el postprocesamiento en dispositivos individuales.En general, este método se puede utilizar en otros microscopios. Sin embargo, los diferentes fabricantes de microscopios tienen versiones únicas del software de modelado, que debe optimizarse para cada sistema. Shreya Mahajan,una estudiante graduada de mi laboratorio.Para prepararse para el montaje, utilice fórceps de vacío de diámetro de punta fina para recoger cuidadosamente la tira limpia de sondas de silicio. Colóquelos en un talón de aluminio limpio utilizado para escanear imágenes y grabados FIB del microscopio electrónico. Utilice un palillo de dientes para colocar una pequeña gota de pintura plateada en el borde del sustrato de silicio que rodea la sonda.Asegure la tira extendiendo la pintura plateada alrededor de los lados del sustrato de silicio que rodea la sonda. Deje que la pintura plateada se seque completamente antes de colocar el talón de aluminio en el SEM FIB. A continuación, haga clic en el botón Ventilación en la pestaña Control de viga para ventilar la cámara SEM FIB.Pulse Mayús F3 para realizar la fase de inicio. Confirme la selección seleccionando el botón Inicio del escenario en la ventana emergente. Una vez completada la etapa de inicio, mueva la etapa a las coordenadas X-70 milímetros, Y-70 milímetros, Z-0 milímetros, T-0 grados, R-0 grados.Una vez ventilada la cámara, póngase guantes de nitrilo limpios y abra la puerta de la cámara. Inserte el talón de aluminio que sujeta las sondas en la parte superior del adaptador de escenario. Asegure el talón de aluminio apretando el tornillo de ajuste en el lado del adaptador de escenario.Asegúrese de que la altura se ajusta adecuadamente. Utilice la llave hexagonal de 1,5 milímetros para esta tarea. Abra cuidadosamente el brazo de la cámara de navegación hasta que se detenga.La etapa del microscopio se moverá automáticamente a una posición debajo de la cámara. Vea la imagen en vivo que se muestra en el cuadrante tres de la interfaz de usuario del microscopio. Una vez que el nivel de brillo se ajuste automáticamente a un nivel adecuado, adquiera la imagen presionando el botón hacia abajo en el soporte de la cámara.Esto toma aproximadamente 10 segundos. Gire el brazo de la cámara de nuevo a la posición cerrada. El escenario volverá a la posición original.Cierre cuidadosamente la puerta de la cámara del microscopio. Observe la imagen de la cámara CCD en el cuadrante cuatro mientras cierra la puerta. Asegúrese de que las muestras y la etapa estén a una distancia segura de cualquier componente crítico de la cámara del microscopio.Seleccione el botón Bomba con limpieza de muestras en el software de interfaz de usuario para iniciar la bomba de vacío de la cámara y el limpiador de plasma incorporado. Espere aproximadamente ocho minutos para que se complete el tiempo de bombeo y el ciclo de limpieza del plasma de la cámara del microscopio. Una vez que el icono en la esquina inferior derecha de la interfaz de usuario se vuelve verde, presione el botón Despertar en la pestaña de control del haz que enciende los haces de electrones e iones.Seleccione Cuadrante Uno y establezca la señal de haz en Rayo de electrones. A continuación, establezca cuadrante dos en viga de iones. Ahora, ajuste el voltaje SEM a cinco kilovoltas, la corriente de haz SEM en 0,20 nanoamps, el detector SEM en ETD y el modo detector en electrones secundarios.Establezca el voltaje FIB en 30 kilovoltas, el haz FIB en 24 picoamps, el detector FIB en detector ICE y el modo detector en el electron secundario. Haga doble clic en la sonda de silicio en la imagen de la cámara de navegación, Cuadrante Tres para mover el escenario a la ubicación aproximada de la sonda. Haga clic en Cuadrante Uno para seleccionarlo como el cuadrante activo y pulse el botón de pausa para iniciar el escaneo SEM.Establezca el tiempo de permanencia del análisis en 300 nanosegundos y desactive Escancer entrelazado, Integración de línea y Promedio de fotogramas. Establezca Rotación de escaneado en cero en la pestaña Control de viga. Haga clic con el botón derecho en el Ajustador 2D de Cambio de viga y seleccione cero.Ajuste la ampliación al valor mínimo girando la perilla de ampliación en sentido antihorario en el panel de interfaz de usuario del microscopio. Ajuste el brillo y el contraste de la imagen utilizando las perillas del panel de la interfaz de usuario o el icono de la barra de herramientas de brillo de contraste automático. Mueva el escenario haciendo doble clic izquierdo haciendo clic con el ratón sobre una operación para centrarla.A continuación, mueva la sonda de silicio deseada para que se estame en el centro de la imagen SEM. Localice una arista u otra operación, como una partícula de polvo o un rasguño. Aumente el aumento a 2000x girando la perilla de aumento en el sentido de las agujas del reloj.Ajuste el enfoque del SEM girando las perillas de enfoque grueso y fino en la interfaz de usuario del microscopio, hasta que la imagen esté enfocada. Una vez que la imagen esté enfocada, seleccione el botón Vincular muestra Z a distancia de trabajo en la barra de herramientas. Confirme que la operación se ha completado mirando la coordenada del eje Z en la pestaña de navegación.El valor debe ser de aproximadamente 11 milímetros. Escriba 4,0 milímetros en la posición del eje Z y pulse el botón Ir a con el ratón. Mueva el escenario en X e Y para localizar el hombro de la sonda de silicio.Coló ello lo más cerca posible del centro del SEM. Cambie la inclinación del escenario a 52 grados escribiendo 52 en la coordenada T y pulsando Intro. Observe si el hombro de la sonda parece moverse hacia arriba o hacia abajo en la imagen.Utilice el control deslizante Etapa Z para volver a poner el hombro de la sonda en el centro de la imagen SEM. Ajuste únicamente la posición Z. No mueva los ejes X, Y, T o R.Ejecute la función de alineación XT integrada, ubicada en el menú desplegable del escenario. Utilice el ratón para hacer clic en dos puntos paralelos al borde de la sonda. Mae asegúrese de que el botón de opción horizontal está seleccionado en la ventana emergente y haga clic en Finalizar.El escenario girará para alinear la sonda con el eje X del escenario. Ajuste el escenario en XY utilizando el ratón para volver a colocar el hombro inferior de la sonda en el centro de la imagen SEM. Seleccione la BOLA en el Cuadrante Dos y asegúrese de que la corriente de la viga sigue siendo de 24 picoamps.Establezca el aumento en 5000X y el tiempo de permanencia en 100 nanosegundos. Escriba Control-F en el teclado para establecer el enfoque FIB en 13 milímetros. En la pestaña Control de viga, haga clic con el botón derecho en el ajustador 2D de Estigmator y seleccione cero.Además, haga clic con el botón derecho en el ajustador 2D de Beam Shift y seleccione cero. Establezca la rotación del escaneo en cero grados y haga clic en el botón de brillo de contraste automático en la barra de herramientas. Busque una imagen del hombro de la sonda en el Cuadrante Dos.Utilice la herramienta de instantáneas para adquirir una imagen en la FIB. Confirme que el hombro de la sonda está en el centro de la imagen FIB. Si no es así, haga doble clic en el hombro de la sonda para moverlo al centro.Mueva el escenario a la izquierda presionando la tecla de flecha izquierda en el teclado aproximadamente 10 a 15 veces. Tome otra instantánea y observe si el lado de la sonda todavía está en el centro de la BOLA. Después de repetir estos pasos hasta que el borde del hombro de la sonda esté perfectamente alineado con el eje X de la etapa, utilice la BOLA para mover la etapa de nuevo al hombro inferior de la sonda.Guarde la posición de la etapa en la lista de posiciones haciendo clic en el botón Agregar. Cambie la corriente del haz FIB a 2,5 nanoamps y asegúrese de que el aumento de la BOLA sigue siendo 5000X. Ejecute la función de contraste de brillo automático y establezca el tiempo de permanencia de la BOLA en 100 nanosegundos.Pulse el botón de pausa para iniciar el escaneo. Ajuste el enfoque y el astigmatismo DE la FIB de la forma más rápida y precisa posible utilizando las perillas de enfoque grueso y fino y las perillas del estigmator X e Y en el panel de interfaz de usuario. Pulse el botón de pausa para detener el escaneo de la FIB.Dentro del software Nanobuilder, abra el archivo para Patterning the Silicon Probes. Seleccione el menú desplegable Microscopio y seleccione Establecer origen de etapa. Seleccione el menú desplegable Microscopio y, a continuación, seleccione Calibrar detectores.En la interfaz de usuario del microscopio, haga clic en Quad One una vez con el ratón para seleccionar Quad One. Haga clic en Aceptar para iniciar la calibración. El proceso tardará unos cinco minutos.Asegúrese de que los detectores ETD e ICE se calibran. En el software, seleccione el menú desplegable Microscopio y elija Ejecutar para iniciar la secuencia de patrones. Cuando el patrón esté completo, cierre el software.Pulse Ventilación en la pestaña Control de haz de la interfaz de usuario del microscopio para apagar los haces del microscopio e iniciar el ciclo de ventilación. Mientras la cámara se está ventilando, mueva el escenario a las coordenadas adecuadas. Una vez ventilada la cámara, póngase guantes de nitrilo limpios y abra la puerta de la cámara.Afloje el tornillo de fijación en el adaptador de talón con la llave hexagonal de 1,5 milímetros. Retire el talón de aluminio que contiene la sonda estanada de la cámara. Cierre cuidadosamente la puerta de la cámara del microscopio.Observe la imagen de la cámara CCD en el cuadrante cuatro mientras cierra la puerta. Asegúrese de que el adaptador de etapa esté a una distancia segura de cualquier componente crítico de la cámara del microscopio. Aquí se muestran imágenes SEM de las sondas de silicio de un solo vástago no funcionales con nanoarquitecturas grabadas en FIB a lo largo de la parte posterior del vástago.Las dimensiones finales de la nanoarquitectura grabada eran líneas paralelas de 200 nanómetros de ancho separadas por 300 nanómetros y con una profundidad de 200 nanómetros. Para determinar cómo el grabado de nanoarquitecturas en la superficie de la sonda afecta a la densidad neuronal inmediatamente alrededor del implante, los nucleii neuronales fueron manchados y cuantificados. La supervivencia neuronal se presenta como un porcentaje de la región de fondo de las mismas distancias de animales de 50 contenedores de micras de distancia del sitio del implante.Había significativamente más neuronas alrededor de las sondas de nanoarquitectura a distancias de 100 a 150 micras del sitio del implante en comparación con los implantes de control suave a las cuatro semanas después de la implantación. Las nanoarquitecturas también fueron grabadas a lo largo de la parte posterior de los microelectrodos funcionales de silicio de un solo vástago y se cuantificaron las mediciones electrofisiológicas para investigar cómo las nanoarquitecturas de grabado afectan el rendimiento de los electrodos. Los resultados electrofisiológicos mostraron mayores porcentajes de canales que registran unidades individuales a partir de los microelectrodos de nanoarquitectura en comparación con los microelectrodos de control suave.No se realizó ningún análisis estadístico para el microelectrodo de nanoarquitectura porque solo se implantó uno para un estudio piloto de prueba de concepto. El grabado FIB permite a los investigadores investigar cómo la adición de señales topográficas en dispositivos médicos puede mejorar la respuesta celular y, en última instancia, el rendimiento del dispositivo. La amplitud de los dispositivos médicos a los que se pueden aplicar estos métodos es ilimitada, ya que la BOLA se puede realizar en una gama de materiales, geometrías de superficie y, lo que es más importante, dispositivos ya fabricados.

Research

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Functional Surface-immobilization of Genes Using Multistep Strand Displacement Lithography

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Assembly and Characterization of Biomolecular Memristors Consisting of Ion Channel-doped Lipid Membranes

Montaje y caracterización de memristores Biomolecular consisten en membranas lipídicas dopado canal iónico

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